田旭軍 廖遜 李榮玉 李明 吳小毛 龍友華

摘 要：采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了3種中藥乙醇提取物對(duì)獼猴桃葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）的毒力以及聯(lián)合作用。結(jié)果表明：苦參、丹參以及黃岑片3種乙醇提取物對(duì)B.dothidea菌絲生長(zhǎng)均有一定的抑制作用，其EC50分別為60.44、60.78和97.86 μg/mL?？鄥⒑偷⑻崛∥镆杂行з|(zhì)量比為1∶ 1、1∶ 3、1∶ 6時(shí)對(duì)獼猴桃B.dothidea均表現(xiàn)為增效作用，其CTC分別為133.16、126.16和129.56；而黃岑片·苦參、黃岑片·丹參的提取物復(fù)配則均表現(xiàn)為相加作用，其CTC為80.71～117.62。該研究結(jié)果可為防治獼猴桃軟腐病的藥劑組合提供參考。

關(guān)鍵詞： 中藥提取物；獼猴桃；葡萄座腔菌；毒力；聯(lián)合作用

中圖分類號(hào)：S435.6

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1008－0457（2023）02－0086－04

國(guó)際DOI編碼：10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2023.02.013

獼猴桃（Actinidia chinensis Planch）屬獼猴桃科（Actinidiaceae）獼猴桃屬（Actinidia），其果實(shí)中含有豐富的K、Zn、Ca等多種礦物元素、氨基酸和維C等物質(zhì)，因此被譽(yù)為“人間仙果”“果中之王”和“維C之王”等［1-4］。獼猴桃采摘后儲(chǔ)藏期間最常見的一種潛伏性病害（軟腐?。┌l(fā)生嚴(yán)重，腐爛率可達(dá)50%以上，嚴(yán)重影響獼猴桃的品質(zhì)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。獼猴桃軟腐病又稱熟腐病，主要是由葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）、擬莖點(diǎn)霉菌（Phomopsis macrospore）和灰霉菌（Botrytis cinerea）等病原菌引起的軟腐?。?-8］，而葡萄座腔菌被認(rèn)為是引起該病害的主要致病菌，發(fā)病快且難以防治［9-10］，給獼猴桃產(chǎn)業(yè)帶來嚴(yán)重影響。目前，獼猴桃軟腐病的防治依然以化學(xué)防治為主，為了降低對(duì)化學(xué)農(nóng)藥的過度依賴，篩選高效生物農(nóng)藥是一種較好的選擇。近年來，植物源殺菌劑作為“環(huán)境和諧農(nóng)藥”和“生物合理性農(nóng)藥”的重要組成部分［11］，植物源殺菌劑因其具有高效、低毒、易降解以及不產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點(diǎn)而受到人們的高度關(guān)注。國(guó)內(nèi)外很多學(xué)者對(duì)其進(jìn)行了研究，如王帆帆等［12］明確了丁子香酚和蛇床子素對(duì)草莖點(diǎn)霉的室內(nèi)毒力較高；高以宸等［13］的研究表明了紅蓼揮發(fā)油在種子發(fā)芽期及苗期對(duì)馬鈴薯環(huán)腐病菌有顯著的抑制作用；Meena等［14］研究表明，牛蹄豆的水提物對(duì)茉莉的Sclertium rolfsii病菌具有一定的抑制作用。因此，本文選取了黃岑片、丹參、苦參3種中藥添加乙醇進(jìn)行提取，并研究乙醇提取物對(duì)獼猴桃軟腐病致病菌（葡萄座腔菌）的抑制作用，以及測(cè)定黃岑片、丹參和苦參3種乙醇提取物組合的聯(lián)合毒力，以期為獼猴桃軟腐病的防治及生物農(nóng)藥的篩選提供依據(jù)。

1 ?材料與方法

1.1 ?試驗(yàn)材料

1.1.1 ?供試病原菌

獼猴桃葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）由貴州大學(xué)農(nóng)學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全實(shí)驗(yàn)室供給。

1.1.2 ?供試藥劑及儀器設(shè)備

供試藥劑：黃岑片無水乙醇提取物、苦參無水乙醇提取物、丹參無水乙醇提取物。

儀器設(shè)備：SJ-CJ-2FD超凈工作臺(tái)（蘇州蘇潔凈化設(shè)備有限公司）、BIC-400人工氣候箱（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）、立式壓力蒸氣滅菌器（LDZM-80L-1，上海申安醫(yī)療器械廠）、接種針、5 mm打孔器、9 mm培養(yǎng)皿、1 mL和5 mL移液槍及槍頭、10 mL離心管等。

1.1.3 ?供試培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基參照劉世江等［15］的方法，略加修改，具體如下：馬鈴薯200 g、葡萄糖15～20 g、瓊脂20 g、純凈水1000 mL。煮好后在121 ℃條件下滅菌20 min，冷卻至50 ℃左右備用。

1.2 ?試驗(yàn)方法

1.2.1 ?3種中藥乙醇提取物對(duì)獼猴桃軟腐病菌的毒力測(cè)定

采用菌絲生長(zhǎng)速率法［16］測(cè)定黃岑片、苦參和丹參3種中藥乙醇提取物對(duì)獼猴桃軟腐病菌的毒力。根據(jù)所設(shè)濃度梯度配置成相應(yīng)的母液，將其與PDA以體積比為1∶ 9倒入平板中，制成含黃岑片乙醇提取物25、50、100、200、400 μg/mL的系列濃度含藥平板；含苦參乙醇提取物25、50、100、200、400 μg/mL的系列濃度含藥平板；含丹參乙醇提取物25、50、100、200、400 μg/mL的系列濃度含藥平板，沿活化的菌落邊緣取直徑為5 mm的菌餅，接至含不同濃度的PDA平板中央，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。并采用十字交叉法測(cè)量各藥劑各濃度的菌落直徑，并利用Excel 2010計(jì)算出毒力回歸方程、有效抑制中濃度（EC50）及其相關(guān)系數(shù)等。

1.2.2 ?3種中藥乙醇提取物及其組合對(duì)獼猴桃軟腐病菌的聯(lián)合作用

采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定黃岑片、苦參和丹參乙醇提取物兩兩復(fù)配對(duì)獼猴桃軟腐病菌的聯(lián)合作用。沿活化的菌落邊緣 取直徑為5 mm的菌餅，接

至含不同組合不同濃度的PDA平板中央，各組合各比例的濃度見表1，并采用 1.2.1 中的方法測(cè)定各組合各比例對(duì)獼猴桃軟腐病菌的毒力。根據(jù)孫云沛法［17］進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)算混劑的共毒系數(shù)（CTC），當(dāng)共毒系數(shù)大于120時(shí)，表現(xiàn)為增效作用，小于80時(shí)表現(xiàn)為拮抗作用，在80～120之間時(shí)則表現(xiàn)為相加作用［18］。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?黃岑片、苦參和丹參3種中藥提取物對(duì)葡萄座腔菌的毒力分析

黃岑片、苦參及丹參3種中藥乙醇提取物對(duì)獼猴桃軟腐病致病菌（葡萄座腔菌）菌絲生長(zhǎng)均具有一定的抑制作用（表2），其EC50分別為97.86、60.44和60.78 μg/mL。丹參、苦參和黃岑片乙醇提取物對(duì)獼猴桃軟腐病致病菌（葡萄座腔菌）的抑制作用無明顯差異，其中苦參和丹參乙醇提取物對(duì)獼猴桃葡萄座腔菌抑制作用較強(qiáng)，而黃岑片乙醇提取物抑制活性較弱。

2.2 ?3種中藥提取物組合對(duì)獼猴桃軟腐病菌的聯(lián)合毒力

2.2.1 ?黃岑片和苦參提取物組合對(duì)獼猴桃葡萄座腔菌的聯(lián)合毒力

黃岑片和苦參乙醇提取物組合（6∶ 1、3∶ 1、1∶ 1、1∶ 3、1∶ 6）對(duì)獼猴桃軟腐病致病菌（葡萄座腔菌）菌絲生長(zhǎng)均有一定的抑制作用（表3）。根據(jù)EC50可知， 苦參提取物對(duì)獼猴桃葡萄座腔菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用要優(yōu)于黃岑片提取物，其EC50值分別為68.34和98.16 μg/mL；黃岑片·苦參乙醇提取物以有效質(zhì)量比為6∶ 1、3∶ 1、1∶ 1、1∶ 3、1∶ 6時(shí)均表現(xiàn)為相加作用，其共毒系數(shù)（CTC）為84.59～96.15。

2.2.2 ?黃岑片和丹參提取物組合對(duì)獼猴桃葡萄座腔菌的聯(lián)合作用

黃岑片和丹參乙醇提取物組合（6∶ 1、3∶ 1、1∶ 1、1∶ 3、1∶ 6）對(duì)獼猴桃葡萄座腔菌菌絲生長(zhǎng)均具有一定的抑制作用（表4）。黃岑片和丹參提取物對(duì)獼猴桃葡萄座腔菌的抑制作用無顯著差異，其EC50分別為98.16、89.35 μg/mL；黃岑片和丹參提取物組合中，黃岑片和丹參提取物以有效質(zhì)量比為1∶ 3和1∶ 6時(shí)相加作用比較明顯，其CTC分別為112.86和117.62。

2.2.3 ?苦參和丹參提取物組合對(duì)獼猴桃葡萄座腔菌的聯(lián)合作用

苦參和丹參提取物5個(gè)組合（6∶ 1、3∶ 1、1∶ 1、1∶ 3、1∶ 6）對(duì)獼猴桃軟腐病致病菌（葡萄座腔菌）菌絲生長(zhǎng)均有一定的抑制作用（表5）。根據(jù)其EC50可知，苦參提取物對(duì)獼猴桃葡萄座腔菌菌絲生長(zhǎng)的抑制效果要好于丹參提取物，其EC50分別為68.34和89.35 μg/mL；苦參·丹參提取物以有效質(zhì)量比為6∶ 1和3∶ 1時(shí)表現(xiàn)為相加作用，其EC50分別為70.55和65.04 μg/mL，CTC分別為100.23和111.63；而苦參·丹參提取物以有效質(zhì)量比為1∶ 1、1∶ 3和1∶ 6時(shí)表現(xiàn)為增效作用，其CTC值分別為133.16、126.16和129.56，均大于120。

3 ?結(jié)論與討論

本研究明確了黃岑片、苦參以及丹參3種乙醇提取物對(duì)獼猴桃葡萄座腔菌具有一定的抑制作用，其EC50為60.44～97.86 μg/mL。聯(lián)合作用表明，本研究篩選出的3個(gè)復(fù)配組合對(duì)獼猴桃葡萄座腔菌具有增效作用，分別為苦參·丹參以有效質(zhì)量比為1∶ 1、1∶ 3、1∶ 6，其CTC分別為133.16、126.16和129.56。以上3種中藥提取物對(duì)葡萄座腔菌引起的獼猴桃熟腐病的防治效果未見相關(guān)報(bào)道，但張盈等［19］研究表明了黃岑片對(duì)引起小麥赤霉病的禾谷鐮孢菌具有較好的抑制效果；楊波等［20］也明確了0.3%苦參堿對(duì)葡萄霜霉病菌的EC50值和EC90值分別為2.1834和0.5464 mg/L；并且梁魁景等［21］研究表明3%苦參堿AS對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌也具有較好的抑制作用。這些研究表明黃岑片、苦參和丹參對(duì)不同作物不同病原菌均具一定的抑制作用，與本試驗(yàn)的研究結(jié)果一致。

隨著我國(guó)獼猴桃產(chǎn)業(yè)的迅猛發(fā)展，獼猴桃軟腐病逐步得到重視。該病大多發(fā)生在果實(shí)采摘后貯藏期，當(dāng)果實(shí)發(fā)病后，其果肉組織變成水漬狀。病斑中心呈現(xiàn)乳白色，周圍的果肉組織變成黃綠色，病斑形狀表現(xiàn)為圓形或橢圓狀，病斑可逐漸擴(kuò)大引起整果腐爛［22］。目前，化學(xué)防治仍是防治獼猴桃軟腐病的主要措施，如5%己唑醇ME、10%苯醚甲環(huán)唑WG以及50%咪酰胺錳鹽WP等藥劑對(duì)葡萄座腔菌菌絲及孢子均具有較好的毒殺作用［23］。但由于化學(xué)農(nóng)藥長(zhǎng)期單一的使用，易導(dǎo)致抗性 （resistance）、再猖獗（resurgence）以及殘留（residue）等問題。而生物農(nóng)藥具有不易產(chǎn)生抗藥性、對(duì)環(huán)境友好、對(duì)非靶標(biāo)生物安全等特點(diǎn)［9］。在綠色、有機(jī)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中生物農(nóng)藥成為了防治病蟲害的主要手段。鑒于此，本研究主要選擇了黃岑片、苦參和丹參3種中藥提取物對(duì)引起獼猴桃熟腐病的葡萄座腔菌進(jìn)行室內(nèi)生物活性測(cè)，篩選出最佳組合，以期為獼猴桃熟腐病的防治提供新的防治措施。

（責(zé)任編輯：胡吉鳳）

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Toxicity and Combined Effects of Three Herbal Extracts on Botryosphaeria dothidea of Kiwifruit

Tian Xujun，Liao Xun，Li Rongyu*，Li Ming，Wu Xiaomao，Long Youhua

（Institute of Crop Protection/Engineering and Technology Research Center of Kiwifruit，Guizhou University，Guiyang，Guizhou 550025，China）

Abstract：

The virulence of three herbal extracts against the soft rot fungus （Botryosphaeria dothidea） of kiwifruit and the combined effect of the mixture were determined by the mycelial growth rate method.The results showed that Sophora flavescens，Salvia miltiorrhiza and Scutellaria baicalensis showed some ?inhibitory effects on B.dothidea with EC50 of 60.44，60.78 and 97.86 μg/mL，respectively.S.baicalensis and S.flavescens showed potentiation at effective mass ratios of 1∶ 1，1∶ 3 and 1∶ 6，with CTCs of 133.16，126.16 and 129.56，respectively.The extract combinations of S.baicalensis-S.flavescens and S.baicalensis-S.miltiorrhiza all showed additive effects with CTCs ranging from 80.71 to 117.62.The results of this study may provide a reference for determining the combination of agents for the control of soft rot of kiwifruit.

Keywords：

Chinese herbs extracts; kiwifruit; Botryosphaeria dothidea; toxicity; combined effect