［摘要］目的探究血清miR-27a-3p與miR-141-3p在老年高血壓性腦出血患者中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系。方法選取山東省立第三醫(yī)院2020年4月～2021年9月收治的124例老年高血壓性腦出血患者作為觀察組，按照格拉斯哥昏迷（GCS）評分將患者分為輕度組（GCS13～14分，55例）、中度組（GCS9～12分，46例）及重度組（GCS3～8分，23例），根據(jù)出院后3個月的格拉斯哥預(yù)后（GOS）評分將觀察組分為預(yù)后良好組（GOS＞4分，65例）和預(yù)后不良組（GOS≤4分，59例）。另選取同期在本院接受體檢的55例健康志愿者作為對照組。對比觀察組與對照組的miR-27a-3p、miR-141-3p、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、白細(xì)胞介素1β（IL-1β）水平。采用Pearson相關(guān)系數(shù)分析miR-27a-3p、miR-141-3p與TNF-α、VEGF、IL-1β之間的相關(guān)性；采用logistic多因素回歸分析影響老年高血壓性腦出血患者預(yù)后的不良因素。結(jié)果觀察組miR-27a-3p、miR-141-3p水平低于對照組，TNF-α、VEGF及IL-1β水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；重度組miR-27a-3p、miR-141-3p水平低于輕度組和中度組（P＜0.05），TNF-α、VEGF及IL-1β水平高于輕度組和中度組（P＜0.05）；中度組miR-27a-3p、miR-141-3p水平低于輕度組，TNF-α、VEGF及IL-1β高于輕度組（P＜0.05）；觀察組miR-27a-3p與miR-141-3p呈正相關(guān)（P＜0.05），miR-27a-3p與TNF-α、VEGF及IL-1β呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），miR-141-3p與TNF-α、VEGF及IL-1β呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）；logistic回歸分析顯示，小腦及腦干出血是影響老年高血壓性腦出血患者預(yù)后的獨(dú)立危險因素（P＜0.05），miR-27a-3p＞0.165、miR-141-3p＞1.035是老年高血壓性腦出血患者預(yù)后的保護(hù)性因素（P＜0.05）。結(jié)論血清miR-27a-3p與miR-141-3p在老年高血壓性腦出血患者中的水平較低，對患者病情判斷以及預(yù)后評估具有重要的臨床意義。

［關(guān)鍵詞］miR-27a-3p；miR-141-3p；高血壓性腦出血；預(yù)后

doi：10.3969/j.issn.1674-7593.2023.04.004

LevelsofSerumMiR-27a-3pandMiR-141-3pinPatientswithHypertensiveIntracerebralHemorrhageandTheirRelationshipwithPrognosis

LiuXiaoyu，LvYongtao，ZhaoXiumin，F(xiàn)engXiaoya，LiuLei，ZhuBaike，ZhangJun

DepartmentofNeurology，ShandongProvincialThirdHospital，Jinan250031

［Abstract］ObjectiveToinvestigatethelevelsofserummiR-27a-3pandmiR-141-3pinolderpatientswithhypertensiveintracerebralhemorrhageandtheirrelationshipwithprognosis.MethodsAtotalof124olderpatientswithhypertensiveintracerebralhemorrhageadmittedtoShandongProvincialThirdHospitalfromApril2020toSeptember2021wereselectedastheobservationgroup.AccordingtotheGlasgowComaScale（GCS）score，thepatientsintheobservationgroupweredividedintoamildgroup（GCS13-14points，55cases），moderategroup（GCS9-12points，46cases），andseveregroup（GCS3-8points，23cases）.At3monthsafterdischarge，thepatientsintheobservationgroupweredividedintoagoodprognosisgroup（GOSgt;4points，65cases）andapoorprognosisgroup（GOS≤4points，59cases）basedontheGlasgowOutcomeScale（GOS）score.Another55healthyvolunteerswhounderwentphysicalexaminationsinthehospitalduringthesameperiodwereselectedasthecontrolgroup.ThelevelsofmiR-27a-3p，miR-141-3p，tumornecrosisfactor-α（TNF-α），vascularendothelialgrowthfactor（VEGF），andinterleukin-1β（IL-1β）werecomparedbetweentheobservationgroupandthecontrolgroup.PearsoncorrelationcoefficientanalysiswasperformedtoassessthecorrelationofmiR-27a-3pandmiR-141-3pwithTNF-α，VEGFandIL-1β.Multivariatelogisticregressionwasusedtoanalyzetheriskfactorsforprognosisinelderlywithhypertensiveintracerebralhemorrhage.ResultsComparedwiththecontrolgroup，theobservationgrouphadlowerlevelsofmiR-27a-3pandmiR-141-3p，andhigherlevelsofTNF-α，VEGFandIL-1β，thedifferenceswerestatisticallysignificant（Plt;0.05）.Comparedwiththemildgroupandmoderategroup，theseveregrouphadlowerlevelsofmiR-27a-3pandmiR-141-3p（Plt;0.05），higherlevelsofTNF-α，VEGFandIL-1β（Plt;0.05）.Comparedwiththemildgroup，themoderategrouphadlowerlevelsofmiR-27a-3pandmiR-141-3p，higherlevelsofTNF-α，VEGFandIL-1β（Plt;0.05）.Intheobservationgroup，therewasapositivecorrelationbetweenmiR-27a-3pandmiR-141-3p（Plt;0.05）.MiR-27a-3pwasnegativelycorrelatedwithTNF-α，VEGF，andIL-1β（Plt;0.05）.MiR-141-3pwasnegativelycorrelatedwithTNF-α，VEGFandIL-1β（Plt;0.05）.Logisticregressionanalysisshowedthatcerebellarandbrainstemhemorrhagewereindependentriskfactorsforprognosisinolderpatientswithhypertensiveintracerebralhemorrhage（Plt;0.05），whilemiR-27a-3pgt;0.165andmiR-141-3pgt;1.035wereprotectivefactorsforprognosis（Plt;0.05）.ConclusionThelevelsofserummiR-27a-3pandmiR-141-3parerelativelylowinolderpatientswithhypertensiveintracerebralhemorrhage，whichhaveimportantclinicalsignificancefortheevaluationofpatientconditionandprognosis.

［Keywords］MiR-27a-3p；MiR-141-3p；Hypertensiveintracerebralhemorrhage；Prognosis

臨床資料顯示，高血壓被認(rèn)為是誘發(fā)腦出血的一個主要危險因素［1］。高血壓性腦出血在進(jìn)展期間可誘發(fā)腦損傷，包括原發(fā)性腦損傷及繼發(fā)性腦損傷兩類，加重了神經(jīng)功能損傷［2］。引起腦出血后繼發(fā)性腦損傷的作用機(jī)制較為復(fù)雜，其中就包括了血腫周圍組織的炎癥反應(yīng)［3］。有研究資料顯示，微小核糖核酸（miRNA）參與了神經(jīng)元功能的調(diào)節(jié)，且與腦出血后神經(jīng)行為障礙以及神經(jīng)炎癥密切相關(guān)［4］。在腦出血大鼠模型中，通過增加血清miR-27a-3p與miR-141-3p等微小RNA的表達(dá)不僅可減輕對腦組織所造成的病理性損害，同時還可對星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化產(chǎn)生抑制作用，對腦組織甚至可起到一定的保護(hù)效果［5-6］。由此也說明了兩者可能與高血壓性腦出血患者的預(yù)后具有一定的關(guān)系。本研究就血清miR-27a-3p與miR-141-3p在老年高血壓性腦出血患者中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系進(jìn)行分析，旨在為該病預(yù)后判斷提供合理的依據(jù)。

1對象與方法

1.1研究對象

選取山東省立第三醫(yī)院2020年4月～2021年9月收治的124例老年高血壓性腦出血患者作為觀察組，根據(jù)格拉斯哥昏迷（Glasgowcomascale，GCS）評分將患者分為輕度組（GCS13～14分，55例）、中度組（GCS9～12分，46例）及重度組（GCS3～8分，23例），根據(jù)出院后3個月的格拉斯哥預(yù)后（Glasgowoutcomescale，GOS）評分將觀察組分為預(yù)后良好組（GOS＞4分，65例）和預(yù)后不良組（GOS≤4分，59例）。另選取同期在本院接受體檢的55例健康志愿者作為對照組。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)審核。納入標(biāo)準(zhǔn)：①觀察組符合《高血壓性腦出血中國多學(xué)科診治指南》中診斷標(biāo)準(zhǔn)［7］。經(jīng)影像學(xué)檢查后確診的首次發(fā)病者，入院時間＜2h，住院時間＞72h；對照組行身體檢查各項指標(biāo)正常者。②年齡60～70歲。③自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①因外傷原因、腦血管結(jié)構(gòu)異常、煙霧病或者顱內(nèi)腫瘤等原因所導(dǎo)致的腦出血者。②合并重要臟器損傷或者功能障礙者。③合并自身免疫系統(tǒng)疾病、良惡性腫瘤疾病者。④已經(jīng)形成腦疝且處于晚期者，或死亡者。

1.2方法

受試者入院后空腹?fàn)顟B(tài)下抽取外周靜脈血4mL，室溫下靜置30～60min后進(jìn)行離心處理，2000r/min離心10min，提取血清。取250μL血清，按照Trizol說明書提取miR-27a-3p、miR-141-3p，按照One-StepgDNARemoval說明對miR-27a-3p、miR-141-3p水平進(jìn)行檢測，以基因U6為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt的方法進(jìn)行定量分析。

受試者入院后空腹?fàn)顟B(tài)下抽取靜脈血放置在EDTA抗凝管中，以3000r/min的離心速度離心10min，離心沉淀細(xì)胞后，提取上層清液采用酶聯(lián)免疫吸附法對腫瘤壞死因子α（Tumornecrosisfactor-α，TNF-α）、血管內(nèi)皮生長因子（Vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）、白細(xì)胞介素1β（Interleukin-1β，IL-1β）進(jìn)行測量。

收集觀察組老年高血壓性腦出血患者的性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)、吸煙史、飲酒史、合并癥、腦出血部位、腦血腫量、GCS評分、GOS評分、治療手段、血壓、血脂、空腹血糖等臨床資料。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS23.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計量資料以±s表示，采取t檢驗、單因素方差分析、采用LSD-t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)系數(shù)檢驗，診斷價值采用ROC曲線分析，預(yù)后影響因素采用多因素logistic回歸分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組miR-27a-3p、miR-141-3p、TNF-α、VEGF及IL-1β水平比較

觀察組miR-27a-3p、miR-141-3p水平低于對照組，TNF-α、VEGF及IL-1β水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

2.2輕度、中度及重度組miR-27a-3p、miR-141-3p、TNF-α、VEGF及IL-1β水平比較

各組miR-27a-3p、miR-141-3p、TNF-α、VEGF及IL-1β比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。重度組血清miR-27a-3p、miR-141-3p水平低于輕度組和中度組（P＜0.05），TNF-α、VEGF及IL-1β水平高于輕度組和中度組（P＜0.05）；中度組血清miR-27a-3p、miR-141-3p水平低于輕度組，TNF-α、VEGF及IL-1β高于輕度組（P＜0.05），見表2。

2.3觀察組miR-27a-3p、miR-141-3p與TNF-α、VEGF及IL-1β的相關(guān)性

觀察組miR-27a-3p與miR-141-3p呈正相關(guān)（r=0.803、P＜0.001）；miR-27a-3p與TNF-α、VEGF及IL-1β呈負(fù)相關(guān)（r=-0.600、r=-0.803、r=-0.785，P＜0.001）。miR-141-3p與TNF-α、VEGF及IL-1β呈負(fù)相關(guān)（r=-0.711、r=-0.816、r=-0.828，P＜0.001）。

2.4老年高血壓性腦出血患者預(yù)后的單因素分析

預(yù)后不良組與預(yù)后良好組的腦出血部位、血清miR-27a-3p、miR-141-3p水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

2.5老年高血壓性腦出血患者預(yù)后的多因素logistic分析

行ROC曲線分析，miR-27a-3p預(yù)測老年高血壓性腦出血曲線下面積為0.953（95%CI：0.879～0.996，P＜0.001），截斷值為0.165，見圖1。miR-141-3p預(yù)測老年高血壓性腦出血曲線下面積為0.962（95%CI：0.921～0.994，P＜0.001），截斷值為1.035，見圖2。將腦出血部位（基底結(jié)區(qū)、丘腦區(qū)、腦室區(qū)=0，小腦及腦干=1）、miR-27a-3p（≤0.165=0，＞0.165=1）、miR-141-3p（≤1.035=0，＞1.035=1）作為自變量，將預(yù)后作為因變量（良好=0，不良=1），進(jìn)行l(wèi)ogistic回歸分析，結(jié)果顯示，小腦及腦干出血是老年高血壓性腦出血預(yù)后不良的獨(dú)立危險因素（P＜0.05），miR-27a-3p＞0.165、miR-141-3p＞1.035是老年高血壓性腦出血患者預(yù)后的保護(hù)性因素（P＜0.05），見表4。

3討論

近年來，隨著生活水平的不斷提高，高血壓性腦出血的發(fā)病率也隨之升高，加之具有較高的致殘率及致死率，對患者的生命健康也造成了嚴(yán)重的影響。報道指出，高血壓在發(fā)生發(fā)展期間，多存在著諸多不同的生理病理變化，且期間伴隨著多種炎癥細(xì)胞因子的作用，進(jìn)而對血管壁的通透性造成影響，同時也增加了各類血管源性以及細(xì)胞源性腦水腫等諸多繼發(fā)性損傷［8］。

miRNA作為一種由20～25個核苷酸組成的非編碼RNA分子，與轉(zhuǎn)錄后的基因表現(xiàn)存在密切的相關(guān)性，在一般情況下可在血清等細(xì)胞外液中穩(wěn)定存在，而位于細(xì)胞外的miRNA可通過與RNA結(jié)合蛋白相結(jié)合，由此避免自身被核酸酶降解［9-10］。miRNA-27家族是具備多種功能的miRNA，分為miR-27a-3p、miR-27a-5p和miR-27b-5p三種亞型，其中miR-27a-3p在人體血液、消化以及神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛存在，研究發(fā)現(xiàn)miR-27a-3p與胰腺癌及胃癌等消化系統(tǒng)腫瘤具有密切的相關(guān)性［11］。曾有報道指出，miR-141-3p作為一種與炎癥反應(yīng)相關(guān)的miRNA，不僅與機(jī)體的炎癥反應(yīng)之間具有密切的關(guān)系，在各類惡性腫瘤中的作用也得以證實(shí)［12］。研究報道，miR-141-3p在通過對kelch樣氧氯丙烷相關(guān)蛋白1/核因子E2相關(guān)因子2信號通路的調(diào)節(jié)改善了男性前列腺的炎癥反應(yīng)［13］。不過兩者是否與老年高血壓性腦出血后的炎癥反應(yīng)相關(guān)仍然需要進(jìn)一步的研究。

本研究可見，老年高血壓性腦出血患者血清miR-27a-3p、miR-141-3p水平低于對照組，而炎癥因子TNF-α、VEGF及IL-1β水平高于對照組，且這種變化在疾病程度較重、預(yù)后較差的患者中表現(xiàn)得更明顯；隨后在進(jìn)行相關(guān)性分析時可見，老年高血壓性腦出血患者miR-27a-3p、miR-141-3p與TNF-α、VEGF及IL-1β呈負(fù)相關(guān)性。綜合分析出現(xiàn)此結(jié)果的原因，當(dāng)miR-27a-3p表達(dá)缺失時，可導(dǎo)致腦組織內(nèi)炎癥因子大量釋放，由此誘發(fā)并加重了不良反應(yīng)，進(jìn)一步造成血腦屏障破壞，誘發(fā)腦水腫，并對神經(jīng)系統(tǒng)帶來損傷；而miR-141-3p呈現(xiàn)出低表達(dá)后通過對腦組織內(nèi)的炎癥因子進(jìn)行激活，誘發(fā)大量的炎癥反應(yīng)，造成神經(jīng)細(xì)胞死亡及損傷［5］。本研究中多因素logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，高水平miR-27a-3p、miR-141-3p可作為老年高血壓性腦出血患者預(yù)后的保護(hù)性因素，也進(jìn)一步證實(shí)了上述結(jié)論，即血清miR-27a-3p與miR-141-3p與老年高血壓性腦出血患者預(yù)后具有一定的關(guān)系，但具體作用機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

綜上所述，血清miR-27a-3p與miR-141-3p在老年高血壓性腦出血患者中呈低表達(dá)，對患者病情的判斷以及預(yù)后評估具有重要的臨床意義。

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（2023-01-31收稿）