徐星榕,白菊萍,邊 蕓,權(quán)小玲,姚家喜

1.張掖市第二人民醫(yī)院病理科,甘肅張掖 734000;2.河西學院附屬張掖人民醫(yī)院病理科,甘肅張掖 734000;3.河西學院附屬張掖人民醫(yī)院泌尿外科,甘肅張掖 734000

胃癌是消化內(nèi)科中較為多見的癌癥,好發(fā)于中老年人群[1]。早期胃癌并無明顯癥狀,部分患者可表現(xiàn)為胃部疼痛、黑便和體重減輕等癥狀[2]。目前胃癌的發(fā)病機制并不明確,可能與遺傳、飲食、感染等有關(guān)。胃黏膜萎縮和腸化生是一種病理表現(xiàn),均屬于癌前狀態(tài),已有研究證實其是引起胃癌的危險因素[3]。細胞角蛋白(CK)主要分布于上皮細胞,是一種復雜的中間絲[4]。CK7和CK20均可體現(xiàn)細胞的分化階段,在胃癌的發(fā)病及分化中起到關(guān)鍵的作用。黏蛋白(MUC)5ac是一種分泌型糖蛋白,可對胃黏膜起到保護的效果,在細胞生長、信號傳導和黏附中發(fā)揮作用[5]。核抗原Ki67是細胞增殖核抗原的一種,可反映出腫瘤細胞的增殖活性[6]。上述幾種指標在胃癌的檢測中均有一定意義,但目前與癌前病變的關(guān)系仍有待考究。因此本研究選取張掖市第二人民醫(yī)院收治的胃部不適患者的臨床資料進行分析,以研究CK、MUC5ac、Ki67表達與胃癌癌前病變的關(guān)系及對胃癌早期診斷的價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年10月至2021年10月于張掖市第二人民醫(yī)院就診的102例胃部不適患者為研究對象,其中男57例,女45例;年齡39～78歲,平均(57.63±5.65)歲,由張掖市第二人民醫(yī)院2名經(jīng)驗豐富的胃鏡醫(yī)師和病理醫(yī)師聯(lián)合診斷確診為胃部良性病變患者47例(良性病變組),胃癌癌前病變患者32例(胃癌癌前病變組),早期胃癌患者23例(早期胃癌組)。納入標準:(1)患者均符合《中國慢性胃炎共識意見(2017年,上海)》[7]中相關(guān)診斷標準;(2)患者入院前未接受藥物治療;(3)患者于張掖市第二人民醫(yī)院接受胃鏡和病理檢查;(4)患者對本研究知情且簽署同意書。排除標準:(1)患者既往合并腸結(jié)核、胃食管反流或腸道腫瘤等消化道惡性病變;(2)患者合并嚴重肝、腎功能障礙;(4)患者既往接受胃腸道手術(shù);(5)患者存在神經(jīng)認知功能障礙,無法配合研究。

1.2方法 收集患者的病灶組織進行檢查,采用10%甲醛溶液進行固定,并以梯度濃度乙醇進行脫水處理;采用BIOBASE全自動包埋機(濟南程騰生物技術(shù)有限公司)將組織包埋成塊,再以配套組織切片機連續(xù)切片;隨后以二甲苯、枸櫞酸鈉緩沖液和過氧化氫溶液進行脫蠟、抗原修復和過氧化氫酶阻斷,采用磷酸鹽緩沖液反復漂洗3次;隨后加入山羊血清封閉,加入稀釋后的鼠抗人CK20單克隆抗體(上海億欣生物科技有限公司)、鼠抗人CK7單克隆抗體(上海億欣生物科技有限公司)、鼠抗人MUC5ac單克隆抗體(艾美捷科技有限公司)和鼠抗人Ki67單克隆抗體(北京普利萊基因技術(shù)有限公司);在4 ℃下孵育過夜,隨后以磷酸鹽緩沖液反復漂洗3次后滴加羊抗鼠IgG(北京索萊寶科技有限公司);采用辣根過氧化物酶顯色試劑盒(北京索萊寶科技有限公司)進行顯色處理,以蘇木精(成都普菲德對照品科技有限公司)進行復染,梯度乙醇脫水,中性樹脂完成封片;在顯微鏡下對CK20、CK7、MUC5ac、Ki67表達進行觀察。結(jié)果判定:由兩名經(jīng)驗豐富的醫(yī)師對結(jié)果進行判定。CK20、CK7陽性染色均為淡黃色、棕黃色或者棕褐色,定位在細胞膜;MUC5ac陽性染色為棕黃色,定位在細胞質(zhì);Ki67陽性染色為棕黃色,定位在細胞核。陽性細胞計數(shù):陽性細胞在視野內(nèi)占比<5%為0分,占比在5%～<25%為1分,占比在25%～<50%為2分,占比在50%～<75%為3分,占比≥75%為4分;染色強度:淡黃色為1分;棕黃色為2分;棕褐色為3分;陽性細胞計數(shù)分數(shù)與染色強度分數(shù)相乘為最終得分,0分為陰性,>0分為陽性。聯(lián)合診斷標準:只要其中任意一項為陽性即可判斷為陽性。

1.3觀察指標 比較3組患者CK20、CK7、MUC5ac、Ki67的表達情況,并分析CK20、CK7、MUC5ac、Ki67表達對于早期胃癌的診斷價值。

2 結(jié) 果

2.13組患者CK20、CK7、MUC5ac、Ki67表達情況比較 良性病變組、胃癌癌前病變組和早期胃癌組CK20、CK7、MUC5ac、Ki67陽性表達率比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);胃癌癌前病變組和早期胃癌組CK20、CK7、Ki67陽性表達率均高于良性病變組,MUC5ac陽性表達率低于良性病變組;早期胃癌組CK20、CK7、Ki67陽性表達率均高于胃癌癌前病變組,MUC5ac陽性表達率低于胃癌癌前病變組,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組患者CK20、CK7、MUC5ac、Ki67表達情況比較[n(%)]

2.2胃癌癌前病變患者CK20、CK7、MUC5ac、Ki67蛋白表達與臨床病理特征的關(guān)系 胃癌癌前病變組不同性別、年齡、發(fā)病部位和病理類型患者CK20、CK7、MUC5ac、Ki67陽性表達率比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 胃癌癌前病變患者CK20、CK7、MUC5ac、Ki67蛋白表達與臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]

2.3CK20、CK7、MUC5ac、Ki67陽性表達診斷早期胃癌的價值分析 通過繪制ROC曲線分析發(fā)現(xiàn),CK20診斷早期胃癌的曲線下面積(AUC)為0.849,靈敏度為82.6%,特異度為87.2%;CK7診斷早期胃癌的AUC為0.860,靈敏度為87.0%,特異度為85.1%;MUC5ac診斷早期胃癌的AUC為0.827,靈敏度為73.9%,特異度為91.5%;Ki67診斷早期胃癌的AUC為0.838,靈敏度為78.3%,特異度為89.5%;4項指標聯(lián)合檢測診斷早期胃癌的AUC、靈敏度和特異度分別為0.892、89.0%和92.5%,均高于各項指標單獨檢測,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 CK20、CK7、MUC5ac、Ki67陽性表達診斷早期胃癌的價值分析

3 討 論

早期胃癌并無明顯癥狀,大部分患者出現(xiàn)癥狀時已經(jīng)發(fā)展至終末期,導致預后效果較差。胃癌是一個持續(xù)性病理性改變,可經(jīng)歷正常胃黏膜、淺表性胃炎、萎縮性胃炎、腸上皮化生和異型增生等過程,最終進展為胃癌[8]。因此對胃癌癌前病變和早期胃癌的診斷極為重要。本研究為此展開討論,為臨床上胃癌癌前病變和早期胃癌的診斷提供基礎(chǔ)。

CK是細胞骨架成分的一種,能夠發(fā)揮穩(wěn)定細胞形態(tài)、運動和調(diào)節(jié)細胞分化的能力[9]。CK20是CK的一種,具有較高的上皮特異性,在非上皮細胞或者組織中均無表達。通常情況下,CK20主要分布在細胞核和細胞器周圍。當癌變細胞惡性增生時,CK需要適應(yīng)惡性細胞引起的細胞形態(tài)和功能的改變,進而出現(xiàn)一系列的狀態(tài)重建[10]。CK7最初是在人體卵巢細胞株中被提取,在乳腺、肺、上皮組織和子宮內(nèi)膜中均呈陽性表達[11]。本研究結(jié)果顯示,胃癌癌前病變組和早期胃癌組CK20和CK7陽性表達率均高于良性病變組?？梢奀K20和CK7均在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。同時進行診斷價值分析發(fā)現(xiàn),兩種蛋白對于早期胃癌的診斷價值均較高。MUC5ac是胃型分泌型黏蛋白的一種,由胃腸道和呼吸道等上皮細胞生成,可發(fā)揮保護黏膜上皮和潤滑的效果[12]。MUC5ac是人體黏膜黏液的重要組成部分,與上皮細胞更新、分化、完整性保持及抵御腫瘤侵襲存在一定的相關(guān)性。張月凡等[13]研究發(fā)現(xiàn),MUC5ac在胃癌組織中呈低表達,與患者分化程度和預后存在相關(guān)性。這與本研究結(jié)果,胃癌癌前病變組和早期胃癌組MUC5ac陽性表達率低于良性病變組一致。本研究結(jié)果還顯示,MUC5ac對于早期胃癌的診斷價值較高。這是因為,胃部出現(xiàn)病理性改變時,MUC5ac也出現(xiàn)變化,蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)異常,硫基化、糖基化受到抑制,這均會影響MUC5ac對于胃腺的保護,進而導致胃癌癌前病變及胃癌[14]。Ki67是大分子蛋白的一種,在細胞周期G1后期逐漸開始表達,在S期及G2期表達逐步升高,直到M期表達達到最高值。Ki67具有DNA結(jié)合特性,是有絲分裂DNA結(jié)構(gòu)的重要維持蛋白,在腫瘤細胞增殖期表達明顯升高[15]。本研究結(jié)果顯示,胃癌癌前病變組和早期胃癌組Ki67陽性表達率均高于良性病變組。這與張興旺等[16]研究結(jié)果一致,提示Ki67在胃癌患者病情進展中具有重要的檢測價值。本研究進一步行診斷價值分析,結(jié)果顯示,Ki67對于早期胃癌的診斷價值較高,這也進一步證實Ki67在早期胃癌的檢測中具有重要意義。另外,本研究對4項指標進行聯(lián)合檢測發(fā)現(xiàn),其對于早期胃癌的診斷價值均高于各項指標單獨檢測?？梢?4項指標聯(lián)合檢測能夠彌補各項指標檢測的不足之處。

綜上所述,CK20、CK7、MUC5ac、Ki67能夠有效反映胃癌癌前病變和早期胃癌情況,4項指標聯(lián)合檢測對于胃癌癌前病變和早期胃癌的診斷價值較高,能夠有效彌補單項指標檢測的不足。