覃寶利　王信海　王宣朋　姜愛蘭　葉建勇　吳春　單金峰

摘要：為獲知不同養(yǎng)殖參數(shù)放養(yǎng)密度、水草覆蓋率及飼料蛋白水平對克氏原螯蝦生長及生理生化的影響，采用 L9（34） 正交設(shè)計探討其在不同放養(yǎng)密度（8、12、16尾/m2）、水草覆蓋率（20%、40%和60%）及飼料蛋白水平（28%、30%和32%）組合條件下的生長、血清生化指標(biāo)含量及非特異性免疫酶活性的變化。結(jié)果表明，克氏原螯蝦生長性能與放養(yǎng)密度呈負(fù)相關(guān)。放養(yǎng)密度為16尾/m2時，蝦末體質(zhì)量和增長率顯著低于低密度處理組（8、12尾/m2）（P<0.05）。成活率在最大密度組顯著降低（P<0.05），2個低密度組無顯著差異（P>0.05）。水草覆蓋率為40%時克氏原螯蝦體質(zhì)量增長率、特定生長率和成活率顯著高于20%和60%組（P<0.05）。40%水草覆蓋率處理下克氏原螯蝦血清白蛋白（ALB）含量均在16尾/m2密度組顯著下降，其他血清生化指標(biāo)含量均無顯著差異。20%、60%水草覆蓋率處理下白蛋白（ALB）含量變化趨勢與40%水草覆蓋率處理相同，但甘油三酯（TG）含量和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）活性均在 16尾/m2 密度組顯著上升（P<0.05）。同一水草覆蓋率處理下，最大密度組蝦體血清超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）和堿性磷酸酶（AKP）活性最高，顯著高于2個低密度組（P<0.05），溶菌酶（LZM）和酸性磷酸酶（ACP）活性最低，顯著低于2個低密度組（P>0.05）。飼料蛋白水平對克氏原螯蝦生長性能、成活率、血清生化指標(biāo)含量和非特異性免疫酶活性均無明顯相關(guān)性。研究提示，放養(yǎng)密度過高可顯著抑制克氏原螯蝦生長、成活率及生理生化指標(biāo)，適宜的水草覆蓋率可顯著提高克氏原螯蝦生長性能和成活率。綜合評價篩選出克氏原螯蝦圍網(wǎng)最佳組合養(yǎng)殖方案為水草覆蓋率為40%，放養(yǎng)密度為8尾/m2或12尾/m2，飼料蛋白水平為28%。

關(guān)鍵詞：克氏原螯蝦；放養(yǎng)密度；水草覆蓋率；飼料蛋白水平；生長性能；血清生化；非特異性免疫酶

中圖分類號：S966.12 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-1302（2023）05-0183-08

克氏原螯蝦（Procambarus clarkii），俗稱淡水小龍蝦，屬節(jié)肢動物門甲殼綱十足目螯蝦亞目螯蝦科原螯蝦屬［1］。因其風(fēng)味鮮美、營養(yǎng)價值高、商業(yè)效益高而在我國內(nèi)陸被廣泛養(yǎng)殖。2019年全國克氏原螯蝦養(yǎng)殖產(chǎn)量達(dá) 208.96 萬t，養(yǎng)殖總面積達(dá) 128.6 萬hm2［2］。但隨著養(yǎng)殖規(guī)模逐年擴大，養(yǎng)殖問題日益凸顯，如各種病害疫情頻發(fā)、規(guī)格提升困難及生長速度慢等，使龍蝦養(yǎng)殖業(yè)效益大大降低，嚴(yán)重制約其養(yǎng)殖業(yè)健康穩(wěn)定持續(xù)發(fā)展。這與市場有關(guān)，更與養(yǎng)殖技術(shù)有關(guān)，養(yǎng)殖技術(shù)涉及的問題很多［3］。在實際生產(chǎn)中，養(yǎng)殖者為追求更大產(chǎn)量，往往進(jìn)行高密度養(yǎng)殖。而甲殼類動物的高密度養(yǎng)殖通常會加劇資源競爭，如生存空間、隱蔽物、食物［4］、同類相殘［5］；擁擠脅迫，如食欲低下、生理狀態(tài)差、抗病能力弱［6］，導(dǎo)致成活率、規(guī)格、生長速度下降。另一方面，克氏原螯蝦生性喜斗，有同類相殘習(xí)性，是典型具有社會行為的動物?？耸显r在蛻殼時，為避免被捕食，需要找隱蔽物隱藏。有研究表明，隱蔽物不僅可顯著減少甲殼類動物的同類相殘，還能改善甲殼類動物的生存和生長［7-9］。伊樂藻作為一種大型耐寒沉水植物，不僅為克氏原螯蝦提供棲息和隱蔽的場所，還為克氏原螯蝦提供營養(yǎng)豐富的餌料，凈化水質(zhì)，防暑降溫、防風(fēng)避寒、提升免疫力，已被廣泛用于克氏原螯蝦養(yǎng)殖中。一般來說，甲殼類動物隱蔽物的有效性隨其密度和復(fù)雜性的增加而增強［7］，但實際生產(chǎn)中往往會出現(xiàn)伊樂藻面積過高，大量腐爛、惡化水質(zhì)等問題，需合理控制栽種面積。再者，克氏原螯蝦在本質(zhì)上屬于肉食性動物，飼料中適宜的蛋白質(zhì)水平對維持其良好的生長性能和健康至關(guān)重要。飼料蛋白水平不足或過量不僅會對養(yǎng)殖對象的生長、蛻殼和免疫產(chǎn)生負(fù)面影響，還會增加養(yǎng)殖水體的氮排放，提高養(yǎng)殖成本［10］。目前，關(guān)于克氏原螯蝦對蛋白質(zhì)適宜需求量的研究結(jié)果差異較大。因此，有必要對克氏原鰲蝦養(yǎng)殖的適宜密度、水草覆蓋率和飼料蛋白水平進(jìn)行精準(zhǔn)評估。

本研究以克氏原螯蝦亞成體蝦作為試驗對象，通過45 d池塘圍網(wǎng)養(yǎng)殖生長試驗分析克氏原螯蝦的生長性能、存活率、血清生化指標(biāo)及非特異性免疫酶活性的變化，明確克氏原鰲蝦養(yǎng)殖的適宜密度、水草覆蓋率和飼料蛋白水平組合參數(shù)，旨在為克氏原螯蝦健康養(yǎng)殖提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗用幼蝦采自江蘇省泗陽縣慶江水產(chǎn)養(yǎng)殖專業(yè)合作社克氏原螯蝦養(yǎng)殖基地，選擇身體健壯，無疾病克氏原螯蝦，規(guī)格為250～300尾/kg，所植水草為伊樂藻。

1.2 試驗設(shè)計

2020年4月2日，在江蘇省宿遷市宿豫區(qū)來龍鎮(zhèn)陵園村玲龍水產(chǎn)養(yǎng)殖專業(yè)合作社克氏原螯蝦養(yǎng)殖基地6 hm2小龍蝦精養(yǎng)塘口內(nèi)，架設(shè)9個圍網(wǎng)（邊長6 m×6 m，高度1.2 m），設(shè)定水草覆蓋率（20%、40%、60%）、投放密度（8、12、16尾/m2）和飼料蛋白水平（28%、30%、32%）3個因素進(jìn)行正交試驗，組成9個組合，在池塘內(nèi)按這9個組合架設(shè)圍網(wǎng)（面積為36 m2/個）。在圍網(wǎng)內(nèi)按照L9（34）正交試驗法對水草覆蓋率（因素A）、放養(yǎng)密度（因素B）、飼料蛋白水平（因素C）進(jìn)行組配，由表1可知，各試驗組克氏原螯蝦的放養(yǎng)量、水草覆蓋比例和飼料蛋白水平，按組配進(jìn)行水草種植、蝦苗投放和不同蛋白飼料投喂。由表2可知，試驗分9個處理組，每組設(shè)3個重復(fù)。試驗期間每日08：00和17：00投喂人工配合飼料，日投餌率為3%～5%，試驗時間為45 d。試驗結(jié)束后取樣測定克氏原螯蝦的生長及生理生化指標(biāo)。

1.3 采樣與指標(biāo)測定

1.3.1 生長性能測定

飼養(yǎng)試驗結(jié)束后，試驗蝦停飼24 h，然后將各圍網(wǎng)中克氏原螯蝦計數(shù)并稱取其終末體質(zhì)量，計算體質(zhì)量增長率、特定生長率、成活率，公式如下：

成活率=Nt/N0×100%；

體質(zhì)量增長率=（Wt-W0）/W0×100%；

特定生長率=（lnWt-lnW0）/t×100%。

式中：Nt為試驗蝦終末尾數(shù)，N0為初始尾數(shù)，尾；Wt為終末體質(zhì)量，W0為初始體質(zhì)量，g；t為試驗天數(shù)，d。

1.3.2 血液生化指標(biāo)的測定

采用無菌注射器取蝦體圍心腔的血液，將血液放入無菌離心管4 ℃冰箱，過夜后離心，取血清，用于總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、總膽固醇（TCH）、甘油三酯（TG）的含量及谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、堿性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）和溶菌酶（LZM）活性的測定，方法參照南京建成生物工程研究所試劑盒說明書。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗結(jié)果數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，雙重比較或Duncans多重比較，P<0.05表明差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 水草覆蓋率、放養(yǎng)密度和飼料蛋白水平對克氏原螯蝦生長性能和成活率的影響

由表2、表3可知，放養(yǎng)密度最大組（16尾/m2）克氏原螯蝦成活率顯著低于2個低密度組（12、8尾/m2）（P<0.05），2個低密度組間無顯著差異（P>0.05）。40%水草覆蓋率組克氏原螯蝦成活率明顯高于20%和60%組（P<0.05），60%組明顯高于20%組（P<0.05）。40%水草覆蓋率組體質(zhì)量增長率和特定生長率顯著高于20%和60%組（P<0.05），60%組與20%組無顯著差異（P<0.05）。16尾/m2組克氏原螯蝦體質(zhì)量增長率和特定生長率顯著低于8尾/m2密度組（P<0.05），2個低密度間無明顯差異。由表3可知，4#組蝦末體質(zhì)量與5#和7#組無顯著差異（P>0.05），但顯著高于其他組（P<0.05）。4#組蝦體質(zhì)量增長率與5#組無顯著差異（P>0.05），但顯著高于其他組（P<0.05）。4#、5#、7#組特定生長率與1#、6#、8#組無顯著差異，但顯著高于2#、3#和9#組。4#、5#組間成活率差異不明顯，但明顯高于其他組。

由表4可知，水草覆蓋率和放養(yǎng)密度對克氏原螯蝦生長性能和成活率均有顯著影響（P<0.05），飼料蛋白水平對克氏原螯蝦生長性能和成活率無顯著影響（P>0.05）。3個因素中，水草覆蓋率對克氏原螯蝦體質(zhì)量增長率和特定生長率的影響作用最大，放養(yǎng)密度次之，飼料蛋白水平最小。放養(yǎng)密度對克氏原螯蝦成活率的影響作用最大，水草覆蓋率次之，飼料蛋白水平最小。

2.2 水草覆蓋率、放養(yǎng)密度和飼料蛋白水平對克氏原螯蝦血清生化指標(biāo)和非特異性免疫酶活性的影響

由表5可知，3#、6#、9#組TP含量雖有明顯下降，但不同處理組間無顯著差異（P>0.05），白蛋白含量顯著下降（P<0.05）。5#組總膽固醇含量與 1#、4#、7#組無顯著差異（P>0.05），但顯著高于2#、3#、6#、8#、9#組（P<0.05），后者之間無顯著差異（P>0.05）。3#、9#組之間甘油三酯含量無顯著差異（P>0.05），但均顯著高于除8#之外的其他組（P<0.05）。3#、9#組谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性分別顯著高于1#和2#組、7#和8#組（P<0.05），4#、5#、6#組之間谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性無顯著性差異（P>0.05）。

由表2、表6可知，在相同水草覆蓋率水平內(nèi)，隨放養(yǎng)密度增大，克氏原螯蝦超氧化物歧化酶、堿性磷酸酶和過氧化氫酶活性逐漸升高，溶菌酶和酸性磷酸酶活性逐漸降低。1#、4#、7#、8#組超氧化物歧化酶活性無顯著差異（P>0.05），但顯著低于2#、3#、6#、9#組，4#與5#無顯著差異（P>0.05）。1#、4#、5#、8#組過氧化氫酶活性無顯著差異（P>0.05），顯著低于3#、9#（P<0.05），6#與4#、5#組無顯著差異。1#、4#、5#、7#、8#組溶菌酶活性無顯著差異（P>0.05），但顯著高于3#、6#、9#組（P<0.05）。4# 組酸性磷酸酶含量與5#、7#組含量無顯著差異（P>0.05），但顯著高于其他組（P<0.05）。3#、9#組堿性磷酸酶活性無顯著差異（P>0.05），但顯著高于其他組（P<0.05），其他組間無顯著差異（P>0.05）。其中，4#組溶菌酶和酸性磷酸酶活性最高，堿性磷酸酶活性最低。

3 討論

3.1 放養(yǎng)密度、水草覆蓋率和飼料蛋白水平對克氏原螯蝦生長性能和成活率的影響

水產(chǎn)養(yǎng)殖中高密度養(yǎng)殖通常會增加水體生產(chǎn)力，但密度過高會降低水產(chǎn)動物存活率和生長性能。肖鳴鶴等發(fā)現(xiàn)，隨著放養(yǎng)密度的增大，克氏原螯蝦幼蝦末體質(zhì)量減小［11］。劉國興等研究發(fā)現(xiàn)，隨放養(yǎng)密度增大，克氏原螯蝦終末體質(zhì)量、增重率和特定生長率逐漸降低［12］。Yu等發(fā)現(xiàn)，較高的養(yǎng)殖密度對克氏原螯蝦生長有負(fù)面影響［7］。本研究中，克氏原螯蝦生長性能隨放養(yǎng)密度的增加而降低，其中蝦體末質(zhì)量和體質(zhì)量增長率在密度最大組（16尾/m2）顯著降低。Romaire等在野外圍隔試驗中發(fā)現(xiàn)，克氏原螯蝦放養(yǎng)密度在5、10尾/m2時個體體質(zhì)量均超過20 g，但在15尾/m2以上時蝦體均發(fā)生顯著的發(fā)育不良［13］。Naranjo-Prano等發(fā)現(xiàn)，紅螯螯蝦養(yǎng)殖密度≤11尾/m2時，蝦體終末體質(zhì)量在 25 g，養(yǎng)殖密度增加終末體質(zhì)量下降［14］。另劉明明也發(fā)現(xiàn)，在伊樂藻環(huán)境中，當(dāng)放養(yǎng)密度高于 15尾/m2 時，克氏原螯蝦的增重率顯著降低［15］，本研究結(jié)果與之類似。生物生長率不僅由物種本身決定，還由環(huán)境因素決定。蝦蟹類屬于排氨型代謝動物，其蛋白質(zhì)代謝的最終產(chǎn)物氨是直接排出體外的［16］。因此，在空間區(qū)域一定的高密度環(huán)境下，幼蝦相互接觸抵抗增加，能耗增加，用于生長的部分減少，代謝廢物增多，生存環(huán)境不健康，從而抑制生長［17］。同樣，養(yǎng)殖密度對成活率也有負(fù)面影響。有研究表明，克氏原螯蝦成活率隨養(yǎng)殖密度增大而減?。?，18-20］。本研究中克氏原螯蝦養(yǎng)殖密度最大組（16尾/m2）成活率明顯低于低密度組（8、12尾/m2），2個低密度組間差別較小。廖銳等發(fā)現(xiàn)，每種魚均有一個臨界養(yǎng)殖密度，超過這個臨界密度時，死亡率上升，而在這個臨界密度內(nèi)，成活率不受影響［21］。因此，本研究中8、12尾/m2 2個密度值可能在該生存條件下的密度臨界值內(nèi)，而16尾/m2的養(yǎng)殖密度可能超過了該規(guī)格的臨界密度，引起密度脅迫，個體競爭加劇，能耗增多，導(dǎo)致自相殘食率增加，死亡率上升。

水草對克氏原螯蝦養(yǎng)殖非常重要，因為它不僅是克氏原螯蝦喜食的餌料，還是克氏原螯蝦蛻殼和躲避的隱蔽場所。而隱蔽場所的有效性通常會隨其密度和復(fù)雜性的升高而增加［22-23］，但隱蔽場所覆蓋率過高時，克氏原螯蝦獲得食物耗費的時間和能量可能會大大增加［24］。因此，在克氏原螯蝦養(yǎng)殖過程中，維持適宜的水草覆蓋率很有必要。本研究中水草覆蓋率為40%時，克氏原螯蝦的生長性能和成活率的整體水平明顯高于20%和60%組。Yu等從不同水草覆蓋率對克氏原螯蝦幼蝦生存、生長和蛻皮的影響結(jié)果，綜合判斷得出養(yǎng)殖克氏原螯蝦適宜的水草覆蓋率是50%，本研究結(jié)果與之接近［7］。方春林等在研究克氏原螯蝦仿生態(tài)繁殖池水草布局時，發(fā)現(xiàn)水草栽植面積占池塘面積的40%，比20%和80%組更有利于克氏原螯蝦親蝦的成熟度、抱卵量、抱卵率和存活率的提高［18］。秦偉等在進(jìn)行克氏原螯蝦養(yǎng)殖試驗時，發(fā)現(xiàn)水草覆蓋率35%試驗組池塘底泥微生物種類比25%試驗組豐富［25］。通過不同角度提示40%可能是克氏原螯蝦養(yǎng)殖水草覆蓋率的最佳數(shù)值。

大多數(shù)研究表明，蝦類生長性能隨飼料中粗蛋白水平的增加呈先上升后下降的趨勢。Miao等研究發(fā)現(xiàn)，克氏原螯蝦［（5.17±0.32） g］在32%和34%蛋白水平下蝦最終體質(zhì)量、增重率和特定生長率顯著高于26%和28%組［26］。夏思瑤等的研究表明，飼料蛋白水平為30.09%時，克氏原螯蝦幼蝦［（3.69±0.05） g］增重率、特定生長率顯著高于其他蛋白水平組［27］。王自蕊等研究發(fā)現(xiàn)，克氏原螯蝦［（9.45±1.33） g］生長需求適宜的蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為31.37%～32.20%［28］。但本研究中不同飼料蛋白水平下克氏原螯蝦的生長性能無顯著差異，可能是不同試驗所用蝦規(guī)格大小、養(yǎng)殖環(huán)境及試驗設(shè)置的蛋白水平梯度范圍不同所致。徐維娜等對均體質(zhì)量為（7.03±0.05） g的克氏原螯蝦幼蝦飼喂8周，24%、27%和30%的飼料蛋白水平下，克氏原螯蝦的生長性能無顯著差異［29］，本研究結(jié)果與之類似。不同飼料蛋白水平下克氏原螯蝦的成活率無顯著差異，與Miao等的研究結(jié)果［26-29］一致。蘇時萍等指出，克氏原螯蝦能消化的飼料蛋白水平最高為 35%～40%［30］，說明本試驗設(shè)置的蛋白水平梯度在克氏原螯蝦適宜需求范圍內(nèi)，28%的蛋白水平即可滿足克氏原螯蝦的生長需求。

本研究通過不同處理因素對克氏原螯蝦生長性能和成活率影響的顯著性和3因素的主次分析發(fā)現(xiàn)，水草覆蓋率和放養(yǎng)密度對克氏原螯蝦生長性能和成活率均有顯著影響，其中放養(yǎng)密度對克氏原螯蝦的成活率影響最大，水草覆蓋率對克氏原螯蝦的生長性能指標(biāo)影響最大。Shao等研究水溫、飼養(yǎng)密度和魚粉豆粕比例對克氏原螯蝦早熟影響時，發(fā)現(xiàn)飼養(yǎng)密度始終是影響成活率、體質(zhì)量增加、性腺指數(shù)和成熟率的最重要因素［31］。提示本研究的3個因素中，放養(yǎng)密度是決定蝦生存的最重要因素，水草覆蓋率是決定蝦生長的最重要因素，進(jìn)而說明放養(yǎng)密度和水草覆蓋率在小龍蝦的水產(chǎn)養(yǎng)殖中具有重要作用。

3.2 水草覆蓋率、放養(yǎng)密度和飼料蛋白水平對克氏原螯蝦血清生化指標(biāo)的影響

血液生化指標(biāo)能夠指示動物的生理和代謝水平，與動物的營養(yǎng)變化、健康狀況和環(huán)境狀況密切相關(guān)［32］。膽固醇甘油三脂主要在肝臟合成，是血脂的主要成分［33］。本研究不同密度處理組克氏原螯蝦血清總膽固醇含量差異不顯著。膽固醇作為一種非極性脂質(zhì)成分，屬于類固醇化合物，廣泛存在于動物體內(nèi)，是動物組織和細(xì)胞中許多具有生理活性化合物的化學(xué)框架［34］。它是甲殼類動物必需的營養(yǎng)物質(zhì)，被用來維持生理功能，并進(jìn)一步參與新陳代謝，或通過腸道排出，不太可能被吸收作為能量來利用［35］。這可能是本試驗中蝦血清總膽固醇受密度變化影響較小的原因。血脂水平的高低與機體的代謝、生理狀態(tài)密切相關(guān)，被廣泛用于評估魚類對環(huán)境的適應(yīng)能力和健康狀況［36］。攝食脂類食物過多或肥胖可引起血清甘油三酯含量升高，而運動會降低其含量。本研究中，20%水草覆蓋率和60%水草覆蓋率水平內(nèi)放養(yǎng)密度最大組甘油三酯含量顯著高于低密度組，40%水草覆蓋率水平內(nèi)不同密度組含量差異不顯著。這可能是20%水草覆蓋率和60%水草覆蓋率水平內(nèi)放養(yǎng)密度最大組蝦運動低于其他組的原因。該結(jié)果反映40%水草覆蓋率的環(huán)境可能更適合克氏原螯蝦生長。肖鳴鶴等發(fā)現(xiàn)，克氏原螯蝦幼蝦肝胰腺中甘油三酯隨著養(yǎng)殖密度的增大呈不斷增多的趨勢［13］。張海恩等發(fā)現(xiàn)，中國明對蝦血清甘油三酯含量在高密度組比低密度組顯著下降［37］。倪蒙等研究得出，不同放養(yǎng)密度對羅氏沼蝦血清甘油三酯含量變化影響不顯著［38］。以上研究與本研究結(jié)果不同，可能是不同養(yǎng)殖條件、不同物種血脂代謝對養(yǎng)殖密度變化的響應(yīng)不同。谷丙轉(zhuǎn)氨酶是肝臟受損的重要指示酶，通常存在于肝細(xì)胞中，若肝細(xì)胞受損或死亡，它便會進(jìn)入到血液中，造成血清中該酶活性增加。本研究中蝦體血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性均在放養(yǎng)密度最大時顯著升高，說明高密度組克氏原螯蝦肝臟細(xì)胞受損。血清總蛋白分為白蛋白和球蛋白，其濃度是魚體健康狀況的基本指標(biāo)［39］，其中白蛋白含量越高標(biāo)志著生長速度越快，球蛋白含量越高，標(biāo)志著免疫能力越強［40］。盡管結(jié)果顯示各處理組血清總蛋白含量差異不顯著，但是密度最大組蝦體血清總蛋白含量明顯下降，白蛋白的含量均在密度最大組顯著降低。說明放養(yǎng)密度在16尾/m2時克氏原螯蝦處于亞健康狀態(tài)，生長受到明顯抑制，這與蝦體末質(zhì)量、體質(zhì)量增長率、特定生長率和成活率的結(jié)果表現(xiàn)一致。

本研究中飼料蛋白水平與血清總蛋白、白蛋白、甘油三酯、總膽固醇、谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量無明顯相關(guān)性。楊弘等對尼羅羅非魚幼魚的飼料蛋白水平（25%～45%）研究中也發(fā)現(xiàn)類似的結(jié)果［41］。說明本試驗條件下飼料蛋白水平為28%即可滿足克氏原螯蝦的生長需求。姜松等研究發(fā)現(xiàn)，斑節(jié)對蝦血液中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶和總蛋白、白蛋白的含量表現(xiàn)出隨著蛋白水平的增加而上升的趨勢，且在各飼料組中均有顯著性差異［42］。Lu等發(fā)現(xiàn)，較高飼料蛋白水平（30.56%～44.64%）可誘導(dǎo)克氏原螯蝦［（12.86±0.10） g］血液中總蛋白、白蛋白、總膽固醇含量和丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性顯著增加［43］，本研究結(jié)果與之不同。這可能是試驗蝦的種類、規(guī)格大小、飼料蛋白源、蛋白水平梯度及養(yǎng)殖環(huán)境不同，導(dǎo)致蝦體血液生理生化響應(yīng)差異較大。

本研究中，水草覆蓋率水平對克氏原螯蝦血清總蛋白、白蛋白、總膽固醇含量及谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性均無顯著影響。說明水草覆蓋率并非是該條件下影響克氏原螯蝦血清生化指標(biāo)的關(guān)鍵因素，更大可能是發(fā)揮了環(huán)境生態(tài)功能。

3.3 水草覆蓋率、放養(yǎng)密度和飼料蛋白水平對克氏原螯蝦血清非特異性免疫酶活性的影響

甲殼類動物以非特異性免疫為主［20］。本研究中水草覆蓋率和飼料蛋白水平對蝦體非特異免疫酶活性變化無明顯影響，放養(yǎng)密度有顯著影響。其中，高密度組SOD、CAT、AKP活性隨放養(yǎng)密度的增加有顯著上升趨勢，ACP、LZM活性隨放養(yǎng)密度的增加有顯著下降趨勢。說明密度條件對蝦體血清非特異性免疫酶活性變化的影響占主導(dǎo)因素，且不同類型的非特異性免疫酶對密度變化引起環(huán)境變化的響應(yīng)不完全相同。密度脅迫導(dǎo)致機體內(nèi)產(chǎn)生大量活性氧自由基，而SOD、CAT活性升高可清除這些自由基，保護(hù)機體免受氧化損傷。本研究中，高密度組SOD、CAT活性顯著高于低密度組，2個低密度組之間無顯著差異。可能是高密度組個體受到密度脅迫時，新陳代謝加快，能量消耗升高，一定程度上促進(jìn)了氧自由基的產(chǎn)生，進(jìn)而導(dǎo)致SOD和CAT含量升高。在機體免疫過程中，LZM可催化細(xì)菌細(xì)胞壁水解，導(dǎo)致細(xì)菌溶解死亡，也可誘導(dǎo)調(diào)節(jié)其他免疫因子產(chǎn)生［44］。本研究中高密度組克氏原螯蝦血清溶菌酶活性顯著低于2個低密度組。其他研究也發(fā)現(xiàn)，克氏原螯蝦肝胰腺溶菌酶活性隨養(yǎng)殖密度的升高呈下降趨勢［20，45］。俄羅斯鱘幼魚也出現(xiàn)高密度組溶菌酶水平顯著低于中、低密度組的現(xiàn)象［46］，說明密度過高導(dǎo)致克氏原螯蝦抗菌能力下降，進(jìn)而機體免疫力下降。ACP是細(xì)胞在發(fā)揮吞噬和包裹作用過程中所釋放的物質(zhì)。本研究結(jié)果顯示，高密度組血清 ACP和LZM活性變化相同，可能是因為吞噬細(xì)胞殺菌的物質(zhì)基礎(chǔ)LZM活性顯著降低，吞噬細(xì)胞的吞噬功能顯著減弱，進(jìn)而伴隨產(chǎn)生ACP顯著減少。血清AKP主要源于肝臟［47］，是構(gòu)成甲殼動物解毒系統(tǒng)的組成之一，在非特異性免疫中發(fā)揮重要作用［48］。研究結(jié)果顯示，AKP活性隨密度增加呈上升趨勢，16尾/m2組顯著高于12、8尾/m2組。范文浩等發(fā)現(xiàn)，克氏原螯蝦肝臟堿性磷酸酶活性隨密度增加有上升趨勢［45］，本研究結(jié)果與之類似。吳垠等研究發(fā)現(xiàn)，患病中國明對蝦血清堿性磷酸酶活性明顯高于正常蝦，且發(fā)病初期該酶活性遠(yuǎn)低于重癥期［49］。在電鏡酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)下，正常中國明對蝦血清幾乎不顯示AKP活性，但病理狀態(tài)下反而升高［50］。因此，推測本研究中AKP活性越高說明克氏原螯蝦體質(zhì)可能越差。吳宗凡等對鯽魚［51］、陳亞坤等對凡納濱對蝦［52］及王博等對墨吉明對蝦［53］的研究中發(fā)現(xiàn)密度對血清AKP活性有負(fù)面影響。這可能是因為不同水產(chǎn)動物堿性磷酸酶理化性質(zhì)和功能基團的差異性導(dǎo)致其在不同條件下酶活力不同［54］。

4 結(jié)論

本研究中放養(yǎng)密度對克氏原螯蝦成活率影響作用最大，水草覆蓋率次之，飼料蛋白水平最??；水草覆蓋率對克氏原螯蝦體質(zhì)量增長率和特定生長率的影響作用最大，放養(yǎng)密度次之，飼料蛋白水平最小。

綜合分析放養(yǎng)密度、水草覆蓋率、飼料蛋白水平3個因子對克氏原螯蝦存活、生長及血清生化指標(biāo)和非特異性免疫酶活性的影響，得出最佳組合方案為水草覆蓋率為40%，放養(yǎng)密度為8尾/m2或 12尾/m2，飼料蛋白水平為28%。

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收稿日期：2022-04-02

基金項目：江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金［編號：CX（19）3018］；江蘇省宿遷市自主創(chuàng)新項目（編號：SQCX202108）。

作者簡介：覃寶利（1986—），女，河南鶴壁人，碩士，助理研究員，主要從事水產(chǎn)養(yǎng)殖方面的研究。E-mail：906963793@qq.com。

通信作者：王信海，碩士，副研究員，主要從事稻田綜合種養(yǎng)方面的研究。E-mail：20141602@jaas.ac.cn。