玄霄宇,范吉林,潘文超,李昱靜,祝昕杰,張世亮

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病簡(jiǎn)稱冠心病,是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化病變引起血管管腔狹窄或阻塞、心肌缺血、缺氧或壞死。冠心病歸屬于中醫(yī)學(xué)“胸痹”范疇,常在寒邪、情緒波動(dòng)、飲食失節(jié)及勞累過(guò)度等危險(xiǎn)因素誘發(fā)下發(fā)作。流行病學(xué)研究顯示,冠心病死亡在全部心血管疾病死因的占比由1990年的29%增長(zhǎng)到2013年的37%,2013年因冠心病死亡的病人約139.4萬(wàn)例,較1990年增長(zhǎng)了90%[1], 冠心病已成為臨床心血管系統(tǒng)的多發(fā)病,對(duì)中老年人的生命健康造成了嚴(yán)重威脅。 冠心病的發(fā)生與內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷、炎癥反應(yīng)、血小板黏附、血栓形成、血管平滑肌的遷移與增殖等有關(guān)[2]。 臨床多采用抗血小板藥、抗凝藥、他汀類(lèi)及β受體阻滯劑等治療,但應(yīng)用時(shí)存在心血管風(fēng)險(xiǎn)[3]。

中醫(yī)藥在防治冠心病方面表現(xiàn)出較大優(yōu)勢(shì),有研究顯示,中藥能有效緩解心絞痛,調(diào)節(jié)心律失常,改善心力衰竭等[4]。 四妙勇安湯可治療脫疽之熱毒熾盛者,由清代鮑相敖收入《驗(yàn)方新編》并首次稱之為“四妙勇安湯”[5],全方清熱解毒、活血止痛,于清熱解毒之中寓活血養(yǎng)血之法,氣血兼顧,恰合病機(jī)。有研究表明,四妙勇安湯的作用機(jī)制涉及抗炎、保護(hù)血管內(nèi)皮、調(diào)控血管新生、抗凝、預(yù)防血栓、調(diào)控血脂等方面[6]。孫春林[7]將60例病人分為試驗(yàn)組和對(duì)照組,試驗(yàn)組采用加味四妙勇安湯,對(duì)照組采用通心絡(luò)膠囊,試驗(yàn)組總有效率高于對(duì)照組。有研究使用常規(guī)西藥合加味四妙勇安湯治療冠心病,結(jié)果顯示,其能顯著改善病人血脂和超敏C反應(yīng)蛋白水平[8]。四妙勇安湯臨床治療冠心病療效較好,但作用機(jī)制尚未明確,本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接技術(shù)探討有效成分及作用靶點(diǎn),探討其治療冠心病的作用機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 四妙勇安湯的活性成分和潛在靶點(diǎn)篩選 利用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)技術(shù)平臺(tái)(TCMSP)對(duì)金銀花、玄參、當(dāng)歸、甘草四味中藥進(jìn)行檢索,得到四妙勇安湯的所有活性成分,以口服生物利用度(OB)≥30%、類(lèi)藥性(DL)≥0.18為篩選條件,得到四妙勇安湯的有效活性成分,并運(yùn)用SwissTargetPrediction和DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)活性成分對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn),之后將藥物的潛在作用靶點(diǎn)錄入全球蛋白質(zhì)資源(UniProt)數(shù)據(jù)庫(kù),將蛋白質(zhì)名稱轉(zhuǎn)化為Gene Symbol,進(jìn)行基因的標(biāo)準(zhǔn)化處理。應(yīng)用Cytoscape軟件制作四妙勇安湯活性成分-作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖,根據(jù)度值(Degree值)選擇四妙勇安湯治療冠心病的關(guān)鍵活性成分。

1.2 冠心病發(fā)病機(jī)制靶點(diǎn)的獲取 在GeneCards和在線人類(lèi)孟德?tīng)栠z傳(OMIM)數(shù)據(jù)庫(kù)獲取冠心病的相關(guān)靶點(diǎn)。將2個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)得到的靶標(biāo)合并去重,得到冠心病有關(guān)基因。

1.3 藥物-成分-疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建 將篩選獲得的四妙勇安湯藥物活性成分與冠心病疾病靶點(diǎn)相映射,獲取交集靶點(diǎn),即四妙勇安湯治療冠心病的可能作用靶點(diǎn)。在Cytoscape 3.7.2軟件中將交集靶點(diǎn)錄入,構(gòu)建“藥物-成分-疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖,利用“Network Analyzer”功能分析構(gòu)建的網(wǎng)絡(luò),節(jié)點(diǎn)代表藥物、有效成分、疾病、靶點(diǎn);邊代表藥物與成分、成分與冠心病、冠心病與靶點(diǎn)的作用關(guān)系。

1.4 藥物-疾病靶點(diǎn)蛋白-蛋白互作(PPI)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建并篩選核心靶點(diǎn) 將獲得的藥物和疾病的交集靶點(diǎn)錄入到生物分子功能注釋系統(tǒng)(STRING)數(shù)據(jù)庫(kù),構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)圖。將得到的文件以“TSV”格式導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2軟件中,根據(jù)Degree值挑選,得到藥物作用于疾病的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

1.5 基因本體(GO)功能富集分析和京都基因與基因組百科全書(shū)(KEGG)通路富集分析 將藥物-疾病的交集靶點(diǎn)錄入到DAVID數(shù)據(jù)庫(kù),物種選擇“Homo sapiens”,進(jìn)行GO和KEGG富集分析,以P<0.05的標(biāo)準(zhǔn)篩選所獲數(shù)據(jù),選取前10條繪圖。分析關(guān)鍵活性成分作用的核心靶點(diǎn)及其所在的通路,利用Cytoscape軟件,選取富集最顯著的10條通路,將結(jié)果進(jìn)行可視化分析。

1.6 分子對(duì)接 以關(guān)鍵成分化合物為配體,并在PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)獲得小分子3D結(jié)構(gòu)。在PDB數(shù)據(jù)庫(kù)以分辨率低、有原始配體等條件選擇核心蛋白的3D結(jié)構(gòu)。利用PyMOL對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行去水等處理,導(dǎo)入AutoDockTools加氫,將活性成分配體和蛋白受體轉(zhuǎn)換成pdbqt格式文件,運(yùn)行AutoDockTools 將二者進(jìn)行對(duì)接,選擇最低結(jié)合能作為結(jié)果。以結(jié)合能≤-20.93 kJ/mol為參考[9], 對(duì)結(jié)果進(jìn)行評(píng)估。

2 結(jié) 果

2.1 四妙勇安湯活性成分的獲取 檢索TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)得到四妙勇安湯活性成分共688個(gè),篩選后獲得有效活性成分127個(gè),其中金銀花23個(gè)、玄參9個(gè)、當(dāng)歸2個(gè)、甘草93個(gè)。去重后得到四妙勇安湯有效成分作用靶點(diǎn)137個(gè)。應(yīng)用Cytoscape軟件構(gòu)建“活性成分-作用靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖,圖中有254個(gè)節(jié)點(diǎn)、2 774條邊,詳見(jiàn)圖1。菱形代表靶點(diǎn),圓形代表不同藥物的活性成分,V形代表金銀花、玄參、當(dāng)歸、甘草,六邊形代表不同藥物的重復(fù)成分;A1為β-谷甾醇,是金銀花、玄參、當(dāng)歸的共有成分;B1為豆甾醇,是金銀花、當(dāng)歸的共有成分;C1為山柰酚,是金銀花、甘草的共有成分;C2為槲皮素,是甘草、金銀花的共有成分;D1為谷甾醇,是甘草、玄參的共有成分。說(shuō)明四妙勇安湯的治療作用是通過(guò)多靶點(diǎn)、多成分實(shí)現(xiàn)的,體現(xiàn)了中藥發(fā)揮作用的復(fù)雜性。應(yīng)用“Network Analyzer”功能對(duì)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)浞治?取Degree值居前8位的成分作為四妙勇安湯的關(guān)鍵活性成分,詳見(jiàn)表1。

圖1 四妙勇安湯活性成分-作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

表1 四妙勇安湯關(guān)鍵活性成分

2.2 四妙勇安湯治療冠心病的潛在作用靶點(diǎn) 檢索GeneCards、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)獲得疾病靶點(diǎn),去重后獲得冠心病疾病靶點(diǎn)5 339個(gè),取交集得到藥物和疾病的映射靶點(diǎn)并繪制Venn圖,有120個(gè)藥物與疾病交集靶點(diǎn),其可能是四妙勇安湯治療冠心病的潛在靶點(diǎn)。詳見(jiàn)圖2。

圖2 四妙勇安湯-冠心病交集靶點(diǎn)Venn圖

2.3 藥物-成分-疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建 將四妙勇安湯的4味中藥、有效活性成分、疾病及交集靶點(diǎn)錄入Cytoscape 3.7.2軟件中,構(gòu)建“藥物-成分-疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖,見(jiàn)圖3。圖中三角形表示金銀花、玄參、當(dāng)歸、甘草;菱形代表藥物有效活性成分;V形代表冠心病;橢圓形代表疾病與藥物的交集靶點(diǎn)。圖中包括233個(gè)節(jié)點(diǎn),其中藥物4個(gè)、疾病1個(gè)、交集靶點(diǎn)120個(gè)、有效活性成分108個(gè)。

圖3 藥物-成分-疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

2.4 藥物-疾病靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)及核心靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建 將獲得的藥物和疾病120個(gè)交集靶點(diǎn)Gene symbol錄入到STRING數(shù)據(jù)庫(kù),設(shè)定物種為“Homo sapiens”,構(gòu)建藥物與疾病之間的PPI網(wǎng)絡(luò)圖,包括120個(gè)節(jié)點(diǎn)、1 202條邊,平均Degree值為20;節(jié)點(diǎn)表示蛋白,邊表示蛋白與蛋白之間的關(guān)系,詳見(jiàn)圖4。通過(guò)STRING數(shù)據(jù)庫(kù)得到數(shù)據(jù)并錄入到Cytoscape 3.7.2軟件中,以Degree值≥50為條件進(jìn)行篩選,得到四妙勇安湯治療冠心病的核心靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖,節(jié)點(diǎn)越大,顏色越深,表示蛋白Degree值越大;連線越粗,顏色越深,說(shuō)明蛋白之間關(guān)系越密切。詳見(jiàn)圖5。其中5個(gè)蛋白基因的Degree值較大,推測(cè)這5個(gè)基因可能是四妙勇安湯治療冠心病的關(guān)鍵靶點(diǎn),基本信息見(jiàn)表2。

圖4 PPI網(wǎng)絡(luò)圖

圖5 核心靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

表2 四妙勇安湯治療冠心病的關(guān)鍵靶點(diǎn)

2.5 GO富集分析 將120個(gè)藥物與疾病的交集靶點(diǎn)錄入到DAVID數(shù)據(jù)庫(kù),120個(gè)基因共影響了564條生物過(guò)程,以P<0.05 為篩選條件,獲得427條生物信息,其中生物過(guò)程(BP)302條,細(xì)胞組分(CC)52條,分子功能(MF)73條。四妙勇安湯治療冠心病的生物過(guò)程涉及對(duì)缺氧的反應(yīng)、一氧化氮生物合成過(guò)程的積極調(diào)節(jié)、細(xì)胞外空間、酶結(jié)合、類(lèi)固醇激素受體活性等。詳見(jiàn)圖6。

圖6 GO功能富集分析

2.6 KEGG通路富集分析 KEGG富集分析應(yīng)用DAVID數(shù)據(jù)庫(kù),設(shè)置P<0.05 為過(guò)濾條件,發(fā)現(xiàn)120個(gè)交集靶蛋白基因主要富集在108條通路上,表明四妙勇安湯可能通過(guò)108條通路治療冠心病。四妙勇安湯作用于冠心病的通絡(luò)涉及TNF信號(hào)通路、磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信號(hào)通路、缺氧誘導(dǎo)因子-1(HIF-1)信號(hào)通路、鈣信號(hào)通路、環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷酸-環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷酸依賴的蛋白激酶(cGMP-PKG)信號(hào)通路等。篩選富集程度較高的10條通路進(jìn)行圖像可視化分析,詳見(jiàn)圖7。應(yīng)用Cytoscape軟件將四妙勇安湯關(guān)鍵成分-關(guān)鍵靶點(diǎn)-通路關(guān)系進(jìn)行可視化,其中內(nèi)圈的長(zhǎng)方形代表關(guān)鍵活性成分,中圈的菱形代表關(guān)鍵靶點(diǎn),外圈的六邊形代表信號(hào)通路,詳見(jiàn)圖8。槲皮素通過(guò)作用于靶點(diǎn)TNF、IL6、TP53、JUN、VEGFA調(diào)控TNF信號(hào)通路、癌癥通路、PI3K-Akt信號(hào)通路等,說(shuō)明四妙勇安湯是通過(guò)多靶點(diǎn)、多通路共同作用治療冠心病。

圖7 KEGG富集分析

圖8 關(guān)鍵活性成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖

2.7 分子對(duì)接技術(shù) 根據(jù)“活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖,得到關(guān)鍵活性成分槲皮素、β-谷甾醇、山柰酚、豆甾醇、7-甲氧基-2-甲基異黃酮、美迪紫檀素、刺芒柄花素、異鼠李素。PPI網(wǎng)絡(luò)分析顯示,TNF、IL6、TP53、JUN、VEGFA可能是四妙勇安湯治療冠心病的關(guān)鍵靶點(diǎn)。分子對(duì)接結(jié)果表明：四妙勇安湯的8個(gè)關(guān)鍵成分與5個(gè)關(guān)鍵蛋白質(zhì)的結(jié)合能均≤-20.93 kJ/mol, 說(shuō)明各成分及各蛋白的結(jié)合能力均較好,詳見(jiàn)表3。將對(duì)接結(jié)果導(dǎo)入PyMOL軟件使其可視化,部分結(jié)果見(jiàn)圖9。

表3 分子對(duì)接結(jié)合能 單位：kJ/mol

圖9 四妙勇安湯部分活性成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)的分子對(duì)接

3 討 論

中醫(yī)學(xué)無(wú)“冠心病”病名,將其歸屬于“胸痹”“心痛”范圍。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為冠心病病機(jī)屬本虛標(biāo)實(shí),本虛為臟腑虧虛,以心氣虛最主要,也可見(jiàn)心陰虛,氣虛進(jìn)一步發(fā)展為陽(yáng)虛,標(biāo)實(shí)主要是指瘀血內(nèi)阻[10]。陳可冀院士提出的“瘀毒致病”理論,認(rèn)為冠心病病人病機(jī)關(guān)鍵在于血瘀,血瘀貫穿于整個(gè)病理過(guò)程,瘀血蘊(yùn)結(jié)不解,日久可化熱生毒,或從化為毒,長(zhǎng)久不愈,一旦遇外因觸動(dòng),瘀毒驟發(fā),蝕肌傷肉,瘀毒搏結(jié),可發(fā)生急性心血管事件[11]。有研究表明,兼具活血解毒功效的藥物抗炎、穩(wěn)定斑塊作用較單純活血或解毒的藥物較好[12]。四妙勇安湯可清熱解毒、活血止痛,全方含有金銀花、玄參、當(dāng)歸、甘草4種藥物,金銀花甘寒,清熱解毒,重用為君;玄參清熱涼血、滋陰解毒,合君藥清熱解毒之力更強(qiáng);當(dāng)歸辛甘溫,補(bǔ)血化瘀,合玄參養(yǎng)血生新;甘草解毒和中,用為佐使,臨床廣泛用于冠心病的治療,但作用機(jī)制尚未明確。

本研究應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討四妙勇安湯治療冠心病的作用機(jī)制,結(jié)果表明,四妙勇安湯的主要活性成分包括槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇等,其中槲皮素和山柰酚存在于金銀花、甘草中。 Chekalina等[13]將冠心病病人分為對(duì)照組和研究組,對(duì)照組口服β受體阻滯劑、他汀類(lèi)藥物、阿司匹林治療,研究組在對(duì)照組基礎(chǔ)上加用槲皮素每日120 mg治療,24 h動(dòng)態(tài)心電圖結(jié)果顯示,槲皮素組ST段壓低總時(shí)間和發(fā)作次數(shù)減少,室性期前收縮數(shù)量減少。 張福宸等[14]研究表明,槲皮素可增強(qiáng)慢性心力衰竭大鼠心功能,其機(jī)制可能是下調(diào)TNF-α介導(dǎo)的抑制炎癥反應(yīng)。槲皮素能改善過(guò)氧化氫(H2O2)介導(dǎo)的心肌細(xì)胞氧化損傷,減少心肌細(xì)胞凋亡,通過(guò)抗氧化、抗炎作用,保護(hù)心血管的結(jié)構(gòu)及功能[15]。 山柰酚的抗炎作用已被證實(shí),可抑制促炎因子產(chǎn)生及mRNA表達(dá),如TNF-α、白細(xì)胞介素8(IL-8)等,調(diào)節(jié)單核細(xì)胞到巨噬細(xì)胞的分化、炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生及巨噬細(xì)胞的活化,具有較強(qiáng)的抗炎作用[16]。湯喜蘭等[17]研究顯示,槲皮素和山柰酚有明顯的抗心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷作用,是心肌缺血再灌注損傷的治療基礎(chǔ)。

根據(jù)藥物-疾病靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)圖,四妙勇安湯治療冠心病的核心靶點(diǎn)主要包括TNF、IL6、TP53、JUN、VEGFA、表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)等,通過(guò)靶點(diǎn)相互作用,抗炎穩(wěn)定斑塊。炎性因子可影響動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性,在預(yù)測(cè)冠心病危險(xiǎn)中有重要的參考意義[18]。 TNF-α是由活化的巨噬細(xì)胞分泌,是作用廣泛的促炎細(xì)胞因子,存在于動(dòng)脈硬化損傷部位,介導(dǎo)多種作用,引起炎癥進(jìn)展、斑塊不穩(wěn)定性增強(qiáng)及血栓形成[19]。 有研究表明,TNF-α可縮短編碼一氧化氮合酶mRNA的半衰期,一氧化氮(NO)可減少血小板聚集、單核細(xì)胞黏附、平滑肌細(xì)胞增殖,從而影響斑塊穩(wěn)定性[20]。IL6是促炎細(xì)胞因子,是判斷動(dòng)脈粥樣硬化斑塊是否穩(wěn)定的重要標(biāo)志物。有研究顯示,IL6是一種上游炎癥標(biāo)志物,與穩(wěn)定型冠心病病人主要不良心血管事件、心血管疾病和全因死亡率、心肌梗死和癌癥死亡率獨(dú)立相關(guān)[21]。 IL6是由活化的免疫細(xì)胞產(chǎn)生,促進(jìn)凝血且誘導(dǎo)產(chǎn)生超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP),引發(fā)急性炎癥反應(yīng),導(dǎo)致斑塊形成,影響斑塊穩(wěn)定性[22],且IL6能刺激基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)升高,分解細(xì)胞基質(zhì)核心物質(zhì)膠原纖維,纖維帽變薄,動(dòng)脈斑塊不穩(wěn)定性增加[23]。 因此,IL6增多可影響斑塊的穩(wěn)定。有研究顯示,TP53蛋白是轉(zhuǎn)錄因子,可調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)及誘發(fā)凋亡,正常狀態(tài)下,TP53不斷降解維持較低水平,細(xì)胞損傷時(shí),中斷了TP53蛋白的降解,蛋白水平上升以激活并啟動(dòng)對(duì)細(xì)胞的修復(fù)作用,但細(xì)胞損傷嚴(yán)重不能完全恢復(fù)時(shí),引起細(xì)胞凋亡[24],血管平滑肌細(xì)胞異常增殖和凋亡與動(dòng)脈粥樣硬化關(guān)系密切。李敏華[25]指出TP53可能通過(guò)干預(yù)動(dòng)脈粥樣斑塊形成,參與冠心病的進(jìn)程。 房間隔缺損是冠心病的常見(jiàn)亞型,Wang等[26]研究分析發(fā)現(xiàn),房間隔缺損的隔膜組織中VEGFA下調(diào),說(shuō)明其可能影響心房間隔形成、心肌細(xì)胞增殖和心肌發(fā)育。有研究顯示,VEGF水平與頸動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度(IMT)有關(guān),推測(cè)VEGF的產(chǎn)生可能加速動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展[27]。 以上靶蛋白相互作用,可能是四妙勇安湯治療冠心病的關(guān)鍵機(jī)制。

GO生物過(guò)程涉及對(duì)缺氧的反應(yīng)、一氧化氮生物合成過(guò)程的積極調(diào)節(jié)、細(xì)胞外空間、酶結(jié)合、類(lèi)固醇激素受體活性、對(duì)藥物的反應(yīng)、腺苷酸環(huán)化酶激活腎上腺素受體信號(hào)通路、線粒體、絲氨酸型內(nèi)肽酶活性等。KEGG通路富集分析結(jié)果表明,四妙勇安湯治療冠心病的靶點(diǎn)主要集中在TNF信號(hào)通路、PI3K-Akt信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路、鈣信號(hào)通路等。PI3K-Akt信號(hào)通路是人體內(nèi)重要的調(diào)控血管再生、心肌細(xì)胞凋亡及代謝的通路[28]。有研究表明,心力衰竭大鼠心臟組織miR-146a表達(dá)顯著上調(diào),可能通過(guò)啟動(dòng)PI3K/Akt信號(hào)通路發(fā)揮miR-146a促使心肌細(xì)胞凋亡的作用[29]。李賽賽等[28]研究顯示,PI3K/Akt信號(hào)通路參與抑制心肌細(xì)胞凋亡,減輕炎癥反應(yīng),改善心臟代謝,可作為防治心血管疾病的切入點(diǎn)。吳勝男等[30]研究顯示,PI3K/Akt信號(hào)通路可能在內(nèi)嗎啡肽-1處理后出現(xiàn)的減輕心肌缺血再灌注損傷中發(fā)揮介導(dǎo)作用。HIF-1信號(hào)通路是復(fù)方治療心肌缺血的特征通路,缺氧時(shí)HIF-1α過(guò)表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞代謝紊亂,破壞心肌細(xì)胞,中藥活性成分可抑制糖氧剝奪心肌細(xì)胞中HIF-1α蛋白的過(guò)表達(dá)以抑制HIF-1信號(hào)通路,從而保護(hù)心肌[31]。 Ca2+處理和信號(hào)蛋白在維持心臟功能中作用重要[32]。說(shuō)明四妙勇安湯通過(guò)多通路-多途徑參與治療冠心病。

由分子對(duì)接結(jié)果可知,四妙勇安湯的關(guān)鍵活性成分和核心蛋白質(zhì)的結(jié)合能均≤-20.93 kJ/mol ,說(shuō)明四妙勇安湯中的活性化合物與核心蛋白結(jié)合能力較強(qiáng),結(jié)合較穩(wěn)定,驗(yàn)證了本研究的預(yù)測(cè)結(jié)果。

綜上所述,四妙勇安湯中的槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇等活性成分通過(guò)TNF、IL6、TP53、VEGFA等靶點(diǎn)對(duì)TNF、PI3K-Akt、HIF-1等信號(hào)通路進(jìn)行調(diào)控以影響機(jī)體對(duì)缺氧的反應(yīng)、一氧化氮生物合成過(guò)程的積極調(diào)節(jié)、細(xì)胞外空間等過(guò)程治療冠心病。因此,今后的研究應(yīng)在此基礎(chǔ)上進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,進(jìn)而深入討論四妙勇安湯治療冠心病的基礎(chǔ)作用機(jī)制。