丁劉剛 ，周 勇 ，李泓穎 ，趙謀明 ，蘇國(guó)萬(wàn)

（1. 華南理工大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,廣州 510641；2. 無(wú)限極(中國(guó))有限公司,廣州 510405；3. 健士星生物技術(shù)研發(fā)(上海)有限公司,上海 200335）

0 引言

骨關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）是一種退行性病變疾病，主要是由于增齡、肥胖、勞損、創(chuàng)傷、關(guān)節(jié)先天性異常、關(guān)節(jié)畸形等諸多因素引起的關(guān)節(jié)軟骨退化損傷、關(guān)節(jié)邊緣和軟骨下骨反應(yīng)性增生的骨關(guān)節(jié)疾病，又稱退行性關(guān)節(jié)炎或老年性關(guān)節(jié)炎等。該疾病主要臨床表現(xiàn)有關(guān)節(jié)疼痛、壓痛、僵硬、關(guān)節(jié)腫脹、活動(dòng)受限、肌肉萎縮和關(guān)節(jié)畸形等[1]。女性在60 歲之后患OA 的幾率比男性高[2]；一些重復(fù)應(yīng)力性損傷，如工作中經(jīng)常需要蹲跪、提重物者，更容易發(fā)生關(guān)節(jié)不適，進(jìn)而罹患OA[3]。關(guān)節(jié)不適經(jīng)常發(fā)生于承重關(guān)節(jié)處，如膝蓋、臀部、脊柱、手指關(guān)節(jié)等，其中膝蓋為最易發(fā)生不適的部位，膝骨關(guān)節(jié)炎（knee osteoarthritis,KOA）的發(fā)病率遠(yuǎn)高于身體其他關(guān)節(jié)部位炎癥[4]。

在OA 的診斷標(biāo)準(zhǔn)中，除了癥狀和表現(xiàn)評(píng)估，還需要對(duì)關(guān)節(jié)進(jìn)行影像學(xué)檢測(cè)，即發(fā)現(xiàn)骨贅類結(jié)構(gòu)變化，才可確診。然而，OA 也是一種慢性疾病，預(yù)防和早期的綜合護(hù)理模式是目前公認(rèn)的規(guī)范。因此，選擇最可能被患者接受的干預(yù)措施，可開(kāi)啟個(gè)性化預(yù)防OA 的時(shí)代[5]。一般情況下，KOA 的治療目的是緩解疼痛和改善關(guān)節(jié)活動(dòng)功能[6]。目前治療KOA 的方法分為非藥物治療、藥物治療和手術(shù)治療三大類。非藥物治療包括對(duì)患者進(jìn)行心理教育，促進(jìn)運(yùn)動(dòng)、減肥和關(guān)節(jié)保護(hù)等；藥物治療包括使用非阿片類鎮(zhèn)痛藥、外用鎮(zhèn)痛藥、非甾醇類抗炎藥物、麻醉性鎮(zhèn)痛藥、關(guān)節(jié)內(nèi)注射甾醇和透明質(zhì)酸等；而手術(shù)治療包括關(guān)節(jié)清創(chuàng)、關(guān)節(jié)置換等。葡萄糖胺、硫酸軟骨素等作為營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，在不同臨床實(shí)驗(yàn)中已被證實(shí)能有效治療KOA，降低關(guān)節(jié)軟骨結(jié)構(gòu)損傷[7]。此外，目前已有文獻(xiàn)報(bào)道多種食品功能組分復(fù)合使用較活性組分單一使用可表現(xiàn)出更好的功能活性[8]。軟骨提取物是采用生物酶解技術(shù)從雞胸軟骨中提取出富含硫酸軟骨素和II 型膠原蛋白肽的復(fù)合物，將其與傳統(tǒng)認(rèn)為具有保護(hù)關(guān)節(jié)功效的姜黃、葛根和薏苡仁原料復(fù)配制成壓片糖果類的健康食品，經(jīng)過(guò)動(dòng)物功效試驗(yàn)證明其具有良好的改善骨關(guān)節(jié)炎作用。本研究將對(duì)該復(fù)方健康食品進(jìn)行臨床試食試驗(yàn)，系統(tǒng)考察其治療和預(yù)防OA，緩解關(guān)節(jié)不適，如疼痛、僵直、生理功能受限等癥狀的影響，并探索該健康食品背后的生理機(jī)制，以期為非藥物治療下健康食品預(yù)防和改善OA 提供理論基礎(chǔ)和方法指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 研究設(shè)計(jì)和受試樣品

本試驗(yàn)采取隨機(jī)、雙盲、安慰劑對(duì)照的設(shè)計(jì)方法，受試者為120 名有膝關(guān)節(jié)不適癥狀者或膝關(guān)節(jié)炎癥臨床癥狀者。試驗(yàn)設(shè)置安慰劑對(duì)照組（60 人）和試驗(yàn)組（60 人），試食周期為90 d。

受試樣品是由無(wú)限極（中國(guó)）有限公司提供的一種健康功能食品，是以軟骨提取物、姜黃、葛根粉、薏苡仁粉為主要組分，輔于包括異麥芽酮糖醇、硬脂酸鎂、羥丙基甲基纖維素、木糖醇、辛，癸酸甘油酯、L(+)-酒石酸、麥芽糊精和食用香精制成的壓片糖果。在配方中，軟骨提取物占比達(dá)33%，其中含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25%以上硫酸軟骨素、50%以上II 型膠原蛋白肽（羥脯氨酸含量達(dá)4%以上）和1%左右的透明質(zhì)酸。受試樣品壓片糖果的規(guī)格為0.75 克/片，每日推薦食用4 片。安慰劑在劑型、口感、外觀和包裝上與受試樣品相同，其中不含軟骨提取物、姜黃、葛根粉、薏苡仁粉為主要組分，僅含有異麥芽酮糖醇、硬脂酸鎂、羥丙基甲基纖維素、木糖醇、辛,癸酸甘油酯、L(+)-酒石酸、麥芽糊精、色素及食用香精等輔料。

1.2 研究對(duì)象

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)

按知情自愿原則，選擇符合納入標(biāo)準(zhǔn)者作為受試者參加臨床人體試食試驗(yàn)。該試驗(yàn)在咸陽(yáng)市中心醫(yī)院舉行，通過(guò)了人體試食試驗(yàn)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，批件批號(hào)XYSZXYY20201203。受試者年齡在18～75 歲之間，30 d以上未接受非甾體類抗炎藥、COX-2 特異性抑制劑和激素治療，參照美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)2001 年制定的膝骨關(guān)節(jié)炎臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)X 射線檢查膝關(guān)節(jié)Kellgren/Lawrence評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為0 級(jí)～I(xiàn)II 級(jí)，簽署知情同意書(shū)。試食期間保持平日的生活和飲食習(xí)慣，空腹取血測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)

年齡在18 歲以下或75 歲以上者；妊娠或哺乳期婦女；合并有心、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病，精神病患者，有其他伴隨疾病正在治療者；短期內(nèi)服用與受試功能有關(guān)的物品，影響到對(duì)結(jié)果的判斷者；主訴不清者，體質(zhì)虛弱無(wú)法進(jìn)行試驗(yàn)者，不能按規(guī)定使用受試樣品者；不符合納入標(biāo)準(zhǔn)，未按規(guī)定食用受試樣品，無(wú)法判定功效或資料不全影響功效或安全性判斷者。

1.3 試驗(yàn)分組與干預(yù)

采用自身和組間兩種對(duì)照設(shè)計(jì)，根據(jù)隨機(jī)盲法的要求，將120 例受試者隨機(jī)分為試食組和對(duì)照組，盡可能考慮影響結(jié)果的主要因素（如病程等）進(jìn)行均衡性檢驗(yàn)，以保證組間的可比性。每組受試者60 例。試食組服用受試樣品，對(duì)照組服用安慰劑，試食周期為90 d。

要求受試者在受試期間保持平時(shí)的生活和飲食習(xí)慣，試食組每日服健康食品壓片糖果4 片，每4 片中軟骨提取物含量為1 000 mg，連續(xù)服用90 d。對(duì)照組服用安慰劑，每日4 片，連續(xù)服用90 d。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 安全性指標(biāo)

一般狀況包括精神、睡眠、飲食、大小便、血壓等，血、尿、便常規(guī)檢查，肝、腎功能檢查，胸片、心電圖和腹部B 超檢查。

1.4.2 功效觀察性指標(biāo)

1）KOA 放射學(xué)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

采用Kellgren-Lawrence 分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。于試食前和試食后各進(jìn)行一次經(jīng)X 射線檢查和分級(jí)評(píng)定：0 級(jí)-為正常；I 級(jí)-關(guān)節(jié)間隙可疑變窄，可能有骨贅；Ⅱ級(jí)-有明顯的骨贅，關(guān)節(jié)間隙可疑變窄；Ⅲ級(jí)-中等量骨贅，關(guān)節(jié)間隙變窄較明確，有硬化性改變；Ⅳ級(jí)-大量骨贅，關(guān)節(jié)間隙明顯變窄，嚴(yán)重硬化性病變及明顯畸形。

2）視覺(jué)模擬評(píng)分法（visual analogue scale,VAS）

長(zhǎng)10 cm 的一條線，定某一點(diǎn)得1～10 中的某一分。

疼痛指數(shù)填寫(xiě)，患者參考以下說(shuō)明，在數(shù)字下打勾，并于疼痛指數(shù)后橫線上填寫(xiě)相對(duì)應(yīng)的數(shù)字。0 代表無(wú)痛，1 代表剛能察覺(jué)到的輕微不適，10 代表無(wú)法忍受的劇烈疼痛。1～3 為輕微疼痛，表情自然；4～6 為中度疼痛，表現(xiàn)為皺眉，輕聲呻吟；7～10 為重度疼痛，痛苦面容，面色蒼白，出冷汗，大聲呻吟等。以上疼痛指數(shù)于試食前，試食后第14 天、28 天、60 天、90 天各觀察記錄一次。

3）WOMAC 量表積分

WOMAC 量表于試食前和試食后各進(jìn)行一次評(píng)定，如表1 所示。

表1 WOMAC 量表積分Table 1 WOMAC Index

4）臨床癥狀積分評(píng)價(jià)（參考《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》2002 版）

①關(guān)節(jié)疼痛程度：0 分-關(guān)節(jié)無(wú)疼痛；2 分-疼痛輕，能忍受，或僅勞累或天氣變化時(shí)疼痛，基本不影響工作；4 分-疼痛較重，工作和休息受到影響；6 分-疼痛嚴(yán)重，難以忍受，嚴(yán)重影響休息和工作，需配合使用止痛藥。

②關(guān)節(jié)壓痛程度：0 分-關(guān)節(jié)無(wú)壓痛；2 分-關(guān)節(jié)輕度壓痛，病人稱有痛；4 分-關(guān)節(jié)中度壓痛，病人尚能忍受，有皺眉不適等表現(xiàn)；6 分-關(guān)節(jié)重度壓痛，痛不可觸，擠壓關(guān)節(jié)時(shí)病人很痛，將手或肢體抽回。

③晨僵時(shí)間：0 分-無(wú)晨僵；2 分-晨僵時(shí)間＜60 min；4 分-晨僵時(shí)間≥60 min，＜120 min；6 分-晨僵時(shí)間≥120 min。

④關(guān)節(jié)屈伸不利：0 分-關(guān)節(jié)活動(dòng)不受限；2 分-膝關(guān)節(jié)屈曲，活動(dòng)輕度受限；4 分-膝關(guān)節(jié)屈曲，活動(dòng)明顯受限；6 分-膝關(guān)節(jié)屈曲活動(dòng)嚴(yán)重受限，行走困難。

⑤關(guān)節(jié)腫脹：0 分-無(wú)；2 分-關(guān)節(jié)輕度腫、皮膚紋理變淺，關(guān)節(jié)的骨標(biāo)志仍明顯；4 分-關(guān)節(jié)中度腫、關(guān)節(jié)腫脹明顯，皮膚紋理基本消失，骨標(biāo)志不明顯；6 分-關(guān)節(jié)重度腫脹、關(guān)節(jié)腫脹明顯、皮膚緊、骨標(biāo)志消失。

臨床癥狀積分于試食前和試食后各進(jìn)行一次評(píng)價(jià)。

5）生化指標(biāo)

ELISA 試劑盒檢測(cè)血清白細(xì)胞介素-6（interleukin-6,IL-6）和超敏C 反應(yīng)蛋白（hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP）的表達(dá)水平于試驗(yàn)前和試驗(yàn)后各進(jìn)行一次檢測(cè)。

1.4.3 功效性評(píng)定及試驗(yàn)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

1）視覺(jué)模擬評(píng)分法（VAS）

采用VAS 評(píng)分，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)值表示。

2）WOMAC 量表積分

采用WOMAC 量表積分，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)值表示。

3）臨床癥狀療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)

采用尼莫地平方法：療效=（（治療前積分－治療后積分）/ 治療前積分）×100%，以百分?jǐn)?shù)表示：①痊愈：臨床癥狀消失或基本消失，積分減少≥95%；②顯效：臨床癥狀明顯改善，積分減少≥70%；③有效：臨床癥狀均有好轉(zhuǎn)，積分減少≥30%；④無(wú)效：臨床癥狀無(wú)明顯改善，甚或加重，積分減少＜30%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

凡自身對(duì)照資料可以采用配對(duì)t檢驗(yàn)，兩組均數(shù)比較采用成組t檢驗(yàn)，后者需進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，對(duì)非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)方差后，用轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)。有效率采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行檢驗(yàn)。

1.6 結(jié)果判定依據(jù)

試驗(yàn)組試食前后自身比較及與對(duì)照組組間比較，原有部位疼痛明顯減輕，VAS 評(píng)分平均下降2 分及以上且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；WOMAC 量表積分試驗(yàn)組試食前后自身比較及與對(duì)照組組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；試驗(yàn)組試食前后自身比較及與對(duì)照組組間比較，總有效率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

1.7 倫理學(xué)要求

整個(gè)研究均符合赫爾辛基宣言及中國(guó)臨床試驗(yàn)研究法規(guī)，所有受試者均簽署知情同意書(shū)。該研究已通過(guò)咸陽(yáng)市中心醫(yī)院倫理委員會(huì)倫理評(píng)審，同意開(kāi)展臨床人體試食試驗(yàn)研究，獲得倫理批件，批件編號(hào)為XYSZXYY 20201203。

2 結(jié)果與分析

2.1 均衡性比較結(jié)果

納入受試者120 例，試驗(yàn)組60 例，對(duì)照組60 例，試驗(yàn)結(jié)束后試食組、對(duì)照組各有1 人脫離試驗(yàn)，脫落率為1.67%，兩組有效例數(shù)分別為59 例和59 例。試食前對(duì)受試者進(jìn)行問(wèn)詢及檢查，試食組和對(duì)照組的一般資料比較差異無(wú)顯著性（P＞0.05），具有均衡可比性，見(jiàn)表2。

表2 試食前試食組和對(duì)照組基本資料比較Table 2 Comparison of the general information for both test and control group before eating

2.2 安全性指標(biāo)分析結(jié)果

2.2.1 樣品對(duì)一般狀況體征的影響

試食期間，兩組受試人群一般癥狀體征均未見(jiàn)異常，表明該樣品對(duì)受試者的一般狀況體征無(wú)不良影響。

2.2.2 血常規(guī)檢查

受試者試食前后白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板檢測(cè)結(jié)果差異均無(wú)顯著性（P＞0.05），見(jiàn)表3。

表3 試食前后試食組和對(duì)照組血常規(guī)檢查結(jié)果分析Table 3 Analysis of routine blood test results for both test and control group before and after eating

2.2.3 肝腎功能及血液生化指標(biāo)檢查

受試者試食前后肝腎功能及血液生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果均未見(jiàn)明顯變化（P＞0.05），見(jiàn)表4。

表4 試食前后試食組和對(duì)照組肝腎功能及血液生化指標(biāo)檢查結(jié)果分析Table 4 Analysis of liver kidney function and blood biochemical indexes results for both test and control group before and after eating

2.2.4 試食前后兩組受試者血壓分析

受試者試食前后兩組受試者的血壓檢查結(jié)果均未見(jiàn)明顯變化（P＞0.05），見(jiàn)表5。

表5 兩組受試者血壓檢查結(jié)果分析Table 5 Analysis of blood pressure for both test results and control group before and after eating

2.2.5 試食前后尿常規(guī)、大便常規(guī)變化情況

所有受試者試食前后尿常規(guī)、大便常規(guī)檢查均未見(jiàn)明顯異常。

2.2.6 胸片、心電圖、腹部B 超

胸片、心電圖、腹部B 超檢查均未見(jiàn)明顯異常。

2.2.7 不良反應(yīng)記錄

試食期間，受試者未見(jiàn)不良反應(yīng)或過(guò)敏反應(yīng)等癥狀。

2.3 功效指標(biāo)分析結(jié)果

2.3.1 視覺(jué)模擬評(píng)分法（VAS）

試食前疼痛指數(shù)兩組間差異無(wú)顯著性（P＞0.05）；試食組試食后第14 天、第28 天疼痛指數(shù)與試食前自身比較無(wú)顯著性（P＞0.05），第60 天、第90 天疼痛指數(shù)與試食前自身比較差異有顯著性（P＜0.05）；試食組試食后第14 天、第28 天、第60 天疼痛指數(shù)與對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性（P＞0.05），試食組試食后第90 天疼痛指數(shù)與對(duì)照組比較差異有顯著性（P＜0.01），試食后試食組疼痛指數(shù)下降的值為2.13，與對(duì)照組比較差異有顯著性（P＜0.01），見(jiàn)表6。

表6 試食前與90 d 疼痛指數(shù)比較Table 6 Comparison of pain index for both test and control group before eating and day 90

2.3.2 WOMAC 量表積分

試食前WOMAC 量表各評(píng)分項(xiàng)目積分及總積分兩組間差異均無(wú)顯著性（P＞ 0.05）；試食組試食前后WOMAC量表疼痛、關(guān)節(jié)僵硬、生理功能及總積分自身比較差異有顯著性（P＜ 0.01）。

試食后試食組WOMAC 量表疼痛、關(guān)節(jié)僵硬、生理功能及總積分與對(duì)照組比較差異有顯著性（P＜ 0.01），試食后試食組WOMAC 量表積分與試食前比較下降的值為11.11，與對(duì)照組比較差異有顯著性（P＜ 0.01），見(jiàn)表7。

表7 試食前后試食組與對(duì)照組WOMAC 量表積分比較Table 7 Comparison of WOMAC scale score for both test and control group before and after eating

2.3.3 臨床癥狀積分

試食前各臨床癥狀積分及總積分和兩組間差異均無(wú)顯著性（P＞ 0.05）；試食組試食前后各臨床癥狀積分及總積分自身比較差異有顯著性（P＜ 0.01），試食后試食組關(guān)節(jié)疼痛、關(guān)節(jié)壓痛、晨僵時(shí)間、關(guān)節(jié)腫脹積分及臨床癥狀總積分與對(duì)照組比較差異有顯著性（P＜ 0.01），試食后試食組臨床癥狀總分與試食前比較下降值為4.84，與對(duì)照組比較差異有顯著性（P＜ 0.01），試食后試食組臨床癥狀總分下降率為31.74%，與對(duì)照組比較差異有顯著性（P＜ 0.01），見(jiàn)表8。

表8 試食前后試食組與對(duì)照組臨床癥狀積分比較Table 8 Comparison of clinical symptom score results for both test and control group before and after eating

2.3.4 臨床癥狀改善率

試食組臨床癥狀總積分有效率為61.02%，與對(duì)照組比較差異有顯著性（P＜ 0.01），見(jiàn)表9。

表9 試食組與對(duì)照組各臨床癥候總積分改善率比較Table 9 Comparison of the clinical symptom scores improvement rate between test and control group

2.3.5 IL-6 及hs-CRP 指標(biāo)檢查

由表10 可知，受試者試食前試食組和對(duì)照組的臨床IL-6 指標(biāo)未見(jiàn)顯著性差異（P＞ 0.05）；試食前后僅有試食組的IL-6 指標(biāo)含量自身比較表現(xiàn)出顯著性差異（P＜ 0.05），但與對(duì)照組比較未見(jiàn)顯著差異（P＞ 0.05）。白細(xì)胞介素-6（interleukin-6,IL-6）和超敏C 反應(yīng)蛋白（hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP）試食組受試者試食后hs-CRP指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果與試食前相比有降低趨勢(shì)，但自身比較及與對(duì)照組組間比較均未見(jiàn)顯著差異（P＞ 0.05），見(jiàn)表10。

表10 受試者試食前后白細(xì)胞介素6、超敏C 反應(yīng)蛋白指標(biāo)檢查結(jié)果分析Table 10 Analysis of IL-6 (interleukin-6),hs-CRP (hypersensitive C-reactive protein)results for both test and control group before and after eating

3 討論

骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率隨著人們年齡增加不斷增高，目前常用的診斷方法包括影像學(xué)改變和癥狀表現(xiàn)，然而，骨關(guān)節(jié)炎影像學(xué)上發(fā)生改變往往比癥狀出現(xiàn)要遲，當(dāng)患者出現(xiàn)影像學(xué)改變時(shí)，關(guān)節(jié)的正常功能以及患者的生活質(zhì)量已經(jīng)受到嚴(yán)重影響，因此有必要搜尋或建立一種可早期診斷骨關(guān)節(jié)炎發(fā)生的快速有效方法。隨著對(duì)骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)血液中某些生化指標(biāo)的改變可以反映出關(guān)節(jié)內(nèi)微環(huán)境的變化，從而可以應(yīng)用到骨關(guān)節(jié)炎的療效評(píng)價(jià)和早期診斷[9]。其中血清中炎癥指標(biāo)IL-6 是參與KOA 發(fā)病的重要細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)，參與了滑膜炎癥反應(yīng)的發(fā)展和軟骨基質(zhì)的破壞。IL-6 主要是由T 淋巴細(xì)胞分泌的炎癥因子，會(huì)抑制關(guān)節(jié)軟骨糖蛋白的合成，加快軟骨細(xì)胞和基質(zhì)微分子的降解，加重軟骨的損傷，參與了骨性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病進(jìn)程。成骨細(xì)胞分泌IL-6 會(huì)刺激破骨細(xì)胞形成，IL-6 在KOA 患者中成骨細(xì)胞的表達(dá)明顯升高，且在重度軟骨損傷患者中的表達(dá)明顯高于輕度軟骨損傷患者。在關(guān)節(jié)炎飲食運(yùn)動(dòng)推廣實(shí)驗(yàn)（arthritis diet and activity promotion trial，ADAPT）中發(fā)現(xiàn)，體重的減輕也可以起到改善OA 的效果[10]。且已有研究表明人體具有較高的身體質(zhì)量指數(shù)（body mass index,BMI）和IL-6 系統(tǒng)水平，會(huì)極大增加其罹患骨關(guān)節(jié)炎的可能性。目前許多治療策略的研究主要圍繞著IL-6 的阻斷而展開(kāi)，包括降低肌肉疼痛閾值，緩解局部疼痛等。試驗(yàn)中，試食組前后自身對(duì)照顯示，受試樣品能夠顯著降低血清IL-6 的水平（P＜ 0.05），對(duì)系統(tǒng)性微炎癥表現(xiàn)出調(diào)節(jié)作用，并能明顯緩解KOA 的相關(guān)癥狀。

關(guān)節(jié)主要由關(guān)節(jié)軟骨、滑液及滑膜等組成，其中關(guān)節(jié)軟骨尤為重要，其結(jié)構(gòu)也極具特色。關(guān)節(jié)軟骨是由軟骨細(xì)胞及軟骨基質(zhì)組成，其中基質(zhì)主要由水、膠原蛋白、蛋白多糖組成，這種組成和結(jié)構(gòu)能吸收和維持多達(dá)自身幾倍的水分，不僅潤(rùn)滑營(yíng)養(yǎng)軟骨，還可增加關(guān)節(jié)軟骨的彈性。而軟骨中軟骨細(xì)胞可維持基質(zhì)在精細(xì)調(diào)整的轉(zhuǎn)換過(guò)程中保持合成和分解平衡。但骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生會(huì)導(dǎo)致該平衡失調(diào)從而引發(fā)軟骨退化，軟骨一旦喪失將難以再生，失去軟骨的保護(hù)，走路時(shí)骨頭間發(fā)生摩擦，則會(huì)產(chǎn)生劇烈疼痛感，正所謂“痛在關(guān)節(jié)，根在軟骨”。本試驗(yàn)受試樣品中含有高含量的軟骨提取物（33%），該組分含有25%以上的硫酸軟骨素和1%左右的透明質(zhì)酸，并將其內(nèi)II 型膠原蛋白降解為具有生理活性的膠原蛋白肽。硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸和膠原蛋白肽不僅具有修復(fù)及潤(rùn)滑關(guān)節(jié)的作用，硫酸軟骨素對(duì)KOA 還具有緩解疼痛的作用[11]，且膠原蛋白肽還可以直接在軟骨中積累，起到調(diào)節(jié)軟骨細(xì)胞的分化，刺激蛋白多糖的合成，啟動(dòng)軟骨組織修復(fù)過(guò)程的作用。此外，姜黃在KOA 的治療和預(yù)防中也表現(xiàn)出良好的功效，隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)薈萃分析（Meta-analysis）顯示姜黃在降低循環(huán)中IL-6 水平方面具有顯著作用[12]；機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)姜黃可以阻斷TLR4/NFκB 信號(hào)通路，降低炎癥水平[13]；臨床功效研究發(fā)現(xiàn)高生物活性的姜黃可以在8 周內(nèi)改善KOA，而且療效與雙氯芬酸相似，并表現(xiàn)出更好的耐受性[14]，且有研究發(fā)現(xiàn)姜黃外用也具有改善老年KOA 患者生活質(zhì)量的功效[15]。葛根的軟骨保護(hù)作用明顯[16]，尤其是對(duì)更年期女性的軟骨健康有良好的促進(jìn)作用[17]，同時(shí)葛根中葛根醇和葛根苷衍生物具有良好的抗炎活性，可以有效調(diào)節(jié)IL-6 和IL-1β 的表達(dá)[18]。薏苡仁通過(guò)抑制促炎因子和降低氧化應(yīng)激來(lái)發(fā)揮抗關(guān)節(jié)炎的作用，采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對(duì)薏苡仁湯（主治手足麻痹不仁、難以屈伸）治療膝骨關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制進(jìn)行深入研究，發(fā)現(xiàn)其主要通過(guò)調(diào)節(jié)IL-17 信號(hào)通路來(lái)減少滑膜細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞中IL-6 分泌[19]。此外，薏苡仁還可能通過(guò)抑制COX-2 和CHI3L mRNA 表達(dá)、增加CAT 和GPx-1 mRNA 表達(dá)來(lái)發(fā)揮抗炎作用[20]。

本試驗(yàn)針對(duì)一種由軟骨提取物、姜黃、薏苡仁和葛根為主要原料制成的健康食品，結(jié)果明顯支持其在緩解KOA 方面的療效，所有評(píng)估的療效措施，包括VAS、WOMAC 和臨床癥狀評(píng)分均表現(xiàn)出顯著的改善效果。疼痛是KOA 的主要表現(xiàn)之一，也是對(duì)患者影響最大的臨床癥狀。關(guān)節(jié)內(nèi)環(huán)境變化引起的骨關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)改變，是引發(fā)疼痛的主要因素[21]。張可可等人認(rèn)為疼痛主要源自滑膜炎，針對(duì)炎癥的治療可以顯著改善疼痛[22]。SZEBENYI等通過(guò)影像學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，與疼痛最密切的個(gè)體特征是軟骨下骨硬化[23]。此外，中樞神經(jīng)敏感化也是KOA 重要表現(xiàn)之一[24]。試驗(yàn)前受試者的VAS 評(píng)分平均為4.42，屬于中度疼痛（VAS=4～6）水平[25]，服用受試樣品90 d 后，VAS 平均分下降至2.29，屬于輕度疼痛（VAS=1～3）水平，改善率達(dá)到48%。

在WOMAC 量表和臨床癥狀評(píng)分中“疼痛”項(xiàng)目評(píng)分方面，試食后比試食前均有顯著的降低（P＜ 0.01），改善率分別為22%和46%說(shuō)明受試物對(duì)疼痛的緩解作用最為顯著。關(guān)節(jié)僵硬是診斷OA 的臨床指標(biāo)之一，也是區(qū)分OA 和其他關(guān)節(jié)炎的重要指標(biāo)[26]。僵硬可能是機(jī)體改善膝關(guān)節(jié)穩(wěn)定性的一種代償性自我保護(hù)機(jī)制，尤其是行進(jìn)間的僵硬步態(tài)[27]，但這種持續(xù)的關(guān)節(jié)壓力也會(huì)加劇軟骨損傷，從而惡化OA 的進(jìn)程[28]。膝關(guān)節(jié)僵硬與骨贅風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生率的顯著增加相關(guān)[29]，也與老年人跌倒風(fēng)險(xiǎn)因子的預(yù)測(cè)相關(guān)[30]。膝關(guān)節(jié)的僵硬程度通常用WOMAC指數(shù)來(lái)量化，僵硬被定義為關(guān)節(jié)移動(dòng)的困難或緩慢[31]。試食組僵硬評(píng)分和晨僵時(shí)間比試驗(yàn)前均顯著減少，與安慰劑相比也表現(xiàn)出明顯差異。表明試食組生理功能得到了顯著改善，平均評(píng)分由試食前34.66±5.71 下降到試食后26.93±5.08，與安慰劑組相比也呈現(xiàn)顯著差異。本試驗(yàn)中所有受試者中沒(méi)有出現(xiàn)不良反應(yīng)，表明對(duì)受試樣品的耐受性良好。除了硫酸軟骨素類成分和植物提取物成分，近年來(lái)，在食品和保健品領(lǐng)域，具有預(yù)防和改善骨關(guān)節(jié)炎作用的原料研究還有很多。如抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸可以有效抑制軟骨細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）13 的表達(dá)和II 型膠原的下調(diào)，并抑制軟骨細(xì)胞的凋亡[32]；ω-3 多不飽和脂肪酸（polyunsaturated fatty acids,PUFAs）也具有良好的抗炎效果[33]，一項(xiàng)長(zhǎng)達(dá)6 個(gè)月的臨床觀察試驗(yàn)證明，新資源食品原料磷蝦油具有良好的安全性和改善輕中度KOA 患者疼痛、僵硬和運(yùn)動(dòng)功能的作用[34]，PUFAs 中代表成分—二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）[35]；膠原蛋白的治療結(jié)果也令人滿意，隨機(jī)安慰劑對(duì)照試驗(yàn)薈萃分析顯示口服膠原蛋白可降低WOMAC 指數(shù)總分和VAS 評(píng)分起到較好改善OA 癥狀的功效[36]，口服低分子量膠原蛋白肽也可以改善OA 的進(jìn)展，降低滑液中IL-1β 和IL-6 的水平，下調(diào)MMP-13 的表達(dá)[37]；蜂王漿及其特有的脂肪酸10-羥基-2-癸烯酸均可體外抑制軟骨細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix,ECM）的降解，防止膝關(guān)節(jié)術(shù)后誘導(dǎo)OA 的發(fā)生[38]；鼠李糖乳桿菌在改善腸道損傷和炎癥的同時(shí)，還可以降低OA 大鼠疼痛和軟骨破壞的程度[39]，臨床試驗(yàn)更是證明了嗜熱鏈球菌可以延緩KOA 的進(jìn)程和發(fā)展[40]。由本試驗(yàn)結(jié)果（表10）可知試食樣品（壓片糖果）能降低體內(nèi)的IL-6 含量，從而起到顯著的改善膝骨關(guān)節(jié)炎，這可能是試食樣品中各功效成分單獨(dú)或復(fù)配使用通過(guò)調(diào)節(jié)人體內(nèi)IL-6 表達(dá)使得最終的壓片糖果呈現(xiàn)出明顯的降低體內(nèi)IL-6 水平的效果。綜上研究成果可為食品保健領(lǐng)域開(kāi)發(fā)骨關(guān)節(jié)炎防治產(chǎn)品工作奠定良好的技術(shù)基礎(chǔ)。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)通過(guò)臨床試食試驗(yàn)，證明了由軟骨提取物、姜黃、葛根和薏苡仁等組成的壓片糖果具有明顯改善膝骨關(guān)節(jié)炎的療效，能夠緩解膝關(guān)節(jié)疼痛和腫脹、改善膝關(guān)節(jié)功能和活動(dòng)度，能較好控制膝骨關(guān)節(jié)炎（knee osteoarthritis，KOA）的病情，通過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)以上壓片糖果的保護(hù)關(guān)節(jié)作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)炎癥因子白細(xì)胞介素6（Interleukin-6,IL-6）有關(guān)，且試驗(yàn)證明其具有較高的安全性。可見(jiàn)本試驗(yàn)的壓片糖果是一種有效改善KOA癥狀的健康食品。但本試驗(yàn)還存在一定的局限性，例如對(duì)于肥胖受試者（身體質(zhì)量指數(shù)＞28 kg/m2）和絕經(jīng)后女性的納入未進(jìn)行具體分組分析，未來(lái)對(duì)于這類KOA易感人群可以進(jìn)行更加系統(tǒng)全面的臨床功效試驗(yàn)；此外本試驗(yàn)中只設(shè)置了安慰劑組對(duì)照，未設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照組，未來(lái)還需要與營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑、如硫酸軟骨素或多不飽和脂肪酸等產(chǎn)品進(jìn)行功效對(duì)比試驗(yàn)。