王林浩，徐慧琳，王雪霏

（青島易邦生物工程有限公司，山東青島 266000）

引起家禽支原體病最主要的病菌就是滑液囊支原體，當(dāng)滑液囊支原體寄生在雞的體內(nèi)后，首先會(huì)容易出現(xiàn)腱鞘炎、關(guān)節(jié)腫脹、氣囊炎等癥狀，其次病菌會(huì)在雞的體內(nèi)產(chǎn)生大量的有毒物質(zhì)，例如神經(jīng)毒素、溶細(xì)胞酶、過(guò)氧化氫酶等，這些物質(zhì)會(huì)影響雞的細(xì)胞功能，是引發(fā)疾病的重要因素。近年來(lái)該病呈現(xiàn)出逐年增長(zhǎng)的流行趨勢(shì)，給養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)帶來(lái)了較大的經(jīng)濟(jì)損失。預(yù)防該病最有效的手段就是接種疫苗，但是有些疫苗目前還在研究當(dāng)中。本文論述了雞滑液囊支原體疫苗目前的研究進(jìn)展情況。

1 雞滑液囊支原體的流行病學(xué)介紹

滑液囊支原體也叫做傳染性滑膜炎，是由支原體類(lèi)的微生物引發(fā)，該病對(duì)家禽產(chǎn)生的危害較大且較為常見(jiàn)。這種微生物沒(méi)有細(xì)胞壁，一般會(huì)呈現(xiàn)出球狀、球桿狀，滑液囊支原體主要是通過(guò)雞的呼吸道進(jìn)入到雞的滑液囊以及腱鞘等部位，主要寄生部位有呼吸道、關(guān)節(jié)、黏膜表面等，支原體會(huì)源源不斷的從宿主體內(nèi)吸收營(yíng)養(yǎng)。長(zhǎng)時(shí)間的寄生，會(huì)對(duì)宿主的生理功能帶來(lái)一定的影響，嚴(yán)重時(shí)會(huì)發(fā)生發(fā)炎、感染等癥狀。滑液囊支原體在生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量的有毒物質(zhì)，這些有毒物質(zhì)是誘發(fā)雞發(fā)病最主要的原因。雞滑液囊支原體最為常見(jiàn)的是慢性感染以及隱性感染，主要的傳染源就是已經(jīng)發(fā)病的雞以及體內(nèi)攜帶毒素暫未發(fā)病的雞，該病有多種傳播方式，其中接觸傳播以及呼吸道傳播的感染幾率最高，可以達(dá)到100%。如果養(yǎng)殖場(chǎng)的衛(wèi)生條件不達(dá)標(biāo)，也會(huì)增加疾病的傳播風(fēng)險(xiǎn)。由于雛雞的抵抗能力不足，所以雛雞的感染概率要比成年雞更高。雞在一年四季都有可能感染該病，但是冬春季節(jié)的感染率明顯更高。該病呈現(xiàn)出地方性的流性態(tài)勢(shì)，且逐漸增長(zhǎng)，感染該病后，也容易誘發(fā)其他并發(fā)癥。對(duì)于該病的防治，主要有藥物防治、疫苗接種、加強(qiáng)安全措施等方法，但是由于蛋雞、肉雞在使用抗菌藥物時(shí)有一定的限制，所以目前最主要的防治方式就是接種疫苗。目前針對(duì)該病的疫苗主要有3 種，分別是弱毒疫苗、滅活疫苗以及基因工程亞單位疫苗。

2 雞滑液囊支原體疫苗的研究進(jìn)展分析

2.1 弱毒疫苗

弱毒疫苗是當(dāng)前被廣泛使用的一種疫苗，弱毒疫苗最明顯的優(yōu)勢(shì)就是易于保存，將疫苗放置在家用冰箱冷凍室也不會(huì)影響使用。目前國(guó)外使用的雞滑液囊支原體疫苗主要有2 種，一種是雞滑液囊支原體弱毒疫苗MS-H 株，另一種是弱毒疫苗MSI 株，弱毒疫苗MSI 株國(guó)內(nèi)目前還沒(méi)有投入使用。弱毒疫苗MS-H 株是一種商品化疫苗，對(duì)于溫度較為敏感，該疫苗在國(guó)內(nèi)的注冊(cè)時(shí)間是2017 年。將該疫苗置于-20℃的環(huán)境中，疫苗的存放時(shí)間不能超過(guò)4 周，溫度越低，儲(chǔ)存時(shí)間就越長(zhǎng)，在使用之前需要先將疫苗解凍，疫苗解凍后需要在2 小時(shí)內(nèi)完成接種。該疫苗的接種方法主要有2 種，一種是點(diǎn)眼，另一種是噴霧。在給3～6 周齡的雞進(jìn)行免疫時(shí)，就可以選擇點(diǎn)眼的接種方式，需要注意的是，如果雞群此前使用了抗菌藥物，就需要休藥期結(jié)束后才能進(jìn)行接種。該疫苗可以與其他疫苗共同接種，例如傳染性支氣管炎以及其他的呼吸系統(tǒng)疾病。對(duì)白來(lái)航雞使用點(diǎn)眼的接種方式完成免疫后，通過(guò)檢測(cè)雞體內(nèi)的血清抗體可以發(fā)現(xiàn)，第27 周的抗體陽(yáng)性率是90%，其余階段都是100%。通過(guò)對(duì)照試驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)，接種過(guò)疫苗的雞感染疾病后的臨床表現(xiàn)相對(duì)未接種疫苗的雞要明顯更輕，發(fā)病率也相對(duì)更低。給火雞進(jìn)行疫苗接種時(shí)可以選擇噴霧的方式，這種方式不會(huì)損傷火雞的氣囊和氣管。雞在接種疫苗之后，因感染疾病而引發(fā)的蛋殼尖端異?，F(xiàn)象有明顯的減少。但是疫苗株定植后容易損傷雞的呼吸道粘膜，呼吸道粘膜的損傷會(huì)加大感染其他疾病的風(fēng)險(xiǎn)。當(dāng)雞已經(jīng)被感染，這時(shí)接種疫苗不但不會(huì)有保護(hù)作用，甚至還可能會(huì)加重病情。雖然弱毒疫苗相對(duì)安全、高效，但是保存以及免疫要求較高，使用起來(lái)也較為繁瑣，根據(jù)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，我國(guó)現(xiàn)有的雞群中陰性的比例較少，所以該疫苗的適用性相對(duì)較低。

2.2 滅活疫苗

目前該病的滅活疫苗還沒(méi)有商品化，國(guó)內(nèi)已經(jīng)有多家機(jī)構(gòu)展開(kāi)了相關(guān)研究。有研究將雞滑液囊支原體毒株使用甲醛滅活后進(jìn)行制備。這種疫苗在試驗(yàn)時(shí)可以發(fā)現(xiàn)有明顯的淋巴細(xì)胞增殖現(xiàn)象，有效激發(fā)了雞體內(nèi)的細(xì)胞以及體液免疫反應(yīng)，該疫苗有較為明顯的抑制作用。也有人使用福爾馬林對(duì)毒株進(jìn)行滅活，通過(guò)這種方式制備出的疫苗可以有效清除雞體內(nèi)的病原。王昆的試驗(yàn)是使用環(huán)化二乙烯亞胺來(lái)滅活雞滑液囊支原體毒株，然后分別加入油乳佐劑、71RVG 油佐劑、CPG 免疫增強(qiáng)劑，制成4 種滅活疫苗進(jìn)行對(duì)比分析。對(duì)比實(shí)驗(yàn)后可以發(fā)現(xiàn)其中加入71RVG 油佐劑的滅活疫苗在使用后效果要明顯優(yōu)于其他滅活疫苗，使用后雞群的氣管黏膜出現(xiàn)增生以及關(guān)節(jié)病的病變概率極低。孫開(kāi)石的試驗(yàn)是先使用甲醛對(duì)雞滑液囊支原體分離株進(jìn)行滅活，然后加入復(fù)合佐劑混合制成，接種對(duì)象是山坑風(fēng)、矮A 兩種肉雞，試驗(yàn)結(jié)果表明，這種方式制成的滅活疫苗有較強(qiáng)的保護(hù)作用，同時(shí)發(fā)現(xiàn)不同的品種在接種之后母源抗體對(duì)子代的保護(hù)效果具有一定的差異性。目前國(guó)內(nèi)已經(jīng)進(jìn)行了多種類(lèi)型的試驗(yàn)，研究結(jié)果表明，使用滅活疫苗后可以對(duì)雞群帶來(lái)一定的刺激，進(jìn)而達(dá)到一定的免疫保護(hù)作用。但是仍然還有許多細(xì)節(jié)需要進(jìn)一步研究解決。雞群在接種疫苗后，對(duì)于雞群的生長(zhǎng)性能是否會(huì)產(chǎn)生較大的影響，例如料肉比、每日的增長(zhǎng)情況、產(chǎn)蛋率以及雞蛋的品質(zhì)等方面。疫苗接種的目的是為了有效預(yù)防疾病，但是前提是不能夠影響到雞群的正常生長(zhǎng)狀況。其次就是佐劑的選擇方面，通過(guò)大量的試驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)，不同的佐劑產(chǎn)生的免疫效果差異較大，如果佐劑選擇不合理，最終會(huì)影響到雞群的肉質(zhì)，導(dǎo)致養(yǎng)殖效益降低。最后一點(diǎn)就是在接種疫苗之后是否可以達(dá)到理想的清除效果，是否可以阻斷疾病在雞群之間的傳播。除此之外，雞滑液囊支原體的培育周期較長(zhǎng)，培養(yǎng)成本也相對(duì)較高，這也是影響滅活疫苗研究的一個(gè)重要因素。

2.3 基因工程亞單位疫苗

基因工程亞單位疫苗具有明顯的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)，不僅具有較高的安全性，而且生產(chǎn)成本較低，可以規(guī)?；a(chǎn)，所以這是目前的一個(gè)較為主要的研發(fā)方向。首先需要篩選出免疫效果相對(duì)更好的抗原，由于支原體沒(méi)有細(xì)胞壁，所以主要依靠支原體表面的膜蛋白來(lái)實(shí)現(xiàn)與宿主之間的聯(lián)系，無(wú)論是疾病的感染還是注射疫苗后的免疫，都發(fā)揮出了較為關(guān)鍵的作用。通過(guò)試驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)，雞滑液囊支原體與雞多抗之間可以發(fā)生特異性反應(yīng)，這說(shuō)明其中存在具有免疫作用的雞滑液囊支原體膜蛋白。除此之外，還發(fā)現(xiàn)了另一種具有良好免疫原性的烯醇化酶蛋白。這些發(fā)現(xiàn)推動(dòng)了基因工程亞單位疫苗的研發(fā)工作，為疫苗的研發(fā)提供了較為重要的靶標(biāo)分子。但是這些研究工作側(cè)重的是單個(gè)蛋白，目前只是對(duì)這些蛋白的免疫反應(yīng)性、免疫原性進(jìn)行了測(cè)定，還沒(méi)有研究免疫學(xué)功能以及實(shí)際的免疫保護(hù)效果。目前國(guó)內(nèi)對(duì)于該項(xiàng)研究仍然處在基礎(chǔ)發(fā)展階段，海量的數(shù)據(jù)、信息為抗原的篩選提供了有力的支撐，目前的研發(fā)方向是要篩選出具有更高保護(hù)性以及免疫反應(yīng)性的抗原。根據(jù)進(jìn)行全基因組測(cè)序的雞滑液囊支原體菌株主要有5 種，可以發(fā)現(xiàn)目前已知的支原體基因已經(jīng)超過(guò)了700 個(gè)。當(dāng)細(xì)菌對(duì)雞群的機(jī)體形成刺激之后，機(jī)體就會(huì)出現(xiàn)免疫反應(yīng)，從而形成蛋白以及外膜蛋白。另一種篩選方法是先使支原體成為破碎狀態(tài)，之后采取二維電泳的方式與支原體抗血清反應(yīng)，這種方法可能會(huì)漏掉一部分分泌出的蛋白，但是會(huì)對(duì)機(jī)體形成一定的刺激。

3 結(jié)語(yǔ)

目前，已經(jīng)商品化的疫苗是MS-H 弱毒疫苗，該疫苗的適用范圍主要是還沒(méi)有感染的雞群，已經(jīng)感染的雞群并不適用，注射疫苗后可能會(huì)加重病情。滅活疫苗是目前正在研究中的一種疫苗，在已經(jīng)進(jìn)行的試驗(yàn)中免疫效果較為理想，接下來(lái)要加快推動(dòng)臨床試驗(yàn)，爭(zhēng)取盡快讓滅活疫苗商品化。同時(shí)要加強(qiáng)陽(yáng)性雞群的疫苗研究工作，要積極尋找母源抗體干擾的突破點(diǎn)。此外，基因工程單位疫苗的研究重點(diǎn)是對(duì)免疫顯性蛋白抗原進(jìn)行篩選，對(duì)不同蛋白的免疫效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，找到更適合制備疫苗的抗原。