秦佳慧 郭雅圖 張偉

1天津醫(yī)科大學(xué)眼科臨床學(xué)院,天津 300020;2天津市眼科醫(yī)院 天津市眼科研究所 天津市眼科學(xué)與視覺科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,天津 300020

小鼠視網(wǎng)膜與玻璃體血管系統(tǒng)是研究血管生長(zhǎng)的重要模型。了解小鼠視網(wǎng)膜血管的發(fā)育以及玻璃體血管的退化過程有助于對(duì)血管退化和視網(wǎng)膜血管系統(tǒng)發(fā)育分子機(jī)制的理解。外層視網(wǎng)膜無(wú)血管,其代謝由脈絡(luò)膜負(fù)責(zé),而內(nèi)層視網(wǎng)膜在胚胎發(fā)育期間由玻璃體血管系統(tǒng)提供營(yíng)養(yǎng)和氧氣[1]。玻璃體血管系統(tǒng)由玻璃體動(dòng)脈(hyaloid artery,HA)、玻璃體固有血管(vasa hyaloidea propria,VHP)、晶狀體血管膜(tunica vasculosa lentis,TVL)和瞳孔膜組成。HA在晶狀體后表面的分支形成了TVL;VHP從HA更近的位置分支,最初位于視網(wǎng)膜上,隨著眼球尺寸的增大,視網(wǎng)膜半徑增加,VHP逐漸脫離視網(wǎng)膜并與靠近晶狀體赤道的TVL吻合[2]。目前已有研究說明了玻璃體脈管系統(tǒng)的退化過程,但并未對(duì)玻璃體脈管系統(tǒng)退化與視網(wǎng)膜血管發(fā)育之間的關(guān)系進(jìn)行觀察與分析。本研究擬觀察小鼠視網(wǎng)膜血管發(fā)育與玻璃體血管系統(tǒng)退化的時(shí)機(jī)和過程,并評(píng)估視網(wǎng)膜血管正常生長(zhǎng)與VHP退化之間的關(guān)系,此外觀察分析了出生后早期處于高氧環(huán)境對(duì)玻璃體血管退化的影響,為早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變(retinopathy of prematurity,ROP)和永存原始玻璃體增生癥(persistent fetal vasculature,PFV)發(fā)病機(jī)制研究提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 將南開醫(yī)院動(dòng)物中心飼養(yǎng)的雄性和雌性C57BL/6J品系小鼠交配,所得新生仔鼠75只以及5只成年C57BL/6J小鼠用于實(shí)驗(yàn),雌雄不限,實(shí)驗(yàn)鼠均在SPF級(jí)動(dòng)物房飼養(yǎng)并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。本研究經(jīng)南開醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(批文號(hào):NKYY-DWLL-2021-070)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用和飼養(yǎng)均遵循ARVO制定的科研動(dòng)物使用規(guī)范和國(guó)家科學(xué)技術(shù)委員會(huì)頒布的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量管理辦法》。

1.1.2主要試劑及儀器 DyLight 594 Labeled GSL I-isolectin B4(MP6316-250UG,上海懋康生物科技有限公司);GFAP兔多克隆抗體(80788,美國(guó)CST公司);FITC標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗(SA00013-21,美國(guó)Proteintech公司);鈉石灰(上海鈉輝干燥試劑廠);磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline,PBS)干粉(北京索萊寶生物科技有限公司);Triton X-100(美國(guó)Sigma公司)。Nikon體式顯微鏡(日本尼康公司);激光掃描共聚焦顯微鏡(德國(guó)Leica公司);氧氣瓶(40 L,天津市津西環(huán)達(dá)化工氣體經(jīng)營(yíng)部);定制玻璃氧艙(50 cm×40 cm×25 cm,廣東皇拓亞克力制品貿(mào)易有限公司);CY-12C測(cè)氧儀(杭州佳長(zhǎng)電子科技有限公司);眼科顯微剪、眼科顯微鑷(江蘇臻邦醫(yī)藥科技有限公司);Micron Ⅳ視網(wǎng)膜影像系統(tǒng)(德國(guó)Phoenix Research Labs公司)。

1.2 方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)分組及處理 取75只出生后第1天(postnatal day 1,P1)的健康小鼠,采用隨機(jī)數(shù)表法將其分為對(duì)照組65只和氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變(oxygen-induced retinopathy,OIR)模型組10只,其中對(duì)照組幼鼠不做處理,OIR模型組幼鼠建立OIR模型。對(duì)照組分別在P1～P12、P17采用斷頸法各處死5只幼鼠,摘取眼球進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn);同時(shí)取15個(gè)月齡的成年小鼠5只作為成年對(duì)照組。OIR模型組幼鼠分別在P12、P17各處死5只幼鼠,摘取眼球進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2OIR動(dòng)物模型的建立 取10只P7的健康幼鼠與哺乳母鼠一起放入玻璃氧艙。氧艙留有2個(gè)直徑為1 cm的通氣孔,分別用來通入氧氣和連接CY-12C測(cè)氧儀,每小時(shí)測(cè)1次氧氣體積分?jǐn)?shù),通過調(diào)節(jié)氧氣流量使玻璃氧艙內(nèi)氧氣體積分?jǐn)?shù)維持在(75±3)%?？刂剖覝?23±2)℃,12 h晝夜循環(huán)光照。每24 h打開玻璃容器快速更換哺乳母鼠、墊料,加飼料、換水。幼鼠連續(xù)在高氧環(huán)境下飼養(yǎng)5 d,于P12時(shí)返回正常氧氣環(huán)境中繼續(xù)飼養(yǎng)5 d。

1.2.3小鼠視網(wǎng)膜和晶狀體的分離及玻璃體血管計(jì)數(shù) 取各組不同時(shí)間點(diǎn)眼球,浸入4%多聚甲醛中4 ℃過夜。將眼球置于PBS中,體式顯微鏡下用手術(shù)刀片在角膜上做1個(gè)放射狀切口。用鑷子從切口處開始,小心地向視神經(jīng)剝除鞏膜、視神經(jīng)和視網(wǎng)膜色素上皮,暴露出視網(wǎng)膜。視網(wǎng)膜類似碗狀結(jié)構(gòu),晶狀體位于碗狀結(jié)構(gòu)之中。為了觀察晶狀體赤道部與視網(wǎng)膜內(nèi)表面的血管數(shù)量,需要將晶狀體從視網(wǎng)膜中取出,在體式顯微鏡下觀察視網(wǎng)膜上HA、VHP的血管數(shù)量以及晶狀體赤道部位上TVL的血管數(shù)量。觀察視盤附近是否存在HA;計(jì)數(shù)視盤與晶狀體后極之間的中間位置處HA分支出的血管數(shù)量即VHP數(shù)量;計(jì)數(shù)晶狀體上血管的數(shù)量即TVL數(shù)量。通過體式顯微鏡在同一放大倍數(shù)下對(duì)視網(wǎng)膜和晶狀體組織的不同位置進(jìn)行拍照,所有照片采用ImageJ軟件進(jìn)行玻璃體血管的手動(dòng)計(jì)數(shù)。

1.2.4視網(wǎng)膜鋪片聯(lián)合免疫熒光染色觀察小鼠視網(wǎng)膜血管形態(tài) 將視網(wǎng)膜在0.3% Triton X-100中透膜過夜,之后在DyLight 594 Labeled GSL I-isolectin B4(5 μg/ml)中孵育過夜。染色后,在培養(yǎng)皿中從視網(wǎng)膜鋸齒口到赤道做4個(gè)放射狀切口,使用眼線刷撈至蓋玻片上,視網(wǎng)膜內(nèi)側(cè)面朝蓋玻片展平,滴PBS至視網(wǎng)膜組織上封片,指甲油涂抹到蓋玻片邊緣封閉4周。激光掃描共聚焦顯微鏡下觀察視網(wǎng)膜血管形態(tài)及VHP的退化情況。

1.2.5免疫熒光雙染法觀察視網(wǎng)膜表層血管、VHP與星形膠質(zhì)細(xì)胞的位置關(guān)系 視網(wǎng)膜在含有5% BSA和0.5% Triton X 100的PBS中4 ℃封閉過夜。將視網(wǎng)膜與DyLight 594 Labeled GSL I-isolectin B4 (1∶200)、GFAP(1∶200)的一抗4 ℃孵育過夜;PBS洗滌后,加入異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)結(jié)合的二抗,室溫孵育2 h;用PBS洗滌后進(jìn)行視網(wǎng)膜鋪片,抗熒光淬滅封片劑封片。激光掃描共聚焦顯微鏡下血管呈紅色熒光,星形膠質(zhì)細(xì)胞呈綠色熒光,并觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞與視網(wǎng)膜表層血管、VHP的分布位置關(guān)系。

1.2.6光學(xué)相干斷層掃描觀察成年小鼠玻璃體血管的退化情況 5%水合氯醛溶液腹腔注射麻醉15個(gè)月齡小鼠后,復(fù)方托吡卡胺滴眼液點(diǎn)眼擴(kuò)瞳,角膜表面涂甲基纖維素眼用凝膠,保持屈光間質(zhì)透明,調(diào)整Micron Ⅳ視網(wǎng)膜影像系統(tǒng)鏡頭焦距,直至視網(wǎng)膜血管清晰可見,通過調(diào)節(jié)操作臺(tái)或者調(diào)節(jié)接收器增益,降噪后拍攝光學(xué)相干斷層掃描(optical coherence tomography,OCT)圖像,觀察玻璃體血管退化情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 HA生理性退化過程

HA起源于視盤,穿過玻璃體向前到達(dá)晶狀體后表面。通過視網(wǎng)膜鋪片顯示,對(duì)照組HA在P1～P8一直存在(圖1)。15個(gè)月齡小鼠視網(wǎng)膜OCT顯示,仍存在未退化的HA(圖2)。

圖1 不同出生時(shí)間點(diǎn)小鼠視網(wǎng)膜鋪片聯(lián)合血管熒光染色(DyLight 594-isolectin B4 ×10,標(biāo)尺=1 mm) P1～P8小鼠視網(wǎng)膜血管(虛線內(nèi))、VHP(虛線外)、HA(箭頭) P:出生后Figure 1 Whole-mount retinas with vascular fluorescence staining of mice at different time points (DyLight 594-isolectin B4 ×10,bar=1 mm) Retinal vessels (within dotted lines),VHP (outside dotted lines) and HA (arrows) of mice from P1 to P8 P:postnatal

圖2 4只15個(gè)月齡雄性小鼠視網(wǎng)膜OCT成像 A、B、C、D:4只小鼠均存在未退化的玻璃體血管(箭頭)Figure 2 Retinal OCT images of four 15-month-old male mice A,B,C,D:Undegenerated hyaloid vessels (arrows) in four mice

2.2 VHP的生理性退化過程

P1小鼠視網(wǎng)膜血管從視盤發(fā)出,隨后在視網(wǎng)膜表面呈放射狀向外蔓延,直到P8血管到達(dá)視網(wǎng)膜的外周,視網(wǎng)膜初級(jí)血管層形成(圖1)。VHP起源于視盤,在視網(wǎng)膜血管出現(xiàn)之前存在(圖3A)。P1～P8發(fā)育中的視網(wǎng)膜血管僅位于視網(wǎng)膜表面,在視網(wǎng)膜外周為網(wǎng)格狀結(jié)構(gòu)的VHP(圖1)。當(dāng)視網(wǎng)膜初級(jí)毛細(xì)血管網(wǎng)到達(dá)視網(wǎng)膜周邊時(shí),VHP也在視網(wǎng)膜上退化到一定程度;在視網(wǎng)膜血管覆蓋到的位置,VHP管徑變細(xì),失去網(wǎng)格狀結(jié)構(gòu),變成徑直的血管線并且位于視網(wǎng)膜血管層之上(圖3B)。在體式顯微鏡下觀察到VHP血管數(shù)量在P5～P8時(shí)期急速下降,P10之后VHP血管數(shù)量趨于穩(wěn)定(圖4,表1,圖5)。

表1 對(duì)照組不同日齡小鼠VHP和TVL數(shù)量(x±s)Table 1 The number of VHP and TVL inmice at different ages in control group (x±s)不同日齡樣本量VHP血管數(shù)量TVL血管數(shù)量P11015.22±3.2623.80±4.02P21014.89±3.0021.00±1.55P31014.78±3.4220.60±3.14P41013.22±2.0420.50±4.31P51012.33±3.9718.30±3.93P6109.89±3.0312.20±3.06P7106.64±2.469.27±2.49P8104.27±1.295.27±1.54P9103.20±1.554.33±1.86P10102.33±1.322.30±1.42P11102.50±1.291.90±2.08P12102.67±1.511.92±1.59 注:VHP:玻璃體固有血管;TVL:晶狀體血管膜;P:出生后 Note:VHP:vasa hyaloidea propria;TVL:tunica vasculosa lentis;P:postnatal

圖4 體式顯微鏡下不同日齡小鼠VHP及TVL數(shù)量(×40,標(biāo)尺=1 mm) 隨著小鼠日齡的增加,VHP(白色箭頭)和TVL(黑色箭頭)數(shù)量不斷減少 P:出生后Figure 4 The number of VHP and TVL in mice of different ages under a microscope (×40,bar=1 mm) The number of VHP (white arrow) and TVL (black arrow) decreased in mice with the increase of age P:postnatal

圖5 對(duì)照組與OIR模型組P12、P17小鼠VHP及TVL情況(×40,標(biāo)尺=1 mm) OIR模型組與對(duì)照組P12小鼠VHP(白色箭頭)數(shù)量和TVL(黑色箭頭)血管數(shù)量無(wú)明顯差別,OIR模型組P17小鼠VHP(白色箭頭)數(shù)量和TVL(黑色箭頭)血管數(shù)量多于對(duì)照組 OIR:氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變;P:出生后Figure 5 VHP and TVL in P12 and P17 mice in control and OIR model groups (×40,bar=1 mm) There was no difference in the number of VHP (white arrow) and TVL (black arrow) vessels in P12 mice between the two groups.There were more VHP (white arrow) and TVL (black arrow) vessels in P17 mice in OIR model group than in control group OIR:oxygen-induced retinopathy;P:postnatal

在視網(wǎng)膜血管發(fā)育的前端由星形膠質(zhì)細(xì)胞引導(dǎo)視網(wǎng)膜血管的尖端細(xì)胞走向(圖3C)。在視網(wǎng)膜血管形成的部位,星形膠質(zhì)細(xì)胞包繞視網(wǎng)膜血管,參與形成血-視網(wǎng)膜屏障(圖3D)。在視網(wǎng)膜血管未發(fā)育的位置,無(wú)視網(wǎng)膜血管,只有VHP和呈細(xì)絲狀的星形膠質(zhì)細(xì)胞,星形膠質(zhì)細(xì)胞所形成的網(wǎng)絡(luò)也與VHP的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)不重合(圖3E)。

2.3 TVL的生理性退化過程

P1小鼠玻璃體血管HA到達(dá)了晶狀體后極,呈輻射狀向前包繞晶狀體,到達(dá)晶狀體赤道部,形成TVL。P5～P9,TVL數(shù)量急速下降,P10時(shí)大部分TVL血管呈透明狀態(tài),血供消失(圖4,表1),P17時(shí)TVL平均數(shù)量減少為(0.30±0.48)個(gè)(圖5,表2)。

表2 2個(gè)組不同日齡小鼠VHP和TVL數(shù)量比較(x±s,個(gè)/視野)Table 2 Comparison of the number of VHP and TVL in mice at different agesbetween two groups (x±s,pcs/field )組別眼數(shù)不同日齡VHP血管數(shù)量不同日齡TVL血管數(shù)量P12P17P12P17對(duì)照組102.43±1.511.80±0.922.30±1.940.30±0.48OIR模型組102.14±0.904.60±1.352.90±1.555.80±1.75t值0.4295.4221.1169.574P值0.232<0.0010.134<0.001 注:(獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)) VHP:玻璃體固有血管;TVL:晶狀體血管膜;OIR:氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變;P:出生后 Note:(Independent samples t-test) VHP:vasa hyaloidea propria;TVL:tunica vasculosa lentis;OIR:oxygen-induced retinopathy;P:postnatal

2.4 OIR模型組與對(duì)照組不同日齡小鼠VHP、TVL數(shù)量比較

OIR模型組與對(duì)照組P12小鼠VHP數(shù)量比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.429,P=0.232);OIR模型組P17小鼠VHP數(shù)量明顯多于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.422,P<0.001)(圖5,表2)。OIR模型組P17小鼠VHP數(shù)量明顯多于P12小鼠,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.188,P<0.001)。

OIR模型組和對(duì)照組P12小鼠TVL血管數(shù)量比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.116,P=0.134)(圖5,表2)。OIR模型組和對(duì)照組P17小鼠TVL血管數(shù)量比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.574,P<0.001)(表2)。OIR模型組P17小鼠TVL血管數(shù)量明顯多于P12小鼠,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.668,P<0.001)。

3 討論

ROP是早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜血管異常發(fā)育和纖維增生所致疾病,PFV是胚胎學(xué)、原發(fā)性玻璃體和玻璃體血管系統(tǒng)發(fā)育失敗或不完全退化造成的[3-5]。了解視網(wǎng)膜血管的正常發(fā)育過程以及玻璃體脈管系統(tǒng)的退化過程將有利于我們了解ROP、PFV等血管發(fā)育異常和玻璃體脈管系統(tǒng)退化異常的病理機(jī)制。本研究通過激光掃描共聚焦顯微鏡完整并且清楚地觀察到了VHP未脫離視網(wǎng)膜之前的結(jié)構(gòu)改變,并發(fā)現(xiàn)C57BL/6J小鼠的視網(wǎng)膜血管發(fā)育是在出生后才開始;然而人類視網(wǎng)膜血管發(fā)育則主要在胚胎發(fā)育期,在學(xué)齡期發(fā)育至成人水平[3],這種發(fā)育上的差異可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型中視網(wǎng)膜血管的病理改變不能完全等同于臨床疾病。

隨著視網(wǎng)膜血管的發(fā)育,眼球內(nèi)部血流重新分布,視網(wǎng)膜血流增加,玻璃體血管血流停止[4]。缺乏血液動(dòng)力和巨噬細(xì)胞積聚均會(huì)引發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡[5]。剪切應(yīng)力激活的信號(hào)級(jí)聯(lián)也會(huì)影響內(nèi)皮細(xì)胞的增生和遷移[6-9]。本研究結(jié)果也顯示,視網(wǎng)膜血管發(fā)育的同時(shí),VHP和TVL退化,因此推測(cè)視網(wǎng)膜血管的正常發(fā)育促進(jìn)了玻璃體血管的退化。

星形膠質(zhì)細(xì)胞通過視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的軸突遷移到視網(wǎng)膜中,并徑向向外周視網(wǎng)膜擴(kuò)散[10]。內(nèi)皮細(xì)胞沿著星形膠質(zhì)細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)遷移,形成視網(wǎng)膜表層脈管系統(tǒng)[11]。視網(wǎng)膜血管化延遲導(dǎo)致星形膠質(zhì)細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)形成延遲,以及視神經(jīng)頭和血管前部星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量增加[12]。星形膠質(zhì)細(xì)胞的發(fā)育缺陷抑制了哺乳動(dòng)物眼中玻璃樣脈管系統(tǒng)的程序性退化[13]。而星形膠質(zhì)細(xì)胞中的HIF-1α/MIF信號(hào)可調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞積聚和透明血管退化[14]。因此視網(wǎng)膜血管發(fā)育異?？蓪?dǎo)致星形膠質(zhì)細(xì)胞行為異常,而星形膠質(zhì)細(xì)胞的異常又能導(dǎo)致玻璃體血管系統(tǒng)退化異常。雖然星形膠質(zhì)細(xì)胞在形態(tài)上與VHP無(wú)重合,但星形膠質(zhì)細(xì)胞功能的正常發(fā)揮促進(jìn)了玻璃體血管的退化。而出生后早期暴露于高氧環(huán)境可導(dǎo)致雙側(cè)玻璃體出血[15],持續(xù)的出血可導(dǎo)致胎兒脈管系統(tǒng)組織化,纖維血管柄包含星形膠質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)PFV的形成[16]。因此,在血管發(fā)育異常的情況下,星形膠質(zhì)細(xì)胞也是視網(wǎng)膜病理改變的原因之一。

組織氧傳感機(jī)制也參與調(diào)節(jié)玻璃體血管系統(tǒng)的退化。von Hippel-Lindau protein(pVHL)是一種E3泛素連接酶的底物識(shí)別成分,在常氧狀態(tài)下能高效、快速地破壞缺氧誘導(dǎo)因子(hypoxia inducible factor,HIF)α亞單位,如HIF-1α和HIF-2α的穩(wěn)定性,通過條件性滅活pVHL導(dǎo)致HIF過度活躍,從而延緩玻璃樣血管系統(tǒng)的退化[17]。此外,Cited2在胚胎晶狀體中表達(dá),是HIF-1α的負(fù)向轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)劑,Cited2缺乏可上調(diào)HIF-1信號(hào),導(dǎo)致玻璃樣脈管系統(tǒng)紊亂[18]。因此,HIF的上調(diào)會(huì)導(dǎo)致玻璃體血管系統(tǒng)退化延遲。在OIR造模過程中,P7～P12小鼠處于高氧環(huán)境中,導(dǎo)致血管閉塞,出現(xiàn)視網(wǎng)膜無(wú)血管區(qū)域;P12～P17小鼠處于常氧環(huán)境中,視網(wǎng)膜無(wú)血管區(qū)域缺血和缺氧,導(dǎo)致HIF表達(dá)上調(diào)[19]。視網(wǎng)膜缺氧和HIF上調(diào)可能是本研究中OIR模型組P17小鼠VHP和TVL數(shù)量較多的原因。但視網(wǎng)膜HIF的上調(diào)是否直接進(jìn)入玻璃體影響玻璃體血管退化,即影響玻璃體血管退化的HIF與視網(wǎng)膜缺血缺氧上調(diào)的HIF是否來源一致仍需進(jìn)一步研究。

在OIR動(dòng)物模型中,視網(wǎng)膜高氧期形成了無(wú)血管區(qū)域,而此時(shí)玻璃體脈管系統(tǒng)退化卻未受到影響,當(dāng)視網(wǎng)膜處于缺氧狀態(tài)時(shí),玻璃體血管退化異常,視網(wǎng)膜血管也會(huì)出現(xiàn)異常增生,說明影響玻璃體脈管系統(tǒng)退化更重要的因素不是視網(wǎng)膜血管是否正常分布,而是視網(wǎng)膜是否缺氧。因此視網(wǎng)膜缺氧是視網(wǎng)膜血管異常增生和玻璃體血管退化異常的共同調(diào)節(jié)因素。但視網(wǎng)膜缺氧時(shí),除了HIF之外是否有其他細(xì)胞因子參與其中尚不明確,其與玻璃體血管退化之間的關(guān)系還有待進(jìn)一步研究。此外,在本研究中,OIR動(dòng)物模型組P17小鼠VHP、TVL的數(shù)量多于P12小鼠,說明在P12時(shí)退化的VHP、TVL經(jīng)過視網(wǎng)膜缺氧后數(shù)量明顯增多,其機(jī)制也有待進(jìn)一步研究。

綜上所述,本研究結(jié)果表明視網(wǎng)膜血管和星形膠質(zhì)細(xì)胞的正常發(fā)育促進(jìn)了玻璃體血管的正常退化;視網(wǎng)膜處于缺血缺氧狀態(tài)時(shí),延緩了玻璃體血管退化。正確認(rèn)識(shí)小鼠玻璃體血管系統(tǒng)退化過程及其與視網(wǎng)膜血管發(fā)育的關(guān)系為OIR發(fā)病機(jī)制研究提供了參考依據(jù),有利于進(jìn)一步探索ROP、PFV的病理機(jī)制。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明秦佳慧:直接參與醞釀和設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)、實(shí)施研究、采集數(shù)據(jù)、分析/解釋數(shù)據(jù)、起草文章;郭雅圖:直接參與醞釀和設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)、統(tǒng)計(jì)分析、對(duì)文章的知識(shí)性內(nèi)容作批評(píng)性審閱;張偉:直接參與醞釀和設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)、對(duì)文章的知識(shí)性內(nèi)容作批評(píng)性審閱