［摘要］目的探索miR-1298調(diào)控青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞生長及其機(jī)制。方法20只C57BL/6小鼠被用于阻斷鞏膜上靜脈建立慢性小鼠青光眼模型。脂多糖誘導(dǎo)Müller細(xì)胞作為體外模型，同時(shí)轉(zhuǎn)染miR-NC（空白對照組）、miR-1298mimic、miR-1298inhibitor、miR-1298mimic+重組人Set7/9組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶（SetD7）。采用MTT實(shí)驗(yàn)、乳酸脫氫酶（LDH）活性和Caspase-3、Caspase-9試劑盒、RT-qPCR和Westernblot方法探索miR-1298的功能和機(jī)制。結(jié)果在青光眼小鼠模型視網(wǎng)膜組織中miR-1298表達(dá)量顯著提高。上調(diào)miR-1298能夠抑制Müller細(xì)胞增殖和激活LDH活性，下調(diào)miR-1298能夠促進(jìn)Müller細(xì)胞增殖和減少LDH活性。SetD7是miR-1298調(diào)控靶點(diǎn)，激活SetD7可以減弱miR-1298對青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞生長的抑制作用。結(jié)論miR-1298在青光眼小鼠模型視網(wǎng)膜組織中表達(dá)量顯著提高，miR-1298能夠通過調(diào)控SetD7表達(dá)抑制青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞生長，miR-1298的表達(dá)可為青光眼預(yù)防和治療提供參考。

［關(guān)鍵詞］miR-1298；青光眼；重組人Set7/9組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶；視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞

doi：10.3969/j.issn.1674-7593.2023.04.015

MiR-1298ReducedtheRetinalGanglionCellGrowthinGlaucomabyRegulatingSetD7Expression

XieJiubing，YangShanshan，ChenXiyue，YueXiangdong

TangshanEyeHospital，Tangshan063000

［Abstract］ObjectiveToexploretheeffectofmiR-1298onthegrowthofretinalganglioncellsinglaucomaanditsmechanism.MethodsChronicglaucomamodelwasestablishedbyblockingtheepiscleralveinsin20C57BL/6mice.Invitro，lipopolysaccharide（LPS）-inducedMüllercellsweretransfectedwithmiR-NC，miR-1298mimic，miR-1298inhibitor，andmiR-1298mimic+recombinanthumanSet7/9histonemethyltransferase（SetD7），respectively.ThefunctionandmechanismofmiR-1298ingrowthoftheretinalganglioncellsinglaucomaweretestedusingMTTkit，LDHkit，Caspase3andCaspase9kits，RT-qPCRandWesternblot.ResultsMiR-1298expressionwasup-regulatedintheretinatissueofmicewithglaucoma.UpregulationofmiR-1298inhibitedMüllercellproliferationandactivatedLDHactivity，whiledownregulationofmiR-1298promotedMüllercellproliferationandreducedLDHactivity.SetD7wasaregulatorytargetofmiR-1298.ActivationofSetD7reducedtheinhibitoryeffectofmiR-1298onthegrowthoftheretinalganglioncellsinglaucoma.ConclusionTheexpressionofmiR-1298issignificantlyincreasedintheretinaofmicewithglaucoma.MiR-1298mayreducethegrowthofretinalganglioncellsinglaucomathroughsuppressionofSetD7expression.TheexpressionofmiR-1298mayprovidereferenceforthepreventionandtreatmentofglaucoma.

［Keywords］MiR-1298；Glaucoma；RecombinanthumanSet7/9histonemethyltransferase；Retinalganglioncells

青光眼多發(fā)于中老年人，因?yàn)檫@個(gè)時(shí)期的晶體處于膨脹期，容易造成淺前房，誘發(fā)青光眼發(fā)作，尤其是原發(fā)性青光眼好發(fā)于老年人，女性較男性更為多見［1］。青光眼特征是視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞變性和視神經(jīng)損傷，最終導(dǎo)致患者視野損失以及比較度和顏色敏感性減弱［2］。青光眼表現(xiàn)為視神經(jīng)頭的視野損失和功能性視力喪失及眼壓升高［3］。目前，治療青光眼的有效方法是降低眼壓，但某些抗青光眼藥物治療會(huì)伴隨眼部不良反應(yīng)，包括干眼癥、灼熱感或刺痛感，這些癥狀往往無法改善，導(dǎo)致青光眼患者生活質(zhì)量顯著下降［4］。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞作為視覺信號的受體和保護(hù)者，在視覺信息從視網(wǎng)膜傳遞到大腦視覺中樞中起著至關(guān)重要的作用。因此，有必要通過闡明視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)機(jī)制和青光眼的病理變化來尋找治療青光眼的新策略，這是青光眼治療和視覺功能恢復(fù)的核心因素［5］。近年來發(fā)現(xiàn)，微小核糖核酸（MicroRNAs，miRNAs）參與了潛在的青光眼通路，包括局部黏連、緊密連接和轉(zhuǎn)化生長因子（Transforminggrowthfactorbeta，TGF-β）信號傳導(dǎo)等［6］。一些miRNAs在青光眼相關(guān)通路中發(fā)揮重要作用，可作為青光眼發(fā)病機(jī)制的生物標(biāo)志物［7］。microRNA-1298（miR-1298）在人小梁網(wǎng)細(xì)胞中的表達(dá)均顯著降低，miR-1298模擬物可顯著抑制殼低聚糖誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性、細(xì)胞凋亡，羰基化蛋白積累和細(xì)胞外基質(zhì)（Extracellularmatrix，ECM）的增加，miR-1298抑制劑可明顯促進(jìn)殼低聚糖對人小梁網(wǎng)細(xì)胞的增強(qiáng)作用［8］。miR-1298是否對青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞生長具有一定影響尚不清楚。重組人Set7/9組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶（RecombinanthumanSet7/9histonemethyltransferase，SetD7）蛋白是DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1的調(diào)節(jié)器，負(fù)責(zé)維持細(xì)胞分裂過程中的DNA甲基化模式，SetD7在葡萄糖介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中起著關(guān)鍵作用，因此它是糖尿病血管并發(fā)癥的候選基因，在糖尿病視網(wǎng)膜病變中發(fā)揮重要作用，而抑制SetD7能夠?qū)购艘蜃应剩拢∟uclearfactorkappaB，NF-κB）誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激和促炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生［9］。研究表明，多個(gè)抗氧化基因的上調(diào)和通過抑制SetD7可提高反應(yīng)活性氧（Reactiveoxygenspecies，ROS）清除率，靶向SetD7治療ROS相關(guān)疾病具有潛在的價(jià)值［10］。本研究意在探索miR-1298調(diào)控青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞生長及其可能的機(jī)制，為青光眼的預(yù)防和治療提供參考。

1材料與方法

1.1動(dòng)物分組

購買SPF級雄性C57BL/6小鼠20只，月齡8～12周，體質(zhì)量23～27g。所有小鼠的外眼和眼底沒有任何異常。實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行為期1周的適應(yīng)性喂養(yǎng)，每籠3～5只，溫度21℃，光、暗循環(huán)12h，自由獲取食物和水，有足夠的活動(dòng)空間。隨后，將20只小鼠隨機(jī)分為正常組和模型組，各10只。實(shí)驗(yàn)過程中嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和使用指南，并符合相關(guān)倫理學(xué)規(guī)定。

1.2方法

1.2.1青光眼小鼠造模采用阻斷鞏膜上靜脈建立小鼠慢性青光眼模型。建立前腹腔注射1%戊巴比妥鈉（50mg/kg，SigmaAldrich，St.Louis，MO，USA）用于全身麻醉，其眼表面用戊巴比妥鈉逐滴麻醉2次后開眼瞼，使用精細(xì)剪剪開球結(jié)膜，暴露上直肌、下直肌，使用體視顯微鏡找到鞏膜上靜脈。用手術(shù)鉗使上、遠(yuǎn)端靜脈充血變白作為阻斷成功的指標(biāo)。于造模第7天處死兩組小鼠，獲取視網(wǎng)膜標(biāo)本以檢測miR-1298表達(dá)水平。從兩組小鼠視網(wǎng)膜組織中獲取視網(wǎng)膜細(xì)胞，處死小鼠后立即取出眼球，用無菌磷酸鹽緩沖液（Phosphatebufferedsaline，PBS）清洗去表面附著的血液和眼球表面的細(xì)胞。隨后，將眼球在無菌條件下分離，取出視網(wǎng)膜組織。將視網(wǎng)膜組織放入含有0.25％胰蛋白酶的無菌PBS中，37℃下孵育10～15min，使其充分消化。分離視網(wǎng)膜細(xì)胞：消化結(jié)束后，用無菌PBS洗滌組織，將其在培養(yǎng)皿中加入含有10％胎牛血清的完整無菌DMEM，用細(xì)胞篩過濾，去除殘留的組織碎片，獲得單個(gè)視網(wǎng)膜細(xì)胞。

1.2.2細(xì)胞轉(zhuǎn)染與分組Müller細(xì)胞（人視網(wǎng)膜細(xì)胞株，中國科學(xué)院上海生命科學(xué)院細(xì)胞資源中心）加入DMEM完全培養(yǎng)基（含10%胎牛血清）中，37℃5%CO2的孵箱中培養(yǎng)。500ng/mL脂多糖加入Müller細(xì)胞（5×105個(gè)細(xì)胞）誘導(dǎo)模型。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分組依次分為空白對照組、miR-1298mimics組、miR-1298inhibitor、miR-1298mimics+SetD7組，根據(jù)轉(zhuǎn)染試劑說明書步驟，通過Lipofectamine2000瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，分別將miR-NC、miR-1298mimic、miR-1298inhibitor、miR-1298mimic+SetD7轉(zhuǎn)入Müller細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后48h收集細(xì)胞，實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Quantitativereal-timePCR，qRT-PCR）檢測轉(zhuǎn)染效率后，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.3RT-qPCR檢測miR-1298在小鼠視網(wǎng)膜和細(xì)胞中的相對表達(dá)量根據(jù)說明書操作步驟，使用TRIzol試劑從各組小鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞和Müller細(xì)胞分離總RNA，分別通過PrimeScript-RT和SYBRgreenmastermix試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄和RT-qPCR，反應(yīng)條件：95℃持續(xù)10min，循環(huán)40次，持續(xù)15s，55℃循環(huán)30s，70℃循環(huán)30s，并使用U6和GAPDH作為內(nèi)部參照，相對表達(dá)量采用2-ΔΔCt計(jì)算，引物見表1。

1.2.4MTT法檢測細(xì)胞增殖細(xì)胞轉(zhuǎn)染48h后，用MTT法檢測細(xì)胞增殖，根據(jù)MTT試劑盒說明書進(jìn)行，在96孔板每孔加入200μL，37℃5%CO2孵育箱培養(yǎng)48h后，加入20mLMTT（5mg/mL）培養(yǎng)4h，2500r/min離心10min，去上清，加入二甲基亞砜150mL，振蕩10min。在570nm處使用分光光度讀板器（Bio-Tek，Winooski，美國）測量吸光度值。

1.2.5乳酸脫氫酶（Lactatedehydrogenase，LDH）活性和Caspase3/9蛋白表達(dá)水平細(xì)胞轉(zhuǎn)染48h后，用放射免疫沉淀（Radioimmunoprecipitationassay，RIPA）裂解緩沖液提取蛋白，用BCA法測定蛋白質(zhì)含量。LDH活性試劑盒和Caspase-3，Caspase-9試劑盒用于檢查Müller細(xì)胞LDH活性水平、Caspase-3和Caspase-9蛋白表達(dá)量。

1.2.6Westernblot檢測B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2基因（B-cellymphoma-2，Bcl-2）、Bcl-2相關(guān)X蛋白基因（Bcl-2associatedXprotein，Bax）和SetD7蛋白表達(dá)細(xì)胞蛋白提取及定量：取對數(shù)生長期的各組細(xì)胞，加入混有蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液，置于冰上裂解30min，以12000r/min離心15min，收集上清即為所提取蛋白，使用BCA蛋白質(zhì)測定試劑盒測定樣品的蛋白質(zhì)濃度。Westernblot檢測：通過SDS-PAGE分離樣品中總蛋白質(zhì)并印記到PVDF膜上，用含有5%脫脂奶粉的PBS/0.3%TritonX清洗-100（PBST，Sigma，St.Louis，MO，USA）封閉1.5h，采用相應(yīng)的一抗（Bax、Bcl-2、SetD7稀釋比例均為1∶1000）4℃過夜孵育，三羥甲基氨基甲烷鹽酸緩沖液（Trisbufferedsaline-Tween20，TBST）洗膜3次，每次10min；辣根過氧化酶（Horseradishperoxidase，HRP）標(biāo)記的二抗孵育2h，TBST洗膜3次，結(jié)合ECL化學(xué)發(fā)光法顯影，Image-J圖像軟件進(jìn)行分度值分析，以GAPDH為內(nèi)參，蛋白相對表達(dá)=待測目標(biāo)條帶灰度值/內(nèi)參條帶灰度值。

1.2.7雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)檢測miR-1298與SetD7的相互作用關(guān)系首先使用在線網(wǎng)站http：//www.TargetScan.org，http：//microrna.sanger和http：//miRDB.org/miRDB/預(yù)測SetD7和miR-1298的假定結(jié)合位點(diǎn)。并通過雙熒光素酶活性測定進(jìn)行驗(yàn)證，按照ATCC建議培養(yǎng)HEK293T細(xì)胞，構(gòu)建pGL3-SetD7-3′-UTR-WT和pGL3-SetD7-3′-UTR-MUT質(zhì)粒。將HEK293T細(xì)胞培養(yǎng)于24孔板中，根據(jù)制造商的說明書，100ng的pGL3-SetD7-3′-UTR-WT和pGL3-SetD7-3′-UTR-MUT使用Lipofectamine2000和miR-1298及陰性對照載體（miR-NC空白質(zhì)粒）分別轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞。轉(zhuǎn)染48h后，使用熒光素酶測定試劑盒分析熒光素酶活性，用螢火蟲熒光值和海腎熒光值的比值計(jì)算熒光素酶報(bào)告基因的活性。

1.2.8免疫熒光細(xì)胞用磷酸鹽吐溫緩沖液（Phosphatebufferedsaline-Tween20，PBST）3次，每次10min，用5%（v/v）驢血清在PBST孵育1h。然后，SetD7一抗（1∶100）在4℃下放置16h。細(xì)胞用PBS洗3次，Alexa555結(jié)合的二級抗體孵育（驢抗鼠1∶200；驢抗兔1∶200；美國）在室溫下孵育2h。細(xì)胞用4′，6-二脒基-2-苯基吲哚在室溫下染色30min。DM5000B顯微鏡（Leicabiosystems，Wetzlar，德國）觀察細(xì)胞。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，正態(tài)分布計(jì)量資料采用±s表示，通過配對t檢驗(yàn)或單因素方差分析進(jìn)行組間差異分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1miR-1298在小鼠青光眼視網(wǎng)膜組織中的表達(dá)

miR-1298在青光眼模型組小鼠視網(wǎng)膜組織中的表達(dá)量（3.85±0.61）高于正常組（1.03±0.24），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=13.604，P＜0.001）。

2.2miR-1298在各Müller細(xì)胞組的表達(dá)水平及其Müller細(xì)胞增殖的影響

體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，與空白對照組比較，miR-1298mimics轉(zhuǎn)染能夠上調(diào)miR-1298在Müller細(xì)胞中的表達(dá)量，miR-1298inhibitor下調(diào)miR-1298在Müller細(xì)胞中的表達(dá)量，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。同時(shí)，上調(diào)miR-1298能夠抑制Müller細(xì)胞增殖，激活LDH活性。下調(diào)miR-1298能夠促進(jìn)Müller細(xì)胞增殖，降低LDH活性。LDH活性增強(qiáng)說明細(xì)胞死亡增加，以上結(jié)果說明miR-1298能夠抑制Müller細(xì)胞增殖，見表1、表2。

2.3miR-1298對Müller細(xì)胞Caspase-3、Caspase-9和Bax/Bcl-2的影響

與空白對照組比較，在miR-1298mimics組中Müller細(xì)胞中Caspase-3、Caspase-9活性被上調(diào)，Bax/Bcl-2信號通路被激活；同時(shí)，在miR-1298inhibitor組，Müller細(xì)胞中Caspase-3、Caspase-9活性減少，Bax/Bcl-2信號通路被抑制，見表3、表4、圖1、圖2。

2.4miR-1298靶向結(jié)合并調(diào)控SetD7表達(dá)

通過序列預(yù)測發(fā)現(xiàn)miR-1298和SetD7mRNA3′端的UTR區(qū)域存在結(jié)合位點(diǎn)，見圖3。熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示，與NCmimic組相比，miR-1298與SetD7-WT3′UTR共轉(zhuǎn)染后，檢測到熒光素酶活性顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而與SetD7-MUT3′UTR共轉(zhuǎn)染后，熒光素酶活性無明顯變化（P＞0.05），見圖4。過表達(dá)miR-1298可抑制Müller細(xì)胞的SetD7表達(dá)量，SetD7蛋白表達(dá)在miR-1298mimics組（0.40±0.12）低于空白對照組（1.01±0.10），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.772，P=0.003）。SetD7蛋白表達(dá)在miR-1298inhibitor組（2.45±0.81）高于空白對照組（1.01±0.12），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.041.P=0.038）。同時(shí)免疫熒光圖顯示miR-1298過表達(dá)抑制Müller細(xì)胞中SetD7蛋白表達(dá)量，見圖5。

2.5miR-1298通過調(diào)控SetD7表達(dá)抑制青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞生長

與空白對照組比較，SetD7質(zhì)粒能夠逆轉(zhuǎn)miR-1298對SetD7的抑制作用和Bax/Bcl-2信號通路的激活作用。同時(shí)SetD7恢復(fù)miR-1298對Müller細(xì)胞增殖，減少Caspase-3、Caspase-9和LDH的活性，見圖6、表5。

3討論

青光眼是一種進(jìn)行性視神經(jīng)病變，是致盲的主要原因［11］。因早期的開角型青光眼患者無不適感，易忽視，視神經(jīng)出現(xiàn)損傷時(shí)，造成視野及視力下降，才被檢查發(fā)現(xiàn)，青光眼的治療主要是通過藥理學(xué)或外科降低眼壓［12］。青光眼根據(jù)不同的病因和預(yù)后可分為原發(fā)性先天性青光眼和繼發(fā)性青光眼。小梁切除術(shù)和小梁切除術(shù)加上抗纖維化藥物是最常見的治療方法［13］。由于抗纖維化藥物的使用存在較高的并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)［14］。因此，探索青光眼的發(fā)病機(jī)制、尋找青光眼治療的新靶標(biāo)成為研究熱點(diǎn)之一。miRNAs通過下調(diào)信使RNA的靶基因或抑制蛋白質(zhì)翻譯，在基因表達(dá)調(diào)控中發(fā)揮重要作用［15］。此外，miRNAs在多種生理過程中也起著調(diào)節(jié)作用，包括細(xì)胞增殖和凋亡等，從而在許多疾病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮作用［16］。miRNAs在青光眼的發(fā)生發(fā)展過程中具有調(diào)節(jié)作用，同時(shí)miRNAs也參與了青光眼相關(guān)基因的生物學(xué)過程［17］。研究表明，進(jìn)行性視神經(jīng)病變和青光眼患者的miRNAs表達(dá)發(fā)生變化，提示miRNAs可能是導(dǎo)致神經(jīng)元細(xì)胞死亡的原因之一［18］。已有證據(jù)表明，一系列miRNAs與視網(wǎng)膜發(fā)育有關(guān)，如視網(wǎng)膜神經(jīng)發(fā)生病變、視網(wǎng)膜內(nèi)穩(wěn)態(tài)和人類視覺系統(tǒng)的視網(wǎng)膜損傷等［19］。本研究發(fā)現(xiàn)miR-1298在小鼠青光眼視網(wǎng)膜組織中高表達(dá)，提示miR-1298可能與青光眼視網(wǎng)膜病變密切相關(guān)。通過體外細(xì)胞模型發(fā)現(xiàn)，在人視網(wǎng)膜細(xì)胞株Müller細(xì)胞中MiR-1298質(zhì)粒能夠上調(diào)miR-1298在Müller細(xì)胞中的表達(dá)量，同時(shí)上調(diào)miR-1298能夠抑制Müller細(xì)胞增殖和激活LDH活性，下調(diào)miR-1298能夠下調(diào)miR-1298在Müller細(xì)胞中的表達(dá)量，下調(diào)miR-1298能夠促進(jìn)Müller細(xì)胞增殖和減少LDH活性，說明miR-1298能夠促進(jìn)細(xì)胞凋亡，抑制Müller細(xì)胞增殖，提示miR-1298可能是調(diào)控青光眼的重要基因，但是機(jī)制尚不清楚，需要繼續(xù)研究。

有研究表明MiR-1298抑制劑可明顯促進(jìn)慢性氧化應(yīng)激對人小梁網(wǎng)細(xì)胞的增強(qiáng)作用，EIF4E3是miR-1298的下游目標(biāo)，EIF4E3能顯著抑制慢性氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的人小梁網(wǎng)細(xì)胞miR-1298抑制劑的增加效應(yīng)；慢性氧化應(yīng)激中TGF-β2和Smad4的表達(dá)水平顯著升高，Wnt3a和β-角朊素明顯降低，miR-1298抑制劑可顯著促進(jìn)這種增加效應(yīng)，EIF4E3可逆轉(zhuǎn)慢性氧化應(yīng)激作用下miR-1298的作用［20］。另外miR-1298可通過抑制TGF-β2/Smad4通路和激活典型Wnt通路，抑制慢性氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，保護(hù)HTM細(xì)胞免受慢性氧化應(yīng)激損傷［21］。Caspase-3、Caspase-9和Bax/Bcl-2為學(xué)術(shù)界公認(rèn)的典型的凋亡信號通路，本研究中發(fā)現(xiàn)，在上調(diào)miR-1298條件下，Müller細(xì)胞中Caspase-3、Caspase-9活性被上調(diào)，Bax/Bcl-2信號通路被激活。同時(shí)，下調(diào)miR-1298條件下，Müller細(xì)胞中Caspase-3、Caspase-9活性被減少，Bax/Bcl-2信號通路被抑制。說明miR-1298可能通過激活Caspase-3、Caspase-9和Bax/Bcl-2信號通路，影響Müller細(xì)胞的凋亡，從而抑制Müller細(xì)胞增殖。

SetD7是一種賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶，可向組蛋白H3K4和連接組蛋白H1添加甲基［22］。SetD7在不需要酶活性的心臟分化中起重要作用，SetD7動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)H3K36me3基因，參與人類胚胎干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞［23］。研究發(fā)現(xiàn)，SetD7可調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)，在周圍神經(jīng)損傷慢性收縮損傷（Chronicconstrictioninjury，CCI）模型中，SetD7的表達(dá)被抑制［24］。此外，SetD7在脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞病、神經(jīng)性疼痛和神經(jīng)炎癥中具有潛在調(diào)控功能和作用。在原發(fā)性小膠質(zhì)細(xì)胞和CCl模型中，SetD7甲基化促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞增殖，可恢復(fù)神經(jīng)功能［25］。另有報(bào)道，SetD7可促進(jìn)腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)的氣道平滑肌細(xì)胞增殖和遷移［26］。也能抑制SetD7保護(hù)心肌細(xì)胞免受缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)的損傷［27］。本研究發(fā)現(xiàn)，SetD7與miR-1298存在結(jié)合位點(diǎn)，在上調(diào)miR-1298條件下Müller細(xì)胞中SetD7蛋白表達(dá)量被抑制，在下調(diào)miR-1298條件下Müller細(xì)胞中SetD7蛋白表達(dá)量被激活，提示SetD7可能是miR-1298的調(diào)控靶點(diǎn)。另外通過免疫熒光實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，miR-1298可抑制Müller細(xì)胞中SetD7蛋白表達(dá)量，進(jìn)一步說明miR-1298可能通過調(diào)控SetD7表達(dá)影響青光眼的進(jìn)展，但具體機(jī)制仍需要進(jìn)一步研究。因此，通過在上調(diào)miR-1298質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的Müller細(xì)胞中加入SetD7質(zhì)粒發(fā)現(xiàn)，SetD7質(zhì)?？赡孓D(zhuǎn)miR-1298對SetD7的抑制作用和Bax/Bcl-2信號通路的激活作用。同時(shí)SetD7能夠恢復(fù)miR-1298對Müller細(xì)胞增殖，減少Caspase-3、Caspase-9和LDH的活性，提示SetD7可能是miR-1298調(diào)控靶點(diǎn)，參與Müller細(xì)胞增殖和凋亡，miR-1298可能是通過調(diào)控SetD7表達(dá)來抑制青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞生長。

綜上所述，miR-1298在青光眼小鼠模型視網(wǎng)膜組織中表達(dá)量顯著升高，miR-1298可能通過激活Caspase-3、Caspase-9和Bax/Bcl-2信號通路，抑制Müller細(xì)胞增殖。激活SetD7可以降低miR-1298對青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞生長的抑制作用。提示miR-1298表達(dá)異?？赡芘c青光眼疾病發(fā)生相關(guān)，miR-1298通過調(diào)控SetD7表達(dá)抑制青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞生長，MiR-1298可能是青光眼的潛在治療和診斷靶點(diǎn)，為以后的相關(guān)研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

［1］GardinerSK，MansbergerSL，F(xiàn)ortuneB.Timelagbetweenfunctionalchangeandlossofretinalnervefiberlayeringlaucoma［J］.InvestOphthalmolVisSci，2020，61（13）：5.

［2］KozdonK，CaridiB，DuruI，etal.ATenon'scapsule/bulbarconjunctivainterfacebiomimetictomodelfibrosisandlocaldrugdelivery［J］.PLoSOne，2020，15（11）：e0241569.

［3］LeeWS，ParsonsS，CugleyD，etal.Increasedincidenceofglaucomamedicationusageinmiddle-agedAustralianmalestakingantiretroviralmedication-apopulation-basedstudy［J］.JOphthalmicInflammInfect，2020，10（1）：30.

［4］YuanX，ZhengX，JiB，etal.Jointopticdiscandcupsegmentationbasedonresidualmulti-scalefullyconvolutionalneuralnetwork［J］.ShengWuYiXueGongChengXueZaZhi，2020，37（5）：875-884.

［5］LiuW，ZhangJ，ZouC，etal.MicroarrayexpressionprofileandfunctionalanalysisofcircularRNAsinosteosarcoma［J］.CellPhysiolBiochem，2017，43（3）：969-985.

［6］MatboliM，LabibME，NasserHE，etal.ExosomalmiR-1298andlncRNA-RP11-583F2.2expressioninhepato-cellularcarcinoma［J］.CurrGenomics，2020，21（1）：46-55.

［7］MoeezUddinM，F(xiàn)arooqueU，AzizMZ，etal.Differenttypesofclinicalpresentationsandstagesofretinoblastomaamongchildren［J］.Cureus，2020，12（9）：e10672.

［8］Organista-JuárezD，JiménezA，RochaL，etal.DifferentialexpressionofmiR-34a，451，1260，1275and1298intheneocortexofpatientswithmesialtemporallobeepilepsy［J］.EpilepsyRes，2019，157：106188.

［9］TziastoudiM，StefanidisI，ZintzarasE.Thegeneticmapofdiabeticnephropathy：evidencefromasystematicreviewandmeta-analysisofgeneticassociationstudies［J］.ClinKidneyJ，2020，13（5）：768-781.

［10］CaoL，RenY，GuoX，etal.DownregulationofSETD7promotesmigrationandinvasionoflungcancercellsviaJAK2/STAT3pathway［J］.IntJMolMed，2020，45（5）：1616-1626.

［11］WlaA，KunaA，Wilkos-KucA，etal.PredictivevalueofblebvascularityaftermitomycinCaugmentedtrabeculectomy［J］.JClinMed，2020，9（11）.

［12］KamelK，O'BrienCJ，ZhdanovAV，etal.Reducedoxidativephosphorylationandincreasedglycolysisinhumanglaucomalaminacribrosacells［J］.InvestOphthalmolVisSci，2020，61（13）：4.

［13］GillmannK，MansouriK.Minimallyinvasivesurgery，implantablesensors，andpersonalizedtherapies［J］.JOphthalmicVisRes，2020，15（4）：531-546.

［14］PerakaRP，MurthySI，ReddyS，etal.Taleoftwocomplicationsfollowingphakicintraocularlensimplantation：secondaryglaucomaandcentralserousretinopathyinoneeyeandinvertedphakicIOLwithcataractintheothereye［J］.BMJCaseRep，2020，13（10）：e238300.

［15］KumarM，VarshneyA.Asuspecteddetachedparsplanacystinthevitreouscavity［J］.JOphthalmicVisRes，2020，15（4）：579-580.

［16］McDonaldAC，ViraM，WalterV，etal.CirculatingmicroRNAsinplasmaamongmenwithlow-gradeandhigh-gradeprostatecanceratprostatebiopsy［J］.Prostate，2019，79（9）：961-968.

［17］EsfandiariH，HassanpourK，KnowltonP，etal.Combiningbaerveldtimplantwithtrabectomenegatestubefenestration：acoarsened-matchedcomparison［J］.JOphthalmicVisRes，2020，15（4）：509-516.

［18］MoniritilakiM，BadakhshM，EhsaeiA，etal.Theeffectofcontactlens-spectaclereversedgalileantelescopeonthevisualfieldofpatientswithopen-angleglaucoma［J］.JOphthalmicVisRes，2020，15（4）：502-508.

［19］JoshiSR，DhagiaV，GairheS，etal.MicroRNA-140iselevatedandmitofusin-1isdownregulatedintherightventricleoftheSugen5416/hypoxia/normoxiamodelofpulmonaryarterialhypertension［J］.AmJPhysiolHeartCircPhysiol，2016，311（3）：H689-698.

［20］RuibinW，ZhengX，ChenJ，etal.MicroRNA-1298opposestheeffectsofchronicoxidativestressonhumantrabecularmeshworkcellsviatargetingonEIF4E3［J］.BiomedPharmacother，2018，100：349-357.

［21］SchmidtK，deWitC.Keepcalmandcarryon：miR-1298preventsup-regulationofCx43andsecuresaquiescentvascularsmoothmusclecell［J］.CardiovascRes，2015，107（4）：407-409.

［22］XieH，LiJ，YingY，etal.METTL3/YTHDF2m（6）AaxispromotestumorigenesisbydegradingSETD7andKLF4mRNAsinbladdercancer［J］.JCellMolMed，2020，24（7）：4092-4104.

［23］KarkhurS，SoniD，SharmaB.TransitoryoutwardpupillarycurlinginacaseofHSVassociatedacuteanterioruveitis：ahithertounreportedsign［J］.BMJCaseRep，2020，13（10）：e237384.

［24］BrichS，BozziF，PerroneF，etal.Fluorescenceinsituhybridization（FISH）providesestimatesofminuteandinterstitialBAP1，CDKN2A，andNF2genedeletionsinperitonealmesothelioma［J］.ModPathol，2020，33（2）：217-227.

［25］SpadoniMB，Bumiller-BiniV，Petzl-ErlerML，etal.Firstglimpseofepigeneticeffectsonpemphigusfoliaceus［J］.JInvestDermatol，2020，140（2）：488-491.e1.

［26］NayakA，Lopez-DavilaAJ，KefalakesE，etal.RegulationofSETD7methyltransferasebySENP3Iscrucialforsarcomereorganizationandcachexia［J］.CellRep，2019，27（9）：2725-2736.e4.

［27］ChenS，KapilashramiK，SenevirathneC，etal.Substrate-differentiatedtransitionstatesofSET7/9-catalyzedlysinemethylation［J］.JAmChemSoc，2019，141（20）：8064-8067.

（2020-11-04收稿）