曲媛鑫，付英杰

（1.山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250300；2.濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院，山東 日照 276800）

阿膠為馬科動(dòng)物驢（Equus asinus L.）的干燥或新鮮皮經(jīng)煎煮、濃縮制成的固體膠，最早出現(xiàn)在《神農(nóng)本草經(jīng)》，被譽(yù)為“補(bǔ)血圣藥”，其最主要的化學(xué)成分為氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)。阿膠味甘、性平，歸肺、肝、腎經(jīng)，具有補(bǔ)血止血和滋陰潤(rùn)燥的功效。2020 版《中華人民共和國(guó)藥典》記載，阿膠用于血虛萎黃、眩暈心悸、肌萎無(wú)力、心煩不眠、虛風(fēng)內(nèi)動(dòng)、肺燥咳嗽、勞嗽咯血、吐血尿血、便血崩漏和妊娠胎漏等病癥。鑒于阿膠具有極高的開發(fā)和利用價(jià)值，本文對(duì)近五年有關(guān)阿膠化學(xué)成分、質(zhì)量控制和藥理研究的內(nèi)容進(jìn)行綜述，為進(jìn)一步深入開發(fā)利用提供思路。

1 阿膠中主要化學(xué)成分

1.1 氨基酸、多肽及蛋白質(zhì)

阿膠主要成分為蛋白質(zhì)及其分解產(chǎn)物肽和氨基酸，阿膠蛋白在10~250 kDa 之間呈彌散分布，主要為膠原蛋白、免疫球蛋白、核心蛋白聚糖、雙糖鏈蛋白聚糖、光蛋白聚糖和纖調(diào)蛋白等富含亮氨酸的小分子蛋白聚糖[1]。在制備過(guò)程中，驢皮中的部分蛋白質(zhì)分解為氨基酸及多肽，阿膠低聚肽的相對(duì)分子質(zhì)量主要集中在900 Da 以下，約占83.87%[2]。2020 版《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定，阿膠質(zhì)量評(píng)定需測(cè)定4 種主要氨基酸（羥脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸和脯氨酸）的含量。不同廠家生產(chǎn)的阿膠，其17種氨基酸的總含量在66.1%~82.0%之間不等，其中以甘氨酸（Gly）和脯氨酸（Pro）的含量較高[3]，不同年限熬制的阿膠，其主要氨基酸含量沒(méi)有顯著差異[4]。王瑩雪等[5]利用液相色譜—質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)從阿膠消化產(chǎn)物中得到519 種活性肽，其分子量在661.4~2851.4Da 之間，其中肽KGETGLR、SGLDGAKG和ADGVAGPK 分別具有降血壓、抗老年癡呆和抗腫瘤的潛力。

1.2 多糖

阿膠中的多糖主要為糖胺聚糖，目前分離得到的主要為硫酸乙酰肝素（HS）/肝素、硫酸軟骨素/硫酸皮膚素（CS/DS）和透明質(zhì)酸（HA），經(jīng)鑒定，除8 種常見的HS 二糖外，還發(fā)現(xiàn)了4 種N-未取代的二糖[6]。此外，低鹽組分中的CS/DS 鏈的硫酸化模式和密度差異很大，HA 鏈的鏈長(zhǎng)也不同[7]，HA 的存在有助于更好解釋阿膠的抗衰老和骨骼修復(fù)作用。HS/肝素、CS/DS與抗凝、腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)，這一發(fā)現(xiàn)有助于更好地闡明阿膠的作用機(jī)制。劉春媛等[8]發(fā)現(xiàn)在提取阿膠中的多糖時(shí)，TCA法脫蛋白的效率較高并且多糖損失率低，可有效去除阿膠粗多糖中的蛋白，得到的阿膠多糖可較好的抑制酪氨酸酶。

1.3 揮發(fā)性物質(zhì)

阿膠獨(dú)特的氣味主要是由阿膠腥味、焦糊味和肉味組成[9]。Zhang等[10]利用氣相色譜—質(zhì)譜鑒定出65種揮發(fā)性物質(zhì)，通過(guò)氣相色譜—嗅覺(jué)和香氣提取物稀釋鑒定出23 種香氣活性物質(zhì)。張鵬云等[11]利用頂空固相微萃取—?dú)庀嗌V—質(zhì)譜（HS-SPME-GC-MS）結(jié)合自動(dòng)解卷積技術(shù)發(fā)現(xiàn)阿膠揮發(fā)性、物質(zhì)中吡嗪類和醛類的含量較高。阿膠中揮發(fā)性堿性物質(zhì)含量高低可能與阿膠“火毒”有一定的關(guān)系，其含量是評(píng)價(jià)阿膠質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)。隨著阿膠儲(chǔ)存年限的增長(zhǎng)，揮發(fā)性堿性物質(zhì)的含量有所下降，到第5 年時(shí)其中揮發(fā)性堿性物質(zhì)的下降程度超過(guò)50%[4]，由此可見，古書中記載服用“陳阿膠”有一定的科學(xué)道理。

表1 阿膠中主要化學(xué)成分Table 1 Main chemical components of Asini corii colla

2 阿膠質(zhì)量控制方法

2.1 真?zhèn)舞b別

阿膠作為名貴藥材，以驢皮為原料熬制而成。我國(guó)毛驢傳統(tǒng)上主要以役用為主，隨著農(nóng)業(yè)機(jī)械化的普及，機(jī)械代替畜力，傳統(tǒng)驢業(yè)開始落寞[12]，因此，導(dǎo)致毛驢數(shù)量減少，驢皮資源緊張，而阿膠的需求量卻不減，許多不法商家使用馬皮[13]、牛皮[14]和豬皮[15]等廉價(jià)易得的皮源摻假，使得阿膠的質(zhì)量及藥效下降，因此，建立阿膠真?zhèn)舞b別的方法迫在眉睫。早些時(shí)期主要是通過(guò)鑒定不同膠原蛋白的性質(zhì)來(lái)鑒別不同膠類[16]，現(xiàn)在主要是利用儀器分析手段，通過(guò)物種特異性肽及DNA等來(lái)鑒別不同膠類物質(zhì)，且多項(xiàng)技術(shù)連用已成為發(fā)展趨勢(shì)，旨在更高效、更準(zhǔn)確地鑒別膠類物質(zhì)。

2.1.1 色譜 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù) 阿膠經(jīng)胰蛋白酶酶解，利用色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)特征性肽段，是檢測(cè)阿膠是否摻假的主要技術(shù)之一，此方法專屬性強(qiáng)、靈敏度和準(zhǔn)確性高[17]。但樣品酶解通常需要耗費(fèi)很長(zhǎng)時(shí)間且酶解效果直接影響檢測(cè)結(jié)果，通過(guò)超聲輔助胰蛋白酶酶解10 min 相當(dāng)于常規(guī)方法酶解2 h[13]，可大大縮短酶解時(shí)間，提高檢測(cè)效率；生物信息技術(shù)模擬胰蛋白酶酶解可得到穩(wěn)定、大量和連續(xù)的小分子肽段[18]，彌補(bǔ)常規(guī)酶解方法不穩(wěn)定的缺點(diǎn)，免受雜質(zhì)的影響。超高液相色譜—四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜（UPLC/Q-TOF-MS）[18]、納升液相色譜 串聯(lián)質(zhì)譜（nano-LC-MS/MS）[19]和超高液相色譜 三重四極桿質(zhì)譜（UPLC-QQQ/MS）[13]等多種色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)均在阿膠鑒別上有所應(yīng)用。李明華等[13,20,21]利用UPLC-QQQ/MS 成功檢測(cè)出阿膠中的豬和馬皮源性成分；石峰等[22]經(jīng)nano-LC-MS/MS 證實(shí)阿膠中驢皮特征性肽為GPTGEPGKPGDK，利用UPLC-QQQ/MS 在阿膠中驗(yàn)證此肽為驢專屬性肽；杭寶鍵等[23,24]則通過(guò)對(duì)比驢皮和馬、牛、豬、羊、駱駝及鹿皮膠原蛋白序列，得到了各雜皮膠原蛋白特征肽，并經(jīng)UPLC-QQQ/MS 對(duì)阿膠中各雜皮源成分進(jìn)行了檢測(cè)；蘇雪媚等[25]利用UPLC-MS 結(jié)合代謝組學(xué)的方法，分析了阿膠、鹿角膠、龜甲膠和黃明膠4 類膠類藥材中化合物成分的關(guān)聯(lián)與差異，此方法在膠類藥材質(zhì)量控制和品質(zhì)鑒定上具有較好的指導(dǎo)性。

2.1.2 DNA 分子鑒定法 目前，中藥鑒定中常用的DNA分子鑒定技術(shù)主要有兩種：一是利用種屬特異性引物進(jìn)行PCR 擴(kuò)增；二是借助測(cè)序儀器對(duì)DNA 序列解讀的DNA 測(cè)序技術(shù)[26]。驢源性線粒體細(xì)胞色素b（Cytb）基因的PCR 產(chǎn)物能被BamHI 酶切為76 bp 和314 bp 兩個(gè)片段，而馬源性成分不能被酶切[27]，依此可鑒定驢和馬；而同時(shí)以馬和驢核基因和線粒體基因組篩選出的物種特異性DNA 序列為檢測(cè)靶標(biāo)，建立鑒別馬、驢和騾皮張以及鑒定阿膠中馬和驢源性成分的多重PCR 方法，可將靈敏度提高到0.2 ng，大大提高檢測(cè)的靈敏度[28]。在阿膠制備過(guò)程中，DNA 嚴(yán)重降解、斷裂，為提取高質(zhì)量的DNA 加大了難度，陳思秀等[29]利用DNA 純化柱替代十二烷基硫酸鈉 蛋白酶K（SDS-PK）方法中有較大毒性的有機(jī)溶劑，并對(duì)SDSPK 法進(jìn)行了一系列優(yōu)化，建立了一種快速、無(wú)毒害提取阿膠基因組DNA的方法。環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）可用于檢測(cè)經(jīng)煮或高壓滅菌40 min 的阿膠中DNA，且此方法鑒定阿膠的靈敏度為10~3 ng，比傳統(tǒng)PCR檢測(cè)靈敏度高105 倍[30]。

嚴(yán)華等[31]通過(guò)阿膠中總DNA 提取、PCR 擴(kuò)增和GenBank 數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，采用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)樹，對(duì)驢皮及其混偽品進(jìn)行鑒別，結(jié)果顯示，22 份驢、馬和牛皮樣品的基因序列與GenBank 數(shù)據(jù)庫(kù)中的一致性大于99%。Zhang 等[32]以驢、馬和牛線粒體COⅠ為目標(biāo)靶序列，新設(shè)計(jì)和合成3 對(duì)特異性探針/引物，此外，還通過(guò)查閱文獻(xiàn)獲得8 對(duì)探針/引物，挑選11 組探針引物中特異性、靈敏度最高的組別，對(duì)采樣量、引物最終濃度等影響檢測(cè)特異性和檢測(cè)效率的參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。

2.1.3 蛋白組學(xué) 以質(zhì)譜為核心的蛋白組學(xué)技術(shù)，具有高選擇性、高分辨率和高通量等優(yōu)點(diǎn)，逐漸成為鑒別真?zhèn)蔚挠辛ぞ遊33]，相較于傳統(tǒng)方法，蛋白組學(xué)技術(shù)對(duì)樣品前處理的要求較簡(jiǎn)單，樣品破壞度較小，可得到更為穩(wěn)定的肽段。房芳等[34]利用鳥槍蛋白組學(xué)對(duì)膠原蛋白源物種特異性肽段的序列特征的研究，推測(cè)出制膠過(guò)程中膠原蛋白的裂解規(guī)律，并獲得了2 條分別來(lái)自于馬源角蛋白和未命名的馬源蛋白，可用于鑒定阿膠中馬皮膠。褚夏燕等[35]基于鳥槍法蛋白組學(xué)分析技術(shù)對(duì)東阿阿膠中蛋白多肽類物質(zhì)進(jìn)行系統(tǒng)分析，從東阿阿膠中共鑒定出2 291 個(gè)馬屬肽段，并首次在東阿阿膠中發(fā)現(xiàn)了255個(gè)含美拉德修飾（AML、CML、CEL）的馬屬肽段，經(jīng)鑒定發(fā)現(xiàn)，所檢出的肽段源于678 個(gè)馬屬蛋白，此研究為深入了解阿膠的化學(xué)物質(zhì)組成和效應(yīng)物質(zhì)提供了新線索和關(guān)鍵信息。

2.1.4 指紋圖譜 中藥成分復(fù)雜多樣，以單一成分為指標(biāo)已難以滿足質(zhì)量控制的需要，而指紋圖譜可以使中藥成分更清晰，更利于研究。李蘭杰等[36]利用氣相色譜初步構(gòu)建了驢、羊和牛皮中總脂肪酸成分的指紋圖譜，并經(jīng)歸一化法測(cè)定驢、羊和牛皮中肉豆蔻、棕櫚油酸的相對(duì)含量，進(jìn)而鑒定驢皮。付英杰等[37]建立了阿膠酶解物HPLC 指紋圖譜，分別對(duì)3 個(gè)廠家阿膠的胰蛋白酶酶解物和糜蛋白酶酶解物進(jìn)行相似度分析、聚類分析及主成分分析，為不同廠家阿膠的區(qū)分提供依據(jù)。李婉斯等[38]采用異硫氨酸苯酯和三乙胺柱前衍生化法，建立10 批阿膠藥材17 種氨基酸成分含量的HPLC指紋圖譜，為阿膠特征性評(píng)價(jià)方法的建立提供依據(jù)。

2.1.5 其他方法 陳麗云等[39]通過(guò)傅里葉變換衰減全反射紅外光譜技術(shù)（ATR-FTIR）發(fā)現(xiàn)東阿阿膠及偽品東阿阿膠紅外光譜共同存在asCH3、asCH2、amide-I、amide-II 和amide-III 等6 種紅外吸收，但二者對(duì)應(yīng)的紅外吸收頻率、強(qiáng)度及峰型均有顯著差異，可用于阿膠的鑒別。高鳳偉等[40]建立了近紅外快速、無(wú)損檢測(cè)豬皮膠、牛皮膠和驢皮膠的方法，F(xiàn)isher判別分析模型預(yù)測(cè)及識(shí)別率達(dá)到100%，可用于阿膠鑒定。Cai 等[41]利用質(zhì)譜和信息學(xué)結(jié)合的方法從阿膠中鑒定并驗(yàn)證得到特異性肽Pep-1 和Pep-2，這兩種特異性肽可以將阿膠與其高度同源的馬皮和騾皮明膠以及其他明膠產(chǎn)品區(qū)分開。

2.2 重金屬殘留檢測(cè)

孫茜茜等[42]采用電感耦合等離子體 質(zhì)譜（ICPMS）法檢測(cè)了60 份阿膠樣品，利用單因子超標(biāo)指數(shù)、內(nèi)梅洛綜合指數(shù)和超標(biāo)物分擔(dān)率評(píng)價(jià)重金屬含量情況，結(jié)果顯示，阿膠重金屬綜合超標(biāo)情況處于安全狀態(tài)，但鉛和鉻超標(biāo)狀況仍值得關(guān)注。郭芯岐等[43]利用石墨爐原子吸收分光光度法對(duì)阿膠中鉛含量的不確定度進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，不確定度主要是由標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合和標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過(guò)程中引入，因此，試驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)多次測(cè)量和采用更精準(zhǔn)的玻璃儀器。

2.3 微生物限度檢測(cè)

梁濤波等[44]建立了PMA-mqPCR 定量檢測(cè)沙門氏菌和金黃色葡萄球菌活菌的方法，發(fā)現(xiàn)在純培養(yǎng)液中沙門氏菌和金黃色葡萄球菌的檢測(cè)靈敏度分別為102 CFU/mL 和101 CFU/mL，而在阿膠制品加樣的靈敏度均為103 CFU/mL。通過(guò)PMA 預(yù)處理，結(jié)合多重?zé)晒獗O(jiān)測(cè)體系，可實(shí)現(xiàn)同時(shí)對(duì)多種致病菌活菌的檢測(cè)，且活菌回收率高。

3 藥理及藥效

中醫(yī)講阿膠具有補(bǔ)血滋陰、潤(rùn)燥和止血的功效，現(xiàn)代藥理研究也表明，阿膠主要有抗貧血止血、抗菌抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗衰老、抗疲勞和抗氧化等作用。

3.1 抗貧血

阿膠對(duì)多種原因所導(dǎo)致的貧血均有較好的療效。曹露萍等[45]發(fā)現(xiàn)阿膠對(duì)慢性再生障礙貧血的輔助治療效果較好，可以顯著改善輕型或中間型-或-地中海貧血孕婦的癥狀，其中對(duì)基因型為CD 41-42(-TTCT)/N 的孕婦的治療效果更好[46]，其抗貧血作用與上調(diào)基因ZNF471 和THOC5 分別參與的Kruppel 相關(guān)盒（KRAB）鋅指蛋白通路和THOC5 通路有關(guān)，表明阿膠對(duì) 地中海貧血孕婦的抗貧血作用可能與翻譯調(diào)節(jié)有關(guān)，特別是血影蛋白相關(guān)合成的翻譯過(guò)程[47]。阿膠肽 鐵螯合物可以使缺鐵性貧血小鼠的血液指標(biāo)明顯恢復(fù)，顯著增加小鼠血液血紅蛋白（HGB）、紅細(xì)胞壓積（HCT）、紅細(xì)胞平均容量（MCV）、紅細(xì)胞平均血紅蛋白量（MCH）、直接測(cè)定的紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度（CHCM）和紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度（MCHC）的值，降低血紅蛋白含量分布寬度（HDW）和紅細(xì)胞體積分布寬度（RDW）值[48]，進(jìn)而改善缺鐵性貧血癥狀。而阿膠提取物組分A可增加5-氟尿嘧啶和 射線輻射致貧血小鼠模型的紅細(xì)胞（RBC）和白細(xì)胞（WBC）數(shù)量，組分A 經(jīng)離子交換層析分離得到的A1 和A2 可通過(guò)提高小鼠骨髓細(xì)胞CFU-E 和CFU-GM 表現(xiàn)出造血活性，經(jīng)進(jìn)一步分離得到的A11 具有更強(qiáng)地提高CFUE 和CFU-GM 的活性，其中利用串聯(lián)質(zhì)譜和蛋白組學(xué)得到的肽11 對(duì)CFU-E 和CFU-GM 的作用與劑量呈正相關(guān)[49]。研究發(fā)現(xiàn)，阿膠對(duì)5 氟尿嘧啶致貧血小鼠模型的造血作用與EMC-相互作用受體、Wnt 信號(hào)通路、PI3K-Akt信號(hào)通路、TGF- 信號(hào)通路和造血細(xì)胞譜系及破骨細(xì)胞分化有關(guān)，Ibsp、Col1a1、Col1a2、Notum、Sost、Dkk1、Irx5、Irx3 和Dcn 是關(guān)鍵調(diào)控分子[50]。

3.2 止血

邸志權(quán)等[51]利用毛細(xì)管法和剪尾法測(cè)定阿膠和小分子阿膠對(duì)小鼠凝血時(shí)間和出血時(shí)間的影響，發(fā)現(xiàn)二者均能明顯縮短小鼠凝血時(shí)間和出血時(shí)間，且1.5g/kg的阿膠可顯著逆轉(zhuǎn)肝素化所致大鼠凝血酶原時(shí)間延長(zhǎng)，表明阿膠可通過(guò)拮抗血液肝素化和活化凝血因子表現(xiàn)出止血收斂的作用。

3.3 抗炎和抗菌

古籍中有關(guān)于阿膠治療“虛勞咳嗽，肺痿吐膿”和“久咳肺癰”的記載，還能“補(bǔ)肺氣，止嗽止痢，惟久而虛者宜之”?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究也集中在其對(duì)肺部疾病的抗炎作用。張喆等[52]考察阿膠對(duì)香煙煙霧暴露法所致慢性阻塞性肺疾?。–OPD）模型小鼠氣道重塑及基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子- 1（TGF- 1）因子表達(dá)的影響，結(jié)果顯示，阿膠能顯著降低肺泡灌洗液和肺臟組織中MMP-2、MMP-9 和TGF- 1 表達(dá)水平，通過(guò)調(diào)節(jié)其異常表達(dá)，有效抑制氣道炎癥和氣道重塑的發(fā)生。阿膠可以通過(guò)降低小鼠肺組織Th17 細(xì)胞和Treg 細(xì)胞比例，血清IL-17A、IL-6、Foxp3 水平和肺組織中IL-17A、IL-6 和Foxp3 表達(dá)來(lái)減輕氣道炎癥小鼠肺臟炎癥[53]。研究發(fā)現(xiàn)阿膠能顯著降低被動(dòng)吸煙小鼠肺臟Th17 和Treg 細(xì)胞亞群比例及Foxp3 因子轉(zhuǎn)錄水平，顯著降低IL-17A、IL-6、TGF- 及ROR t 因子轉(zhuǎn)錄水平，表明阿膠可以通過(guò)下調(diào)Th17 應(yīng)答減輕肺臟的局部炎癥[54]。研究發(fā)現(xiàn)，高劑量（4 g/kg）阿膠可使COPD 大鼠呼氣持續(xù)時(shí)間（Te）和松弛時(shí)間（RT）和支氣管收縮程度（Penh）顯著下降，吸氣峰流速（PIF）、每分鐘通氣量（MV）和呼出50%潮氣量時(shí)呼氣流速（EF50）顯著增加，減輕肺部炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和肺泡擴(kuò)張，減少肺大泡，緩解肺氣腫，進(jìn)而延緩慢性阻塞性肺疾病病理進(jìn)程[55]。

Cheng 等[56]研究發(fā)現(xiàn)，阿膠肽—鐵螯合物可顯著改善貧血小鼠結(jié)腸組織黏膜潰瘍、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和減少氧化應(yīng)激，與傳統(tǒng)補(bǔ)鐵劑相比，高劑量阿膠肽 鐵螯合物不會(huì)導(dǎo)致致病菌增加、有益菌減少，具有更高的安全性，可以更穩(wěn)定地維持腸道環(huán)境平衡。Park 等[57]通過(guò)瓊脂試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，阿膠醇提物最小抑制鼠傷寒沙門氏菌的濃度為0.78 mg/mL，最小殺菌濃度為1.56 mg/mL；而且阿膠醇提物在體內(nèi)外均可發(fā)揮抗菌活性，可通過(guò)抑制入侵蛋白SipA、SipB 和SipC 來(lái)減少鼠傷寒沙門氏菌入侵細(xì)菌，降低小鼠小腸染菌的幾率。

3.4 抗衰老、抗疲勞和抗氧化

人各臟腑、氣血津液功能及相互協(xié)調(diào)與人的生老病死息息相關(guān)，《本草綱目》認(rèn)為人臟腑和氣血津液的損耗會(huì)導(dǎo)致臟腑機(jī)能逐漸衰退，外在表現(xiàn)則為衰老[58]。研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)虛藥在中藥抗衰老方面具有廣泛地應(yīng)用，阿膠屬于補(bǔ)虛藥的范疇，阿膠可以通過(guò)提高抗氧化酶的活性和促進(jìn)新陳代謝等表現(xiàn)出抗衰老和抗氧化等藥理作用。

研究發(fā)現(xiàn)，阿膠對(duì)過(guò)氧化氫和紫外線A 導(dǎo)致的皮膚衰老有抑制作用，阿膠酶解液可以預(yù)防過(guò)氧化氫和紫外線誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，加速過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的人牙齦成纖維細(xì)胞傷口愈合，降低紫外線對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞和3D 皮膚等效物中IV 型膠原蛋白和彈性蛋白表達(dá)的抑制作用，減輕3D 皮膚等效物上皺紋深度[59]。與冷水魚皮膠相比，阿膠酶解液能更好地提升神經(jīng)元樣P12 細(xì)胞的活性，抑制乙酰膽堿酯酶（AchE）的活性[60]。這表明阿膠酶解液可減少經(jīng)A 1-42 處理的PC12 細(xì)胞中淀粉樣蛋白的積累，提高A 清除率，預(yù)防和治療阿爾茨海默病。

分子量集中在400~1 000 Da 的小分子阿膠（CCAH-Ⅱ）對(duì)DPPH 自由基、ABTS 自由基和羥基自由基的清除率較高，通過(guò)對(duì)其組成和圓二色譜分析發(fā)現(xiàn)，CCAH-Ⅱ中疏水性氨基酸、-轉(zhuǎn)角和無(wú)規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu)的占比較高，其可能與小分子阿膠的高抗氧化性密切相關(guān)[61]。研究發(fā)現(xiàn)，阿膠可顯著提高斑馬魚胚胎的存活率和抗氧化酶活性，抑制活性氧（ROS）和丙二醛（MDA）生成[62]。經(jīng)基因檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，阿膠通過(guò)提高胚胎Nrf2 水平及其下游抗氧化酶基因的表達(dá)量，起到對(duì)丙烯酰胺誘導(dǎo)的斑馬魚胚胎氧化應(yīng)激損傷保護(hù)作用。姜一樸等[63]發(fā)現(xiàn)，小分子阿膠肽及阿膠均可顯著延長(zhǎng)大鼠游泳時(shí)間，顯著降低血清丙二醛含量，二者均具有抗疲勞和抗氧化的作用。

3.5 免疫調(diào)節(jié)

阿膠通過(guò)提高小鼠血清中TNF- 和GM-CSF 的表達(dá)，脾臟中TNF- 和GM-CSF mRNA 表達(dá)來(lái)改善環(huán)磷酰胺所致的小鼠免疫低下[64]，10~30 kDa（F2）組分阿膠具有較強(qiáng)的免疫活性，可促進(jìn)細(xì)胞TNF- 、IL-6、iNOS 和TLR4 基因表達(dá)，從而提高細(xì)胞內(nèi)其mRNA含量，說(shuō)明F2 組分可與TLR4 受體結(jié)合，并能促進(jìn)細(xì)胞中JNK、ERK 和P38 蛋白磷酸化，通過(guò)MAPK 信號(hào)通路發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用[65]。安夢(mèng)培等[66,67]研究發(fā)現(xiàn)，阿膠、小分子阿膠可顯著提高免疫功能低下小鼠血清溶血素含量并能顯著提高小鼠T 淋巴細(xì)胞（CD3+）、輔助性和遲發(fā)超敏性T 細(xì)胞（CD3+/CD4+）占淋巴細(xì)胞百分比，顯著提高小鼠體液免疫和細(xì)胞免疫。梁榮等[68]發(fā)現(xiàn)，高劑量小分子阿膠肽增加小鼠血清溶血素水平、增強(qiáng)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)和促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化增值的能力更強(qiáng)，中劑量可明顯增加小鼠脾細(xì)胞抗體生成，正向調(diào)節(jié)小鼠免疫功能。

3.6 對(duì)子宮及子宮腫瘤的影響

有研究發(fā)現(xiàn)，阿膠對(duì)正常雌性小鼠有一定雌性激素樣作用[69]，可通過(guò)提高促排卵大鼠模型子宮內(nèi)膜的子宮內(nèi)膜雌激素受體（ER）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的表達(dá)，來(lái)改善子宮內(nèi)膜血流，促進(jìn)激素發(fā)揮作用，進(jìn)而改善子宮內(nèi)膜的容受性[70]。楊敏春等[71]研究阿膠對(duì)模型大鼠子宮肌瘤的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，高劑量[0.94 g/（kg d）]阿膠通過(guò)改善血液流變學(xué)、降低血清雌激素（E2）、上調(diào)促卵泡生長(zhǎng)激素（FSH）和促黃體生成素（LH）水平進(jìn)而治療子宮肌瘤。

3.7 其他作用

阿膠經(jīng)胰蛋白酶酶解得到的小分子阿膠可顯著提高環(huán)磷酰胺所致白細(xì)胞減少模型小鼠的白細(xì)胞數(shù)量，具有升白的作用[72,73]。報(bào)道發(fā)現(xiàn)，1%以下濃度的阿膠可促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖，顯著促進(jìn)成纖維細(xì)胞遷移和Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)；5%濃度的阿膠可以修復(fù)十二烷基硫酸鈉造成的皮膚損傷并抑制IL-1 表達(dá)，效果與地塞米松類似[74]。研究發(fā)現(xiàn)，去卵巢小鼠經(jīng)阿膠治療后神經(jīng)細(xì)胞核固縮減少，神經(jīng)元變性程度減輕，完整錐形細(xì)胞數(shù)量明顯增多，這表明阿膠可通過(guò)減少海馬區(qū)CA1 區(qū)A 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及減少海馬A 陽(yáng)性細(xì)胞積分密度提升去卵巢小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力[75]。

表2 阿膠藥理作用機(jī)制Table 2 Pharmacological mechanism of Asini corii colla

4 小結(jié)與討論

當(dāng)前對(duì)于阿膠成分的研究只是冰山一角，目前從阿膠中分離出的主要化學(xué)成分有氨基酸、多肽及蛋白質(zhì)類，多糖類和揮發(fā)性物質(zhì)類。其中，小分子肽及蛋白質(zhì)為阿膠中的主要有效成分，雖已有文獻(xiàn)利用液相色譜—質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)從阿膠胃腸道消化產(chǎn)物中檢測(cè)出519 種活性肽，但尚不了解其中起主要藥理作用的成分。雖然有從阿膠中提取純化出多糖成分，但有關(guān)藥理作用只是猜想，沒(méi)有研究證實(shí)，有待進(jìn)一步研究。阿膠中揮發(fā)性物質(zhì)為其腥味的主要來(lái)源，因此，可以通過(guò)減少此類物質(zhì)減少腥味，達(dá)到利于服用的目的。

阿膠作為膠劑，成分及其含量復(fù)雜，膠類中藥的質(zhì)量控制通常采用傳統(tǒng)的經(jīng)驗(yàn)鑒別法（顏色、形狀、氣味、口感、質(zhì)地、火試和水試等）和一般的理化分析測(cè)試方法，難以制定嚴(yán)格明確的質(zhì)量控制方法[16]。當(dāng)前對(duì)于阿膠鑒定方面的研究，分為真?zhèn)舞b定和有害物質(zhì)檢測(cè)等。前者主要有兩種思路來(lái)鑒別阿膠中的摻假成分，一種是利用提取、純化得到的特異性肽段區(qū)別摻假皮源和驢皮；另一種是提取出特異性DNA，利用PCR 擴(kuò)增，從而區(qū)別驢特異性DNA 和摻假皮源DNA。后者主要采用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）法、石墨爐原子吸收分光光度法來(lái)檢測(cè)阿膠中鉛、鎘、砷和汞等重金屬殘留；采用PMA-mqPCR 定量檢測(cè)阿膠中沙門氏菌和金黃色葡萄球菌活菌含量。

現(xiàn)有研究報(bào)道表明，阿膠具有抗貧血、止血、抗炎、抗氧化、抗疲勞和免疫調(diào)節(jié)等現(xiàn)代藥理作用，其中關(guān)于阿膠抗貧血、抗菌抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)制的研究較多，而關(guān)于抗氧化和止血等的作用機(jī)制研究尚少，且現(xiàn)有的研究多數(shù)停留在動(dòng)物層面和細(xì)胞層面，有關(guān)分子層面藥理機(jī)制的研究極少。

未來(lái)，阿膠的研究應(yīng)從以下3 方面著重展開：（1）應(yīng)加強(qiáng)有關(guān)阿膠中藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究，特別是相關(guān)小肽方面的研究；（2）雖特異性肽已用于阿膠質(zhì)量控制研究，但目前得到的驢特異性肽較少，且不同研究者得到特異性肽不同，應(yīng)建立阿膠特異性肽數(shù)據(jù)庫(kù)，便于阿膠的質(zhì)量控制；（3）現(xiàn)已有的研究大多針對(duì)阿膠生品而言，有關(guān)其炮制品的研究鮮有報(bào)道，阿膠經(jīng)炮制后其化學(xué)成分、質(zhì)量控制及藥理作用是否還如生品一樣，不得而知，因此，阿膠未來(lái)的研究，可從阿膠藥理的分子機(jī)制、阿膠中有效組分或成分、阿膠炮制品等方面，單獨(dú)或交叉入手，對(duì)其進(jìn)行深入研究。綜上所述，阿膠具有極高的開發(fā)價(jià)值，應(yīng)進(jìn)行廣泛的基礎(chǔ)研究，為阿膠的應(yīng)用提供基礎(chǔ)依據(jù)。