楊金枝，崔曉鴿，郝海軍

TPGS表面修飾巖白菜素固體脂質(zhì)納米粒的制備與口服生物利用度研究

楊金枝1，崔曉鴿1，郝海軍2, 3*

1. 鄭州澍青醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 鄭州 450064 2. 上海市中藥研究所，上海 201401 3. 上海雷允上藥業(yè)有限公司，上海 201401

制備-α-維生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯（TPGS）修飾巖白菜素固體脂質(zhì)納米粒（TPGS surface-modified bergenin solid lipid nanoparticles，TPGS-Ber-SLN），并考察其體外釋藥和口服藥動(dòng)學(xué)行為。采用高壓均質(zhì)法制備TPGS-Ber-SLN。以包封率、載藥量和粒徑為考察指標(biāo)，通過(guò)單因素考察結(jié)合Box-Behnken設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法（Box Behnken design- response surface methodology，BBD-RSM）優(yōu)化TPGS-Ber-SLN處方，并制備成凍干粉末。X射線粉末衍射法（X-ray powder diffraction，XRPD）和差式掃描量熱法（differential scanning calorimetry，DSC）分析巖白菜素在TPGS-Ber-SLN凍干粉末中的存在狀態(tài)，透析袋法考察TPGS-Ber-SLN在不同介質(zhì)中釋藥情況。以巖白菜素原料藥為參考，比較TPGS-Ber-SLN在體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)行為及口服生物利用度。TPGS-Ber-SLN最佳處方工藝：巖白菜素用量為40 mg，單硬脂酸甘油酯用量525 mg，泊洛沙姆188質(zhì)量濃度為17.5 mg/mL，TPGS質(zhì)量濃度為0.2 mg/mL，均質(zhì)次數(shù)為9次。TPGS-Ber-SLN的平均包封率、載藥量、粒徑及ζ電位分別為（83.16±1.09）%、（4.97±0.13）%、（229.46±19.07）nm和（?15.67±0.23）mV，體外釋藥過(guò)程符合Weibull模型?？诜巹?dòng)學(xué)結(jié)果顯示，TPGS-Ber-SLN的max延長(zhǎng)至（2.07±0.43）h，1/2延長(zhǎng)至（4.21±0.78）h，max和生物利用度分別提高至3.91倍和5.34倍。TPGS-Ber-SLN顯著改變了巖白菜素的藥動(dòng)學(xué)行為，增加了口服吸收生物利用度。

巖白菜素；固體脂質(zhì)納米粒；-α-維生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯；藥動(dòng)學(xué)；口服生物利用度

巖白菜素（bergenin，Ber）是一類異香豆素類化合物，主要存在于虎耳草科、豆科、紫金?？频戎参镏衃1]，國(guó)內(nèi)外研究顯示，巖白菜素具有抗腫瘤、消炎、鎮(zhèn)痛、增強(qiáng)免疫、抗糖尿病、腎臟保護(hù)、鎮(zhèn)咳等活性[1-2]，且毒性很小[1]，具備開發(fā)成新藥的潛力。巖白菜素屬于生物藥劑學(xué)IV類藥物[3]，在25 ℃下溶解度為（1.37±0.02）mg/mL[4]，表觀油/水分配系數(shù)lg為?1.060±0.033～?1.190±0.044[3]。據(jù)報(bào)道[4-5]，巖白菜素在酸性和中性條件下可保持穩(wěn)定，但在堿性條件下可發(fā)生降解現(xiàn)象，降解速度隨著pH值增加而加快[5]，且受P-糖蛋白外排作用影響[6]導(dǎo)致巖白菜素口服生物利用度僅為4.83%[5]。目前巖白菜素已有固體分散體[7]、磷脂復(fù)合物[3]、自微乳[8]等制劑新技術(shù)報(bào)道。但固體分散體并不能改善巖白菜素的透膜能力及P-糖蛋白外排作用等；磷脂復(fù)合物在胃腸道中容易發(fā)生解離[9]，可能會(huì)削弱促吸收作用；自微乳技術(shù)需要添加大量的表面活性劑，存在一定的安全隱患。

固體脂質(zhì)納米粒（solid lipid nanoparticles，SLN）是由可生物降解、安全性高的固態(tài)脂質(zhì)作為載體制備的一種納米給藥系統(tǒng)，具有提高藥物在胃腸道的穩(wěn)定性、促進(jìn)藥物體內(nèi)吸收、提高生物利用度、增強(qiáng)藥效等優(yōu)勢(shì)[10-11]，且SLN的穩(wěn)定性優(yōu)于脂質(zhì)體[12]。-α-維生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯（-α- tocopheryl polyethylene glycol 1000 succinate，TPGS）是一種非離子型表面活性劑，不僅有助于增加藥物的溶解度、提高納米制劑的包封率，而且可抑制P-糖蛋白活性[13-14]，從而有利于增加藥物口服吸收[15-17]。故本研究將巖白菜素制備成TPGS表面修飾固體脂質(zhì)納米粒（TPGS surface-modified bergenin solid lipid nanoparticles，TPGS-Ber-SLN），以包封率、載藥量、粒徑為指標(biāo)，通過(guò)單因素試驗(yàn)結(jié)合Box-Behnken設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法（Box Behnken design-response surface methodology，BBD-RSM）優(yōu)化TPGS-Ber-SLN處方工藝，為便于儲(chǔ)存及給藥故將TPGS-Ber-SLN制備成凍干粉，并考察TPGS- Ber-SLN凍干粉體外釋藥及體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)行為，為后續(xù)藥效學(xué)評(píng)價(jià)奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

BSA124S型電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；1100型高效液相色譜儀，美國(guó)Agilent公司；HJ-3型磁力攪拌器，常州市偉嘉儀器制造有限公司；RCY-1400T型智能溶出儀，博科控股集團(tuán)有限公司；RE-200型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，華辰儀器有限公司；KL-060型超聲波儀器，深圳市科力超聲波洗凈設(shè)備有限公司；CGJB60-70型實(shí)驗(yàn)室用高壓均質(zhì)機(jī)，鄭州玉祥機(jī)械設(shè)備有限公司；XLW型超低溫冰箱，江蘇天日智能科技有限公司；LGJ-10N型真空凍干機(jī)，北京亞星儀科科技發(fā)展有限公司；Topsizer型激光粒度分析儀，珠海歐美克儀器有限公司；JEM-2100 透射電子顯微鏡（TEM），日本電子株式會(huì)社；HS-50AA型恒溫恒濕箱，上海目尼實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；D8 Venture型X射線粉末衍射儀，德國(guó)布魯克儀器公司；DSC-HSC-2型差示掃描量熱儀，北京恒久實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；ZX-DC型氮吹儀，北京眾信佳儀科技有限公司。

1.2 試劑

巖白菜素對(duì)照品，批號(hào)JW10533，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.6%，上海極威生物科技有限公司；巖白菜素原料藥，批號(hào)191208，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%，湖北新星化工有限公司；對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品，批號(hào)100018- 210615，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.4%，中國(guó)食品藥品檢定研究院；磷酸（批號(hào)C12747030）、四氫呋喃（批號(hào)C10303495），上海麥克林生化科技有限公司；單硬脂酸甘油酯（批號(hào)F1821057）、聚乙二醇1000維生素E琥珀酸酯（TPGS，批號(hào)T124208），阿拉丁試劑（上海）有限公司；無(wú)水乙醇（批號(hào)20200921）、醋酸乙酯（批號(hào)20200322），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；大豆磷脂，批號(hào)200718，上海輔必成醫(yī)藥科技有限公司；泊洛沙姆188（批號(hào)WPEE587E，德國(guó)巴斯夫有限公司）；乳糖（批號(hào)191220）、甘露醇（批號(hào)201028），鄭州宇控生物科技有限公司；其他試劑均為分析純。

1.3 動(dòng)物

SD大鼠，體質(zhì)量（220±20）g，雌雄兼具，購(gòu)自河南動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心［許可證號(hào)SCXK（豫）2020- 0001］，每組實(shí)驗(yàn)中雌雄數(shù)量各半。飼養(yǎng)溫度為20～25 ℃，相對(duì)濕度為50%～65%，實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)1周后進(jìn)行藥動(dòng)學(xué)研究，給藥前禁食12 h，自由飲水。遵循鄭州澍青醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理和使用的規(guī)定，均符合3R原則。

2 方法與結(jié)果

2.1 TPGS-Ber-SLN的制備[15,17]

精密稱取40 mg巖白菜素和100 mg大豆磷脂至圓底燒瓶，加入10 mL四氫呋喃并置于75 ℃水浴中磁力攪拌1 h（800 r/min）至澄清，減壓旋蒸除去四氫呋喃[4]，加入處方量的固態(tài)脂質(zhì)和10 mL無(wú)水乙醇并置于75 ℃水浴中，磁力攪拌（800 r/min）約10 min至體系澄清即得有機(jī)相。配制含一定質(zhì)量濃度的泊洛沙姆188及TPGS的水相，水相體積為50 mL，置于75 ℃水浴中磁力攪拌溶解。將有機(jī)相緩慢加至水相，繼續(xù)磁力攪拌20 min（800 r/min），于一定均質(zhì)壓力下均質(zhì)數(shù)次，置于?10 ℃冰箱中存放15 min，過(guò)0.45 μm微孔濾膜，補(bǔ)加蒸餾水至50 mL，即得TPGS-Ber-SLN混懸液。

2.2 TPGS-Ber-SLN中巖白菜素含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件[6]色譜柱為Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)為275 nm；柱溫為30 ℃；流動(dòng)相為甲醇-水（20∶80，稀磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.5）；體積流量為1.0 mL/min；進(jìn)樣體積為10 μL。理論塔板數(shù)以巖白菜素計(jì)不低于6000。

2.2.2 TPGS-Ber-SLN供試品溶液的配制 精密量取1 mL的TPGS-Ber-SLN混懸液至50 mL量瓶中，加入約30 mL甲醇超聲5 min（超聲功率為250 W、頻率為40 kHz），加入甲醇稀釋，混勻后過(guò)0.45 μm微孔濾膜。精密量取5 mL至10 mL量瓶中，加入流動(dòng)相稀釋，即得TPGS-Ber-SLN供試品溶液。

2.2.3 巖白菜素對(duì)照品溶液的配制 精密稱取巖白菜素對(duì)照品20 mg至100 mL量瓶中，加入約80 mL甲醇超聲溶解（超聲功率為250 W、頻率為40 kHz），加入甲醇稀釋至刻度，即得巖白菜素對(duì)照品儲(chǔ)備液（質(zhì)量濃度為200 μg/mL）。

2.2.4 線性關(guān)系考察 分別精密量取質(zhì)量濃度為200 μg/mL的巖白菜素對(duì)照品儲(chǔ)備液，加入流動(dòng)相配制成質(zhì)量濃度為10.00、5.00、2.50、1.00、0.50、0.05 μg/mL的系列對(duì)照品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以巖白菜素峰面積為縱坐標(biāo)（），質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），得回歸方程為＝17.666 2－0.045 8，＝0.999 9，結(jié)果表明巖白菜素在0.05～10.00 μg/mL線性關(guān)系良好。

2.2.5 專屬性考察 取空白輔料制備陰性樣品，另取巖白菜素對(duì)照品溶液和TPGS-Ber-SLN供試品溶液分別進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見圖1，試驗(yàn)結(jié)果表明輔料未對(duì)巖白菜素色譜峰產(chǎn)生干擾，專屬性高。

圖1 空白輔料(A)、巖白菜素對(duì)照品(B)和TPGS-Ber-SLN樣品(C)溶液的HPLC圖

2.2.6 精密度考察 取0.05、2.50、10.00 μg/mL對(duì)照品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件分別連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，計(jì)算得巖白菜素峰面積的RSD分別為0.68%、0.12%、0.16%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.2.7 重復(fù)性考察 取1份TPGS-Ber-SLN混懸液，按“2.2.2”項(xiàng)下方法平行制備6份TPGS-Ber-SLN供試品溶液并進(jìn)樣測(cè)定，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得巖白菜素質(zhì)量濃度的RSD為0.89%，結(jié)果表明該方法的重復(fù)性良好。

2.2.8 穩(wěn)定性考察 取TPGS-Ber-SLN供試品溶液，置于室溫（溫度25 ℃，濕度55%），分別于制備后0、2、4、8、12、24 h取樣，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得巖白菜素峰面積的RSD為1.45%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.9 加樣回收率考察 精密量取0.5 mL的TPGS-Ber-SLN混懸液置于50 mL量瓶中，平行9份，分為低、中、高3組，分別加入巖白菜素對(duì)照品儲(chǔ)備液（質(zhì)量濃度為200 μg/mL）1、2、3 mL，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法分別制備TPGS-Ber-SLN的供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定巖白菜素含量，計(jì)算得巖白菜素的平均加樣回收率為101.54%，RSD為1.58%。

2.3 TPGS-Ber-SLN包封率及載藥量的測(cè)定

精密量取TPGS-Ber-SLN混懸液1 mL至超濾管中（平均截留相對(duì)分子質(zhì)量12 000），于4 ℃下12 500 r/min離心（離心半徑為6.8 cm）20 min[18]，取續(xù)濾液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定游離巖白菜素的量（游離）。精密量取TPGS-Ber-SLN混懸液1 mL按“2.2.2”項(xiàng)下方法處理后按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定巖白菜素總量（總）。精密量取4 mL的TPGS-Ber-SLN混懸液于?50 ℃預(yù)凍1 d后置于低溫凍干機(jī)中（?40 ℃）直接凍干，稱定質(zhì)量，計(jì)算1 mL的TPGS-Ber-SLN混懸液中藥物與輔料總質(zhì)量（總）。計(jì)算TPGS-Ber-SLN的包封率及載藥量。

包封率＝(總－游離)/總

載藥量＝(總－游離)/總

2.4 TPGS-Ber-SLN粒徑及ζ電位的測(cè)定

精密量取TPGS-Ber-SLN混懸液0.1 mL，加入蒸餾水稀釋40倍，搖勻。取4 mL置于四面透光型比色皿中測(cè)定TPGS-Ber-SLN粒徑及多分散指數(shù)（polydispersity index，PDI）值。取稀釋后的TPGS-Ber-SLN混懸液適量至ζ電位專用樣品池中，測(cè)定ζ電位，平行測(cè)定3次，取平均值。

2.5 TPGS-Ber-SLN處方工藝研究

2.5.1 固態(tài)脂質(zhì)種類的考察 巖白菜素投藥量為40 mg，固態(tài)脂質(zhì)用量為500 mg，泊洛沙姆188質(zhì)量濃度為15.0 mg/mL，TPGS質(zhì)量濃度為0.20 mg/mL，均質(zhì)壓力為80 MPa，均質(zhì)次數(shù)為6次，考察固態(tài)脂質(zhì)種類對(duì)TPGS-Ber-SLN的影響，結(jié)果見表1。結(jié)果顯示，與雙硬脂酸甘油酯和硬脂酸相比，單硬脂酸甘油酯制得的TPGS-Ber-SLN具有相對(duì)較高的包封率和載藥量，平均粒徑雖大于雙硬脂酸甘油酯制得的TPGS-Ber-SLN，但兩者之間無(wú)顯著性差異（＝0.152 8＞0.05），因此，選擇單硬脂酸甘油酯作為制備TPGS-Ber-SLN的固態(tài)脂質(zhì)。

表1 固態(tài)脂質(zhì)種類考察(, n = 3)

2.5.2 單硬脂酸甘油酯用量的考察 巖白菜素投藥量為40 mg，單硬脂酸甘油酯為固態(tài)脂質(zhì)，泊洛沙姆188質(zhì)量濃度為15.0 mg/mL，TPGS質(zhì)量濃度為0.20 mg/mL，均質(zhì)壓力為80 MPa，均質(zhì)次數(shù)為6次，考察單硬脂酸甘油酯用量對(duì)TPGS-Ber-SLN的影響，結(jié)果見表2。結(jié)果顯示，TPGS-Ber-SLN包封率隨著單硬脂酸甘油酯用量增加而增加，可見加大載體用量利于提高包封率。但載藥量隨著單硬脂酸甘油酯用量的增加呈先增大后下降趨勢(shì)，而粒徑呈現(xiàn)先變小后增大趨勢(shì)。為獲得較高包封率和載藥量、較小粒徑的TPGS-Ber-SLN處方，選擇單硬脂酸甘油酯用量在450～600 mg進(jìn)行優(yōu)化。

表2 單硬脂酸甘油酯用量的考察(, n = 3)

2.5.3 泊洛沙姆188質(zhì)量濃度的考察 巖白菜素投藥量為40 mg，單硬脂酸甘油酯用量為500 mg，TPGS質(zhì)量濃度為0.20 mg/mL，均質(zhì)壓力為80 MPa，均質(zhì)次數(shù)為6次，考察泊洛沙姆188質(zhì)量濃度對(duì)TPGS-Ber-SLN的影響，結(jié)果見表3。結(jié)果顯示，隨著泊洛沙姆188質(zhì)量濃度的增加TPGS-Ber-SLN包封率和載藥量呈先增加后下降情況，所以適量增加泊洛沙姆188利于增加包封率及載藥量，但泊洛沙姆188用量過(guò)大時(shí)可能由于增溶作用使藥物進(jìn)入水相[18]，導(dǎo)致包封率和載藥量下降。TPGS-Ber-SLN粒徑隨著泊洛沙姆188質(zhì)量濃度增加總體呈下降趨勢(shì)，可見泊洛沙姆188質(zhì)量濃度對(duì)TPGS-Ber-SLN影響較大，后續(xù)可對(duì)質(zhì)量濃度12.5～22.5 mg/mL進(jìn)行優(yōu)化。

2.5.4 TPGS質(zhì)量濃度的考察 巖白菜素投藥量為40 mg，單硬脂酸甘油酯用量為500 mg，泊洛沙姆188質(zhì)量濃度為15.0 mg/mL，均質(zhì)壓力為80 MPa，均質(zhì)次數(shù)為6次，考察TPGS質(zhì)量濃度對(duì)TPGS- Ber-SLN的影響，結(jié)果見表4。結(jié)果顯示，當(dāng)處方中不含TPGS時(shí)包封率及載藥相對(duì)較低，隨著TPGS質(zhì)量濃度的增加TPGS-Ber-SLN包封率和載藥量逐漸增加后下降，而粒徑呈逐漸增加趨勢(shì)?？赡苁怯捎赥PGS長(zhǎng)鏈有助于阻止TPGS-Ber-SLN表層或淺表層藥物泄露[19]，從而使包封率和載藥量增加；但TPGS用量過(guò)大時(shí)，TPGS長(zhǎng)鏈之間的排斥作用降低了TPGS-Ber-SLN表面致密度，從而導(dǎo)致藥物泄露。由于TPGS質(zhì)量濃度為0.2 mg/mL時(shí)包封率和載藥量均相對(duì)較高，粒徑小于250 nm，故確定TPGS質(zhì)量濃度為0.2 mg/mL。

表3 泊洛沙姆188質(zhì)量濃度的考察(, n = 3)

2.5.5 均質(zhì)壓力的考察 巖白菜素投藥量為40 mg，單硬脂酸甘油酯用量為500 mg，泊洛沙姆188質(zhì)量濃度為17.5 mg/mL，TPGS質(zhì)量濃度為0.20 mg/mL，均質(zhì)次數(shù)為6次，考察均質(zhì)壓力對(duì)TPGS- Ber-SLN的影響，結(jié)果見表5。結(jié)果顯示，均質(zhì)壓力在60～80 MPa時(shí)對(duì)TPGS-Ber-SLN包封率和載藥量無(wú)顯著性影響，但壓力達(dá)到90 MPa時(shí)包封率和載藥量出現(xiàn)明顯下降情況，可能是均質(zhì)壓力較高時(shí)體系溫度過(guò)高，在表面活性劑作用下使巖白菜素進(jìn)入水相從而降低了TPGS-Ber-SLN的包封率及載藥量。較高的均質(zhì)壓力也使TPGS-Ber-SLN粒徑出現(xiàn)增長(zhǎng)趨勢(shì)，為降低過(guò)高均質(zhì)壓力帶來(lái)的影響，故固定均質(zhì)壓力為80 MPa。

表4 TPGS質(zhì)量濃度的考察(, n = 3)

表5 均質(zhì)壓力的考察(, n = 3)

2.5.6 均質(zhì)次數(shù)的考察 巖白菜素投藥量為40 mg，單硬脂酸甘油酯用量為500 mg，泊洛沙姆188質(zhì)量濃度為17.5 mg/mL，TPGS質(zhì)量濃度為0.20 mg/mL，均質(zhì)壓力為80 MPa，考察均質(zhì)次數(shù)對(duì)TPGS-Ber-SLN的影響，結(jié)果見表6。結(jié)果顯示，隨著均質(zhì)次數(shù)的增加TPGS-Ber-SLN包封率和載藥量均呈現(xiàn)先增加后下降，而粒徑呈下降后增加情況。說(shuō)明均質(zhì)次數(shù)過(guò)少或過(guò)多均會(huì)對(duì)TPGS-Ber-SLN的各項(xiàng)指標(biāo)產(chǎn)生影響，后續(xù)需對(duì)均質(zhì)次數(shù)在6～10次進(jìn)行優(yōu)化。

表6 均質(zhì)次數(shù)的考察(, n = 3)

2.6 BBD-RSM優(yōu)化TPGS-Ber-SLN處方工藝

2.6.1 試驗(yàn)方案 結(jié)合單因素試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)單硬脂酸甘油酯用量、泊洛沙姆188質(zhì)量濃度和均質(zhì)次數(shù)對(duì)TPGS-Ber-SLN影響較大，故分別將其作為自變量1、2、3，各水平設(shè)置見表7。BBD-RSM仍采用包封率、載藥量和粒徑作為優(yōu)化指標(biāo)，即作為因變量1、2和3。為了得到具有較高包封率及載藥量、同時(shí)具有較小粒徑的TPGS-Ber-SLN處方工藝，將3個(gè)指標(biāo)作歸一化處理。

歸一值（overall desirability，OD）計(jì)算過(guò)程為①包封率和載藥量計(jì)算公式為max＝(M－min)/ (max－min)；②粒徑計(jì)算公式為min＝(max－M)/(max－min)，其中max和min分別為該試驗(yàn)組中最大及最小值，M為實(shí)際值；③OD＝(12…d)1/k。

分別制備TPGS-Ber-SLN，各組均進(jìn)行3次平行試驗(yàn)，取平均值，結(jié)果見表7。

2.6.2 模型擬合、效應(yīng)面圖處方工藝的確定 采用Design Expert V8.0.6軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，得OD方程：OD＝0.93＋4.03×10?31－9.21×10?32＋0.043＋0.0812＋0.0613－0.2923－0.5112－0.2822－0.2932。

方差分析結(jié)果（表8）顯示，模型＜0.000 1，2＝0.992 6，adj2＝0.983 1，失擬項(xiàng)＝0.057 7＞0.05，說(shuō)明所選模型的擬合度較高。OD方程中3、12、13具有顯著性差異（＜0.05），23、12、22和3具有極顯著性差異（＜0.01），交互作用三維效應(yīng)面見圖2，當(dāng)固定某一因素時(shí)，隨著其他2因素（質(zhì)量濃度、用量或次數(shù)）的增加響應(yīng)值OD均呈現(xiàn)先增大后減小趨勢(shì)，說(shuō)明采用BBD-RSM優(yōu)化TPGS-Ber-SLN處方工藝是非常必要的。

TPGS-Ber-SLN最佳處方工藝為單硬脂酸甘油酯524.71 mg，泊洛沙姆188質(zhì)量濃度為17.2 mg/mL，均質(zhì)次數(shù)為8.72次。包封率、載藥量和粒徑的預(yù)測(cè)值分別為83.87%、5.14%和224.37 nm。

表7 BBD-RSM試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果(n = 3)

表8 方差分析

圖2 不同因素對(duì)OD值的效應(yīng)面

2.7 處方工藝驗(yàn)證

為便于實(shí)際操作，將單硬脂酸甘油酯用量調(diào)整為525 mg，泊洛沙姆188質(zhì)量濃度調(diào)整為17.5 mg/mL，均質(zhì)次數(shù)調(diào)整為9次，按“2.2”項(xiàng)方法平行制備3批TPGS-Ber-SLN，按“2.3”及“2.4”項(xiàng)下方法操作，分別測(cè)定TPGS-Ber-SLN包封率、載藥量及粒徑，并計(jì)算各自測(cè)定值與預(yù)測(cè)值的偏差，結(jié)果見表9。TPGS-Ber-SLN的包封率、載藥量及粒徑的偏差均小于±5%。粒徑分布見圖3，平均PDI為0.099±0.011，平均ζ電位為（?15.67±0.23）mV，ζ電位見圖4。

偏差＝(測(cè)定值－預(yù)測(cè)值)/預(yù)測(cè)值

表9 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果(, n = 3)

圖3 TPGS-Ber-SLN粒徑分布

圖4 TPGS-Ber-SLN的ζ電位

2.8 TEM觀察TPGS-Ber-SLN微觀形態(tài)

取TPGS-Ber-SLN混懸液0.1 mL，稀釋50倍后滴至銅網(wǎng)上，用2%磷鎢酸鈉染色，置于室溫環(huán)境晾干，于TEM下放大至12 000倍（高壓為5.0 kV），即可觀察到TPGS-Ber-SLN的微觀形態(tài)，結(jié)果見圖5。結(jié)果顯示，TPGS-Ber-SLN基本形態(tài)為類球形，無(wú)粘連。

2.9 凍干粉的制備及穩(wěn)定性評(píng)價(jià)

2.9.1 凍干粉種類及處方用量的考察 于TPGS- Ber-SLN混懸液中加入凍干保護(hù)劑（乳糖、甘露醇或兩者混合物），震蕩至澄清，?50 ℃超低溫冰箱預(yù)凍1 d，取出立即置于?40 ℃冷凍干燥機(jī)中，抽真空，冷凍干燥1 d后取出凍干品。按表10進(jìn)行評(píng)價(jià)，凍干粉出現(xiàn)塌陷、分層且色差明顯、再分散時(shí)間大于90 s時(shí)表示凍干粉不理想，因而評(píng)分較低；反之則表示凍干粉較為理想，評(píng)分較高?？疾旖Y(jié)果見表11，質(zhì)量濃度為0.05、0.07 g/mL的乳糖和甘露醇（質(zhì)量比為1∶1）制得的凍干粉得分最高，考慮到輔料用量問(wèn)題，最終選擇5%的乳糖和甘露醇（質(zhì)量比為1∶1）來(lái)制備TPGS-Ber-SLN凍干粉。復(fù)溶后測(cè)得包封率、粒徑和PDI值分別為（81.26±1.01）%、（242.03±15.86）nm和0.116±0.021。TPGS- Ber-SLN凍干前、凍干粉和蒸餾水復(fù)溶后樣品外觀見圖6。

圖5 TPGS-Ber-SLN的TEM圖

2.9.2 TPGS-Ber-SLN凍干粉穩(wěn)定性考察 TPGS- Ber-SLN凍干粉密封置于恒溫恒濕箱中（溫度30 ℃，濕度60%），分別于0、5、10、15、30、45、60、75、90 d取樣，蒸餾水復(fù)溶后測(cè)定包封率和粒徑，結(jié)果見表12。TPGS-Ber-SLN混懸液穩(wěn)定性較差，但制備成凍干粉后包封率和粒徑波動(dòng)幅度明顯變?。≒DI值均小于0.2），說(shuō)明制備成凍干粉后增加了穩(wěn)定性。

2.10 TPGS-Ber-SLN凍干粉的XRPD研究

采用XRPD對(duì)TPGS-Ber-SLN凍干粉進(jìn)行晶型分析。取巖白菜素原料藥、空白輔料、物理混合物（巖白菜素和輔料的比例與TPGS-Ber-SLN凍干粉一致）和TPGS-Ber-SLN凍干粉適量置于樣品槽中，玻璃片將樣品粉末壓制平整后進(jìn)行掃描。測(cè)試條件為Cu-Kα靶，速度為4°/min，掃描角度（2）為3°～45°，結(jié)果見圖7。巖白菜素原料藥在6.97°、8.03°、11.77°、13.45°、14.26°等處的晶型峰相對(duì)較強(qiáng)，在物理混合物的XRPD圖譜中仍可觀察到這些晶型峰，位置未發(fā)生變化但強(qiáng)度下降明顯。TPGS-Ber- SLN凍干粉XRPD中僅可觀察到空白輔料的晶型衍射峰，巖白菜素晶型峰完全消失，說(shuō)明巖白菜素在TPGS-Ber-SLN凍干粉中晶型發(fā)生很大改變，轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)定型物質(zhì)。

表10 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表11 凍干結(jié)果(n = 3)

A-TPGS-Ber-SLN混懸液 B-TPGS-Ber-SLN凍干粉 C-蒸餾水復(fù)溶后樣品

表12 TPGS-Ber-SLN的穩(wěn)定性考察結(jié)果(, n = 3)

取TPGS-Ber-SLN凍干粉密封后置于恒溫恒濕箱（溫度30 ℃，濕度60%），分別于0、30、60、90 d取樣作XRPD分析，結(jié)果見圖8。TPGS-Ber-SLN凍干粉放置90 d后XRPD圖譜中仍未出現(xiàn)巖白菜素原料藥特征晶型峰，說(shuō)明巖白菜素在TPGS-Ber- SLN凍干粉中仍以無(wú)定形的形式存在，未出現(xiàn)析晶現(xiàn)象。

2.11 TPGS-Ber-SLN凍干粉的差式掃描量熱法（DSC）研究

取巖白菜素原料藥、空白輔料、物理混合物（巖白菜素和輔料比例與TPGS-Ber-SLN凍干粉一致）、TPGS-Ber-SLN凍干粉（0、30、60、90 d）適量置于樣品槽中測(cè)試條件為氧化鋁（Al2O3）為參比物，升溫速度為10 ℃/min，升溫范圍為30～300 ℃。結(jié)果見圖9，巖白菜素原料藥在242.2 ℃出現(xiàn)熔點(diǎn)峰，在物理混合物中吸熱峰提前至217.8 ℃。TPGS- Ber-SLN凍干粉（0 d）的DSC圖譜中未出現(xiàn)巖白菜素原料藥吸熱峰，說(shuō)明巖白菜素在TPGS-Ber- SLN凍干粉中以無(wú)定型形式存在，與XRPD研究結(jié)果一致。在TPGS-Ber-SLN凍干粉的30、60、90 d樣品的DSC圖譜中仍未出現(xiàn)原料藥吸熱峰，證明樣品穩(wěn)定性良好。

圖7 TPGS-Ber-SLN凍干粉的XRPD結(jié)果

圖8 TPGS-Ber-SLN凍干粉的晶型穩(wěn)定性結(jié)果(XRPD)

圖9 TPGS-Ber-SLN凍干粉的晶型穩(wěn)定性結(jié)果(DSC)

2.12 TPGS-Ber-SLN體外釋藥行為研究

測(cè)得巖白菜素在pH 1.2鹽酸水溶液及pH 5.0和pH 6.8磷酸鹽緩沖液（PBS）中溶解度分別為（1.58±0.04）、（1.60±0.03）、（0.98±0.02）mg/mL，因此50 mg巖白菜素在體積為500 mL的3種釋藥介質(zhì)中可達(dá)漏槽條件。按照TPGS-Ber-SLN處方工藝制備Ber-SLN（不加TPGS），并按“2.9.1”項(xiàng)下方法制備成凍干粉末。取巖白菜素原料藥、Ber-SLN和TPGS-Ber-SLN凍干粉適量，使巖白菜素含量為50 mg，加入pH 1.2鹽酸水溶液5 mL，置于透析袋中（平均截留相對(duì)分子質(zhì)量為12 000），扎緊。釋藥介質(zhì)為500 mL的pH 1.2鹽酸水溶液，介質(zhì)溫度為37 ℃，轉(zhuǎn)速為75 r/min，分別于0、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00 h取樣3 mL。同法考察在pH 5.0和pH 6.8 PBS中釋藥情況，取樣點(diǎn)調(diào)整為0、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00、4.00、6.00、8.00、12.00、18.00、24.00、48.00 h。樣品均過(guò)0.45 μm微孔濾膜后進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見圖10。Ber-SLN和TPGS-Ber- SLN均呈緩釋特征，Ber-SLN在不同pH值的釋藥介質(zhì)中，釋藥速率和累積釋放度均高于TPGS-Ber- SLN。巖白菜素原料藥在pH 1.2鹽酸水溶液和pH 5.0 PBS中2 h內(nèi)累積釋放度均達(dá)90%以上，但在pH 6.8 PBS中隨著時(shí)間的延長(zhǎng)累積釋放度呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，可能是由于巖白菜素在堿性環(huán)境中發(fā)生降解所致[4,6]。

圖10 巖白菜素原料藥、Ber-SLN和TPGS-Ber-SLN在pH 1.2鹽酸水溶液(A) 及pH 5.0 PBS (B) 和pH 6.8 PBS (C) 中的體外釋放曲線(, n = 6)

Ber-SLN和TPGS-Ber-SLN在pH 5.0和pH 6.8 PBS中釋藥過(guò)程均符合Weibull模型（表13），說(shuō)明釋藥過(guò)程是典型的雙相動(dòng)力學(xué)特征。

2.13 口服藥動(dòng)學(xué)比較

2.13.1 給藥及取血方案 取巖白菜素原料藥、Ber- SLN和TPGS-Ber-SLN凍干粉末，采用0.5%的CMC-Na溶液配制灌胃液。取18只健康SD大鼠，過(guò)夜禁食，隨機(jī)分成3組，各只大鼠稱定質(zhì)量后按60 mg/kg ig給藥（以巖白菜素含量計(jì)）。巖白菜素原料藥組分別于0.25、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、8.00 h取血約0.3 mL，Ber-SLN和TPGS-Ber-SLN凍干粉末分別增加10 h和12 h取血點(diǎn)，將血樣引流至肝素浸潤(rùn)離心管中，震蕩，并以3000 r/min離心（離心半徑為6.8 cm）2 min，即得血漿樣品。

表13 Ber-SLN和TPGS-Ber-SLN在pH5.0、6.8PBS中的釋放模型

2.13.2 血漿樣品的處理[6]取100 μL血漿樣品和50 μL對(duì)乙酰氨基酚內(nèi)標(biāo)溶液（質(zhì)量濃度為800 ng/mL）至離心管中，密封渦旋15 s，加入0.5 mL醋酸乙酯后繼續(xù)密封渦旋30 s，置于4 ℃離心機(jī)中5000 r/min離心（離心半徑為6.8 cm）3 min，移取上層有機(jī)相。同法再次提取1次，合并有機(jī)相，于40 ℃溫度下用氮?dú)獯蹈傻脷堅(jiān)?，采?00 μL甲醇復(fù)溶，待測(cè)。

2.13.3 血漿對(duì)照品溶液的配制 甲醇配制50、100、250、500、1250、2500 ng/mL的巖白菜素對(duì)照品溶液，各個(gè)質(zhì)量濃度分別取100 μL，氮?dú)獯党袡C(jī)溶液后加入100 μL空白血漿，渦旋30 s后超聲30 s混合均勻，即得血漿對(duì)照品溶液。

2.13.4 線性關(guān)系考察 按“2.13.2”項(xiàng)方法配制巖白菜素血漿對(duì)照品溶液，并進(jìn)樣測(cè)定巖白菜素和乙酰氨基酚的峰面積。以兩者峰面積比為縱坐標(biāo)（），巖白菜素質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），作線性回歸得方程：＝2.231 0＋8.042 6，＝0.996 4，結(jié)果表明巖白菜素血漿對(duì)照品溶液的線性范圍為50～2500 ng/mL。

2.13.5 專屬性考察 血藥濃度測(cè)定時(shí)色譜條件與“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件一致。取空白血漿、巖白菜素血漿對(duì)照品溶液和巖白菜素原料藥ig給藥8 h血漿樣品，分別按“2.13.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。色譜圖見圖11，試驗(yàn)結(jié)果表明血漿內(nèi)源性物質(zhì)未對(duì)巖白菜素和內(nèi)標(biāo)峰產(chǎn)生干擾，專屬性較高。

圖11 空白血漿(A)、巖白菜素＋空白血漿(B)和血漿樣品(C)的HPLC圖

2.13.6 日內(nèi)精密度考察 分別取50、500、2500 ng/mL血漿對(duì)照品溶液，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件同1 d內(nèi)分別連續(xù)測(cè)定6次，計(jì)算得巖白菜素和內(nèi)標(biāo)峰面積比值的RSD分別為9.05%、4.17%、6.02%，試驗(yàn)結(jié)果表明日內(nèi)精密度良好。

2.13.7 日間精密度考察 分別取50、500、2500 ng/mL血漿對(duì)照品溶液每天測(cè)試1次，按“2.1.1”項(xiàng)色譜條件連續(xù)測(cè)定6 d，計(jì)算得巖白菜素和內(nèi)標(biāo)峰面積比值RSD分別為6.79%、9.32%、5.10%，試驗(yàn)結(jié)果表明日間精密度良好。

2.13.8 穩(wěn)定性考察 取巖白菜素原料藥ig給藥1 h的血漿樣品，分別于0、3、6、9、12、24 h進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得巖白菜素和內(nèi)標(biāo)峰面積比值RSD為6.07%，試驗(yàn)結(jié)果表明穩(wěn)定性良好。

2.13.9 提取回收率考察[20]取巖白菜素質(zhì)量濃度為50、500、2500 ng/mL對(duì)照品溶液各100 μL，氮?dú)獯党袡C(jī)溶液后加入100 μL空白血漿，渦旋30 s后超聲30 s混合均勻后按“2.13.2”項(xiàng)下方法處理，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定巖白菜素和內(nèi)標(biāo)峰面積，并計(jì)算兩者峰面積比值，帶入巖白菜素血漿對(duì)照品線性方程＝2.231 0＋8.042 6，計(jì)算測(cè)得質(zhì)量濃度及提取回收率，結(jié)果顯示平均提取回收率為94.98%，RSD為7.18%（＝9）。

2.13.10 定量限考察 取質(zhì)量濃度為50 ng/mL的巖白菜素血漿對(duì)照品溶液，加入空白血漿逐步稀釋，按“2.13.2”項(xiàng)下方法處理后進(jìn)樣測(cè)定，采用信噪比為10作為定量限，試驗(yàn)結(jié)果表明巖白菜素在血漿中定量限為15 ng/mL。

2.13.11 藥動(dòng)學(xué)結(jié)果 巖白菜素原料藥、Ber-SLN和TPGS-Ber-SLN藥-時(shí)曲線見圖12，使用DAS2.0計(jì)算主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，結(jié)果見表14。Ber-SLN與TPGS-Ber-SLN組與原料藥相比，達(dá)峰時(shí)間（max）均發(fā)生了顯著性延后（＜0.05）；半衰期（1/2）也發(fā)生了顯著性延長(zhǎng)（＜0.05），利于維持血藥濃度；峰濃度（max）分別提高至2.63倍和3.91倍，差異具有極顯著性水平（＜0.01）；藥時(shí)曲線下面積（AUC0～t和AUC0～∞）均有極顯著性改變（＜0.01），說(shuō)明Ber-SLN與TPGS-Ber-SLN極大影響了巖白菜素體內(nèi)吸收過(guò)程，生物利用度分別提高至3.37倍和5.34倍。TPGS-Ber-SLN與Ber-SLN相比，max和1/2無(wú)明顯改變，但max、AUC0～t和AUC0～∞發(fā)生了顯著性提高（＜0.05），證明TPGS-Ber-SLN更能促進(jìn)巖白菜素體內(nèi)吸收。

圖12 藥-時(shí)曲線(, n = 6)

表14 主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(, n = 6)

與巖白菜素比較：*＜0.05**＜0.01；與Ber-SLN比較：#＜0.01

*< 0.05**< 0.01bergenin drug substance;#< 0.05Ber-SLN

3 討論

在制備TPGS-Ber-SLN時(shí)先將巖白菜素與磷脂在四氫呋喃中磁力攪拌至體系澄清，此時(shí)巖白菜素可與磷脂形成磷脂復(fù)合物[4]，從而利于增強(qiáng)巖白菜素溶解度及與單硬脂酸甘油酯的親和性[18,21]，為后續(xù)制備TPGS-Ber-SLN奠定了基礎(chǔ)。也有學(xué)者認(rèn)為[19]，藥物-磷脂復(fù)合物本身可作為固體脂質(zhì)納米粒的脂質(zhì)載體，采用2種以上的脂質(zhì)載體可防止藥物被排出晶格，增加納米粒的包封率，本研究結(jié)果可為脂溶性差的藥物制備SLN提供參考。TPGS是一種同時(shí)帶有親水和親脂基團(tuán)的高分子材料，具有一定的乳化能力，在水中臨界膠束質(zhì)量濃度為249 mg/L[22]，為了防止TPGS從SLN表面逃逸出去自發(fā)形成膠束，故確定其在水相中質(zhì)量濃度為0.20 mg/mL，該用量也與相關(guān)研究者采用的用量基本一致[15,17]。

測(cè)得TPGS-Ber-SLN平均ζ電位絕對(duì)值不足30 mV，穩(wěn)定性不佳?？赡苁怯捎谖挥赥PGS-Ber-SLN表面的TPGS接枝較長(zhǎng)，起到了屏蔽作用[23-24]，故將TPGS-Ber-SLN制備成凍干粉來(lái)加以改善。糖類保護(hù)劑（乳糖）在凍干失去水分時(shí)，體系可形成高黏度的玻璃態(tài)來(lái)防止納米微觀結(jié)構(gòu)發(fā)生變化[25]，但糖類保護(hù)劑容易出現(xiàn)塌陷現(xiàn)象。甘露醇具有優(yōu)良的支撐作用，可解決糖類保護(hù)劑的不足，因此選用糖類保護(hù)劑（乳糖）和甘露醇聯(lián)用來(lái)制備TPGS- Ber-SLN凍干粉?？疾彀l(fā)現(xiàn)，采用質(zhì)量濃度0.05 g/mL的乳糖和甘露醇（質(zhì)量比為1∶1）來(lái)制備TPGS-Ber-SLN凍干粉時(shí)外觀飽滿、無(wú)分層、再分散性良好。

巖白菜素原料藥在pH 6.8 PBS中累積釋放度逐漸降低，而Ber-SLN和TPGS-Ber-SLN在pH 6.8 PBS中的累積溶出度逐漸增加，可能是由于載體的包裹作用提高了巖白菜素穩(wěn)定性，為后續(xù)順利進(jìn)入血液循環(huán)奠定了基礎(chǔ)。TPGS-Ber-SLN釋藥速率較慢，可能是由于TPGS-Ber-SLN表面的親水性高于Ber-SLN，疏水性藥物更傾向于分布于TPGS-Ber- SLN內(nèi)部[26]，因而釋藥更為緩慢；另外TPGS-Ber- SLN表面經(jīng)TPGS修飾后對(duì)藥物釋放也起到一定的阻滯作用。

Ber-SLN和TPGS-Ber-SLN的max均發(fā)生顯著性延后，可能與Ber-SLN和TPGS-Ber-SLN緩釋作用有關(guān)，而且較小的粒徑容易使Ber-SLN和TPGS-Ber-SLN滯留于腸道或絨毛間隙中[27-28]，影響了入血速度，因而使max發(fā)生顯著性延后。Ber-SLN和TPGS-Ber-SLN的1/2也發(fā)生顯著性延長(zhǎng)，有助于維持血藥濃度，增加巖白菜素的生物利用度。Ber-SLN和TPGS-Ber-SLN的max分別極顯著性提高至2.63倍和3.91倍，說(shuō)明2種SLN均有效促進(jìn)了藥物吸收。Ber-SLN和TPGS-Ber-SLN口服吸收生物利用度的提高，可能是由于SLN對(duì)藥物的包裹作用降低了巖白菜素在腸道降解，提高了巖白菜素的穩(wěn)定性；納米藥物增加了與胃腸道接觸面積；提高了巖白菜素累積溶出度；處方中脂質(zhì)成分可打開腸壁緊密連接，增強(qiáng)藥物滲透[12]；納米藥物可經(jīng)細(xì)胞間、淋巴轉(zhuǎn)運(yùn)等方式進(jìn)入血液循環(huán)[29-30]，最終顯著促進(jìn)了藥物吸收。

另外，TPGS-Ber-SLN的max和生物利用度與Ber-SLN相比具有顯著性差異（＜0.05），可能是由于TPGS-Ber-SLN處方中TPGS抑制了P-糖蛋白活性，減少了巖白菜素外排作用[15]，因而生物利用度提高幅度更大。

本研究制備的TPGS-Ber-SLN口服相對(duì)生物利用度提高至5.34倍，比已報(bào)道的固體分散體（提高至1.48倍）[7]、磷脂復(fù)合物（提高至439%）[4]及磷脂復(fù)合物固體分散體（202.46%）[31]改善幅度更大。后續(xù)將研究進(jìn)一步對(duì)TPGS-Ber-SLN藥效學(xué)、毒理學(xué)等進(jìn)行評(píng)價(jià)，為TPGS-Ber-SLN提供更為全面的研究資料。另外，只采用TPGS來(lái)制備SLN是否具有更高的包封率或生物利用度有待進(jìn)一步研究。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Formulation optimization of TPGS surface-modified bergenin solid lipid nanoparticles and oral bioavailability study

YANG Jin-zhi1, CUI Xiao-ge1, HAO Hai-jun2, 3

1. Zhengzhou Shuqing Medical College, Zhengzhou 450064, China 2. Shanghai Institute of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201401, China 3. Shanghai Leiyunshang Pharmaceutical Co., Ltd., Shanghai 201401, China

To prepare-α-vitamin E polyethylene glycol 1000 succinate (TPGS) surface-modified bergenin (Ber) solid lipid nanoparticles (TPGS-Ber-SLN), and investigate its drug releaseand oral pharmacokinetics behavior.High pressure homogenization method was used to prepare TPGS-Ber-SLN. Encapsulation rate, drug loading and particle size were taken as evaluation indexes, single factor investigation method combined with Box-Behnken design-response surface method was employed to optimize the prescription process of TPGS-Ber-SLN. Lyophilized powder of TPGS-Ber-SLN was also prepared. X-ray powder diffraction (XRPD) and differential scanning calorimetry (DSC) were employed to analyze the state of Ber in lyophilized powder of TPGS-Ber-SLN.drug release behavior of TPGS-Ber-SLN in different pH media were investigated by dialysis bag method. Using Ber suspension as control, pharmacokinetics behaviorof TPGS-Ber-SLNand oral bioavailability was compared.Optimal prescription process of TPGS-Ber-SLN was as follow: Ber dosage was 40 mg, glycerol monostearate dosage was 525 mg, poloxamer 188 mass concentrations was 17.5 mg/mL, TPGS mass concentrations was 0.2 mg/mL and homogenization times were nine times. Average envelopment efficiency, drug loading, particle size and ζ potential of TPGS-Ber-SLN were (83.16 ± 1.09)%, (4.97 ± 0.13)%, and (229.46 ± 19.07) nm and (?15.67 ± 0.23) mV, respectively. The drug release process of TPGS-Ber-SLNaccorded with Weibull model. Results of oral pharmacokinetics showed thatmaxof TPGS-Ber-SLN was delayed to (2.07 ± 0.43) h,1/2was extended to (4.21 ± 0.78) h,maxand oral bioavailability were increased to 3.91 fold and 5.34 fold, respectively.TPGS-Ber-SLN significantly altered the pharmacokinetic behavior of Berand increased its oral bioavailability effectively.

bergenin; solid lipid nanoparticles;-α-vitamin E polyethylene glycol 1000 succinate; pharmacokinetics; oral bioavailability

R283.6

A

0253 - 2670(2023)13 - 4144 - 13

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.13.008

2022-11-30

上海市科委項(xiàng)目（21S21903400）

楊金枝（1980—），女，碩士，副教授，從事中藥學(xué)研究。Tel: (0371)67673621 E-mail: yangjz2007@126.com

通信作者：郝海軍（1981—），男，博士，高級(jí)工程師，從事中藥新型給藥系統(tǒng)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。Tel: (021)67103277 E-mail: haohj@shlys.com

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]