葛 雯，陳建偉，李 祥，李金枝，蔡紅蝶，陶 倩，羅益遠(yuǎn)，陳宏降*

1. 浙江藥科職業(yè)大學(xué)，浙江 寧波 315500

2. 南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南京 210046

三白草是三白草科植物三白草Saururus chinensis(Lour.) Baill.的干燥地上部分，具有利尿消腫、清熱解毒的功效，臨床主要用于治療尿路感染、尿結(jié)石、腎炎水腫、白帶過多、支氣管炎等癥，外敷治療癰瘡腫毒和皮膚濕疹等。三白草植物資源十分豐富，我國南方各地均有分布，同時(shí)在韓國、日本等也作為民間常用藥物，用于治療水腫、黃疸、淋病等[1]。研究表明其主要含有木脂素、黃酮、生物堿、萜類等多種化學(xué)成分，其中木脂素類為三白草的主要活性成分，迄今已從三白草中分離鑒定出100 多個木脂素類化合物，具有抗炎、保肝、抗病毒、抗腫瘤等多種藥理活性[3-7]。為進(jìn)一步豐富三白草的化學(xué)成分研究資料，本課題組在前期對三白草化學(xué)成分研究基礎(chǔ)上[8-9]，對三白草地上部分的化學(xué)成分進(jìn)一步研究，從三白草地上部分的超臨界CO2萃取物中分離得到15 個化合物，分別鑒定為2,3-二甲基-1,4-二(3,4,5-三甲氧基苯基)-1,4-丁二酮[2,3-dimethyl-1,4-bis(3,4,5-trimethoxyphenyl)butane-1,4-dione，1]、asperphenamate（2）、rel-(7S,8S,7′R,8′R)-3,3′,4,4′,5,5′- 六 甲 氧 基-7-O-7′,8.8′- 木 脂 素[rel-(7S,8S,7′R,8′R)-3,3′,4,4′,5,5′-hexamethoxy-7-O-7′,8.8′-lignan，3]、常春藤皂苷元（hederagenin，4）、schisandlignans C（5）、樟葉素（polysyphorin，6）、4-羥基-5-甲基己烷-5-內(nèi)酯（4-hydroxy-5-methylhexan-5-olide，7）、異黑麥草內(nèi)酯（isololiolide，8）、perseal B（9）、myrisfragransin（10）、heteroplexisolide E（11）、curcasinlignan C（12）、去氫催吐蘿芙木醇（dehydrovomifoliol，13）、黑麥草內(nèi)酯（loliolide，14）和三白草二萜E（sauruditerpene E，15）?；衔锍?、6、13 外均為首次從該植物中分離得到，其中化合物15 為1 個新化合物，化合物為新的天然產(chǎn)物。

1 儀器與材料

Bruker AV-400 和Bruker AV-300 型核磁共振儀（TMS 為內(nèi)標(biāo)，瑞士布魯克公司）；Autopol IV 型自動旋光儀（美國Rudolph 公司）；UV-2550 型紫外/可見分光光度計(jì)（日本島津公司）；FTIR-84005 型紅外光譜儀（日本島津公司）；美國Waters UPLC AcquityTM系統(tǒng)、Xevo G2-XS Q TOF 質(zhì)譜儀（美國Waters 公司）；LC-20AP 制備型高效液相色譜儀（日本島津公司）；Dr Flash S 型快速中壓制備系統(tǒng)（蘇州利穗科技有限公司）；HA220-40-11 型超臨界CO2萃取儀（江蘇南通華安超臨界萃取有限公司）；CO2氣體（南京天澤氣體有限責(zé)任公司）；反相C18硅膠（60～80 μm，德國Merck 公司）；MCI GEL CHP-20P（75～150 μm，三菱化學(xué)株式會社）；薄層色譜和柱色譜硅膠（青島海洋化工有限公司）；制備液相用甲醇（色譜純，江蘇漢邦科技有限公司）；其它試劑均為國產(chǎn)分析純。

三白草藥材（產(chǎn)地湖北，批號20140822）購自亳州藥材公司，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)陳建偉教授鑒定為三白草科植物三白草S.chinensis(Lour.) Baill.的干燥地上部分，標(biāo)本（ZH2014003）存放于南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥化學(xué)實(shí)驗(yàn)室。

2 提取與分離

三白草地上部分粗粉8 kg，超臨界CO2萃取，萃取壓力30 MPa，萃取溫度50 ℃，萃取時(shí)間2 h，95%乙醇為夾帶劑，加入量為藥材量的1 倍[9]，減壓濃縮后得萃取物（約140 g），將萃取物經(jīng)硅膠柱色譜分離（濕法裝柱，干法上樣），先后通過石油醚-醋酸乙酯（50∶1～0∶100）、醋酸乙酯-甲醇（50∶1～0∶100）梯度洗脫得到10 個組分（Fr. 1～10）。Fr. 3 經(jīng)MCI GEL CHP20P 色譜除色素（95%甲醇洗脫）后，再經(jīng)ODS 中壓制備，甲醇-水（30∶70→100∶0）梯度洗脫，得到14 個組份（Fr. 3-1～3-14）。Fr. 3-4 經(jīng)反相HPLC 制備，甲醇-水（86∶14）洗脫得到化合物4（18 mg）。Fr. 3-6 經(jīng)反相HPLC制備，甲醇-水（82∶18）洗脫得到化合物2（12 mg）。Fr. 3-9 經(jīng)反相HPLC 制備，甲醇-水（78∶22）洗脫得到化合物8（16 mg）。Fr. 3-10 經(jīng)反相HPLC 制備，甲醇-水（76∶24）洗脫得到化合物5（24 mg）。Fr.3-12 經(jīng)反相HPLC 制備，甲醇-水（70∶30）洗脫得到化合物9（15 mg）。Fr. 4 經(jīng)MCI GEL CHP20P 色譜除色素（95%甲醇洗脫）后，ODS 中壓制備甲醇-水（20∶80→100∶0）梯度洗脫，得到13 個組份（Fr.4-1～4-13）。Fr. 4-3 經(jīng)反相HPLC 制備，甲醇-水（75∶25）洗脫得到化合物3（20 mg）。Fr. 4-4 經(jīng)反相HPLC 制備，甲醇-水（73∶27）洗脫得到化合物1（14 mg）。Fr. 4-6 經(jīng)反相HPLC 制備，甲醇-水（70∶30）洗脫得到化合物6（16 mg）。Fr. 4-8 經(jīng)反相HPLC制備，甲醇-水（70∶30）洗脫得到化合物10（15 mg）。Fr. 4-11 經(jīng)反相HPLC 制備，甲醇-水（65∶35）洗脫得到化合物15（7 mg）。Fr. 5 經(jīng)MCI GEL CHP20P色譜除色素（95%甲醇洗脫）后，ODS 中壓制備甲醇-水（10∶90→100∶0）梯度洗脫，得到17 個組份（Fr. 5-1～5-17）。Fr. 5-2 經(jīng)反相HPLC 制備，甲醇-水（22∶78）洗脫得到化合物13（8 mg）。Fr. 5-4經(jīng)反相HPLC 制備，甲醇-水（35∶65）洗脫得到化合物7（10 mg）。Fr. 5-7 經(jīng)反相HPLC 制備，甲醇-水（50∶50）洗脫得到化合物12（10 mg）。Fr. 7 經(jīng)ODS 中壓制備甲醇-水（10∶90→100∶0）梯度洗脫，得到9 個組份（Fr. 7-1～7-9）。Fr. 7-6 經(jīng)反相HPLC 制備，甲醇-水（70∶30）洗脫得到化合物11（90 mg）。Fr. 8 經(jīng)ODS 中壓制備甲醇-水（10∶90→100∶0）梯度洗脫，得到11 個組份（Fr. 8-1～8-11）。Fr. 8-3 經(jīng)反相HPLC 制備，甲醇-水（22∶68）洗脫得到化合物14（10 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 新化合物結(jié)構(gòu)鑒定

1H-NMR (400 MHz, CDCl3) 譜顯示了26 個氫信號，其中包括4 個烯質(zhì)子信號[δ5.98 (1H, t,J= 7.6 Hz, H-10), 5.91 (1H, s, H-2), 5.49 (1H, t,J= 7.9 Hz,H-5), 5.06 (1H, m, H-14)] 和4 個甲基氫信號[δ2.15(3H, s, H-20), 1.65 (3H, s, H-16), 1.56 (3H, s, H-17),1.22 (3H, s, H-19)]。13C-NMR (100 MHz, CDCl3) 結(jié)合HMBC 譜共解析出20 個碳信號，其中包括1 個羧基信號δ172.4 (C-18)，1 個羰基信號δ169.7(C-1)，8 個烯碳信號[δ154.7 (C-3), 152.1 (C-4), 144.2(C-10), 132.3 (C-15), 131.3 (C-11), 123.4 (C-14),116.3 (C-2), 108.8 (C-5)]，5 個亞甲基碳信號[δ41.3(C-8), 38.7 (C-6), 34.5 (C-12), 27.7 (C-13) 和24.6(C-9)]，4 個甲基碳信號[δ26.8 (C-19), 25.6 (C-16),17.7 (C-17) 和11.8 (C-20)]，以及1 個季碳信號δ73.1 (C-7)。

HMBC 譜中H-17 與C-14/C-17 的相關(guān)和H-16與C-14/C-17 的相關(guān)可推測出2-甲基戊-2-烯基的結(jié)構(gòu)片段，H-10 與C-11/C-12/C-18 相關(guān)和H-12 與C-10/C-11/C-18 相關(guān)信號可推導(dǎo)出2-甲基-2-丙烯酸結(jié)構(gòu)，結(jié)合1H-1H COSY 譜中H-13 與H-12/H-14 相關(guān)，H-9 與H-8/H-10 相關(guān)，可以推導(dǎo)出結(jié)構(gòu)片段I：2-甲基戊-2-烯基→C-13→2-甲基-2-丙烯酸→C-9→C-8。同理，HMBC 譜中H-2 與C-1/C-3/C-4/C-20 的相關(guān)和H-20 與C-2/C-3/C-4 的相關(guān)結(jié)合相關(guān)碳的化學(xué)位移值，可推測出 4-methyl-5-methylenefuran-2(5H)-one 結(jié)構(gòu)，結(jié)合1H-1H COSY譜中H-5 與H-6 相關(guān)，HMBC 中H-5 與C-3/C-4 相關(guān)，H-6 與C-4 相關(guān)，可以得到結(jié)構(gòu)片段II：4-methyl-5-methylenefuran-2(5H)-one→C-5→C-6 。最后，根據(jù)HMBC 譜中H-5 與C-7 相關(guān)，H-6 與C-7/C-8/C-19 相關(guān)，H-8 與C-6/C-7/C-19 相關(guān)，H-9與C-7 相關(guān)，表明結(jié)構(gòu)片段I、II 和C-19 通過C-7相連。將相連得到的結(jié)構(gòu)片段與化合物15 的分子式C20H28O5進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)片段中少了1 個氫和1個氧，且C-7 的化學(xué)位移值（δ73.1）與飽和碳鏈上的季碳相比明顯向低場區(qū)移動，與不飽和季碳相比向高場區(qū)移動，因此推測C-7 位還與羥基相連。同時(shí)HR-ESI-MS 出現(xiàn)m/z223 的碎片離子峰也進(jìn)一步證實(shí)-OH 連在7 號位（圖1）。

圖1 化合物15 的ESI-MS/MS 的碎片離子Fig. 1 Diagnostic ESI-MS/MS fragment ions (m/z) of compound 15

NOESY譜中，H-10與H-12有明顯的相關(guān)信號，提示C-10→C-11 的雙鍵為順式構(gòu)型（Z）[10]，結(jié)構(gòu)見圖2（本實(shí)驗(yàn)尚未對7 位手性碳的絕對構(gòu)型進(jìn)行確認(rèn)，將在后續(xù)的研究中進(jìn)行確認(rèn)）。經(jīng)過SciFinder Scholar 網(wǎng)絡(luò)檢索，未發(fā)現(xiàn)相關(guān)報(bào)道，表明化合物15 為新化合物，命名為三白草二萜E（sauruditerpene E），其13C-NMR、1H-NMR 信號歸屬見表1。

圖2 化合物15 的結(jié)構(gòu)和主要相關(guān)信號Fig. 2 Chemical structure and key correlations of compound 15

3.2 已知化合物結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色無定形粉末，mp 103～104 ℃。HR-ESI-MSm/z: 445.182 1 [M－H]-（計(jì)算值為445.185 6，分子式為C24H29O8），結(jié)合1H-NMR、13C-NMR 確定分子式為C24H30O8。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 7.33 (4H, s, H-2, 2′, 6, 6′), 4.01 (2H,m, H-8, 8′), 3.98 (12H, s, 3, 3′, 5, 5′-OCH3), 3.96 (6H,s, 4, 4′-OCH3), 1.17 (6H, d,J= 6.3 Hz, H-9, 9′)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 202.6 (C-7, 7′), 153.2(C-4, 4′), 143.0 (C-3, 3′, 5, 5′), 132.0 (C-1, 1′), 105.9(C-2, 2′, 6, 6′), 61.0 (4, 4′-OCH3), 56.4 (3, 3′, 5,5′-OCH3), 43.2 (C-8, 8′), 17.8 (C-9, 9′)。

表1 化合物15 的NMR 數(shù)據(jù) (400/100 MHz, CDCl3)Table 1 NMR Spectroscopic data of compound 15 (400/100 MHz, CDCl3)

1H-NMR 中δ7.33 (4H, s, H-2, 2′, 6, 6′), 3.98(12H, s, 3, 3′, 5, 5′-OCH3), 3.96 (6H, s, 4, 4′-OCH3)，表明結(jié)構(gòu)中可能存在2 個3,4,5-三甲氧基苯基部分，HMBC 譜中3,3′,5,5′-OCH3(δH3.98, 12H, s) 和4,4′-OCH3(δH3.96, 6H, s) 分別與143.0 (C-3, 3′, 5, 5′)和153.2 (C-4, 4′)，遠(yuǎn)程相關(guān)，進(jìn)一步證明甲氧基分別取代在3,3′,4,4′,5,5′位；1H-NMR 譜中剩下2 組質(zhì)子信號δ4.01 (2H, m, H-8, 8′) 和1.17 (6H, d,J= 6.3 Hz, H-9, 9′) 表明結(jié)構(gòu)中含有CH3-CH-部分且與不飽和基團(tuán)相連，HMBC譜中H-9/9′ (δH1.17, d,J= 6.3 Hz), H-2, 2′, 6, 6′ (δH7.33, s) 分別與C-7/7′ (δC202.6) 相關(guān)，表明3,4,5-三甲氧基苯基和CH3-CH-部分通過7, 7′位羰基連接（圖3）。經(jīng)Sci Finder 數(shù)據(jù)系統(tǒng)檢索，以上化合物結(jié)構(gòu)與文獻(xiàn)報(bào)道對照基本一致[11]，故鑒定化合物1 為2,3-二甲基-1,4-二(3,4,5-三甲氧基苯基)-1,4-丁二酮。

圖3 化合物1 的結(jié)構(gòu)和主要HMBC (→) 相關(guān)信號Fig. 3 Chemical structrue and key HMBC (→) correlations of compound 1

化合物 2：白色粉末，mp 210～212 ℃。HR-ESI-MSm/z: 505.212 2 [M－H]-，結(jié)合1H-NMR、13C-NMR 確定分子式為C32H30N2O4。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 8.86 (1H, d,J= 8.0 Hz, -NH),8.31 (1H, d,J= 8.0 Hz, -NH), 7.16～7.78 (20H, m,Ar-H), 4.68 (1H, m, H-2), 4.45 (1H, m, H-2′), 4.18(2H, m, H-1′), 3.09～3.17 (2H, m, H-3), 2.86 (2H, m,H-3′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 171.5 (C-1),166.7 (C=O), 166.2 (C=O), 54.4 (C-2), 35.9 (C-3),65.5 (C-1′), 49.9 (C-2′), 36.3 (C-3′), 4 個苯環(huán)上的24個碳信號（138.3, 137.8, 134.5, 133.6, 131.5×2,131.2×2, 129.1×2, 129.0×2, 128.3×2, 128.2×2,127.4×2, 127.2×2, 126.5×2, 126.2×2）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道對照基本一致[12-13]，故鑒定化合物2 為asperphenamate。

化合物3：淡黃色油狀液體。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ: 0.99 (6H, d,J= 4.0 Hz, H-9, 9′), 2.24(2H, m H-8, 8′), 3.66 (6H, s, 4, 4′-OCH3), 3.78 (12H,s, 3, 3′, 5, 5′-OCH3), 4.53 (2H, d,J= 6.4 Hz, H-7, 7′),6.68 (4H, s, H-2, 2′, 6, 6′)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ: 153.0 (C-5, 5′), 138.1 (C-1, 1′, 4, 4′),103.5 (C-2, 2′, 6, 6′), 86.6 (C-7, 7′), 60.2 (4, 4′-OCH3),55.9 (3, 3′, 5, 5′-OCH3), 44.1 (C-8, 8′), 12.9 (C-9, 9′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道對照基本一致[14]，故鑒定化合物3 為rel-(7S,8S,7′R,8′R)-3,3′,4,4′,5,5′-六甲氧基-7-O-7′,8.8′-木脂素。

化合物4：白色粉末，mp 331～332 ℃。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ: 5.19 (1H, t,J= 3.6 Hz,H-12), 3.40 (1H, overlapped, H-3), 3.31 (1H, d,J=10.2 Hz, H-23b), 2.73 (1H, dd,J= 16.4, 4.2 Hz,H-18), 1.09 (3H, s, H-27), 0.85 (9H, s, H-25, 29, 30),0.71 (3H, s, H-26), 0.52 (3H, s, H-26)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 178.5 (C-28), 144.2 (C-13), 122.0(C-12), 70.9 (C-3), 64.4 (C-23), 47.0 (C-9), 42.6(C-14), 41.3 (C-4), 47.6 (C-5), 45.1 (C-19), 44.9(C-17), 40.4 (C-18), 39.2 (C-8), 37.2 (C-1), 36.6(C-10), 33.6 (C-21), 33.0 (C-22, 29), 32.5 (C-7), 30.3(C-20), 27.7 (C-15), 26.4 (C-2), 25.6 (C-27), 23.2(C-30), 22.8 (C-11, 16), 18.0 (C-6), 16.9 (C-26), 15.4(C-25), 12.5 (C-24)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道對照基本一致[15]，故鑒定化合物4 為常春藤皂苷元。

化合物5：淡黃色油狀液體。1H-NMR (400 MHz,CDCl3)δ: 7.71 (1H, dd,J= 8.4 Hz, 1.6 Hz, H-6), 7.54(1H, d,J= 1.6 Hz, H-2), 6.88～6.96 (3H, m, H-2′, 5′,6′), 6.82 (1H, d,J= 8.4 Hz, H-5), 6.15 (1H, d,J= 7.6 Hz, H-7′), 3.94 (3H, s, 4-OCH3), 3.91 (3H, s, 4′-OCH3),3.87 (3H, s, 3′-OCH3), 3.84 (3H, s, 3-OCH3), 3.21(1H, m, H-8′), 2.05 (3H, s, H-9), 1.26 (3H, d,J= 6.8 Hz, H-9′)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 165.3(C-7), 153.2 (C-3′), 148.8 (C-3), 148.7 (C-4′), 131.5(C-1′), 123.5 (C-6′), 122.5 (C-1), 119.0 (C-6), 112.1(C-2′), 110.2 (C-2), 110.0 (C-5), 76.3 (C-7′), 56.0 (3,4-OCH3), 55.9 (3′-OCH3), 55.8 (4′-OCH3), 52.9(C-8′), 29.7 (C-9), 12.85 (C-9′), 12.8 (C-4), 11.0(C-5′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道對照基本一致[16]，故鑒定化合物5 為schisandlignans C。

化合物6：白色無定形粉末。1H-NMR (400 MHz,CDCl3)δ: 6.66～6.50 (4H, m, H-2, 6, 2′, 6′), 6.36 (1H,m, H-7′), 6.20 (1H, dt,J= 9.1, 6.5 Hz, H-8′), 5.32(1H, s, -OH), 4.62 (1H, dd,J= 8.3, 5.2 Hz, H-7), 4.00(1H, m, H-8), 3.91 (6H, s, 3′, 5′-OCH3), 3.87 (6H, s, 3,5-OCH3), 3.84 (3H, s, 4′-OCH3), 1.93 (3H, ddd,J=7.8, 6.9, 1.5 Hz, H-9′), 1.25 (3H, t,J= 6.0 Hz, H-9)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 153.1 (C-3, 5), 152.8(C-3′, 5′), 137.6 (C-4), 136.4 (C-4′), 135.7 (C-1),133.9 (C-1′), 130.7 (C-7′), 125.7 (C-8′), 106.0 (C-2),104.3 (C-6), 102.9 (C-2′, 6′), 86.5 (C-8), 79.4 (C-7),60.8 (-OCH3), 56.1 (3, 5-OCH3), 56.0 (3′, 5′-OCH3),18.4 (C-9′), 17.7 (C-9)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道對照基本一致[17]，故鑒定化合物6 為樟葉素。

化合物7：無色油狀液體。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ: 4.63 (1H, brs, -OH), 4.25 (1H, t,J= 7.3 Hz, H-4), 2.45 (2H, m, H-2a, b), 2.09 (2H, dt,J= 9.2,7.4 Hz, H-3a, b), 1.13 (3H, s, H-6), 1.07 (3H, s, H-7)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 177.8 (C-1), 86.2(C-5), 70.2 (C-4), 28.9 (C-2), 26.0 (C-3), 25.8 (C-6),22.1 (C-7)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道對照基本一致[18]，故鑒定化合物7 為4-羥基-5-甲基己烷-5-內(nèi)酯。

化合物8：無色油狀液體。1H-NMR (400 MHz,CDCl3)δ: 5.69 (1H, s, H-7), 4.11 (1H, m, H-3), 2.52(1H, ddd,J= 12.1, 3.9, 2.2 Hz, H-4a), 2.03 (1H, ddd,J= 12.8, 4.2, 2.2 Hz, H-2a), 1.57 (3H, s, H-11), 1.49(1H, t,J= 11.7 Hz, H-4b), 1.33 (1H, t,J= 11.7 Hz,H-2b), 1.32 (3H, s, H-10), 1.25 (3H, s, H-9)；13C-NMR(100 MHz, CDCl3)δ: 181.4 (C-6), 171.9 (C-8), 113.0(C-7), 86.9 (C-5), 64.8 (C-3), 49.7 (C-2), 47.8 (C-4),35.1 (C-1), 29.9 (C-10), 25.5 (C-9), 25.0 (C-11)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道對照基本一致[19]，故鑒定化合物8 為異黑麥草內(nèi)酯。

化合物9：白色無定形粉末。1H-NMR (400 MHz,CDCl3)δ: 9.87 (1H, s, -CHO), 7.45 (2H, d,J= 6.9 Hz,H-2′, 6′), 7.07 (1H, d,J= 8.7 Hz, H-5′), 6.96 (1H, d,J= 0.9 Hz, H-2), 6.90 (2H, t,J= 3.2 Hz, H-5, 6) , 4.73(1H, d,J= 7.8 Hz, H-7), 4.43 (1H, dt,J= 12.5, 6.3 Hz, H-8), 3.96 (3H, s, 3′-OCH3), 3.90 (3H, s,3-OCH3), 1.23 (3H, d,J= 6.2 Hz, H-9)；13C-NMR(100 MHz, CDCl3)δ: 190.9 (-CHO), 153.2 (C-4′),150.8 (C-3′), 146.7 (C-3), 145.8(C-4), 131.5 (C-1′),130.9 (C-1), 126.4 (C-2′), 120.6 (C-6), 115.1 (C-5′),114.3 (C-5), 110.0 (C-6′), 109.4 (C-2), 81.9 (C-8),77.9 (C-7), 56.0 (3, 3′-OCH3), 16.4 (C-9)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道對照基本一致[20]，故鑒定化合物9 為perseal B。

化合物10：白色無定形粉末。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 6.79 (1H, d,J= 8.1 Hz, H-3′), 6.69(1H, s, H-2), 6.61 (1H, d,J= 1.7 Hz, H-6′), 6.58 (1H,dd,J= 8.1, 1.8 Hz, H-2′), 6.54 (1H, s, H-5), 6.13 (1H,s, H-7), 5.32 (1H, s, -OH), 3.81 (3H, s, 3′-OCH3), 3.79(3H, s, 3-OCH3), 3.67 (1H, d,J= 3.0 Hz, H-7′), 2.37(1H, ddd,J= 10.3, 7.0, 3.5 Hz, H-8′), 1.80 (3H, brs,9′-CH3), 1.10 (3H, d,J= 7.1 Hz, 9-CH3)；13C-NMR(100 MHz, CDCl3)δ: 146.2 (C-3), 145.1 (C-4), 144.1(C-3′), 143.8 (C-4′), 138.9 (C-1′), 137.8 (C-8), 127.8(C-6), 126.9 (C-1), 121.1 (C-7), 120.4 (C-6′), 111.7(C-5′), 114.0 (C-2), 112.1 (C-5), 110.1 (C-2′), 56.0(3′-OCH3), 55.8 (3-OCH3), 51.0 (C-7′), 42.2 (C-8′),22.2 (C-9), 18.8 (C-9′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道對照基本一致[21]，故鑒定化合物10 為myrisfragransin。

化合物11：淡黃色液體。1H-NMR (400 MHz,CDCl3)δ: 6.55 (1H, m,J= 7.5, 2.8 Hz, H-6), 5.21(2H, m, H-5, 11), 3.15 (1H, m, H-4a), 2.63 (2H, t,J=7.1 Hz, H-8), 2.53 (1H, ddd,J= 6.0, 4.4, 2.9 Hz,H-4b), 2.37 (2H, m, H-7), 2.13 (3H, s, H-10), 1.75(3H, s, H-14), 1.73 (3H, s, H-13)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 206.8 (C-9), 170.9 (C-2), 139.6(C-12), 138.0 (C-6), 127.8 (C-3), 123.6 (C-11), 74.5(C-5), 41.4 (C-8), 32.4 (C-4), 30.0 (C-10), 25.7(C-13), 24.0 (C-7), 18.4 (C-14)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道對照基本一致[22]，故鑒定化合物 11 為heteroplexisolide E。

化合物12：淡黃色液體。1H-NMR (400 MHz,CDCl3)δ: 9.84 (1H, s, -CHO), 7.37 (2H, d,J= 11.3 Hz, H-2′, 4), 6.93 (3H, dd,J=13.3, 6.2 Hz, H-2, 6, 6′),5.30 (1H, s, -OH), 5.26 (1H, d,J= 9.3 Hz, H-7), 3.95(3H, s, 3′-OCH3), 3.89 (3H, s, 3-OCH3), 3.57 (1H, dd,J= 8.7, 7.1 Hz, H-8), 1.45 (3H, d,J= 6.8 Hz, H-9)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 190.8 (C-7′), 153.3(C-4′), 146.7 (C-3), 146.2 (C-5), 144.9 (C-3′), 133.7(C-5′), 131.4 (C-1), 131.0 (C-1′), 120.2 (C-6′), 120.1(C-2), 111.8 (C-2′), 114.4 (C-4), 109.0 (C-6), 95.0(C-7), 56.1 (3, 3′-OCH3), 44.8 (C-8), 17.8 (C-9)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道對照基本一致[23]，故鑒定化合物12 為curcasinlignan C。

化合物13：淡黃色油狀物。1H-NMR (400 MHz,CDCl3)δ: 6.83 (1H, d,J= 15.7 Hz, H-7), 6.45 (1H, d,J= 15.7 Hz, H-8), 5.92 (1H, s, H-4), 2.46 (1H, d,J=17.2 Hz, H-2a), 2.30 (3H, s, H-10), 2.24 (1H, d,J=17.0 Hz, H-2b), 1.87 (3H, d,J= 1.1 Hz, H-11), 1.07(3H, s, H-12), 0.99 (3H, s, H-13)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 198.2 (C-3), 197.9 (C-9), 161.8(C-5), 145.9 (C-7), 130.4 (C-8), 127.4 (C-4), 79.1(C-6), 49.5 (C-2), 41.6 (C-1), 28.2 (C-10), 24.4(C-12), 23.0 (C-13), 18.9 (C-11)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道對照基本一致[24]，故鑒定化合物13 為去氫催吐蘿芙木醇。

化合物14：淡黃色液體。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ: 5.79 (1H, s, H-7), 5.01 (1H, s, -OH),4.08 (1H, m, H-3), 2.30 (1H, dd,J= 13.3, 2.5 Hz,H-4a), 1.87 (1H, dd,J= 14.1, 2.5 Hz, H-2a), 1.67 (3H,s, H-11), 1.63 (1H, dd,J= 13.4, 3.9 Hz, H-4b), 1.42(1H, dd,J= 14.2, 3.7 Hz, H-2b), 1.38 (3H, s, H-9),1.20 (3H, s, H-10)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 183.5 (C-6), 171.5 (C-8), 112.6 (C-7), 87.0 (C-5),65.3 (C-3), 47.1 (C-2), 45.7 (C-4), 36.1 (C-1), 30.9(C-10), 27.3 (C-11), 26.7 (C-9)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道對照基本一致[19]，故鑒定化合物14 為黑麥草內(nèi)酯。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)對三白草地上部分超臨界CO2萃取物的化學(xué)成分進(jìn)行研究，從中分離鑒定出15 個化合物，除化合物3、6、13 外均為首次從該植物中分離得到，其中化合物15 為新化合物，化合物1 為新的天然產(chǎn)物。Asperphenamate 又名3-苯基-2-苯甲酰氨基丙酸-3′-苯基-2′-苯甲酰氨基丙酯，是具有多個酰胺鍵的天然產(chǎn)物，且對人乳腺導(dǎo)管癌T47D 細(xì)胞、人乳腺癌MDA-MB231細(xì)胞、人早幼粒白血病HL60細(xì)胞、人宮頸癌Hela 細(xì)胞和人胃癌SGC-7901 細(xì)胞等多種腫瘤細(xì)胞具有顯著的抑制活性，半數(shù)抑制濃度（median inhibition concentration，IC50）分別為8.2、11.9、67.2、25.7、25.8 μmol/L[25]；常春藤皂苷元能抑制前列腺癌DU145 細(xì)胞、人乳腺癌MCF-7細(xì)胞和肺癌A549 細(xì)胞等多種腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲[26]，同時(shí)具有抗炎、抗抑郁[26-27]等多方面生物活性。本研究豐富了三白草的化學(xué)成分，后續(xù)將選擇適宜的藥理模型對上述化合物進(jìn)行藥效評價(jià)，以期闡明三白草藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，從而為三白草的產(chǎn)品開發(fā)提供理論依據(jù)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突