雷寧波 閆文 謝興文 于文霞 李文廣 馬成 顧玉彪* 張磊*

1.甘肅省中醫(yī)院,甘肅 蘭州 730050

2.甘肅中醫(yī)藥大學(xué),甘肅 蘭州 730000

3.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院,甘肅 蘭州 730000

骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)是一種慢性退行性骨關(guān)節(jié)疾病,影響著世界上數(shù)百萬人。研究表明,大約6%的30歲以上成年人會(huì)患OA,而80%的70歲以上的人一直經(jīng)歷著OA帶來的危害[1]。OA的臨床特征多表現(xiàn)為關(guān)節(jié)疼痛、僵硬和不同程度的功能障礙。大多數(shù)研究學(xué)者發(fā)現(xiàn),年齡、性別、肥胖、創(chuàng)傷和遺傳等因素都是導(dǎo)致OA形成及進(jìn)展的原因[2]。近年來研究發(fā)現(xiàn),關(guān)節(jié)軟骨的破壞可能是OA的主要發(fā)病機(jī)制[3],它是由于軟骨細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)的降解導(dǎo)致OA的形成及發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn),軟骨ECM的降解主要由于基質(zhì)金屬蛋白酶[4](matrix metalloproteinase,MMPs)及一種以血栓反應(yīng)蛋白為基序的解整合素和金屬蛋白酶[5](a thrombospondin-motif-motifed disintegrin and metalloprotease,ADAMTs)為主的蛋白酶組成。在OA的進(jìn)展中,軟骨ECM的降解可分為兩個(gè)階段,在降解早期,ADAMTs和MMP-13在促炎細(xì)胞因子的存在下消化ECM[6];在代償性生物合成階段,軟骨細(xì)胞將增殖以修復(fù)受損的軟骨ECM,一旦代償被促炎細(xì)胞因子破壞,軟骨的侵蝕將隨之加速,因此軟骨降解在OA中起著重要作用[7]。軟骨細(xì)胞負(fù)責(zé)合成軟骨ECM的主要成分并維持軟骨的穩(wěn)態(tài),軟骨ECM的結(jié)構(gòu)和組織是軟骨正常功能的主要決定因素,大多數(shù)涉及軟骨的疾病導(dǎo)致軟骨ECM的劇烈變化,這些變化可以促進(jìn)疾病的進(jìn)展。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為,OA屬于“骨痹”的范疇[8],引起OA的病因多屬于外邪侵?jǐn)_人體筋骨關(guān)節(jié),導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)氣血運(yùn)行不暢、氣滯血瘀等,導(dǎo)致肢體關(guān)節(jié)疼痛及不同的功能障礙[9]。中藥作為傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)最主要的分支,對(duì)于OA的防治具有重要的作用,因此,本文將闡述中藥在抑制軟骨ECM方面的作用機(jī)理,為中藥干預(yù)軟骨ECM降解及防治OA提供理論依據(jù)。

1 細(xì)胞外基質(zhì)

細(xì)胞外基質(zhì)是由相互作用的蛋白質(zhì)、糖蛋白和蛋白聚糖組成的組織特異性混合物,是細(xì)胞微環(huán)境的非細(xì)胞成分,為組織提供結(jié)構(gòu)網(wǎng)絡(luò)和支架[10-12]。在機(jī)體內(nèi),ECM除了有助于組織形狀和生物力學(xué),還可以介導(dǎo)生長(zhǎng)、發(fā)育和結(jié)締組織重塑和修復(fù)等重要方面[13]。研究發(fā)現(xiàn),ECM以其大量不同的大分子組成細(xì)胞的4個(gè)微環(huán)境,為細(xì)胞提供機(jī)械和結(jié)構(gòu)上的支持[14]。ECM通過整合素等及細(xì)胞受體如透明質(zhì)酸受體發(fā)揮作用,ECM大分子與細(xì)胞之間的相互作用是個(gè)體發(fā)生、傷口愈合和組織穩(wěn)態(tài)的基礎(chǔ)[15-16]。多項(xiàng)研究表明,幾乎所有的疾病都與ECM結(jié)構(gòu)的某些改變、ECM代謝的紊亂或ECM細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的紊亂有關(guān)[17-18]。ECM作為一個(gè)高度復(fù)雜以及動(dòng)態(tài)的結(jié)構(gòu)網(wǎng)絡(luò),可通過多種不同的基質(zhì)降解酶介導(dǎo),進(jìn)而不斷發(fā)生重構(gòu)[19]。在大多數(shù)組織中,Ⅰ型膠原和軟骨中的Ⅱ型膠原作為ECM的主要成分,與其他膠原蛋白及ECM蛋白相關(guān)聯(lián),構(gòu)建大的纖維結(jié)構(gòu)[20],這些多分子結(jié)構(gòu)通過與ECM分子相互連接又相互關(guān)聯(lián),進(jìn)一步構(gòu)成復(fù)雜的三維矩陣網(wǎng)絡(luò)[21]。

ECM在機(jī)體內(nèi)可按照組成和結(jié)構(gòu)分為兩種類型,包括間質(zhì)基質(zhì)和細(xì)胞周圍基質(zhì)[22-24]。ECM的細(xì)胞通過整合素、盤狀蛋白結(jié)構(gòu)域受體等相互作用,進(jìn)而發(fā)揮其相關(guān)功能[25-27]。許多綜合征和病理/致死條件也是由ECM的異常引起,這些異常使ECM分子成為靶向藥物治療的潛在靶點(diǎn)[28]。越來越多的證據(jù)表明ECM通過維持代謝平衡、強(qiáng)度和彈性以及影響細(xì)胞生長(zhǎng)和分化來協(xié)調(diào)細(xì)胞環(huán)境[29-31],通過多種方式調(diào)節(jié)ECM的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)。病理?xiàng)l件下,ECM發(fā)生了顯著的改變,導(dǎo)致纖維化基質(zhì)的形成,隨著蛋白水解酶的釋放,導(dǎo)致ECM的異常重塑[32]。通過對(duì)正常組織和病理組織的研究,發(fā)現(xiàn)ECM蛋白水解和ECM積累可能在發(fā)育和疾病狀態(tài)中起著顯著的作用[33-34],因此筆者將著重探討ECM的降解與OA的相關(guān)性。

2 軟骨ECM降解促進(jìn)OA的形成及進(jìn)展

軟骨ECM具有獨(dú)特的結(jié)構(gòu)和組成,這種獨(dú)特性就決定了其在人體組織中的特殊性,關(guān)節(jié)軟骨ECM主要由水、Ⅱ型膠原、蛋白聚糖等組成[35]。在健康的關(guān)節(jié)軟骨中,ECM維持在緩慢、持續(xù)的周轉(zhuǎn)狀態(tài),這種狀態(tài)通常被描述為ECM合成和降解的總體合成代謝和分解代謝活動(dòng)的平衡狀態(tài)[36]。在病理?xiàng)l件如OA形成時(shí),軟骨ECM表現(xiàn)出機(jī)械功能的變化,這與其分解代謝活動(dòng)增加和關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)有關(guān)[37-38]。最常見的病理改變主要是纖維形成的Ⅱ型軟骨膠原(COL2A1)的雜合結(jié)構(gòu)突變,可導(dǎo)致包括Ⅱ型軟骨形成、膝關(guān)節(jié)發(fā)育不良和早發(fā)性關(guān)節(jié)炎等疾病[39]。

ECM的降解通過改變軟骨的生物力學(xué)特性,進(jìn)一步導(dǎo)致生物力學(xué)負(fù)荷的改變和ECM的重塑以及關(guān)節(jié)軟骨的組織結(jié)構(gòu)改變。因此,OA主要以關(guān)節(jié)軟骨破壞為特征。然而,對(duì)膝關(guān)節(jié)的損傷,除了機(jī)械性的外力傷害外,關(guān)節(jié)內(nèi)促炎性細(xì)胞因子的水平在最初損傷后的幾天內(nèi)也會(huì)突然升高[40],如腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)和白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)等,炎性細(xì)胞因子可以擴(kuò)散到軟骨中,引起蛋白酶活性升高,導(dǎo)致MMPs等和聚合酶類降解軟骨ECM中的多種大分子。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),炎癥可以通過活性氧的作用引起氧化應(yīng)激并引起ECM的分解代謝,促進(jìn)聚集蛋白、膠原蛋白等降解產(chǎn)物的丟失,最終損害軟骨組織的機(jī)械強(qiáng)度,加速軟骨的進(jìn)一步損傷和退化,引起OA的產(chǎn)生及發(fā)展[41]。

3 中藥干預(yù)軟骨ECM降解治療OA

OA在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中多以“痹證”進(jìn)行命名,OA的病因多與機(jī)體內(nèi)的臟腑虛損有關(guān),而最主要的是與肝脾腎虛損有關(guān)[42],隨著臟腑的虛損,正氣不足難以抗邪,邪氣入侵,引起關(guān)節(jié)部位的疼痛、腫脹等,治療原則多以補(bǔ)虛為主加以祛除外邪。在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中,OA的病因多與關(guān)節(jié)軟骨退行性變?yōu)橹?因此,隨著ECM的降解,將會(huì)導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨的退變。治療方面,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)OA的治療多以口服非甾體藥來緩解疼痛及OA后期的關(guān)節(jié)置換術(shù)為主,這些方法導(dǎo)致的副作用及手術(shù)的風(fēng)險(xiǎn)也顯露出來[43]。因此這時(shí)中藥的優(yōu)勢(shì)將進(jìn)一步顯示出來,中藥通過抑制軟骨ECM的降解,延緩軟骨的退變,達(dá)到防治OA的目的;另一方面,中藥治療OA表現(xiàn)為副作用小等多方面的優(yōu)勢(shì)。因此,本文將重點(diǎn)闡述中藥通過抑制MMPs及ADAMTS等相關(guān)蛋白酶的表達(dá),抑制ECM降解,達(dá)到延緩OA進(jìn)展的目的,進(jìn)而體現(xiàn)出中藥防治OA的優(yōu)勢(shì)。

3.1 中藥單體干預(yù)軟骨ECM降解治療OA

李安琪等[44]通過實(shí)驗(yàn)的方法探討淫羊藿苷對(duì)炎癥軟骨細(xì)胞的作用機(jī)制,得出淫羊藿苷通過抑制大鼠MMP-13、ADAMTS-5的表達(dá),促進(jìn)軟骨細(xì)胞Ⅱ膠原蛋白的表達(dá),維持軟骨細(xì)胞的正常表型。MMP-13、ADAMTS-5作為與ECM相關(guān)的蛋白酶,淫羊藿苷通過抑制其表達(dá)進(jìn)而發(fā)揮功能,進(jìn)一步抑制ECM的降解,從而延緩OA的進(jìn)展。趙曉燕[45]通過淫羊藿苷對(duì)OA軟骨細(xì)胞增殖凋亡的影響發(fā)現(xiàn),淫羊藿苷能夠抑制IL-1β等炎癥細(xì)胞因子的表達(dá),并能夠抑制ECM的上游蛋白酶MMP-1、MMP-3、MMP-13的表達(dá),進(jìn)而對(duì)ECM的降解具有抑制作用。通過抑制ECM的上游蛋白酶的表達(dá),促進(jìn)軟骨細(xì)胞的進(jìn)一步增殖及抑制軟骨細(xì)胞的凋亡,間接抑制OA的進(jìn)展。陳文鈞等[46]通過建立淫羊藿-川芎藥對(duì)高效液相色譜指紋圖譜及建立大鼠OA的模型,得出淫羊藿苷-川芎對(duì)大鼠血漿中MMP-13、MMP-3、IL-1β的表達(dá)具有抑制作用。在本實(shí)驗(yàn)中,發(fā)現(xiàn)淫羊藿苷主要抑制ECM的上游蛋白酶MMPs家族及對(duì)OA中的炎癥細(xì)胞因子的抑制作用,進(jìn)而抑制軟骨ECM的降解。川芎主要是抑制炎癥細(xì)胞因子的表達(dá),間接抑制ECM的降解。Zhang等[47]得出姜黃素在創(chuàng)傷后OA小鼠模型中能夠減緩OA進(jìn)展和減輕OA的疼痛癥狀,并通過實(shí)驗(yàn)方法得出姜黃素能夠抑制軟骨細(xì)胞中促炎介質(zhì)IL-1β和TNF-α、MMP-1、MMP-3、MMP-13以及ADAMTS-5的表達(dá),通過抑制軟骨ECM的上游蛋白酶及軟骨ECM的促炎使動(dòng)細(xì)胞因子,對(duì)ECM的降解起到一定的抑制作用。進(jìn)而延緩軟骨細(xì)胞的凋亡,延緩OA的進(jìn)展。王國(guó)旗等[48]通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比較,姜黃素能夠明顯降低大鼠OA內(nèi)炎癥細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β的水平,通過降低炎癥細(xì)胞因子的水平,對(duì)軟骨ECM的降解起到了一定的抑制作用,因此能夠延緩OA的進(jìn)展。孫志濤等[49]通過建立OA模型,造模成功后運(yùn)用鹿茸進(jìn)行藥物治療,發(fā)現(xiàn)鹿茸通過抑制ADAMTS-4的分泌以及阻止蛋白聚糖、Ⅱ型膠原蛋白的降解,對(duì)軟骨ECM的降解起到一定的抑制作用。ADAMTS-4及蛋白聚糖及Ⅱ型膠原蛋白作為軟骨ECM的成分,通過抑制其成分的降解,對(duì)延緩軟骨ECM的降解具有促進(jìn)作用,間接保護(hù)及延緩OA的進(jìn)展。郭子奕等[50]通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法得出鹿茸具有抗炎的作用,通過抑制脂多糖誘導(dǎo)的炎癥細(xì)胞的TNF-α水平,延緩促使軟骨ECM降解的炎癥細(xì)胞因子,達(dá)到抑制OA進(jìn)展的目的。因此,通過以上的實(shí)驗(yàn)及網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的驗(yàn)證,中藥單體在抑制軟骨ECM降解方面主要是抑制其上游的MMPs、ADAMTS等酶的表達(dá)及抑制軟骨ECM降解的炎癥細(xì)胞因子。因此,為了達(dá)到抑制軟骨ECM降解的目的,需抑制其上游蛋白及干預(yù)炎癥細(xì)胞因子這兩方面入手,間接抑制軟骨ECM降解。Yang等[51]通過杜仲-牛膝治療OA的分子機(jī)制預(yù)測(cè)即網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對(duì)接的方法,發(fā)現(xiàn)杜仲-牛膝通過抑制軟骨細(xì)胞IL-6、MMP-13等的升高,調(diào)節(jié)OA的炎癥反應(yīng)。杜仲-牛膝通過抑制炎癥因子IL-6的升高,減少軟骨內(nèi)環(huán)境的炎癥細(xì)胞因子,間接抑制軟骨ECM的降解;杜仲-牛膝通過抑制MMP-13的升高,直接對(duì)軟骨ECM的降解起到抑制作用。因此,通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對(duì)接技術(shù),對(duì)以后的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證提供了前期的理論基礎(chǔ),為實(shí)驗(yàn)得出杜仲-牛膝通過抑制軟骨細(xì)胞IL-6、MMP-13等的升高,調(diào)節(jié)OA的炎癥反應(yīng),以及這種抑制作用與其軟骨ECM的降解有關(guān)。因此,不管是哪一種中藥單體,都是通過干預(yù)軟骨ECM的上游蛋白進(jìn)而抑制軟骨ECM的降解,或者干預(yù)軟骨內(nèi)炎癥細(xì)胞因子的表達(dá),間接抑制軟骨ECM的降解,對(duì)OA的產(chǎn)生及進(jìn)展起到一定的干預(yù)及治療作用。

3.2 中藥復(fù)方干預(yù)軟骨ECM降解治療OA

黃璐等[52]研究發(fā)現(xiàn)加味獨(dú)活寄生合劑能夠降低兔膝OA軟骨MMP-3、TNF-α的表達(dá),進(jìn)而延緩軟骨的退變,達(dá)到延緩及治療膝OA的目的。通過降低軟骨MMP-3的表達(dá),能夠?qū)浌荅CM的降解起到一定的抑制作用。另外,加味獨(dú)活寄生合劑通過降低軟骨內(nèi)TNF-α的表達(dá),能夠進(jìn)一步降低機(jī)體內(nèi)的炎癥環(huán)境,也能夠間接對(duì)軟骨ECM的降解起到一定的抑制作用。因此,加味獨(dú)活寄生合劑通過控制軟骨ECM上游蛋白酶的表達(dá)及減少軟骨內(nèi)的炎癥反應(yīng),對(duì)膝OA的治療起到一定的促進(jìn)作用。白榮闖等[53]通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)甘姜苓術(shù)湯能夠降低膝OA模型中的軟骨MMP-3的表達(dá),進(jìn)而對(duì)膝OA起到一定的治療作用。甘姜苓術(shù)湯通過降低軟骨MMP-3的表達(dá),對(duì)軟骨ECM的降解起到一定的抑制作用,進(jìn)而對(duì)膝OA起到一定的治療及干預(yù)作用。倪宇峰等[54]通過仙芎骨康顆粒對(duì)OA的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),仙芎骨康顆粒能夠降低OA大鼠組織內(nèi)MMP-13的表達(dá)及炎癥細(xì)胞因子IL-1β的表達(dá)。因此,仙芎骨康顆粒在干預(yù)及治療OA具有兩個(gè)方面的作用。一方面,仙芎骨康顆粒通過降低軟骨MMP-13的表達(dá),對(duì)軟骨ECM的降解起到了一定的抑制作用,干預(yù)軟骨ECM的降解,直接干預(yù)及治療OA的產(chǎn)生及進(jìn)展。另一方面,仙芎骨康顆粒通過抑制軟骨內(nèi)炎癥因子的表達(dá),降低軟骨內(nèi)的炎癥環(huán)境,間接抑制軟骨ECM的降解,進(jìn)而達(dá)到干預(yù)OA進(jìn)展的目的。五藤膏作為經(jīng)典的苗藥,能夠降低兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型中的軟骨MMP-13的表達(dá),以及這種抑制作用與Wnt/β-catenin信號(hào)有關(guān)[55]。在Wnt/β-catenin信號(hào)通路的指導(dǎo)下,五藤膏通過降低軟骨MMP-13、β-catenin蛋白及酶的表達(dá),抑制軟骨ECM的降解,進(jìn)而干預(yù)OA的進(jìn)展。研究發(fā)現(xiàn),茯苓丸加減方能夠干預(yù)及治療OA的進(jìn)展[56]。通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,茯苓丸加減方通過降低軟骨ECM的上游蛋白酶的表達(dá),這些蛋白酶包括MMP-3、MMP-13等,通過抑制這些蛋白酶的表達(dá),進(jìn)而直接抑制軟骨ECM的降解,達(dá)到治療及干預(yù)的效果。鐘傳棋等[57]研究發(fā)現(xiàn),健骨方能夠干預(yù)及抑制OA的進(jìn)展,這種抑制作用以降低MMP-13的表達(dá)及干預(yù)炎癥因子IL-1β有關(guān),通過抑制其表達(dá)及炎癥因子發(fā)揮作用,能夠?qū)浌荅CM的降解起到一定的抑制作用。降低軟骨ECM的降解,進(jìn)而抑制軟骨退變,達(dá)到干預(yù)及治療OA的目的。因此,中藥復(fù)方對(duì)軟骨ECM的降解都與抑制其上游MMPs的表達(dá)及炎癥因子的表達(dá)有關(guān),通過干預(yù)酶及炎癥因子的表達(dá),抑制軟骨ECM的降解,進(jìn)而達(dá)到干預(yù)及治療OA的目的。

4 小結(jié)及展望

綜上,本文主要闡述了中藥通過干預(yù)蛋白酶及炎癥因子的表達(dá),進(jìn)而干預(yù)軟骨ECM的降解,達(dá)到延緩OA進(jìn)展的目的。雖然目前臨床上關(guān)于OA的診治方法層出不窮,但都是從治療疼痛及整體觀念入手,沒有相應(yīng)的進(jìn)行中藥單體及復(fù)方防治OA的作用機(jī)制方面深入挖掘。因此,中藥通過干預(yù)相關(guān)蛋白酶的表達(dá)及抑制炎癥因子的產(chǎn)生,抑制軟骨ECM的降解,發(fā)揮中藥個(gè)體化、多途徑的優(yōu)勢(shì)。由于目前的研究手段單一且不透徹,對(duì)其主要作用機(jī)制沒有詳細(xì)地進(jìn)行挖掘,因此,將中藥相關(guān)科研成果轉(zhuǎn)化為臨床治療手段的過程中存在較多阻力,但是這些不可控因素或阻力隨著中藥研究的不斷深入,中藥在防治OA領(lǐng)域一定會(huì)有新的突破,中藥干預(yù)軟骨ECM的降解可防治OA的進(jìn)展。因此,尋找新興技術(shù)及新思路探索中藥這座巨大的寶庫,為中藥應(yīng)用于臨床,防治OA提供廣闊的治療空間。