張裕惠，薛 丹，王憭瑤，賈瑞婷，宋朱謹(jǐn)，虞吳敏，朱愛松*

基于數(shù)據(jù)挖掘與德爾菲法的脾氣虛證動物模型評價及用藥特征分析

張?；?, 2, 3，薛 丹1, 2，王憭瑤1, 2，賈瑞婷1, 2，宋朱謹(jǐn)1, 2，虞吳敏1, 2，朱愛松1, 2*

1. 浙江省中醫(yī)“瘀毒”證重點實驗室，浙江 杭州 310053 2. 中醫(yī)“治未病”智慧健康浙江省工程研究中心，浙江 杭州 310053 3. 嘉興市第二醫(yī)院，浙江 嘉興 314000

全面分析脾氣虛證動物模型并明確模型評價指標(biāo)，為該動物模型的規(guī)范化研究提供參考。在中國知網(wǎng)數(shù)據(jù)庫中檢索脾氣虛證動物模型相關(guān)實驗性研究文獻(xiàn)，分別對動物品系、造模方法、取材部位、評價指標(biāo)和用藥特征進(jìn)行數(shù)據(jù)提取及分析。以此為基礎(chǔ)聚焦高頻評價指標(biāo)進(jìn)行德爾菲專家問卷調(diào)查，通過均數(shù)和變異系數(shù)等明確高效能的脾氣虛證動物模型評價指標(biāo)。同時，基于用藥特征分析結(jié)果，通過以方測證進(jìn)一步探討脾氣虛證動物模型的客觀性和科學(xué)性。共納入146篇文獻(xiàn)，動物模型以SD大鼠和雄性占比最高，取材部位依次為小腸、胃和脾臟，飲食失宜和游泳力竭雙因素復(fù)合法是最常用的造模方法。德爾菲專家問卷調(diào)查表明，高效能的脾氣虛證動物模型評價指標(biāo)主要包括表觀指標(biāo)（大便溏泄、神疲乏力、皮毛枯槁無華等）、生化指標(biāo)[胃動素、線粒體三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）水平、-木糖吸收率等] 和其他指標(biāo)（食量減少、體質(zhì)量下降、抓力下降等）。其中75篇文獻(xiàn)報道了有效的治療方藥，最常用的方劑為四君子湯，高頻藥物為白術(shù)、甘草、茯苓、黃芪、黨參和人參等，用藥特征以性溫、味甘、歸脾經(jīng)為主。脾氣虛證動物模型的構(gòu)建主要為SD大鼠，多采用飲食失宜與游泳力竭的雙因素復(fù)合法。綜合表觀指標(biāo)、生化指標(biāo)和其他指標(biāo)的系統(tǒng)性模型評價方法具有科學(xué)性和合理性，將為脾氣虛證動物模型的規(guī)范化提供參考。

脾氣虛證；動物模型；評價指標(biāo)；德爾菲法；用藥特征；四君子湯

證候是證所表現(xiàn)的具有內(nèi)在聯(lián)系的癥狀和體征，是中醫(yī)辨證的結(jié)果和論證的依據(jù)[1]。證候的規(guī)范化是中醫(yī)學(xué)走向現(xiàn)代化、規(guī)范化的基石，而構(gòu)建完善的中醫(yī)證候動物模型是證候規(guī)范化研究的基本方法。脾氣虛證是中醫(yī)基礎(chǔ)證候類型之一，以倦怠乏力、大便溏稀、食欲減退為主要表現(xiàn)[2]，是臨床多種疾病的常見證型[3-5]。目前，關(guān)于脾氣虛證動物模型的研究主要涉及模型制備與評價方法等方面，但仍存在一些問題，如造模方法復(fù)雜多樣，評價指標(biāo)差異大、種類多，脾氣虛、脾虛及氣虛模型的研究常相互混雜，沒有形成系統(tǒng)性的整合，這些問題導(dǎo)致了脾氣虛證實驗研究無法標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化，也阻礙了中醫(yī)證候科學(xué)研究進(jìn)程。

本研究通過數(shù)據(jù)挖掘?qū)ζ馓撟C動物模型的構(gòu)建方法和評價指標(biāo)進(jìn)行全面整理，結(jié)合德爾菲法[6]對評價指標(biāo)進(jìn)行專家意見征詢，構(gòu)建較為系統(tǒng)的脾氣虛證動物模型評價方法。同時，通過以方測證探討脾氣虛證動物模型成功構(gòu)建的客觀性和科學(xué)性。以期為脾氣虛動物模型的建立與評價提供科學(xué)依據(jù)，為中醫(yī)證候動物模型的規(guī)范化研究提供參考。

1 資料與方法

1.1 數(shù)據(jù)來源與處理

1.1.1 文獻(xiàn)檢索與篩選

（1）檢索策略：以“脾氣虛”“動物模型”等為主題詞在中國知網(wǎng)進(jìn)行檢索，時間為2010年1月1日—2022年10月1日。

（2）動物模型文獻(xiàn)篩選：納入標(biāo)準(zhǔn)是1）脾氣虛證動物模型造模成功的實驗研究性文獻(xiàn)；2）同一作者進(jìn)行拆分?jǐn)?shù)據(jù)發(fā)表的文獻(xiàn)最終僅計入1次；3）同一篇文獻(xiàn)中同一指標(biāo)采用不同方法進(jìn)行檢測最終僅計入1次。排除標(biāo)準(zhǔn)是1）會議論文、理論性研究、綜述及資料不全的文獻(xiàn)；2）脾虛證、脾陽虛證及氣虛證等非脾氣虛證或指代性不明的文獻(xiàn)；3）重復(fù)發(fā)表的文獻(xiàn)。

（3）用藥特征文獻(xiàn)篩選：納入標(biāo)準(zhǔn)是1）中藥治療有效改善模型動物脾氣虛證的文獻(xiàn)；2）處方信息完整的文獻(xiàn)。排除標(biāo)準(zhǔn)是1）僅有方名無藥物組成的文獻(xiàn)；2）處方藥物記載不全的文獻(xiàn)；3）無治療措施或非中藥治療手段的文獻(xiàn)。

由2名評價者根據(jù)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)獨立進(jìn)行篩選，閱讀全文，剔除不合格文獻(xiàn)。如出現(xiàn)分歧，由第3名評價者判定，直至意見一致。

1.1.2 數(shù)據(jù)錄入 以實驗動物品系、性別、取材部位、造模成功時間、評價指標(biāo)、處方名、具體用藥及藥物性、味、歸經(jīng)為分類依據(jù)，提取數(shù)據(jù)并錄入Excel表，建立脾氣虛證動物模型數(shù)據(jù)集。

1.1.3 術(shù)語規(guī)范化 參照《中醫(yī)實驗動物模型方法學(xué)》[7]及《實用中醫(yī)證候動物模型學(xué)》[8]規(guī)范模型要素數(shù)據(jù)，如“大便溏泄、便溏、泄瀉”歸為“大便溏泄”。參照《中國藥典》2020年版一部[9]及《中藥學(xué)》[10]規(guī)范中藥名及性、味、歸經(jīng)，如將“生黃芪、炙黃芪、黃芪”歸為“黃芪”，將“微甜”“微甘”歸為“甘”等。

1.2 德爾菲專家問卷調(diào)查

1.2.1 調(diào)查問卷 選取文獻(xiàn)研究中高頻評價指標(biāo)（頻次≥5）構(gòu)建條目池，制定《脾氣虛證動物模型評價指標(biāo)專家意見征詢問卷》[6]，邀請專家根據(jù)重要性進(jìn)行評價。

1.2.2 評價指標(biāo)及量化 通過對評價指標(biāo)進(jìn)行歸納，將其分為定性指標(biāo)和定量指標(biāo)。定性指標(biāo)為表觀指標(biāo)，主要是對動物的外觀、行為狀態(tài)以及排泄物性狀等由主觀觀察得出的定性結(jié)果。定量指標(biāo)分為生化指標(biāo)和其他指標(biāo)，強(qiáng)調(diào)通過客觀化、多維度視角對動物的功能狀態(tài)進(jìn)行評估。生化指標(biāo)是從分子水平檢驗動物的功能狀態(tài)，其他指標(biāo)從動物的體質(zhì)量、食量及運動量等方面進(jìn)行評估。評價指標(biāo)的重要性采用Likert的五尺度評分法[11]，根據(jù)“很不重要、不重要、一般、重要及很重要”分別賦1、2、3、4、5分。

1.3 統(tǒng)計分析

Excel 2021軟件用于統(tǒng)計模型要素及用藥特征條目的頻次與頻率。SPSS 25.0用于統(tǒng)計專家問卷指標(biāo)，包括：1）專家積極系數(shù)，用回收率表示（回收率＝回收份數(shù)/總份數(shù)）；2）專家意見集中程度，以平均數(shù)（X）、滿分率（，滿分頻數(shù)/總頻數(shù)）、等級和（，專家對某項指標(biāo)賦值后的總得分）表示，這些指標(biāo)越高，表明專家的意見越集中；3）專家意見的協(xié)調(diào)程度，以變異系數(shù)（CV，標(biāo)準(zhǔn)差/均值）和肯德爾和諧系數(shù)（）表示，CV越小，提示專家對該指標(biāo)重要性評價的一致性越高[12]；是專家對所有指標(biāo)評價的協(xié)調(diào)程度，其值在0～1，＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義，值越大，協(xié)調(diào)程度越高，德爾菲法的值多在0.5上下波動[13]。將滿足以下條件的指標(biāo)納入脾氣虛證動物模型的評價標(biāo)準(zhǔn)：1）均數(shù)≥3.5；2）等級和≥70；3）CV≤0.3。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)篩選

共檢索出442篇文獻(xiàn)，包括學(xué)術(shù)期刊279篇、學(xué)位論文145篇、會議論文18篇。根據(jù)納排標(biāo)準(zhǔn)篩選后，納入146篇文獻(xiàn)。其中，有75篇文獻(xiàn)中報道了具有改善脾氣虛證較好的方藥，涉及到67個方劑和48味中藥。

2.2 動物模型、造模方法、取材及評價指標(biāo)

2.2.1 動物模型 在脾氣虛證動物模型中，使用頻次最高的動物品系依次為SD大鼠（105篇，71.92%）、Wistar大鼠（25篇，17.12%）、C57BL/6小鼠（8篇，5.48%）。性別以雄性最多（81篇，55.50%），其次為雌雄各半（54篇，37.00%），見表1。

表1 實驗動物品系、性別頻次分布

Table 1 Species and gender frequency distribution of experimental animals

動物品系頻次頻率/%動物性別頻次頻率/% SD大鼠10571.92雄性雌性各半815455.5037.00 Wistar大鼠 2517.12 C57BL/6小鼠 8 5.48雌性11 7.50 昆明種小鼠 4 2.74 Balb/c小鼠 4 2.74

2.2.2 造模方法 有飲食失宜法、游泳力竭法、耗氣破氣法、苦寒瀉下法、情志所傷法、睡眠剝奪法、跑步疲勞法和利血平皮下注射法共8種造模方法。這些造模方法經(jīng)過組合后，使用頻次排序為雙因素復(fù)合法102篇、3因素復(fù)合法31篇、單因素法24篇。其中飲食失宜、游泳力竭的雙因素復(fù)合法（78篇，49.68%）頻次最高。造模時間分布情況中，頻次最高的為造模14～16 d的飲食失宜和游泳力竭復(fù)合法，見表2。

2.2.3 取材部位 小腸頻次最多（37篇，25.70%），其次為胃（27篇，18.80%）和脾臟（23篇，16.00%），見表3。

2.2.4 評價指標(biāo) 經(jīng)統(tǒng)計高頻指標(biāo)共有64個，其中表觀指標(biāo)16個、生化指標(biāo)37個、其他指標(biāo)11個，各類型指標(biāo)排序前8的指標(biāo)分布情況見圖1。由于評價指標(biāo)較多，導(dǎo)致模型評價存在一定的困難，因此，本研究進(jìn)行了德爾菲專家問卷調(diào)查以明確動物模型的高效評價指標(biāo)。

2.3 專家問卷

本次調(diào)查共2輪，共邀請40名中醫(yī)專家參與問卷調(diào)查。涉及華東（上海市、浙江省、江蘇省、福建省、江西?。⑷A北（北京市、天津市、河北省、山西省）、華中（湖北省、湖南省）、東北（遼寧?。?、華南（廣東?。⑽髂希ㄋ拇ㄊ。?、西北（青海省、寧夏回族自治區(qū)）共16個省市，地域分布范圍廣，地域影響小。所有專家均具有高級職稱，且90%的專家學(xué)歷為研究生及以上。2輪問卷全部回收，專家積極系數(shù)為100%。問卷中，各指標(biāo)的均數(shù)、滿分率、等級和及CV見表4。

第1輪問卷表觀指標(biāo)、生化指標(biāo)、其他指標(biāo)的值分別為0.257、0.159和0.247，2為41.149、54.212和44.397。第2輪問卷值分別為0.533、0.345和0.259，2為85.23、117.246和46.668，見表5。2輪專家值均有統(tǒng)計學(xué)意義，第2輪專家值較第1輪有較大提高，表明專家對脾氣虛證動物模型評價指標(biāo)判定條目的認(rèn)同度明顯提高。根據(jù)專家問卷結(jié)果，最終確定脾氣虛證動物模型評價指標(biāo)見表6。

表2 造模方法分布

Table 2 Distribution of modeling methods

單因素法雙因素復(fù)合法3因素復(fù)合法 造模方法造模時間/d頻數(shù)造模方法造模時間/d頻數(shù)造模方法造模時間/d頻數(shù) 苦寒瀉下12～144飲食失宜及游泳力竭14～1662苦寒瀉下、飲食失宜及游泳力竭2112 21321 614～1610 8～9228 428 1 18142 230～35 2 利血平皮下注射9～12330～31 242 1 14～16324 1耗氣破氣、飲食失宜及游泳力竭35 2 7184 1 飲食失宜141飲食失宜及耗氣破氣14 4飲食失宜、睡眠剝奪及跑步疲勞28 1 21142 4 36156 1飲食失宜、游泳力竭及情志所傷21 1 841苦寒瀉下及耗氣破氣30 328 1 耗氣破氣30135 1 451飲食失宜及苦寒瀉下21 2 游泳力竭21112～14 2 30 1 苦寒瀉下及游泳力竭21 1 瀉下傷脾及游泳力竭39 1 耗氣破氣及游泳力竭14 1 21 1 28 1 飲食失宜及睡眠剝奪28 1

表3 取材部位分布

Table 3 Distribution of sampling parts

取材部位頻次頻率/% 小腸3725.70 胃2718.80 脾臟2316.00 胸腺149.70 海馬128.30 心臟117.60 骨骼肌106.90 肝臟106.90

2.4 方藥分析

經(jīng)統(tǒng)計，高頻有效方劑中四君子湯（26次，39%）使用最多，其次為白術(shù)茯苓湯（7次，10%）、補中益氣湯（5次，7%）及香砂六君子湯（5次，7%），其余為自擬方。頻次＞5的藥物共17味，依次為白術(shù)、甘草、茯苓、黃芪、黨參、人參等，見表7。

藥物性味歸經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，溫性藥物占比最高（23次，47.92%），其次為平性（13次，27.08%）、寒性（10次，20.83%）。藥味中，甘味藥占比最多（31次，41.33%），其次為苦性（20次，26.67%）、辛性（18次，24.00%）。歸經(jīng)中，藥物歸脾經(jīng)最多（34次，25.37%），其次為肺經(jīng)（25次，18.66%）、胃經(jīng)（21次，15.67%），歸經(jīng)頻次前6位見圖2。

3 討論

中醫(yī)證候的規(guī)范化研究是中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究的重要內(nèi)容，是揭示中醫(yī)證的本質(zhì)研究的重要途徑?；谖墨I(xiàn)的數(shù)據(jù)挖掘可為證候研究提供數(shù)據(jù)來源，德爾菲專家問卷調(diào)查可提高證候標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)性與指導(dǎo)性，將數(shù)據(jù)挖掘和德爾菲法相結(jié)合，能夠?qū)ζ馓撟C動物模型做出全面、科學(xué)的評價，促進(jìn)中醫(yī)證候的規(guī)范化研究。

圖1 高頻指標(biāo)分布

表4 評價指標(biāo)問卷調(diào)查結(jié)果

Table 4 Questionnaire survey results of evaluation index

指標(biāo)條目第1輪問卷第2輪問卷 `XK/%SCV`XK/%SCV 表觀指標(biāo)大便溏泄4.5565910.154.8585970.08 神疲乏力4.5060900.154.9095980.09 皮毛枯槁無華4.2040840.204.2540850.17 蜷縮扎堆4.0535810.204.4050880.15 形體消瘦4.0030800.214.2040840.18 肛周污穢4.1515830.164.0530810.19 足蹼鼻爪或耳尾色白4.0530810.194.0020800.16 弓背3.7030740.293.4510690.20 瞇眼3.4030680.263.15 0630.12 其他指標(biāo)食量減少4.0535860.104.9090980.06 體質(zhì)量下降或增長緩慢3.7515760.154.5565910.15 抓力下降3.8015800.114.3545870.15 飲水量減少3.5510680.204.3035860.13 游泳力竭時間縮短3.9030850.114.2040840.18 曠場實驗（運動距離、站立次數(shù)等下降）3.8020750.184.1540880.16 脾臟指數(shù)下降3.8020720.184.2035840.17 受激排便率增高3.80 5640.164.4035840.11 體溫不變或輕微下降3.5525740.213.7030830.15 胸腺指數(shù)下降3.5510620.194.20 5740.17 生化指標(biāo)胃動素3.9025780.204.1015820.11 線粒體ATP水平4.0525810.174.0010800.11 D-木糖吸收率3.9020780.183.9515800.13 環(huán)磷酸腺苷4.0530810.193.8510800.15 胃泌素4.0025800.183.8510790.15 線粒體呼吸鏈復(fù)合物（complex Ⅰ～I(xiàn)V）3.9535790.224.0010770.11

續(xù)表4

指標(biāo)條目第1輪問卷第2輪問卷 `XK/%SCV`XK/%SCV 生化指標(biāo)線粒體膜電位3.9525790.194.0010770.14 血清免疫球蛋白A3.7520750.233.75 0750.12 血紅蛋白3.7020740.233.35 5740.18 血管活性腸肽3.5515710.233.50 0720.15 P物質(zhì)3.6015720.233.70 0710.15 酪蛋白裂解酶3.7020740.233.25 0700.14 超氧化物歧化酶3.5515710.233.45 5700.15 生長抑素3.5515710.233.55 0690.14 淋巴細(xì)胞比值3.6020720.253.30 0660.14 炎癥因子（TNFα、IL1β)等3.5525710.283.20 5670.13 丙二醛3.4010680.203.60 0640.14

表5 專家意見協(xié)調(diào)系數(shù)

Table 5 Coordination coefficient of expert opinion

咨詢輪次指標(biāo)分類重要性Wc2P值 第1輪表觀指標(biāo)0.257 41.149＜0.001 生化指標(biāo)0.159 54.212＜0.001 其他指標(biāo)0.247 44.397＜0.001 第2輪表觀指標(biāo)0.533 85.230＜0.001 生化指標(biāo)0.345117.246＜0.001 其他指標(biāo)0.259 46.668＜0.001

表6 脾氣虛證動物模型評價指標(biāo)

Table 6 Evaluation indexes of animal model with spleen qi deficiency syndrome

指標(biāo)分類具體指標(biāo) 表觀指標(biāo)大便溏泄、神疲乏力、皮毛枯槁無華、形體消瘦、蜷縮扎堆、肛周污穢、足蹼鼻爪耳尾色白 生化指標(biāo)胃動素、線粒體ATP水平、D-木糖吸收率、環(huán)磷酸腺苷、胃泌素、線粒體呼吸鏈復(fù)合物（complex Ⅰ～I(xiàn)V）、線粒體膜電、血清免疫球蛋白A、血紅蛋白、血管活性腸肽、P物質(zhì)、酪蛋白裂解酶、超氧化物歧酶 其他指標(biāo)食量減少、體質(zhì)量下降或增長緩慢、抓力下降、飲水量減少、游泳力竭時間縮短、曠場實驗（運動距離、站立次數(shù)等下降）、脾臟指數(shù)下降、體溫不變或輕微下降

前期文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，脾氣虛證動物模型在2010年之前研究力度和學(xué)術(shù)關(guān)注度較低，在近10年出現(xiàn)階梯式增長，得到廣泛關(guān)注，故本研究基于近10年的文獻(xiàn)資料進(jìn)行展開。本研究顯示，在模型動物選擇上，SD大鼠是主要的模型動物。SD大鼠具有皮毛、尾巴和耳朵等部位顏色淡的特點，便于收集脾氣虛證的四診指標(biāo)。目前，脾氣虛證造模方法較多且以中醫(yī)病因造模法為主。中醫(yī)病因造模法是基于中醫(yī)學(xué)病因?qū)W說與發(fā)病理論，模擬導(dǎo)致“證”形成的致病因素并作用于實驗動物，使模型呈現(xiàn)特定的證候特征的造模方法[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，飲食失宜和游泳力竭復(fù)合法最為多見。飲食失宜主要包括饑飽失常和飲食偏嗜。飲食物主要是依賴脾胃的納運作用進(jìn)行消化吸收，過饑、過飽均會損傷脾胃。飲食偏嗜是遵循《素問·生氣通天論》中“味過于酸，肝氣以津，脾氣乃絕”“味過于苦，脾氣不濡，胃氣乃厚”的理論。游泳力竭法是使模型動物負(fù)重后游泳，直至勞倦。《脾胃論·脾胃勝衰論》：“形體勞役則脾病”，勞倦過度會耗傷大量氣血。脾為氣血生化之源，脾氣健旺則氣血生化有源，而勞倦過度易損耗脾氣導(dǎo)致脾氣虧虛。楊關(guān)林等[15]采用飲食失宜和游泳力竭法，損傷大鼠脾胃，造成脾氣虛證。此外，苦寒瀉下、耗氣破氣也是脾氣虛證動物模型常用的方法。《本草經(jīng)疏·五臟六腑虛實門》：“脾虛，忌下、降泄、破氣、苦寒?！笨嗪疄a下、耗氣破氣法可導(dǎo)致脾氣虛損。鄭小偉等[16]采用苦寒瀉下的大黃水煎劑進(jìn)行灌胃，謝磊等[17]則在隔日喂食的基礎(chǔ)上結(jié)合耗氣破氣的小承氣湯進(jìn)行灌胃，均造成了大鼠脾氣虛癥狀。利血平皮下注射是利用利血平的胃腸道不良反應(yīng)，使動物出現(xiàn)消痩、腹瀉、納呆等與脾氣虛證類似的臨床表現(xiàn)。梁雪丹等[18]通過利血平皮下注射導(dǎo)致大鼠出現(xiàn)毛色無澤、便溏，體質(zhì)量、食水量下降等癥狀，成功建立脾氣虛動物模型。此外，情志刺激、睡眠剝奪及跑步疲勞也與脾氣虛證密切相關(guān)。在脾氣虛型亞健康狀態(tài)中，研究人員在飲食失宜與游泳力竭的基礎(chǔ)上結(jié)合情志所傷法，造成脾氣虛模型[19]，睡眠剝奪與飲食失宜及跑步疲勞結(jié)合也可造成模型動物脾氣虛[20]。

表7 藥物使用頻次分布

Table 7 Frequency distribution of herbs use

藥物頻次頻率/%藥物頻次頻率/% 白術(shù)6415.17柴胡143.32 甘草5713.51大棗102.37 茯苓4711.14半夏 92.13 黃芪31 7.35生姜 81.90 黨參26 6.16桂枝 61.42 人參26 6.16丹參 61.42 陳皮20 4.76飴糖 61.42 當(dāng)歸14 3.32白芍 61.42 升麻14 3.32

圖2 藥性、藥味、歸經(jīng)分布圖

在取材部位上本研究發(fā)現(xiàn)脾氣虛證動物模型研究的焦點或所關(guān)聯(lián)的疾病與“小腸、胃、脾臟、胸腺、海馬、心臟、骨骼肌”等相關(guān)，這與中醫(yī)“脾”的生理功能和特性息息相關(guān)。脾主運化，脾氣虧虛則運化水谷的功能障礙，可見腹脹、便溏之癥?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為腸道中的膽囊收縮素（cholecystokinin，CCK）、血管活性腸肽等腦腸肽具有調(diào)節(jié)胃腸道運動的作用[21]，其表達(dá)情況可以反映脾主運化的功能。脾主升，胃主降，脾氣虧虛升而不及，則胃通降失常，研究觀察到脾虛組大鼠的胃排空率低于對照組[22]。脾臟和胸腺是重要的免疫器官，因此脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)常用來評價動物的免疫功能[23]。脾藏意、主思，海馬是學(xué)習(xí)記憶的關(guān)鍵部位，脾氣虛大鼠可見記憶功能下降、海馬神經(jīng)元數(shù)量減少[24]。脾為氣血生化之源，血為水谷之精氣，總統(tǒng)于心而生化于脾。若脾氣虧虛，則生化乏源，氣血衰少，脈道失盈，亦見統(tǒng)攝無權(quán)、行血異常，進(jìn)而導(dǎo)致“脈道不利”，影響心主血脈的功能，最終導(dǎo)致心臟病變，故心臟在脾氣虛證中也受到廣泛關(guān)注。《靈樞·本神》：“脾氣虛則四肢不用”，若脾虛運化失司，肌肉失養(yǎng)，則見肌肉萎縮、四肢無力?；诖?，研究人員發(fā)現(xiàn)脾氣虛大鼠可見肌力減退、肌肉萎縮、腓腸肌線粒體受損、肌細(xì)胞凋亡及炎癥因子浸潤[25]。

在脾氣虛證動物模型中，表觀體征一直是脾氣虛證的常用評價指標(biāo)，但研究人員對表觀體征進(jìn)行評價時往往存在一定的主觀性，缺乏更加科學(xué)化的客觀指標(biāo)的支持。本研究使用德爾菲法科學(xué)評價脾氣虛證評價指標(biāo)，匯聚了眾多專家的意見，以達(dá)成對動物的脾氣虛證診斷共識。結(jié)果顯示，表觀指標(biāo)的專家意見集中程度最高、協(xié)調(diào)性最好，表明表觀指標(biāo)可能是脾氣虛證動物模型主要的評價手段。其中大便溏泄、神疲乏力、皮毛枯槁無華、蜷縮扎堆及形體消瘦等指標(biāo)受到專家的高度認(rèn)可，便溏、神疲乏力、體瘦是臨床脾氣虛患者的癥狀，而皮毛枯槁無華與蜷縮扎堆則是脾氣虛證動物特有的表現(xiàn)[26]。食量減少、體質(zhì)量下降、抓力下降等其他指標(biāo)是脾氣虛患者“食欲減退、肌瘦無力”的臨床表現(xiàn)。生化指標(biāo)分析發(fā)現(xiàn)，脾氣虛不僅與消化吸收功能相關(guān)，還與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)線粒體能量代謝、免疫功能、神經(jīng)內(nèi)分泌、血液質(zhì)量、氧化損傷、炎癥反應(yīng)等息息相關(guān)?；凇捌楹筇熘尽睘闄C(jī)體提供生命活動所必須的能量，與線粒體通過三羧酸循環(huán)產(chǎn)生ATP為細(xì)胞提供能量存在相似性，認(rèn)為線粒體能量代謝障礙與脾氣虛密切相關(guān)[27]，脾氣虛動物會出現(xiàn)ATP水平下降[28]?！鹅`樞·五癃津液別》：“脾為之衛(wèi)”，《脾胃論·脾胃盛衰論》：“內(nèi)傷脾胃，百病由生”，《金匱要略·臟腑經(jīng)絡(luò)先后病脈證第一》：“四季脾旺不受邪”均指出了脾在防病驅(qū)邪方面的重要作用，這與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的免疫功能內(nèi)涵不謀而合。脾氣虛與神經(jīng)系統(tǒng)密切相關(guān)，脾通過“腦-腸軸”，將胃腸道與中樞神經(jīng)系統(tǒng)聯(lián)系起來，調(diào)節(jié)胃腸道運動以及內(nèi)分泌平衡[29]。脾氣虛與血液質(zhì)量密切相關(guān)，《靈樞·決氣》：“中焦受氣取汁，變化而赤，是謂血”，中焦脾胃功能正常，則運化水谷精微上輸心肺，奉心化赤為血，參與血液的生成。脾氣虛與氧化損傷密切相關(guān)，脾氣虛會導(dǎo)致體內(nèi)自由基代謝的紊亂，導(dǎo)致抗氧化酶清除自由基的活性降低、脂質(zhì)過氧化損傷增強(qiáng)，應(yīng)用具有健脾益氣功能的四君子湯治療可以起到抗氧化的作用[30]。此外，研究發(fā)現(xiàn)脾氣虛大鼠的手術(shù)傷口炎癥反應(yīng)失調(diào)，中性粒細(xì)胞散在分布，提示炎癥反應(yīng)與脾的功能也是密切相關(guān)的[31]。

“以方測證”是中醫(yī)學(xué)認(rèn)識病證的重要方法，其通過處方的藥物構(gòu)成與功效，并結(jié)合用藥后的反應(yīng)，可推測研究對象的所屬證型[32]，故選擇正確的處方是驗證模型準(zhǔn)確性的關(guān)鍵。本研究對脾氣虛證動物模型的有效方藥進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，經(jīng)典補氣方劑“四君子湯”是目前使用最多的方劑。白術(shù)、甘草、茯苓、黃芪、黨參等是有效的高頻藥物，其功效多以益氣健脾為主，可以顯著改善模型動物的脾氣虛癥狀。藥物藥性以溫、平為主，藥味以甘、苦、辛為主，藥物歸經(jīng)以脾經(jīng)、肺經(jīng)、胃經(jīng)為主。甘味藥能補益，苦味藥能燥濕，辛味藥能發(fā)散、行氣，能發(fā)揮補脾、醒脾并防止?jié)窭⒌淖饔?。入脾、胃?jīng)藥物可直達(dá)病變臟腑以調(diào)理脾胃功能，入肺經(jīng)藥物則可通過“母子關(guān)系”達(dá)到肺強(qiáng)脾健的效果?？梢?，方藥分析結(jié)果與模型病機(jī)相吻合。

綜上所述，中醫(yī)的“脾”不僅僅與消化吸收有關(guān)，而是一個涵蓋現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中消化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、能量代謝系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、造血系統(tǒng)、運動系統(tǒng)、氧化系統(tǒng)的多元系統(tǒng)單位。脾氣虛證動物模型的構(gòu)建主要動物為SD大鼠，多采用飲食失宜與游泳力竭的雙因素復(fù)合法。模型的評價應(yīng)更加科學(xué)、全面地反映消化吸收、運動及免疫功能的表觀指標(biāo)和其他指標(biāo)，與其量化的胃腸激素、能量代謝、免疫、血液質(zhì)量、氧化損傷及炎癥因子等微觀生化指標(biāo)相結(jié)合。模型的辨證應(yīng)當(dāng)選擇與其病機(jī)相符的方藥，可選擇藥性溫、平，藥味以甘、苦、辛為主，歸脾、胃、肺經(jīng)的藥物。本研究通過對脾氣虛證動物模型的建立、評價及用藥特征的全面分析，以提高脾氣虛證實驗研究的準(zhǔn)確性、科學(xué)性，從而為中醫(yī)證候的規(guī)范化研究提供參考。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Evaluation of animal model with spleendeficiency syndrome and analysis of medication characteristics based on data mining and Delphi method

ZHANG Yu-hui1, 2, 3, XUE Dan1, 2, WANG Liao-yao1, 2, JIA Rui-ting1, 2, SONG Zhu-jin1, 2, YU Wu-min1, 2, ZHU Ai-song1, 2

1. Zhejiang Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine for “Blood-Stasis-Yoxin” Syndrome, Hangzhou 310053, China 2. Zhejiang Engineering Research Center of Traditional Chinese Medicine for Preventive Disease, Hangzhou 310053, China 3. The Second Affiliated Hospital of Jiaxing University, Jiaxing 314000, China

To comprehensively analyze the animal model with spleendeficiency syndrome and clarify its evaluation index, so as to provide reference for the standardization research of the animal model.Experimental studies related to the animal model with spleendeficiency syndrome was retrieved from the database of China National Knowledge Infrastructure, and the data of animal species, modeling method, sampling parts, evaluation indexes and medication characteristics were extracted and analyzed. On this basis, the Delphi expert questionnaire was constructed focusing on the high-frequency evaluation indicators, and the evaluation indicators of the animal model with spleendeficiency syndrome were defined by means of the mean number and coefficient of variation. At the same time, based on the analysis results of medication characteristics, the objectivity and scientific nature of the animal model of spleendeficiency syndrome was further confirmed by the prescription analysis.A total of 146 studies were included, SD rats and male rats accounted for the highest proportion. The sampling parts were small intestine, stomach and spleen in order. The two-factor complex method of improper diet and swimming exhaustion was the most commonly used method for modeling. According to the results of Delphi expert questionnaires, the highly effective evaluation indexes of animal model with spleendeficiency syndrome mainly include apparent indexes (loose stool, fatigue, and withered fur, etc.), biochemical indexes [motilin, mitochondrial adenosine triphosphate (ATP) level,-xylose absorption rate, etc.] and other indexes (decreased food intake, decreased weight, decreased grasping power, etc.). A total of 75 studies reported effective prescriptions, the most commonly used was Sijunzi Decoction (四君子湯), and the most frequently used traditional Chinese medicines were Baizhu (), Gancao (et), Fuling (), Huangqi (), Dangshen (), Renshen (et), etc. The drug characteristics were mainly warm property, sweet taste and belong to the spleen meridians.The animal model with spleendeficiency syndrome was mainly constructed in SD rats, and the two-factor complex method of improper diet and swimming exhaustion was used. The systematic model evaluation method which synthesize apparent index, biochemical index and other index phases is scientific and reasonable. This study provides reference for the standardization of animal model of spleendeficiency syndrome.

spleendeficiency syndrome; animal model; evaluation index; Delphi method; medication characteristic; Sijunzi Decoction

R285

A

0253 - 2670(2023)14 - 4590 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.14.020

2023-02-21

國家自然科學(xué)基金面上項目（82174246）；浙江省衛(wèi)生創(chuàng)新人才項目（浙衛(wèi)辦[2020]18號）

張?；荩?996—），女，碩士研究生，從事中醫(yī)藏象理論及其應(yīng)用研究。E-mail: yhzhang0601@163.com

朱愛松，女，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事中醫(yī)病因病機(jī)、中醫(yī)治未病及心血管疾病研究。E-mail: liaoningzhongyi@hotmail.com

[責(zé)任編輯 潘明佳]