李佳莘 黎玲 黃藝峰 刁勇

摘要：

重組腺相關(guān)病毒（rAAV）基因藥物在臨床應(yīng)用過程中長(zhǎng)期療效不確定，甚至存在安全性風(fēng)險(xiǎn)，是制約其廣泛應(yīng)用的主要障礙.對(duì)現(xiàn)有rAAV基因藥物臨床前評(píng)價(jià)方法進(jìn)行分析和梳理.結(jié)果表明：僅進(jìn)行藥效學(xué)評(píng)價(jià)不能揭示rAAV轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞和分子機(jī)制，而基于轉(zhuǎn)導(dǎo)過程分析的物理轉(zhuǎn)導(dǎo)與功能轉(zhuǎn)導(dǎo)評(píng)價(jià)存在結(jié)果不一致，不能反映rAAV轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞異質(zhì)性和靶細(xì)胞的空間分布特征等問題，難以準(zhǔn)確預(yù)測(cè)rAAV基因藥物的臨床療效和安全性，需要從單分子、單細(xì)胞水平開展rAAV載體胞內(nèi)命運(yùn)評(píng)價(jià)的新方法，以切實(shí)保障新型rAAV基因藥物的臨床有效性和安全性.

關(guān)鍵詞： 基因治療； 臨床前評(píng)價(jià)； 胞內(nèi)命運(yùn)； 重組腺相關(guān)病毒

中圖分類號(hào)： R 394文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A ??文章編號(hào)： 1000-5013（2023）04-0421-06

Assessment and Prospects of Preclinical Evaluation Methods of Recombinant Adeno-Associated Virus Gene Medicine

LI Jiashen1， LI Ling1， HUANG Yifeng2， DIAO Yong1

（1. School of Medicine， Huaqiao University， Quanzhou 362021， China；

2. Haixia Hospital Affiliated to Huaqiao University， Quanzhou 362000， China）

Abstract： Long-term efficacy uncertainty and safety risks of recombinant adeno-associated virus （rAAV） gene medicine in clinical application are the main obstacles restricting their wide applications. The current preclinical evaluation methods for rAAV gene medicine are analyzed and carded. The results show that pharmacodynamic evaluation alone cannot reveal the cellular and molecular mechanisms of rAAV transduction， while physical and functional transduction evaluations based on transduction process analysis have inconsistent results and cannot reveal the cellular heterogeneity and spatial distribution characteristics of target cell of rAAV transduction， making it difficult to accurately predict the clinical efficacy and safety of rAAV gene medicine. It is necessary to construct a new method for evaluating intracellular fate of rAAV vectors at single-molecule and single-cell level to effectively ensure the clinical efficacy and safety of novel rAAV gene medicine.

Keywords： gene therapy； preclinical evaluation； intracellular fate； recombinant adeno-associated virus

基因藥物是在基因水平進(jìn)行疾病的預(yù)防或治療的藥物.基因藥物需要采用適當(dāng)?shù)幕蜻f送載體，將靶基因?qū)胩囟?xì)胞內(nèi)，以糾正因基因缺陷和異常引起的疾?。?］，理論上具有“一次治療、終身治愈”的優(yōu)勢(shì)，已經(jīng)成為生物醫(yī)藥領(lǐng)域研發(fā)的熱點(diǎn)［2-3］.自歐盟和美國(guó)食品藥品管理局（FDA）相繼批準(zhǔn)6種以重組腺相關(guān)病毒（rAAV）為載體的基因藥物以來，rAAV基因藥物在飽受挫折后，終于進(jìn)入高速發(fā)展的新時(shí)代［4］.特別是用于治療脊髓性肌萎縮癥的Zolgensma，單次應(yīng)用就可將患兒的2歲存活率從8%提高到100%［5］，標(biāo)志著rAAV基因藥物的療效實(shí)現(xiàn)了革命性突破.FDA預(yù)測(cè)，自2025年起，每年將有10～20項(xiàng)基因藥物被批準(zhǔn)上市，基因藥物的全球市場(chǎng)規(guī)模將從2017年的10億美元增長(zhǎng)到2024年的440億美元.在如此樂觀的市場(chǎng)預(yù)期刺激下，輝瑞、諾華、強(qiáng)生等世界制藥巨頭紛紛布局基因治療.我國(guó)也加強(qiáng)了rAAV基因藥物的研發(fā)，迄今已有21項(xiàng)rAAV基因藥物申請(qǐng)臨床研究，3項(xiàng)進(jìn)入三期臨床.

然而，維持rAAV基因藥物的長(zhǎng)期療效，避免毒副反應(yīng)，仍然是困擾該領(lǐng)域研究人員的最大難題［6］.對(duì)治療先天性黑朦病的Luxturna的長(zhǎng)期隨訪發(fā)現(xiàn)，患者視覺功能在治療后1～3年達(dá)到峰值，之后有所下降，一些受試者甚至回到了治療前狀態(tài)［7］.在歐洲獲得附條件上市批準(zhǔn)的A型血友病基因藥物Roctavian遲遲沒有得到FDA批準(zhǔn)，很大的原因在于其長(zhǎng)期臨床療效仍存在不確定性［8］.雖然rAAV被公認(rèn)為是最安全的基因治療載體，但近年來接連發(fā)生的由rAAV基因藥物引起的患者死亡事件［9-10］，再次敲響了用藥安全的警鐘.臨床研究表明，目前應(yīng)用于基因治療的所有rAAV載體均存在不同程度的安全性和有效性缺陷.而現(xiàn)有的rAAV載體臨床前評(píng)價(jià)體系尚不能準(zhǔn)確預(yù)估其臨床有效性和安全性.因此，迫切需要?jiǎng)?chuàng)建一種新型臨床前評(píng)價(jià)體系，以精準(zhǔn)評(píng)估rAAV載體的臨床表現(xiàn).因此，本文對(duì)現(xiàn)有rAAV臨床前評(píng)價(jià)體系的優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行評(píng)價(jià)，并就未來評(píng)價(jià)體系的建立提出建議和展望.

1 rAAV基因藥物的結(jié)構(gòu)及轉(zhuǎn)導(dǎo)過程

rAAV基因藥物的結(jié)構(gòu)（圖1）非常簡(jiǎn)單，其外部為由60個(gè)腺相關(guān)病毒（AAV）衣殼蛋白形成的病毒衣殼，內(nèi)部則是可表達(dá)目的基因的rAAV基因組.在rAAV基因組中，兩端長(zhǎng)度為145堿基的反向末端重復(fù)序列（ITR）是唯一來自野生AAV基因組的序列，其余部分都是與轉(zhuǎn)基因表達(dá)相關(guān)的序列，如啟動(dòng)子和polyA（pA）尾，有時(shí)還含有基因表達(dá)調(diào)控序列等.

rAAV基因藥物的結(jié)構(gòu)元件，無論是衣殼還是基因組，都會(huì)影響其藥效和毒性.在臨床研究之前，一般是利用特定的細(xì)胞和動(dòng)物模型，對(duì)候選載體進(jìn)行臨床前評(píng)價(jià)，即藥效學(xué)評(píng)價(jià).rAAV基因藥物臨床前評(píng)價(jià)體系，如圖2所示.臨床研究表明，在用藥劑量相當(dāng)?shù)那闆r下，目前所有rAAV載體在人體內(nèi)的轉(zhuǎn)基因表達(dá)水平都遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于臨床前研究結(jié)果［11］.然而，為增加療效而提高用藥劑量又會(huì)引起嚴(yán)重的免疫毒性反應(yīng)［12］.現(xiàn)有臨床前評(píng)價(jià)體系尚不能準(zhǔn)確評(píng)估rAAV載體的臨床行為.

rAAV基因藥物的藥效依賴于載體的高效轉(zhuǎn)導(dǎo).rAAV載體的轉(zhuǎn)導(dǎo)是一個(gè)多步驟共同參與的過程，除入胞外，還包括胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、入核、DNA雙鏈轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)錄、翻譯等.Westhaus等［13］首先以“物理轉(zhuǎn)導(dǎo)”的概念描述rAAV載體的入胞、胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)及入核等步驟，采用其攜帶的基因組DNA進(jìn)行表征，而以“功能轉(zhuǎn)導(dǎo)”描述其轉(zhuǎn)錄、翻譯等過程，并采用其表達(dá)的mRNA和蛋白進(jìn)行表征.

2 通過解析轉(zhuǎn)導(dǎo)過程進(jìn)行rAAV載體的臨床前評(píng)價(jià)

rAAV載體轉(zhuǎn)導(dǎo)的第一步是與靶細(xì)胞膜上特定受體結(jié)合后入胞.學(xué)界一直將rAAV載體的入胞作為限制其轉(zhuǎn)導(dǎo)效率及細(xì)胞靶向的決定性因素，大量的研究集中在AAV衣殼結(jié)構(gòu)的改造［6］，以提高其轉(zhuǎn)導(dǎo)效率或改變其轉(zhuǎn)導(dǎo)的組織（細(xì)胞）專屬性.

早在2007年，Wang等［14］就發(fā)現(xiàn)rAAV載體的入胞效率并不低，關(guān)鍵在于入胞后載體基因組的雙鏈轉(zhuǎn)化及雙鏈DNA（dsDNA）的胞內(nèi)穩(wěn)定性.與野生型AAV一樣，常規(guī)rAAV載體包裝的基因組也是單鏈DNA（ssDNA），必須在細(xì)胞核內(nèi)經(jīng)歷雙鏈轉(zhuǎn)化才具備轉(zhuǎn)錄活性.在細(xì)胞核內(nèi)脫去AAV衣殼的游離ssDNA非常不穩(wěn)定，必須迅速形成dsDNA.線性的dsDNA穩(wěn)定性仍然較差，只可以作為轉(zhuǎn)基因瞬時(shí)表達(dá)的模板.如果要持久表達(dá)轉(zhuǎn)基因，還需要形成可抵御核酸酶降解的環(huán)狀dsDNA結(jié)構(gòu).Lang等［15］研究發(fā)現(xiàn)，rAAV載體以很低的劑量靜注給藥后，就可以進(jìn)入幾乎所有小鼠肝臟細(xì)胞，傳統(tǒng)的細(xì)胞和動(dòng)物評(píng)價(jià)方法遠(yuǎn)遠(yuǎn)低估了rAAV載體的入胞效率.

2.1 基于物理轉(zhuǎn)導(dǎo)的評(píng)價(jià)方法

基于物理轉(zhuǎn)導(dǎo)的評(píng)價(jià)方法的指導(dǎo)思想如下：高效的物理轉(zhuǎn)導(dǎo)是rAAV載體實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因表達(dá)的前提，在多種載體共同參與的競(jìng)爭(zhēng)條件下，對(duì)特定細(xì)胞物理轉(zhuǎn)導(dǎo)效率最高的為最佳靶向載體.Cre是一種位點(diǎn)特異性的DNA重組酶，能特異識(shí)別基因組中的LoxP位點(diǎn)，介導(dǎo)LoxP位點(diǎn)間的序列重組或刪除.基于Cre重組的AAV靶向進(jìn)化（CREATE）平臺(tái)就是基于Cre-LoxP重組技術(shù)的rAAV載體評(píng)價(jià)體系［16］（圖2），采用Cre轉(zhuǎn)基因小鼠直接進(jìn)行體內(nèi)評(píng)價(jià).Cre僅在該模型動(dòng)物的特定類型細(xì)胞中表達(dá)，可精準(zhǔn)體內(nèi)定位靶細(xì)胞.當(dāng)基因組中含有Cre/LoxP位點(diǎn)的rAAV載體物理轉(zhuǎn)導(dǎo)Cre陽性的細(xì)胞后，其相應(yīng)基因組序列發(fā)生反轉(zhuǎn)重組，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR），就可以檢出靶向轉(zhuǎn)導(dǎo)特定細(xì)胞的rAAV載體.Hillestad等［17］采用CREATE平臺(tái)對(duì)常用的rAAV1，rAAV8和rAAV9載體的體內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)行為進(jìn)行評(píng)價(jià)，證實(shí)rAAV8和rAAV9載體的肝靶向轉(zhuǎn)導(dǎo)能力優(yōu)于rAAV1，與基于細(xì)胞和動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)體系結(jié)果一致.同時(shí)發(fā)現(xiàn)，隨著給藥劑量增加，rAAV8和rAAV9載體的脫靶轉(zhuǎn)導(dǎo)現(xiàn)象越來越明顯，說明CREATE平臺(tái)的細(xì)胞分辨率顯著提高，更適合細(xì)胞水平的篩選和評(píng)價(jià).采用CREATE平臺(tái)對(duì)基于rAAV9改造的候選載體進(jìn)行評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)AAV-PHP.B載體轉(zhuǎn)導(dǎo)中樞神經(jīng)細(xì)胞的效率比原rAAV9提高了40倍，且主要局限于星狀膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元［16］.在AAV-PHP.B基礎(chǔ)上繼續(xù)進(jìn)行改造和篩選，又發(fā)現(xiàn)了靶向轉(zhuǎn)導(dǎo)皮層神經(jīng)元和紋狀體神經(jīng)元的AAV-PHP.eB載體，以及靶向轉(zhuǎn)導(dǎo)外周背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元的AAV-PHP.S載體［18］，為今后中樞神經(jīng)系統(tǒng)的精準(zhǔn)基因治療提供了優(yōu)化載體.

2.2 基于功能轉(zhuǎn)導(dǎo)的評(píng)價(jià)方法

物理轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高只能說明該載體基因組可以順利完成胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和入核等過程，不能說明轉(zhuǎn)基因表達(dá)效率的高低.研究表明，蛋白酶體抑制劑可以有效促進(jìn)rAAV載體的胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)［19］，在蛋白酶體抑制劑的作用下，胞內(nèi)rAAV2載體DNA的數(shù)量增加了4～7倍，但轉(zhuǎn)基因表達(dá)效率卻提高了36～105倍［20］，說明物理轉(zhuǎn)導(dǎo)與功能轉(zhuǎn)導(dǎo)的效率差距甚大，物理轉(zhuǎn)導(dǎo)不能準(zhǔn)確反映轉(zhuǎn)錄與翻譯等關(guān)鍵步驟的行為.也有研究發(fā)現(xiàn)，有些rAAV載體雖然物理轉(zhuǎn)導(dǎo)效率類似，但轉(zhuǎn)基因表達(dá)效率卻迥異，甚至出現(xiàn)物理轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高但轉(zhuǎn)基因表達(dá)水平低的現(xiàn)象［21］，提示根據(jù)功能轉(zhuǎn)導(dǎo)的評(píng)價(jià)體系可更為客觀地表征其轉(zhuǎn)導(dǎo)行為.

Tabebordbar等［22］設(shè)計(jì)的利用轉(zhuǎn)基因 RNA 體內(nèi)表達(dá)的 AAV 衣殼定向進(jìn)化（DELIVER）策略，采用功能轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)行rAAV載體的評(píng)價(jià)（圖2）.在候選rAAV載體基因組中插入條碼序列（BC）以便后期身份辨識(shí)，動(dòng)物用藥后，測(cè)定相關(guān)組織或細(xì)胞中各載體對(duì)應(yīng)的mRNA的水平，就可以了解相應(yīng)載體的功能轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，與流式分析技術(shù)結(jié)合，還可以分析載體的細(xì)胞靶向轉(zhuǎn)導(dǎo)特性.利用該策略篩選得到的MyoAAV載體，不僅對(duì)骨骼肌和心臟組織具有靶向轉(zhuǎn)導(dǎo)特性，而且顯著降低了對(duì)肝臟的轉(zhuǎn)導(dǎo)能力.研究還發(fā)現(xiàn)，采用從人巨細(xì)胞病毒中發(fā)現(xiàn)的通用啟動(dòng)子CMV啟動(dòng)子時(shí)，rAAV載體的物理轉(zhuǎn)導(dǎo)與功能轉(zhuǎn)導(dǎo)之間并不存在線性相關(guān)性［22］，進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)了僅基于物理轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)行載體評(píng)價(jià)的缺陷.

對(duì)rAAV載體的免疫毒性研究發(fā)現(xiàn)，除衣殼蛋白外，其基因組DNA構(gòu)成也可以誘導(dǎo)宿主細(xì)胞天然免疫反應(yīng)［23］.血友病基因治療臨床研究已經(jīng)證實(shí)，rAAV基因組中的CpG基序與免疫毒性存在相關(guān)性［24］.因此，在保證功能轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的前提下，盡量降低物理轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的比率應(yīng)當(dāng)作為rAAV載體的優(yōu)化條件之一.

2.3 物理和功能轉(zhuǎn)導(dǎo)相結(jié)合的評(píng)價(jià)體系

近期研究發(fā)現(xiàn)，不同組織/細(xì)胞中表達(dá)的tRNA種類和水平也存在顯著差異，意味著同一DNA模板在不同組織/細(xì)胞中存在轉(zhuǎn)錄效率的差異，基因組DNA與所表達(dá)的mRNA之間未必存在相關(guān)性［22］.這一發(fā)現(xiàn)引起研究人員對(duì)rAAV載體評(píng)價(jià)策略的反思，無論是物理轉(zhuǎn)導(dǎo)還是功能轉(zhuǎn)導(dǎo)，都難以單獨(dú)作為最佳載體的判斷依據(jù)［25］.

在rAAV載體的轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中，物理轉(zhuǎn)導(dǎo)和功能轉(zhuǎn)導(dǎo)既相互區(qū)分，又前后連貫.基因組DNA對(duì)免疫毒性的誘導(dǎo)作用，提醒著不能忽視其物理轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的評(píng)價(jià)［26］.為了全面評(píng)估rAAV載體的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率與毒性風(fēng)險(xiǎn)，Westhaus等［13］提出同時(shí)評(píng)價(jià)物理轉(zhuǎn)導(dǎo)和功能轉(zhuǎn)導(dǎo)的新方法（圖2）.Cabanes-Creus等［27］采用該方法，利用人肝嵌合小鼠，從rAAV候選文庫中成功優(yōu)選出對(duì)人肝細(xì)胞具有靶向轉(zhuǎn)導(dǎo)作用的新型載體AAV-SYD，并揭示了其衣殼蛋白序列對(duì)物理轉(zhuǎn)導(dǎo)和功能轉(zhuǎn)導(dǎo)性能的貢獻(xiàn).

通過物理轉(zhuǎn)導(dǎo)與功能轉(zhuǎn)導(dǎo)的綜合評(píng)價(jià)，可從細(xì)胞水平揭示rAAV載體的胞內(nèi)命運(yùn)，有助于篩選轉(zhuǎn)基因表達(dá)效率高且毒副反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)小的載體.但該方法難以揭示靶細(xì)胞在體內(nèi)的空間分布信息及rAAV轉(zhuǎn)導(dǎo)過程的細(xì)胞異質(zhì)性現(xiàn)象.

3 單細(xì)胞、單分子水平評(píng)價(jià)rAAV的轉(zhuǎn)導(dǎo)特性

3.1 單分子水平考察rAAV載體的胞內(nèi)轉(zhuǎn)化

因rAAV載體發(fā)生染色體整合的概率很低，學(xué)界普遍認(rèn)為，rAAV載體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因長(zhǎng)期表達(dá)依賴于以附加體（episome）形式存在的環(huán)狀dsDNA.基因組以dsDNA存在的自身互補(bǔ)型rAAV載體，在細(xì)胞內(nèi)無需第二鏈合成即可表達(dá)轉(zhuǎn)基因，但其要實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期表達(dá)，也需要環(huán)狀dsDNA的形成.因此，在單分子水平考察rAAV載體的胞內(nèi)轉(zhuǎn)化過程，并揭示制約二鏈合成、DNA環(huán)化的載體或細(xì)胞因素，是對(duì)現(xiàn)有載體進(jìn)行優(yōu)化改造的可行思路.基于擴(kuò)增的單分子熒光原位雜交技術(shù)［28］為在單分子水平研究rAAV載體DNA的胞內(nèi)轉(zhuǎn)化提供了可能.

3.2 單細(xì)胞水平考察rAAV載體的空間轉(zhuǎn)導(dǎo)特性

體內(nèi)器官均具有鮮明的細(xì)胞空間異質(zhì)性特征，如肝臟內(nèi)肝細(xì)胞、肝竇內(nèi)皮細(xì)胞（LSEC）等各類細(xì)胞的空間分布直接影響其功能［29］.LSEC和肝細(xì)胞分別是第八、九因子的天然生產(chǎn)細(xì)胞，這兩種因子表達(dá)異常會(huì)分別引起甲型或乙型血友病.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在肝細(xì)胞中異位表達(dá)第八因子雖然可以緩解甲型血友病癥狀，但也會(huì)誘導(dǎo)免疫應(yīng)激［30］.以LSEC為靶細(xì)胞開展的基因治療動(dòng)物研究，既可以實(shí)現(xiàn)第八因子的長(zhǎng)期表達(dá)，又可避免免疫反應(yīng)的發(fā)生［31］.因此，采用空間原位單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)［32］，在細(xì)胞水平精準(zhǔn)評(píng)價(jià)rAAV載體的體內(nèi)空間轉(zhuǎn)導(dǎo)特性，對(duì)于提高其細(xì)胞靶向轉(zhuǎn)導(dǎo)、克服其免疫毒性具有重要意義.

4 結(jié)論

目前，已批準(zhǔn)上市的6種rAAV基因藥物使用的載體均來自天然AAV血清型，具體為AAV1，AAV2，AAV5和AAV9，其選擇依據(jù)均基于傳統(tǒng)的藥效學(xué)評(píng)價(jià).rAAV載體篩選及評(píng)價(jià)體系，如表1所示.因AAV本質(zhì)上是病毒而非理想的基因遞送載體，在治療基因的靶向遞送及安全性方面存在天生缺陷，因而需要從其轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞和分子機(jī)制入手進(jìn)行篩選和評(píng)價(jià).通過物理轉(zhuǎn)導(dǎo)和功能轉(zhuǎn)導(dǎo)性能的評(píng)價(jià)，可以準(zhǔn)確預(yù)測(cè)rAAV的靶細(xì)胞及轉(zhuǎn)基因表達(dá)效率，將兩種性能綜合評(píng)估，還有利于進(jìn)一步提升所篩選載體的有效性，降低安全性風(fēng)險(xiǎn)（表1）.從單分子單細(xì)胞水平對(duì)rAAV的胞內(nèi)命運(yùn)進(jìn)行解析，將克服現(xiàn)有技術(shù)存在難以揭示其體內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞及空間異質(zhì)性難題，為新一代rAAV載體的開發(fā)提供評(píng)價(jià)手段.

臨床前評(píng)價(jià)是rAAV基因藥物研發(fā)的關(guān)鍵步驟.既然rAAV被公認(rèn)為是最安全有效且能夠長(zhǎng)期保持轉(zhuǎn)基因表達(dá)的病毒載體［2-3］，進(jìn)入臨床應(yīng)用的理想rAAV載體，就應(yīng)當(dāng)具備在恰當(dāng)?shù)募?xì)胞以恰當(dāng)?shù)乃介L(zhǎng)期表達(dá)轉(zhuǎn)基因的能力，具體應(yīng)具備的特性如下：1） 時(shí)間特性，持續(xù)表達(dá)轉(zhuǎn)基因，“一次治療、終身治愈”；2） 空間特性，在恰當(dāng)?shù)陌屑?xì)胞內(nèi)表達(dá)轉(zhuǎn)基因，既可以有效發(fā)揮活性，又沒有安全隱患；3） 模式特性，rAAV載體的免疫毒性具有劑量依賴性特征，在保證功能轉(zhuǎn)導(dǎo)的前提下盡量降低物理轉(zhuǎn)導(dǎo)，是保持轉(zhuǎn)基因表達(dá)水平適中，又不會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞應(yīng)激及免疫反應(yīng)的最佳模式.綜合應(yīng)用分子生物學(xué)、病毒學(xué)、藥學(xué)等學(xué)科的最新技術(shù)，構(gòu)建精準(zhǔn)可靠的臨床前評(píng)價(jià)體系，將為rAAV基因藥物更有效、更安全、更廣泛的臨床應(yīng)用奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ).

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（責(zé)任編輯：? 黃曉楠 ?英文審校： 劉源崗）

收稿日期： 2023-05-29

通信作者： 刁勇（1967-），男，教授，博士，博士生導(dǎo)師，主要從事基因藥物的研究.E-mail：diaoyong@hqu.edu.cn.

基金項(xiàng)目： 國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81371669， 81271691， 30973591）； 福建省泉州市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2022C 006R）

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