◎ 劉八斤,汪婷婷,劉昌福,歐陽(yáng)敏,吳劍華,鄧 鋼
(萍鄉(xiāng)衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院,江西 萍鄉(xiāng) 337000)
吳茱萸始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,具有散寒止痛、降逆止嘔、降壓等功能。國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn),其化學(xué)成分吳茱萸堿具有較強(qiáng)的抗炎、抗癌、抗氧化及修復(fù)腦細(xì)胞治療中風(fēng)等作用[1]。近年,吳茱萸不同部位在治療心血管疾病的前景受到人們密切關(guān)注,但關(guān)于不同采收期的吳茱萸品質(zhì)研究及其抗氧化活性未有報(bào)道。通過(guò)本課題的研究,有助于明確不同采收期的吳茱萸品質(zhì)及其抗氧化活性。
吳茱萸的有效成分具有護(hù)心降血壓、調(diào)脂、鎮(zhèn)痛及抗炎等作用[2]。吳茱萸不同部位具有廣泛的藥理活性,能夠?qū)岚逯峦春投妆街卵仔∈缶哂忻黠@的鎮(zhèn)痛和抗炎作用,并表現(xiàn)出一定的中樞神經(jīng)作用[3]。然而,當(dāng)前學(xué)界對(duì)于不同采收期和部位的吳茱萸品質(zhì)未有研究,本研究擬通過(guò)檢測(cè)吳茱萸在不同采收期的有效成分含量,檢測(cè)抗氧化活性,以期闡明不同采收期吳茱萸品質(zhì)及其抗氧化活性。
吳茱萸樣品:2022年,采集于萍鄉(xiāng)衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院;采集方法:采用五點(diǎn)采樣法,選定35株吳茱萸的樣株,每次采集其部分果實(shí)混勻,開(kāi)始每隔2 d采集1次,后采集間隔延至6 d或更長(zhǎng),采集后立即暴曬干。
吳茱萸堿、吳茱萸次堿、吳茱萸內(nèi)酯購(gòu)自大連美侖有限公司,供含量測(cè)定。
高效液相色譜儀(Agilent,包括Agilent 1290系列泵及 G1314A檢測(cè)器);色譜柱為Kromsol MG C18柱(4.6×150 mm,5 μm);流動(dòng)相為乙腈-水;流速為 1 mL?min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)為 225 nm;柱溫:35 ℃;進(jìn)樣量: 20 μL。
吳茱萸打碎過(guò)5號(hào)篩,取約0.6 g,稱(chēng)量后置容量瓶中,精密加入75%乙醇50 mL,稱(chēng)重,超聲處理30 min,放置冷卻后用75%乙醇補(bǔ)重,濾過(guò)即得。按2.1方法分別對(duì)吳茱萸進(jìn)行有效成分(吳茱萸堿、吳茱萸次堿、吳茱萸內(nèi)酯)的定量分析。
2.3.1 測(cè)定 1,2-二苦基-2-三硝基苯亞肼(DPPH )
自由基清除率取3支潔凈離心管,分別準(zhǔn)確吸取1 mL樣品溶液(樣品組)、抗壞血酸溶液 (陽(yáng)性對(duì)照組)和純凈水(空白組),然后分別加入0.004%的DPPH自由基溶液5 mL,混勻冷卻即得,測(cè)吸光值,計(jì)算DPPH自由基清除率。
自由基清除率/% =(1-Ab-AcAa)×100% (1)
式中:Ab為樣品吸光度;Ac為陽(yáng)性對(duì)照吸光度;Aa為空白對(duì)照吸光度。
2.3.2 測(cè)定過(guò)氧化氫清除率
向3支空試管中各吸取1.7 mL樣品溶液(樣品組)、維生素C(Vitamin C,VC)溶液(陽(yáng)性對(duì)照組)和蒸餾水(空白組),再各加入40 mmol/L過(guò)氧化氫溶液 (用0.1 mol/L的磷酸鹽緩沖溶液配制)0.3 mL,混勻即得,于230 nm處測(cè)吸光值,根據(jù)公式(1)計(jì)算樣品H2O2清除率。
所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)通過(guò)x(平均值)的方式表示,采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行偏最小二乘法、回歸性分析,用GraphPad Prism 8進(jìn)行圖形繪制。
不同時(shí)期的吳茱萸品種的吳茱萸堿、吳茱萸次堿、去氫吳茱萸堿的變化趨勢(shì)如表1所示。結(jié)果顯示,在吳茱萸結(jié)果后,吳茱萸堿、吳茱萸次堿、去氫吳茱萸堿的含量逐漸增加,且吳茱萸果實(shí)中吳茱萸堿、吳茱萸次堿、去氫吳茱萸堿成分在9月份增加速度最快,在9月下旬仍呈增加趨勢(shì);10月吳茱萸老熟且成分開(kāi)始降低,因此沒(méi)有繼續(xù)進(jìn)行樣品采集,連續(xù)采樣時(shí)間持續(xù)了2個(gè)月。從有效成分含量變化可以看出,9月底是最佳采收時(shí)間。
表1 不同采收期吳茱萸有效成分含量表
不同采收期吳茱萸的DPPH自由基和過(guò)氧化氫清除能力結(jié)果見(jiàn)表2。通過(guò)并應(yīng)用偏最小二乘法分析、回歸分析3個(gè)主要成分的含量與DPPH自由基和過(guò)氧化氫清除能力的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)吳茱萸的DPPH自由基和過(guò)氧化氫清除能力與3個(gè)主要成分的含量,呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)。
表2 不同采收期吳茱萸的DPPH和H2O2清除率表
研究表明,吳茱萸堿、吳茱萸次堿、去氫吳茱萸堿是吳茱萸的主要有效成分,且吳茱萸堿具有內(nèi)皮依賴(lài)性血管擴(kuò)張作用[4]。近年,人們對(duì)吳茱萸次堿的藥理特性進(jìn)行了廣泛的研究。吳茱萸有效成分具有積極的肌力和變時(shí)作用,可調(diào)節(jié)葡萄糖代謝以及動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)鍵分子,因此,具有特殊的心血管保護(hù)作用[5]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)不同時(shí)期采收吳茱萸果實(shí),進(jìn)行吳茱萸堿、吳茱萸次堿、去氫吳茱萸堿的含量測(cè)定,發(fā)現(xiàn)其最佳采收期是9月底。同時(shí),根據(jù)體外DPPH和H2O2消除實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)其有效成分含量與抗氧化消除作用呈正相關(guān),結(jié)論與過(guò)往文獻(xiàn)結(jié)論相近,且能為萍鄉(xiāng)地區(qū)采收和使用吳茱萸提供依據(jù)。
綜上所述,萍鄉(xiāng)安源地區(qū)吳茱萸的最佳采收期是9月底,同時(shí),抗氧化作用和其有效成分含量呈正相關(guān)。因此,本研究可以為吳茱萸的采收和臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
樹(shù)立節(jié)糧意識(shí),珍惜勞動(dòng)成果。