吳福祥 李堅(jiān) 朱仁愿 閆君 陳婷 丁輝 張文

摘要 ?［目的］利用氣相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜（GC-MS/MS）建立同時(shí)測(cè)定當(dāng)歸中35種禁用農(nóng)藥殘留量的分析方法。［方法］色譜柱為HP-5MSUI（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；載氣流量1.2 mL/min；進(jìn)樣量1 μL，不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣口溫度280 ℃；程序升溫。樣品以乙腈直接提取，采用GC-MS/MS的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)分析模式，通過(guò)基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液降低基質(zhì)干擾，內(nèi)標(biāo)法定量。［結(jié)果］35種禁用農(nóng)藥在各自濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)均不低于0.985 2，檢出限為0.155 5～7.173 9 μg/kg，定量限為0.513 2～23.673 9 μg/kg，精密度RSD均小于14%（n=6）。平均加樣回收率為83.86%～122.80%，RSD為3.8%～24.6%（n=5）。［結(jié)論］該方法快捷、準(zhǔn)確，可用于當(dāng)歸中禁用農(nóng)藥殘留的定性和定量分析。

關(guān)鍵詞 ?當(dāng)歸；禁用農(nóng)藥殘留量；氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

中圖分類(lèi)號(hào) ?S 481+.8 ??文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 ?A ??文章編號(hào) ?0517-6611（2023）05-0198-05

doi： 10.3969/j.issn.0517-6611.2023.05.045

開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Simultaneous Determination of 35 Banned Pesticide Residues in Angelica sinensis by GC-MS/MS

WU Fu-xiang， LI Jian， ZHU Ren-yuan et al

（Lanzhou Institute for Food and Drug Control/Key Laboratory of Pesticide and Veterinary Drug Monitoring for State Market Regulation /Gansu Engineering Research Center for Monitoring Exogenous Harmful Residues in Traditional Chinese Medicines， Lanzhou，Gansu 730050）

Abstract ?［Objective］ A method for simultaneous determination of 35 banned pesticide residues in Angelica sinensis was established by gas chromatography-tandem mass spectrometry （GC-MS/MS）. ［Method］ Chromatographic column was HP-5MSUI（30 m×0.25 mm，0.25 μm）;gas traffic was 1.2 mL/min;injection volume was 1 μL， no split injection;injection temperature was 280 ℃;the program heats up.The samples were extracted directly with acetonitrile， and the multi-reaction monitoring and analysis mode of GC-MS/MS was used. Matrix interference was reduced by matrix matching standard solution， and the internal standard method was used for quantification. ［Result］ The 35 banned pesticides had good linearity within their respective concentration range， the correlation coefficient was not less than 0.985 2，the limit of detection was 0.155 5-7.173 9 μg/kg， the limit of quantification was 0.513 2-23.673 9 μg/kg， the RSD of precisions were all less than 14%（n=6）， the average recovery rate was 83.86%-122.80%， and the RSDs were 3.8%-24.6%（n=5）. ［Conclusion］ The method is rapid and accurate， and can be used for qualitative and quantitative analysis of banned pesticide residues in Angelica sinensis.

Key words ?Angelica sinensis;Banned pesticide residues;Gas chromatography tandem mass spectrometry （GC-MS/MS）

中醫(yī)藥是我國(guó)文明的寶貴遺產(chǎn)，在幾千年的歷史中不斷進(jìn)步，為人類(lèi)的健康作出了重大的貢獻(xiàn)。中藥作為中醫(yī)藥體系的核心組成部分，一直以來(lái)都受到人們的充分重視。甘肅省是我國(guó)中藥材的主產(chǎn)區(qū)之一，素有“千年藥鄉(xiāng)”和“天然藥庫(kù)”的美譽(yù)，中藥資源十分豐富。據(jù)2019年統(tǒng)計(jì)，甘肅省中藥材種植面積31.33萬(wàn)hm2，產(chǎn)量52萬(wàn)t，產(chǎn)值超32億元；其中，當(dāng)歸、板藍(lán)根、黨參等道地藥材產(chǎn)量分別占全國(guó)市場(chǎng)的95%、65%、60%，種植面積及產(chǎn)量居全國(guó)前列［1］。近年來(lái)，中藥的質(zhì)量安全問(wèn)題阻礙了我國(guó)中藥產(chǎn)品進(jìn)入國(guó)際市場(chǎng)，主要原因就是農(nóng)藥殘留、重金屬及真菌毒素等外源性污染問(wèn)題。其中，農(nóng)藥殘留污染主要有3個(gè)方面：一是種植過(guò)程中，施用農(nóng)藥防治病蟲(chóng)害，造成農(nóng)藥濫用的直接污染；二是土壤和空氣中殘留的農(nóng)藥造成的間接污染；三是采收加工、儲(chǔ)存運(yùn)輸過(guò)程中造成的污染［2-6］。隨著農(nóng)藥使用范圍和使用量的不斷擴(kuò)大，農(nóng)藥造成的環(huán)境污染和食品藥品安全問(wèn)題逐漸暴露，如六六六、殺蟲(chóng)脒、除草醚、艾氏劑、狄氏劑、苯線磷等農(nóng)藥殘留超標(biāo)現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生［7］?；诖?，該試驗(yàn)采用GC-MS/MS建立同時(shí)測(cè)定當(dāng)歸中35種禁用農(nóng)藥的殘留檢測(cè)方法，以期為控制當(dāng)歸質(zhì)量提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 ???儀器。7890B-7000D氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；ME204/02萬(wàn)分之一電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；AH40全自動(dòng)均質(zhì)器（廈門(mén)睿科集團(tuán)）；UPU-1-20T超純水機(jī)（四川優(yōu)普超純科技公司）；5810R離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf公司）；EVA50A氮吹儀（北京普立泰科儀器有限公司）。

1.1.2 ???試劑。35種農(nóng)藥對(duì)照品：甲基對(duì)硫磷（G163528，0.1 g，98.2%）、對(duì)硫磷（G130512，0.1 g，98.0%）、久效磷（G833027，0.1 g，98.0%）、α-六六六（G130554，0.1 g，98.1%）、β-六六六（G138918，0.1 g，98.6%）、γ-六六六（G129950，0.25 g，98.8%）、δ-六六六（G132134，0.05 g，99.2%）、4，4′-滴滴涕（G12082000，0.1 g，99.5%）、2，4′-滴滴涕（G12081000，0.1 g，99.6%）、4，4′-滴滴伊（G130552，0.1 g，99.7%）、4，4′-滴滴滴（G123407，0.25 g，98.7%）、殺蟲(chóng)脒（G150101，0.1 g，99.5%）、除草醚（G149884，0.1 g，98.1%）、艾氏劑（G16913910，100 ng/μL）、狄氏劑（H171083CY，100 ng/μL）、苯線磷（C13421000，0.25 g，99.5%）、蠅毒磷（G92054，0.1 g，98.0%）、治螟磷（G108121，0.1 g，98.9%）、特丁硫磷（G158932，0.1 g，97.8%）、甲拌磷（BCBZ5040，0.1 g，95.4%）、甲基異柳磷（G122317，0.05 g，97.5%）、O-內(nèi)吸磷（993046CY，10 ng/μL）、S-內(nèi)吸磷（G1045602，0.1 g，98.3%）、滅線磷（G150818，0.1 g，98.2%）、水胺硫磷（G126442，0.1 g，99.7%）、α-硫丹（G150002，0.1 g，98.1%）、β-硫丹（G139276，0.1 g，99.6%）、硫丹硫酸酯（G1042736，0.1 g，100%）、氟蟲(chóng)腈（G156586，0.1 g，96.5%）、氟甲腈（13-JQW68-5，0.01 g，98.0%）、氟蟲(chóng)腈砜（G153662，0.05 g，98.2%）、氟蟲(chóng)腈亞砜（G141212，0.025 g，99.3%）、o，p′-三氯殺螨醇（219071318，100 ng/μL）、p，p′-三氯殺螨醇（G139873，0.1 g，99.7%），均購(gòu)自DrEhrenstorfer公司；甲基硫環(huán)磷（S033319，100.5 ng/μL），購(gòu)自Achemtek公司。內(nèi)標(biāo)對(duì)照品：磷酸三苯酯（G1042718，0.1 g，100%）購(gòu)自DrEhrenstorfer公司。乙腈為色譜純（德國(guó)Merck公司）；氯化鈉、冰醋酸為分析純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；水為超純水（Milli-Q）。

1.1.3 ???試材。23批當(dāng)歸（Angelica sinensis Radix）均采自甘肅省定西市岷縣種植地，經(jīng)蘭州市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院吳福祥主任藥師鑒定。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 ???混合對(duì)照品溶液的配制。分別稱(chēng)取35種對(duì)照品各10 mg，精密稱(chēng)定，置10 mL容量瓶中，用乙腈稀釋配制成1 mg/mL的對(duì)照儲(chǔ)備液，密封儲(chǔ)存于-18 ℃冰箱中。根據(jù)各農(nóng)藥在儀器上的響應(yīng)靈敏度，準(zhǔn)確移取一定體積的對(duì)照儲(chǔ)備液，置25 mL容量瓶中，用乙腈稀釋配制成質(zhì)量濃度為100～250 μg/L的混合對(duì)照品溶液，于4 ℃避光保存。精密量取空白基質(zhì)溶液1.0 mL，平行6份，置氮吹儀上于39 ℃水浴濃縮至約0.4 mL，分別加入混合對(duì)照品溶液20、40、100、200、300、400 μL，以乙腈稀釋至1 mL，搖勻即得2～100 μg/L 的6個(gè)級(jí)別濃度梯度的基質(zhì)匹配混合對(duì)照品溶液［8］。

1.2.2 ???內(nèi)標(biāo)溶液的配制。精密稱(chēng)取磷酸三苯酯內(nèi)標(biāo)對(duì)照品0.010 44 g，置10 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液9.58 μL，置100 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，即得內(nèi)標(biāo)溶液。

1.2.3 ???供試品溶液的配制。取供試品粉末（過(guò)3號(hào)篩）5 g，精密稱(chēng)定，置50 mL離心管中，加1%冰醋酸水溶液15 mL，陶瓷均質(zhì)子1顆，渦旋2 min，靜置30 min后，加入乙腈50 mL和氯化鈉1 g，立即搖散，12 000 r/min均質(zhì)1 min，3 900 r/min離心10 min后取上清液，沉淀重復(fù)上述步驟，合并2次上清液，置氮吹儀上于39 ℃水浴氮吹至盡干，用乙腈復(fù)溶并稀釋至5 mL，搖勻，過(guò)0.22 μm濾膜。

1.2.4 ???色譜條件。安捷倫HP-5MS UI氣相色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；載氣為氦氣，流量1.2 mL/min；程序升溫：初始溫度80 ℃，保持1 min，以40 ℃/min升至200 ℃，再以2 ℃/min升至230 ℃，最后以25 ℃/min升至320 ℃，保持3 min；進(jìn)樣量1 μL，進(jìn)樣口溫度280 ℃，不分流進(jìn)樣。

1.2.5 ???質(zhì)譜條件。EI離子源，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（multiple reaction monitoring，MRM）模式，離子源溫度230 ℃，電子能量70 eV，溶劑延遲3.5 min，碰撞氣（氮?dú)猓┝魉?.5 mL/min。

1.2.6 ???基質(zhì)效應(yīng)。對(duì)比10、25、50、75 μg/L的當(dāng)歸空白基質(zhì)匹配標(biāo)液與乙腈配制的標(biāo)液的儀器響應(yīng)值，以基質(zhì)標(biāo)樣的響應(yīng)值與溶劑標(biāo)樣響應(yīng)值的比值計(jì)算基質(zhì)效應(yīng)。

1.2.7 ???方法學(xué)考察。

1.2.7.1 ???線性關(guān)系考察。取“ 1.2.1 ”項(xiàng)下當(dāng)歸空白基質(zhì)配制的6個(gè)級(jí)別梯度的混合對(duì)照品溶液進(jìn)行分析，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x）、定量離子對(duì)峰面積為縱坐標(biāo)（y）進(jìn)行線性回歸計(jì)算，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.7.2 ???檢出限和定量限。選取基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線最低濃度的混合對(duì)照品溶液進(jìn)行稀釋后進(jìn)樣，以3倍信噪比（S/N≥3）和10倍信噪比（S/N≥10）確定檢出限（LOD）和定量限（LOQ）。

1.2.7.3 ???精密度試驗(yàn)。選取基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線最高濃度的混合對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，以定量離子對(duì)峰面積RSD計(jì)算精密度。

1.2.7.4 ???加樣回收率試驗(yàn)。采用加樣回收法，取經(jīng)測(cè)定未檢出35種農(nóng)藥的當(dāng)歸陰性樣品，分3組，精密加入混合對(duì)照品溶液適量，考察10、20、100 μg/kg 3個(gè)添加水平的加標(biāo)回收率，每個(gè)水平均測(cè)定5次，計(jì)算RSD。

1.2.8 ???樣品測(cè)定。按照“ 1.2.3 ”方法制備23批當(dāng)歸藥材的供試品溶液，分別精密吸取“ 1.2.1 ”基質(zhì)匹配混合對(duì)照溶液和“ 1.2.3 ”供試品溶液各1 mL，精密加入“ 1.2.2 ”內(nèi)標(biāo)溶液0.3 mL，混勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，注入氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，按照“ 1.2.4 ”色譜條件和“ 1.2.5 ”質(zhì)譜條件進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)樣品測(cè)定3次，以?xún)?nèi)標(biāo)法計(jì)算樣品中35種禁用農(nóng)藥的殘留量。

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜分析參數(shù)

35種禁用農(nóng)藥的質(zhì)譜分析參數(shù)見(jiàn)表1，總離子流圖見(jiàn)圖1。

2.2 基質(zhì)效應(yīng)

從表2可以看出，α-六六六、o，p′-三氯殺螨醇和p，p′-三氯殺螨醇的基質(zhì)效應(yīng)均小于1.0，說(shuō)明存在基質(zhì)抑制效應(yīng)；δ-六六六和氟蟲(chóng)腈的基質(zhì)效應(yīng)接近1.0，說(shuō)明當(dāng)歸基質(zhì)對(duì)這2個(gè)農(nóng)藥沒(méi)有明顯的抑制或增強(qiáng)效應(yīng)；其他30種農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)均大于1.0，說(shuō)明存在基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。因此，為降低基質(zhì)效應(yīng)的影響，該試驗(yàn)采用基質(zhì)匹配法配制標(biāo)準(zhǔn)溶液并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線［9］。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 ???線性關(guān)系。按“ 1.2.7.1 ”方法操作，35種禁用農(nóng)藥的線性方程見(jiàn)表3，相關(guān)系數(shù)（r）均不低于0.985 2，表明35種禁用農(nóng)藥在各自的濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2 ???檢出限與定量限。按“ 1.2.7.2 ”方法操作，測(cè)得35種禁用農(nóng)藥的檢出限為0.155 5～7.173 9 μg/kg，定量限為0.513 2～23.673 9 μg/kg，具體結(jié)果見(jiàn)表3，表明該方法滿足痕量檢測(cè)的要求。

2.3.3 ???精密度。按“ 1.2.7.3 ”方法操作，測(cè)得35種禁用農(nóng)藥定量離子對(duì)峰面積的RSD為2.2%～13.4%，具體結(jié)果見(jiàn)表3，表明儀器精密度良好。

2.3.4 ???加樣回收率。按“ 1.2.7.4 ”方法操作，計(jì)算35種禁用農(nóng)藥的平均加樣回收率為83.86%～122.80%，RSD為3.8%～24.6%，具體結(jié)果見(jiàn)表4，表明該方法回收率良好，可用于當(dāng)歸中35種禁用農(nóng)藥殘留量的測(cè)定。

2.4 樣品測(cè)定

按“ 1.2.8 ”方法對(duì)23批當(dāng)歸藥材進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示（表5），有10批藥材檢出O-內(nèi)吸磷、治螟磷、α-六六六、β-六六六、氟蟲(chóng)腈亞砜、對(duì)硫磷和甲基異柳磷7種禁用農(nóng)藥。按照《中國(guó)藥典》2020版限量標(biāo)準(zhǔn)［10］進(jìn)行判定，均未超出標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

3 結(jié)論

該試驗(yàn)建立了氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時(shí)測(cè)定當(dāng)歸中35種禁用農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)方法，具有前處理簡(jiǎn)單、靈敏度高、準(zhǔn)確快速的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)符合殘留分析的要求，可用于當(dāng)歸中禁用農(nóng)藥殘留的定性和定量分析。

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