唐益文，王 雄，周艷艷，陳豪特，張澤家，王 忠，高慶和，劉劍剛，高 瞻

（1.北京中醫(yī)藥大學研究生院，北京 100029；2.中國中醫(yī)科學院西苑醫(yī)院泌尿外科，北京 100091；3.中國中醫(yī)科學院西苑醫(yī)院男科，北京 100091；4.中國中醫(yī)科學院心血管病研究所，北京 100091）

慢性非細菌性前列腺炎（chronic nonbacterial prostatitis，CNP）為泌尿外科常見疾病，占所有前列腺炎的90%以上［1，2］，因前列腺特殊的解剖及生理特點，致使臨床表現(xiàn)多樣、癥狀反復難愈，是前列腺炎中最常見、最復雜的一類臨床綜合征［3］。目前研究發(fā)現(xiàn)病原體感染、尿液反流、神經(jīng)內分泌因素、氧化應激等都與前列腺炎發(fā)病相關，其中免疫因素在CNP 發(fā)生發(fā)展中起到重要作用［4，5］。免疫因素CNP動物模型的建立，是進行CNP 病因病機及藥物研究的重要基礎，目前，前列腺免疫因素動物模型包括去勢結合雌激素誘導型、自身免疫反應誘導型、自發(fā)型CNP 模型［6］，其中常用方法為前兩種，但尚缺乏系統(tǒng)的從手法、病理組織、免疫炎癥指標和激素水平比較兩種模型的報道，本研究擬采用此兩種方法建立CNP 模型，比較兩種模型特征、病理及各項指標，探討制備CNP 動物模型的最優(yōu)選擇，為今后藥物防治CNP 的實驗研究提供較好的動物模型。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 健康SPF 級，雄性，Wistar 大鼠34 只，體質量（200±20）g，由斯貝福（北京）生物技術有限公司［SYXK（京）2019-0030］提供，飼養(yǎng)于中國中醫(yī)科學院西苑醫(yī)院屏障級實驗動物室［SYXK（京）2018-0018］。飼養(yǎng)環(huán)境：屏障系統(tǒng)內飼養(yǎng)，溫度22℃～26℃，濕度控制在40%～70%，由12 h 光照/黑暗循環(huán)，自由飲食。飼料由北京科澳協(xié)力飼料有限公司［京飼證（2014）06054］提供。飲水：滅菌水，裝入飲水瓶供實驗動物自由飲用。

1.1.2 試劑 0.9%生理鹽水（山東辰欣藥業(yè)股份有限公司，批號：1211040591）；10%水合氯醛（國際集團化學有限公司，批號：20050805）；苯甲酸雌二醇（Solarbio 公司，批號：WXBD0151V）；弗氏完全佐劑（CFA）（Sigma 公司，批號：C104202）；BCA 測蛋白濃度試劑盒（上海碧云天生物技術公司，批號：P0010）；IgA、IgG、IgM 試劑盒（北京華英生物技術研究所，批號：20220416BH）；白細胞介素-1β（IL-1β）、白細胞介素-10（IL-10）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、高敏-C 反應蛋白（hs-CRP）試劑盒（北京欣博盛生物科技有限公司，批號：20220428X）；T 試劑盒（上海羅氏診斷產品有限公司，批號：48879601）。

1.1.3 儀器 3-18K 型低溫離心機（美國SiGma 公司）；T18 型分散機（德國IKA 公司）；DNP9082 型電熱恒溫平培養(yǎng)箱（上海精宏實驗設備有限公司）；MultiSkan3 型酶標儀（美國Thermo 公司）；EG1150型病理包埋機（德國Leica 公司）；7160 型全自動生化儀（日本HITACHI 公司）；DR-200BS 型全自動酶標分析儀（無錫華衛(wèi)德朗儀器有限公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 模型構建和分組 適應性飼養(yǎng)大鼠7 d 后，按隨機對照表分為5 組，假手術組6 只、去勢結合雌激素誘導CNP 模型組（去勢激素組）8 只、自身免疫性前列腺炎（experimental autoimmune prostatitis，EAP）組3 組，分別為EAP 蛋白高劑量組（高EAP組）8 只、EAP 蛋白中劑量組（中EAP 組）6 只、EAP蛋白低劑量組（低EAP 組）6 只。

去勢結合雌激素誘導CNP 造模，大鼠采用10%水合氯醛腹腔麻醉（0.2 mL/kg 體質量），仰臥位固定四肢及頭頸，充分暴露會陰區(qū)視野，會陰區(qū)備皮并消毒鋪巾，眼科剪剪開陰囊正中皮膚，逐層分離兩側睪丸至鞘膜，鈍性分離睪丸和附睪，絲線結扎睪丸根部，剪斷精索，移走睪丸，仔細觀察結扎斷端，確認無活動性出血。傷口消毒，逐層縫合，再次消毒傷口，放回鼠籠。術后連續(xù)3 d 背部4 點肌內注射青霉素（劑量25 萬 U/kg，每只注射0.1 mL），以防感染。術后第2 天開始，每天對大鼠進行背部皮下注射苯甲酸雌二醇，劑量為0.25 mg/kg·d-1，連續(xù)注射30 d。第31 天可制備大鼠慢性前列腺炎模型，該模型可維持不少于30 d［7］。假手術組手術步驟同前，區(qū)別僅在于鈍性分離睪丸和附睪步驟即止，傷口予以縫合放回鼠籠，每日注射藥物為芝麻油。

EAP 造模，取下預備大鼠前列腺組織放入生理鹽水中，修掉脂肪、膀胱及多余組織，清洗2～3 次，剪碎攪勻前列腺組織，加入含0.5%Triton-100 的生理鹽水溶液，冰浴勻漿，12 000 r/min，4℃離心30 min。離心后吸去上層的脂肪組織，上清液吸入冷凍管進行液氮冷凍，并保存于-20 ℃條件下備用。臨用前用BCA 測定蛋白濃度，根據(jù)測得的蛋白濃度，用0.01 mmol/L 的PBS 將蛋白提純液分別稀釋成40、20、10 mg/mL 高中低3 種濃度，吸取前列腺蛋白提純液高、中、低3 種濃度0.5 mL 分別與完全弗氏佐劑0.5 mL 等比混懸，共1 mL。在造模的第0天、15 天、30 天將1 mL 高、中、低三種濃度混懸液分別對應不同組別進行背部4 點皮下注射，腹腔同時注射百白破疫苗0.5 mL，造模時間為45 d。第46 天可制備大鼠EAP 模型，本模型的維持時間不少于30 d［7］。

1.2.2 標本采集 各組大鼠按相應組別造模時間結束之后，稱重，再次麻醉，腹主動脈取血，靜置1 h后，3 000 r/min，離心10 min，分離血清備用，-80 ℃保存。取出大鼠前列腺組織，剝離被膜及脂肪組織，生理鹽水清洗2～3 次，濾紙吸干，電子天平稱重，計算各組大鼠前列腺指數(shù)，即前列腺濕重/體質量，取材結束后采用二氧化碳安死術處理。實驗過程中嚴格遵循2011 年修訂版《實驗動物管理條例》及相關規(guī)定，動物實驗經(jīng)過中國中醫(yī)科學院西苑醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準（倫理批件號：2022XLC043-2）。

1.3 模型評價

1.3.1 一般情況 記錄大鼠一般體征狀況變化，造模期間每周對各組大鼠予以稱重記錄，并每日觀察進食量、飲水量，觀察大鼠毛發(fā)情況及一般活動情況。

1.3.2 前列腺組織病理學評價 將各組大鼠前列腺組織選取一部分保存于10%福爾馬林溶液固定72 h，室溫下水洗、脫水、透明、浸蠟、包埋、烤片處理后，HE 染色后封片，光鏡下觀察前列腺局部病理變化。其余部分備用留取做勻漿用于前列腺組織指標測定。

1.3.3 前列腺組織炎癥病理評分 對前列腺組織從炎性細胞、成纖維細胞、腺腔大小、分泌物四個指標進行評價。炎性細胞：0 分：無炎性細胞浸潤，2分：炎性細胞輕度浸潤，4 分：炎性細胞中度浸潤，6分：炎性細胞重度浸潤。成纖維細胞：0 分：無成纖維細胞增生，1 分：成纖維細胞輕度增生，2 分：成纖維細胞中度增生，3 分：成纖維細胞重度增生。腺腔：0 分：腺腔大，1 分：腺腔中等，2 分：腺腔小，3 分：腺腔閉鎖或消失。分泌物：0 分：分泌物多，1 分：分泌物中等，2 分：分泌物少，3 分：無分泌物［8］。

1.3.4 大鼠血清免疫球蛋白測定 按照試劑盒要求采用免疫比濁法測定IgA、IgM、IgG 水平。

1.3.5 大鼠血清炎癥因子測定 按照試劑盒要求采用酶聯(lián)免疫（ELISA）雙抗體夾心法測定IL-1β、IL-10、TNF-α、hs-CRP 水平。

1.3.6 大鼠前列腺組織激素水平測定 按照試劑盒要求采用電化學發(fā)光法測定睪酮（T）水平。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS27.0 和Graphpad Prism9.4.1 軟件進行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析處理，計量資料采用均數(shù)±標準差（±s）的形式，組間比較若方差齊采用單因素方差分析（ANOVA 檢驗），若不滿足正態(tài)分布或方差不齊，則采用校正檢驗，組間多重比較采用Bonferroni 檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組的一般情況

各組Wistar 大鼠按相應造模方式進行飼養(yǎng)，去勢激素組大鼠于第2 天死亡2 只，高EAP 組大鼠2只36 d 死亡。所有未死亡大鼠一般情況良好，無異?，F(xiàn)象，進食量、飲水量正常，其中去勢激素組大鼠和高、中、低EAP 組大鼠毛色明顯變黃，光澤度下降，反應稍緩。每7 d 對所有大鼠稱重，較假手術組，去勢激素組從第1 周開始具有顯著差異（P＜0.05）；高EAP 組、中EAP 組、低EAP 組大鼠分別從第2 周、第4 周、第5 周差異具有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。見表1。

表1 造模期間各組大鼠體質量變化（g，±s）Tab 1 Changes in body mass of rats in each group during the modeling period（g，±s）

表1 造模期間各組大鼠體質量變化（g，±s）Tab 1 Changes in body mass of rats in each group during the modeling period（g，±s）

注：與假手術組相比，# P＜0.05；## P＜0.01。

組別假手術組去勢激素組高EAP 組中EAP 組低EAP 組取材前430.00±13.04 411.17±13.50#418.83±10.68#413.17±6.91#414.17±8.23#5.580＜0.001 n66666 FP第0 周181.75±7.13 179.33±3.93 186.16±4.46 182.67±4.72 184.83±4.62 1.239 0.320第1 周220.50±2.08 209.67±3.39#220.33±9.22 226.00±5.97 220.17±3.92 5.715 0.001第2 周268.50±2.38 255.67±4.30#256.00±7.32#268.50±3.73 261.50±5.35 6.002＜0.001第3 周310.00±4.40 293.33±5.43#298.83±7.22#312.00±9.86 308.50±7.26 6.845＜0.001第4 周352.50±15.41 331.83±8.40#330.67±7.47#333.33±7.87#339.33±7.20 5.307 0.020第5 周386.75±13.22 363.67±10.42#362.67±9.2#366.67±4.97#366.00±8.94#7.705＜0.001第6 周420.75±10.69 402.16±13.60#408.33±11.88#404.16±6.97#410.10±13.94#5.481 0.010

取材時稱量前列腺濕重，計算前列腺指數(shù)。去勢激素組大鼠前列腺腺體極度萎縮，腺體軟，體積減小，與周圍組織有黏連，與假手術組和EAP 組相比，大鼠前列腺指數(shù)具有極顯著差異（P＜0.01，P＜0.01）。肉眼觀察高、中、低EAP 3 組和假手術組無明顯變化（P＞0.05），較假手術組體積稍小，前列腺腺體稍硬；高、中、低EAP 組大鼠3 組組間無明顯差別（P＞0.05）。見圖1。

圖1 各組大鼠前列腺指數(shù)Fig 1 Prostate index of rats of each group

2.2 各組大鼠前列腺組織病理學的比較

假手術組大鼠前列腺組織結構完整，界限清晰，腺腔規(guī)則，腺體上皮細胞形態(tài)正常，無炎癥反應，見圖2A。去勢激素組大鼠前列腺組織存在明顯腺體結構破壞，上皮細胞形態(tài)發(fā)生病變，間質明顯水腫，腺腔顯著擴大，可見大量炎性細胞彌漫性浸潤，血管擴張充血，見圖2B。高EAP 組大鼠存在腺體結構破壞，腺腔擴大，可見少量炎性細胞浸潤，見圖2C。；中EAP 組大鼠存在腺體結構破壞，腺腔稍擴大，腺上皮減少，間質內可見部分炎性細胞浸潤，見圖2D。；低EAP 組大鼠腺體結構有破壞，腺腔疏松，間質內可見少量炎性細胞浸潤［8］，見圖2E。

圖2 各組大鼠前列腺組織觀察（HE，×100）Fig 2 Observation of prostate tissue in rats of each group （HE，×100）

2.3 各組大鼠前列腺組織炎癥病理評分的比較

造模后，與假手術組相比，去勢激素組大鼠前列腺組織炎性細胞、成纖維細胞、腺腔大小、腺腔內分泌物顯著上升，具有顯著差異（P＜0.05）；與假手術組相比，高、中、低EAP 組大鼠前列腺組織炎癥病理評分變化無顯著差異（P＜0.05）；與自身免疫組相比，去勢激素組與高、中、低EAP 組炎癥病理評分各指標具有顯著差異（P＜0.05）；高、中、低EAP 組組間對比未見明顯差異，無顯著差異（P＞0.05）。見表2。

表2 各組大鼠前列腺組織炎癥評分比較（±s）Tab 2 Comparison of inflammation scores of prostate tissue in each group of rats（±s）

表2 各組大鼠前列腺組織炎癥評分比較（±s）Tab 2 Comparison of inflammation scores of prostate tissue in each group of rats（±s）

注：與假手術組相比，# P＜0.05，## P＜0.01。

腺腔內分泌物0.67±0.82 2.00±0.63#0.33±0.57 0.50±0.84 0.67±0.82 4.94 0.004組別假手術組去勢激素組高EAP 組中EAP 組低EAP 組n66666 FP炎性細胞1.33±1.03 3.67±2.88#1.33±3.34 1.33±1.03 1.33±1.03 5.00 0.004成纖維細胞0.50±0.55 2.00±0.00##1.00±0.00 0.83±0.41 1.00±0.00 20.18＜0.001腺腔大小0.00±0.00 1.50±0.55##0.17±0.41 0.33±0.52 0.50±0.55 10.08＜0.001

2.4 各組大鼠血清免疫球蛋白的比較

與假手術組相比，去勢激素組大鼠IgA、IgG、IgM 顯著上升，差異具有顯著差異（P＜0.05）；與假手術組相比，高、中、低EAP 組大鼠僅IgM 具有顯著差異（P＜0.05）；與自身免疫組相比，去勢激素組與高、中、低EAP 組炎癥病理評分各指標具有顯著差異（P＜0.05）；高、中、低EAP 組組間對比未見明顯差異，無顯著差異（P＞0.05）。見表3。

表3 各組大鼠血清IgA、IgG、IgM 水平比較（±s）Tab 3 Comparison of serum IgA，IgG and IgM levels of rats in each group（±s）

表3 各組大鼠血清IgA、IgG、IgM 水平比較（±s）Tab 3 Comparison of serum IgA，IgG and IgM levels of rats in each group（±s）

注：與假手術組相比，# P＜0.05；## P＜0.01。

組別假手術組去勢激素組高EAP 組中EAP 組低EAP 組IgM(g/L)0.44±0.08 0.78±0.08##0.73±0.04##0.71±0.02##0.67±0.01##31.80＜0.001 n66666 FP IgA(g/L)0.49±0.40 0.93±0.15#0.78±0.20 0.74±0.08 0.72±0.03 6.27 0.001 IgG(g/L)4.92±0.22 7.65±0.72##6.56±0.35##6.38±0.14##6.16±0.16#12.70＜0.001

2.5 各組大鼠血清炎癥因子的比較

與假手術組相比，去勢激素組IL-1β、TNF-α、CRP、IL-10 未見明顯差異（P＞0.05）；與假手術組相比，低EAP 組大鼠IL-1β、TNF-α、CRP、IL-10 均顯著變化，差異具有極顯著差異（P＜0.01），中EAP 組大鼠IL-1β、TNF-α 具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；高EAP 組大鼠各指標未見顯著差異（P＞0.05）；高、中、低EAP 組組間對比，以低EAP 組大鼠指標變化最為敏感，極顯著差異（P＜0.01）。見表4。

表4 各組大鼠血清IL-1β、IL-10、TNF-α、CRP 水平比較（±s）Tab 4 Comparison of serum IL-1β，IL-10，TNF-α and CRP levels of rats in each group（±s）

表4 各組大鼠血清IL-1β、IL-10、TNF-α、CRP 水平比較（±s）Tab 4 Comparison of serum IL-1β，IL-10，TNF-α and CRP levels of rats in each group（±s）

注：與假手術組相比，# P＜0.05；## P＜0.01。

CRP(mg/L)6.39±0.42 6.07±0.84 6.96±0.39 7.86±0.83 9.38±1.64##10.84＜0.001組別假手術組去勢激素組高EAP 組中EAP 組低EAP 組n66666 FP IL-1β(pg/mL)21.25±1.48 21.77±2.88 25.89±3.34 28.96±4.96#35.30±3.83##14.13＜0.001 IL-10(pg/mL)14.04±0.53 15.11±0.81 13.24±0.72 11.77±0.61##10.38±0.69##37.82＜0.001 TNF-α(pg/mL)49.84±13.02 51.12±10.01 58.59±9.38 65.05±3.83 72.61±4.83##7.36＜0.001

2.6 各組大鼠前列腺組織激素水平的比較

與假手術組分別相比，去勢激素組、高EAP 組大鼠T 水平均未見顯著差異（P＞0.05），中EAP 組大鼠T 水平明顯降低，差異具有顯著差異（P＜0.05），低EAP 組大鼠T 水平均具有極顯著差異（P＜0.05）；高、中、低EAP 組組間以低EAP 組大鼠T水平變化最為明顯（P＜0.05）。見表5。

表5 各組大鼠前列腺組織T 水平比較(ng/mL,±s)Tab 5 Comparison of T levels in prostate tissue of rats in each group(ng/mL,±s)

表5 各組大鼠前列腺組織T 水平比較(ng/mL,±s)Tab 5 Comparison of T levels in prostate tissue of rats in each group(ng/mL,±s)

注：與假手術組相比，# P＜0.05，## P＜0.01。

組別假手術組去勢激素組高EAP 組中EAP 組低EAP 組n66666 T 1.01±0.05 0.93±0.65 0.87±0.42 0.88±0.31#0.67±0.03##0.84 0.54 FP

3 討論

CNP 是泌尿外科常見病，臨床病因和發(fā)病機制仍未闡明，常規(guī)西藥治療也存在局限性，因此建立理想合適的、模擬人類CNP 發(fā)病機制及病理狀態(tài)的動物模型大鼠具有很重要的意義。

去勢結合雌激素誘導慢性非細菌性前列腺炎大鼠模型特點，免疫因素CNP 大鼠模型主要包括去勢結合雌激素誘導CNP 模型、自身免疫反應誘導CNP 模型、自發(fā)性CNP 模型等。自發(fā)性CNP 模型選用老年雄性大鼠自發(fā)產生CNP，雖然病理表現(xiàn)與臨床相似，病理特異性良好，穩(wěn)定性良好，但因對大鼠種類和周齡要求嚴格，造模時間長，成本高，個體偏差大，模型難以復制等缺點限制其在實驗研究中的應用，目前相關文獻中選用該模型進行實驗研究十分罕見。去勢結合雌激素方法可致大鼠體內睪酮激素水平失衡，一氧化氮合酶增高，引起前列腺組織局部免疫機能亢進，介導免疫炎癥反應，造成前列腺組織細胞損傷，形成CNP，較自發(fā)性CNP 模型造模方法簡單、造模成本低，且病理變化不劣于CNP 模型，此外在模型持續(xù)時間、穩(wěn)定性方面也具有優(yōu)良特性。該方法的主要缺點在于是該模型產生原理尚有商榷之處，是單純雄激素剝奪和雌激素治療、亦或是自發(fā)性或基因型多因素結合促使產生炎癥并不清楚；并且此模型嚴重影響大鼠體內激素水平，大鼠經(jīng)過去勢，理論上睪酮急劇下降，但是否因此體內產生負反饋作用仍未可知，因此有激素水平評估或性功能檢測要求時，該類動物模型并不適合［9］。本研究去勢結合雌激素誘導CNP 大鼠模型發(fā)現(xiàn)，去勢激素組大鼠T 與假手術組相較雖然有所下降，但未見統(tǒng)計學意義，這可能大鼠體內腎上腺彌補部分功能有關。

自身免疫反應誘導慢性非細菌性前列腺炎大鼠模型特點，通過純化前列腺蛋白刺激誘導CNP 是制備CNP 大鼠模型的常用方法，原理為同種別雄性附性腺勻漿液可誘發(fā)大鼠產生自身免疫反應，從而選擇性地誘導細胞免疫及前列腺間隙單個核細胞浸潤，形成CNP。此類造模方法操作簡便，模型維持時間與去勢結合雌激素方法相當，但較為繁瑣的是前期需搜取大鼠前列腺制備蛋白勻漿。目前大多文獻對蛋白勻漿液濃度以及注射時間的選擇，尚未形成統(tǒng)一共識，盡管在相關規(guī)范草案中推薦選用20 mg/mL［7］，連續(xù)注射45 d 的方法制備CNP 大鼠模型，但并未指出這一推薦的具體依據(jù)。Galmarini等［10］采用大鼠雄性副腺提取物配制成15 mg/mL 的蛋白勻漿液和完全弗氏佐劑等比配成1 mL 于 0，30和 45 d 對 Wistar 大鼠進行多點注射，每7 d 對大鼠細胞免疫反應動力學進行研究，發(fā)現(xiàn)所有大鼠在第35、42、49 天時靶器官出現(xiàn)明顯的組織學改變，前列腺及附腺產生炎癥反應，小血管周圍存在單核細胞浸潤。周曉輝等［11］在此方法上進一步探索，采用第0 天和30 天多點注射的方法，發(fā)現(xiàn)注射蛋白勻漿液為 15 mg/mL 時大鼠可在45 d 后形成 CNP 模型，而濃度為 5 mg/mL、10 mg/mL 時均未出現(xiàn)明顯病理改變和炎癥反應。宋國宏等［12］選用20、40、60 和80 mg/mL 的蛋白勻漿液研究濃度與大鼠模型成功率的量效關系，各組分別第0 天和第30 天多點皮下注射 1 次，結果顯示蛋白勻漿液濃度40、60 mg/mL兩組造模 45 d 后能產生較好炎癥反應且保持穩(wěn)定。綜上而言，目前常用大鼠前列腺蛋白勻漿液濃度有15、40、60 mg/mL 可供選擇，和完全弗氏佐劑1∶1 配比成1 mL 后多點注射，注射間隔時間少到1 d 1 次、注射45 次，長至15 d 1 次、注射2～3 次；SD 大鼠或Wistar 大鼠均可形成EAP 模型。本研究采40、20、10 mg/mL 三種濃度構建大鼠CNP 模型，造模后可見三組免疫球蛋白指標未見明顯變化；與假手術組相比，10 mg/mL 組炎癥因子指標IL-1β、TNF-α、CRP、IL-10 明顯改變，20 mg/mL 組病理變化更為明顯。

兩種模型在造模過程中均出現(xiàn)進食及飲水量較假手術組減少，體質量降低，去勢激素組前列腺指數(shù)顯著性下降。其中去勢激素組模型死亡2 只，考慮大鼠可能對規(guī)定麻醉劑量不耐受而死亡；高EAP 組死亡2 只，可能與傷口感染、大鼠同類撕咬有關。

兩種模型病理均有不同程度改變，其中去勢激素組前列腺指數(shù)腺體結構破壞、腺腔彌漫性分布炎性細胞，變化最為明顯；高、中、低EAP 組病理變化各有優(yōu)劣，中EAP 組大鼠腺體結構破壞、炎性細胞浸潤較多，3 組較假手術組有明顯改變，但仍遜于去勢激素組。兩種模型比較，去勢激素組造模更符合CNP 的病理變化，炎性細胞浸潤較高、中、低EAP 3組均明顯。

前列腺組織炎癥病理評分以去勢激素組上升變化最為明顯，相較于假手術組和自身免疫組，去勢激素組炎性細胞、成纖維細胞、腺腔大小、腺腔內分泌物均可見明顯異常；相較假手術組，高、中、低EAP 組未見顯著差異；高、中、低EAP 組組間差異亦未有統(tǒng)計學意義。

血清免疫球蛋白IgA［13］、IgG［14］、IgM［15］是檢測大鼠是否產生免疫反應的重要指標。IgA 分布于機體黏膜局部，是抗感染免疫的第一防線；IgG 能夠激活補體、吞噬病菌、中和毒素，是感染免疫的主要力量，并且能在體內維持較長時間；IgM 是機體受感染的標志物，受到抗原刺激后會第一時間激活免疫應答反應，在早期機體免疫防御中意義重大，因此血清免疫球蛋白水平高低也提示CNP 免疫反應的強弱。本研究發(fā)現(xiàn)去勢激素組和高、中、低EAP 組大鼠IgA、IgG、IgM 水平較假手術組均有不同程度上升，其中以去勢激素組大鼠變化最為明顯，差異均具有顯著意義（P＜0.05）。

促炎性細胞因子包括IL-1β［16］、TNF-α［17］、CRP［18］等，在炎癥中起到促進作用，加速細胞間黏附因子表達、增加前列腺素，造成前列腺組織局部損傷；抗炎性細胞因子IL-10 可強烈抑制單核巨噬細胞，減少炎癥介質產生，達到修復組織的功能［19］。本研究中相較假手術組，低EAP 組大鼠IL-1β、IL-10、TNF-α、CRP 均顯著變化，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），去勢激素組未見明顯差異（P＞0.05）。

雄激素對前列腺正常發(fā)育起主導作用，具有抑制體液免疫的作用，當雄激素含量水平降低，便可誘發(fā)自身免疫反應的發(fā)生［20］。本研究中相較假手術組，中、低EAP 組大鼠T 水平均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），去勢激素組大鼠T 水平亦有所下降，但未見明顯差異（P＞0.05）。

綜上所述，去勢結合雌激素誘導法和自身免疫反應誘導法均可成功構建CNP 模型。一般情況方面去勢激素組前列腺指數(shù)明顯下降；病理方面，去勢激素組可導致明顯的腺體破壞、間質水腫，前列腺組織炎性細胞浸潤十分明顯，更符合CNP 的病理變化；免疫指標中，去勢激素組大鼠優(yōu)于高、中、低EAP 組；在炎癥因子指標中及性激素指標中，低EAP 組（10 mg/mL）大鼠明顯優(yōu)于其他各組變化。根據(jù)制備草案計算權重［7］，可得去勢激素組CNP 模型總積分為0.81，高、中、低EAP 組分別為0.62、0.73、0.67分，根據(jù)本研究結果，一般情況下，去勢結合雌激素誘導法造模是兩者之間更為合適的一種方法。具體而言，去勢結合雌激素誘導法更適合研究CNP 病理及免疫應答反應變化，更適用于研究CNP 長期改變；而對于研究CNP炎癥因子指標及性激素指標，10 mg/mL 的前列腺蛋白勻漿液是制備大鼠CNP 更為合適的理想濃度，更適用于研究CNP 早期炎癥指標變化。

作者貢獻度說明：

唐益文、王雄：負責造模實驗、數(shù)據(jù)整理、統(tǒng)計及文章書寫；周艷艷、陳豪特、張澤家、王忠：協(xié)助實驗進行以及核對實驗數(shù)據(jù)；高慶和、劉建剛：負責理論指導、審閱文章；高瞻：工作支持，提供經(jīng)費。

所有作者聲明無利益沖突關系。