王赫,邊曉倩,江海濤

(青島大學(xué)附屬醫(yī)院胃腸外科,山東 青島 266003)

缺血再灌注(I/R)損傷是一種常見的與臨床事件相關(guān)的具有高發(fā)病率和死亡率的創(chuàng)傷。目前學(xué)術(shù)界普遍認(rèn)為,缺血并不是導(dǎo)致組織損傷的主要因素,當(dāng)血液供應(yīng)得到恢復(fù)(再灌注),大量的自由基對(duì)細(xì)胞造成沖擊是I/R損傷發(fā)生的主要機(jī)制。然而最近有研究表明,白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞等免疫細(xì)胞與I/R的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),再灌注過程中血管炎癥的發(fā)生發(fā)展也與I/R的進(jìn)展相一致[1]。I/R可以發(fā)生于心肌梗死、缺血性卒中、急性腎損傷、創(chuàng)傷、循環(huán)驟停、鐮狀細(xì)胞病和睡眠呼吸暫停中,是器官移植、心胸外科、血管外科和普通外科面臨的主要挑戰(zhàn)。對(duì)于I/R的治療,目前仍然缺乏有效的治療手段。由于間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)具有缺乏共刺激分子表達(dá)導(dǎo)致的低免疫原性的特點(diǎn)和在體內(nèi)外分化為多種間充質(zhì)組織的能力[2],利用MSCs對(duì)I/R損傷進(jìn)行修復(fù)已經(jīng)成為一個(gè)研究熱點(diǎn),出現(xiàn)于多種器官(心、腦、腎、肝)損傷后治療修復(fù)研究中。I/R會(huì)引起無(wú)菌性炎癥(腸I/R等少數(shù)事件除外)以及細(xì)胞免疫和體液免疫的相應(yīng)反應(yīng),故靶向免疫治療作為一種新興的治療理念被提出[3]。本文對(duì)MSCs在修復(fù)I/R損傷過程中的可能免疫機(jī)制進(jìn)行綜述。

1 MSCs概述

MSCs為一種具有克隆性和自我更新能力并可分化為多種細(xì)胞系的細(xì)胞,它來源于胚泡期的哺乳動(dòng)物胚胎,并有能力在體內(nèi)產(chǎn)生任何終末分化的細(xì)胞。新生兒的骨髓含有MSCs,它們能夠分化成多種間充質(zhì)組織,如骨、脂肪、軟骨和骨髓支持基質(zhì)。MSCs主要通過直接作用或外泌體介導(dǎo)的旁分泌發(fā)揮作用[4]。MSCs取材容易、培養(yǎng)簡(jiǎn)便、應(yīng)用前景廣闊,還有快速塑性黏附、造血標(biāo)志物表達(dá)缺乏的特點(diǎn),從而成為干細(xì)胞中最受關(guān)注的種類之一。MSCs不但具有自我更新和多向分化的雙向功能,還具有明顯的可塑性,并能分泌多種細(xì)胞因子,在醫(yī)學(xué)各個(gè)領(lǐng)域都具有極其重要的研究和應(yīng)用價(jià)值。許多研究表明,MSCs對(duì)先天性免疫和適應(yīng)性免疫都有調(diào)節(jié)作用。

2 細(xì)胞免疫與體液免疫概述

狹義的細(xì)胞免疫指T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答,本文中的細(xì)胞免疫還包括了巨噬細(xì)胞的免疫作用。T細(xì)胞是參與細(xì)胞免疫的主力軍,細(xì)胞毒性T細(xì)胞可以直接殺傷靶細(xì)胞,輔助性T細(xì)胞(Th)參與體液免疫的開始,抑制性T細(xì)胞停止免疫反應(yīng),調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)分泌抑制性細(xì)胞因子抑制效應(yīng)T細(xì)胞活化增殖效應(yīng)。T細(xì)胞與巨噬細(xì)胞的作用途徑與多種細(xì)胞因子息息相關(guān)。體液免疫的重要機(jī)制是B細(xì)胞增殖分化為漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體,而這一步驟也需要多種細(xì)胞因子的參與激活[5]。

3 MSCs對(duì)I/R組織損傷修復(fù)的免疫機(jī)制

3.1 調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞亞群

缺血和再灌注引起了一種強(qiáng)大的適應(yīng)性免疫反應(yīng),其中包括T淋巴細(xì)胞反應(yīng)。雖然抗原特異性T細(xì)胞的種類及其在無(wú)菌炎癥反應(yīng)中被激活的機(jī)制還不清楚,但是有證據(jù)表明,抗原特異性和抗原非依賴性的激活機(jī)制都有所貢獻(xiàn)[6-7]。MSCs可以通過抑制共刺激分子的表面表達(dá)來降低Th1和Th2細(xì)胞的活性,直接對(duì)T、B細(xì)胞的功能作用進(jìn)行調(diào)節(jié)[8]。有研究發(fā)現(xiàn),MSCs可在前列腺素E2(PGE2)、吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)的介導(dǎo)下通過直接接觸作用對(duì)CD4+T細(xì)胞進(jìn)行免疫抑制[9-10]。有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,MSCs的治療作用可能與其對(duì)CD8+T細(xì)胞的抑制增殖作用以及CD103+樹突狀細(xì)胞的激活介導(dǎo)作用有關(guān)[11]。許多研究發(fā)現(xiàn),骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)可以劑量依賴性地抑制T、B細(xì)胞的增殖[12-15]。還有研究發(fā)現(xiàn),MSCs能夠抑制Th0細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化,在基因水平上傾向于使Th0細(xì)胞分化為Th2細(xì)胞[16]。Treg細(xì)胞在I/R中具有保護(hù)作用。MSCs可誘導(dǎo)T細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子(Foxp3)上調(diào),從而促進(jìn)血清或組織中的CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)免疫調(diào)節(jié),其減輕I/R損傷的作用在視網(wǎng)膜、心臟、肝臟和肺臟I/R中已經(jīng)得到研究證實(shí)[17-20]。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),借助某些細(xì)胞因子預(yù)處理可以通過環(huán)氧化物酶2(COX-2)/PGE2通路增加Treg細(xì)胞百分比,更能增強(qiáng)MSCs對(duì)I/R急性腎損傷小鼠的療效。近期有研究表明,Treg細(xì)胞和MSCs之間的直接交流是基于活性線粒體和質(zhì)膜片段從MSCs轉(zhuǎn)移到Treg細(xì)胞,這個(gè)事件與Treg細(xì)胞和MSCs供體之間的人類白細(xì)胞抗原C(HLA-C)和人類白細(xì)胞抗原DRB1(HLA-DRB1)錯(cuò)配負(fù)載有關(guān)[21]。另有研究發(fā)現(xiàn),人羊膜來源MSCs可通過程序性死亡受體1(PD-1)路徑阻止T細(xì)胞活化[22]。MSCs不僅能增加Treg細(xì)胞的比例,還能維持其活性[23-24]。有研究結(jié)果表明,MSCs對(duì)T、B淋巴細(xì)胞的調(diào)節(jié)可能是通過對(duì)細(xì)胞周期蛋白的調(diào)節(jié)[25-27]。有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明,反復(fù)應(yīng)用MSCs治療過程中無(wú)明顯不良反應(yīng),預(yù)示這種治療有良好前景[28]。

3.2 改變巨噬細(xì)胞的免疫表型

巨噬細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的重要成員。有研究表明,MSCs能夠通過誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞從M1表型向M2表型轉(zhuǎn)化,調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化,從而促進(jìn)愈合過程[29-30]。ABUMAREE等[31]將煎蛋樣M1巨噬細(xì)胞與MSCs共培養(yǎng)3 d,M1巨噬細(xì)胞逐漸轉(zhuǎn)化為紡錘狀M2巨噬細(xì)胞。這一過程伴隨著白細(xì)胞介素(IL)-10水平升高,IL-12和IL-1β水平降低,以及巨噬細(xì)胞吞噬活性增加。MSCs還可以調(diào)節(jié)體內(nèi)巨噬細(xì)胞的免疫表型,這已在多種疾病模型中得到證實(shí)。例如,MSCs可通過改變M1/M2極化和抑制抗原遞呈細(xì)胞的浸潤(rùn)來增加角膜移植的成功率[32]。最新研究表明,MSCs通過分泌IL-13而不是IL-4增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的選擇性活化[33]。

3.3 調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫/體液免疫相關(guān)細(xì)胞因子

I/R后接受MSCs治療,經(jīng)過48 h,Th1細(xì)胞因子下降不明顯,IL-6表達(dá)明顯上調(diào),表明MSCs的免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)發(fā)生在非常早的時(shí)間點(diǎn)[34]。目前已有研究試圖探尋MSCs對(duì)B細(xì)胞增殖及產(chǎn)生抗體的影響,得出的結(jié)論并不一致[35-37],所以顯而易見的是MSCs與B細(xì)胞的關(guān)系涉及復(fù)雜的機(jī)制,而且與細(xì)胞因子密切相關(guān)。在肝臟I/R損傷的情況下,樹突狀細(xì)胞的保護(hù)作用取決于它們產(chǎn)生的抗炎細(xì)胞因子IL-10,MSCs使組織中IL-10水平升高可能導(dǎo)致TNF-a、IL-6和活性氧水平下降[3]。由于細(xì)胞因子的作用是廣泛且復(fù)雜的,針對(duì)MSCs免疫作用機(jī)制的細(xì)胞因子檢測(cè)數(shù)不勝數(shù),但仍未得到系統(tǒng)確切的結(jié)論。許多研究表明,MSCs可以通過升高組織或血清中的IL-10、分泌PGE2來調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫與體液免疫,從而減輕I/R免疫損傷[10,38-46],這可能與Treg細(xì)胞的增殖有關(guān)[47]。呂翠等[48]研究發(fā)現(xiàn),移植IL-10修飾的MSCs對(duì)大鼠腦I/R損傷有保護(hù)作用。TGF-β1也被證明是參與MSCs的免疫抑制過程中的重要成員[40,49-50]。有研究表明,在再生障礙性貧血病人中,MSCs可以通過下調(diào)IL-2、γ-干擾素的表達(dá),上調(diào)IL-4、IL-10的表達(dá)來調(diào)節(jié)免疫紊亂[51]。另有研究表明,在試驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎模型中,MSCs借助其對(duì)IL-17的抑制作用可以治療這種疾病[52]。

3.4 通過外泌體發(fā)揮免疫功能

外泌體是已知的免疫調(diào)節(jié)因子,可以參與細(xì)胞免疫與體液免疫的調(diào)節(jié)[53]。SATO等[54]早在2007年便證明了小鼠MSCs分泌的一氧化氮通過細(xì)胞周期阻滯或細(xì)胞凋亡直接調(diào)節(jié)T細(xì)胞的免疫抑制反應(yīng)。近年來,越來越多的研究把研究重點(diǎn)放在了MSCs的外泌體上。WANG等[55]在研究MSCs對(duì)心肌I/R損傷的治療效果時(shí)甚至發(fā)現(xiàn),來自MSCs的外泌體擁有比MSCs更好的治療效果。然而有研究表明,無(wú)論預(yù)處理如何,MSCs對(duì)于呼吸窘迫綜合征癥狀的改善能力總是強(qiáng)于相同數(shù)量MSCs產(chǎn)生的外泌體的作用能力[56]。戴華磊[57]通過實(shí)驗(yàn)證明,MSCs外泌體可通過調(diào)節(jié)IL-10、IL-1β這兩個(gè)免疫相關(guān)細(xì)胞因子水平來緩解大鼠肝臟I/R損傷。有研究表明,人臍帶血MSCs來源的外泌體可以通過miR-1246介導(dǎo)的IL-6-gp130-STAT3軸調(diào)節(jié)Treg和Th17細(xì)胞之間的平衡來緩解肝I/R損傷[58]。有研究發(fā)現(xiàn),來自腎臟的尿干細(xì)胞分泌的外泌體的裂解液有調(diào)節(jié)體液免疫的作用[45]。

3.5 治療自身免疫性疾病

MSCs的免疫抑制特性在自身免疫性疾病中表現(xiàn)得尤為顯著,MSCs修復(fù)腸I/R損傷過程中腸黏膜免疫屏障相關(guān)指標(biāo)的改變與MSCs治療許多自身免疫性疾病觀測(cè)到的免疫指標(biāo)的改變類似。有MSCs對(duì)自身免疫性腦脊髓炎的治療效果的研究顯示,疾病的預(yù)后得到了極大的改善[59]。有研究發(fā)現(xiàn),MSCs可以明顯抑制類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人活化的T淋巴細(xì)胞凋亡,并且能促進(jìn)B細(xì)胞功能成熟,使IgG分泌增加[12],或者通過誘導(dǎo)特異Treg細(xì)胞分化增殖阻止T細(xì)胞活化[60],從而治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明,BMSCs能夠通過降低Th1/Th2表達(dá)比值來減少自身免疫性多腺體綜合征的發(fā)病率[61]。FORBES[62]的研究提示了MSCs治療克羅恩病的有效性。TAKEDA等[63]還發(fā)現(xiàn)了MSCs在治療過敏性氣道炎中的優(yōu)越性。

3.6 依賴于人表面抗原

胡紅林等[64]在腎I/R疾病中進(jìn)行了進(jìn)一步的研究,結(jié)果表明,MSCs可以通過降低CD4+CD25+Treg的比例來調(diào)節(jié)免疫從而起到治療作用。最近有研究結(jié)果表明,MSCs可以通過miRNA-125b和miRNA-155通路負(fù)向調(diào)節(jié)原發(fā)性Sj?gren綜合征病人的CD4+T細(xì)胞活化[65]。SHENG等[66]在缺乏CD47的MSCs會(huì)加重肝組織I/R損傷的基礎(chǔ)上進(jìn)一步證明,CD47是治療I/R的潛在靶點(diǎn)。也有研究表明,MSCs的修復(fù)作用依賴于人表面抗原CD29、CD44[67]。來源于人類臍帶的MSCs可通過降低CD4+T細(xì)胞上的CD154抗原的表達(dá)來緩解肝臟I/R損傷[68]。

4 小結(jié)

MSCs的臨床前期研究目前已經(jīng)得到了許多肯定的結(jié)果,在臨床試驗(yàn)階段也有許多研究正在進(jìn)行[69]。近年來,對(duì)MSCs機(jī)制的研究逐漸深入,由于其機(jī)制的多樣性與廣泛性,MSCs可能對(duì)新冠肺炎亦有一定的治療潛力[70]。已知MSCs主要通過直接作用和旁分泌作用發(fā)揮作用,近年來越來越多的研究把重點(diǎn)放在MSCs分泌的外泌體上面[71],帶有特定靶點(diǎn)或與其他材料結(jié)合的MSCs被證明能在特定的疾病中發(fā)揮更好的作用[72]。I/R損傷免疫修復(fù)過程是一個(gè)復(fù)雜的涉及多因素的過程,盡管MSCs修復(fù)I/R損傷相關(guān)機(jī)制研究尤其是免疫機(jī)制研究涉及多個(gè)方面,但其具體的機(jī)制目前仍不是很清楚。因此,更多臨床試驗(yàn)或臨床前試驗(yàn)對(duì)于MSCs進(jìn)一步的臨床應(yīng)用是必須的,對(duì)MSCs治療免疫相關(guān)疾病機(jī)制仍需做深入的探討。