黎湘娟 唐艷霞 韋瑩 陳立軍*

（1.廣西衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣西 南寧 530023；2. 南寧海關(guān)技術(shù)中心，廣西 南寧 530028）

猴B 病毒（B virus，BV），也稱獼猴皰疹病毒Ⅰ型（Cercopithecine Herpesvirus Ⅰ），是一種人畜共患病原，BV 感染在猴群中非常多見，主要以食蟹猴和恒河猴為自然宿主，感染率在10%-60%之間［1］，感染動(dòng)物可傳染給其他動(dòng)物。猴群感染BV 后的癥狀并不明顯，但是當(dāng)人感染BV 后，會(huì)出現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，嚴(yán)重者會(huì)導(dǎo)致死亡。2021 年4 月中國(guó)記載第1 例人感染BV 死亡病例［2］。BV 感染常成隱性感染，具有潛伏期長(zhǎng)的特點(diǎn)，這不僅易導(dǎo)致猴群感染率增高，同時(shí)也增加從業(yè)人員或是實(shí)驗(yàn)人員感染的風(fēng)險(xiǎn)，因此對(duì)猴群開展BV 感染的檢測(cè)對(duì)于猴群質(zhì)量的監(jiān)控以及保障相關(guān)從業(yè)人員的生命健康都具有十分重要的意義。血液學(xué)指標(biāo)不僅是評(píng)估試驗(yàn)動(dòng)物健康狀況的監(jiān)測(cè)指標(biāo)，也是反應(yīng)其生理、病理變化的重要參考指標(biāo)。目前，有關(guān)食蟹猴BV 感染后血常規(guī)及血液生化的研究報(bào)道較少，在1997 年報(bào)道的患病食蟹猴病例中，提到白細(xì)胞減少和低蛋白血癥［3］。國(guó)內(nèi)研究曾對(duì)安徽恒河猴感染BV 后相關(guān)的血液檢測(cè)指標(biāo)進(jìn)行比較［4］，但研究的猴群及數(shù)量較有限。目前大部分猴的血常規(guī)及生化指標(biāo)研究?jī)H局限于健康猴群，故本研究旨在了解試驗(yàn)動(dòng)物食蟹猴感染BV 的情況，對(duì)其血常規(guī)、生化指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，探討感染BV 后引起血液相關(guān)指標(biāo)變化的情況，為食蟹猴健康養(yǎng)殖提供參考。

1 方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

2019 年9 月至2020 年5 月，采用隨機(jī)抽樣的方法，在廣西試驗(yàn)猴養(yǎng)殖企業(yè)內(nèi)隨機(jī)采集食蟹猴血樣本682 份。在食蟹猴清醒空腹?fàn)顟B(tài)下，在每只后肢靜脈采血5 mL，其中抗凝血2 mL，用于血常規(guī)檢測(cè)；非抗凝血3 mL，用于生化指標(biāo)檢測(cè)。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 猴BV 檢測(cè)

采用斑點(diǎn)酶免疫法（DIA）檢測(cè)猴血清BV 抗體。試劑盒由廣州瑞姆生物科技有限公司提供，規(guī)格96 T。操作方法按說明書進(jìn)行，判斷標(biāo)準(zhǔn)為：病毒抗原點(diǎn)顏色與弱陽性對(duì)照顏色深度相同或更深，則判為陽性；若病毒抗原點(diǎn)顏色比弱陽性對(duì)照略淺，則判為可疑；若病毒抗原點(diǎn)無色或顏色很淺，判為陰性?？梢蓸?biāo)本需進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)。若仍為可疑，則可判為陽性。

1.2.2 血常規(guī)檢測(cè)

在采血后2 h 內(nèi)，使用日本森美康醫(yī)用電子有限公司的自動(dòng)血液分析系統(tǒng)XN-10 對(duì)抗凝血學(xué)進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）、血紅蛋白（HGB）、紅細(xì)胞比容（HCT）、紅細(xì)胞平均體積（MCV）、平均血紅蛋白量（MCH）、平均血紅蛋白濃度（MCHC）、淋巴細(xì)胞數(shù)（LYMPH）、淋巴細(xì)胞百分比（LYMPH %）、中性細(xì)胞數(shù)（NEUT）、中性粒細(xì)胞百分比（NEUT%）、單核細(xì)胞數(shù)（MONO）、單核細(xì)胞百分比（MONO%）、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)（EO）、嗜酸性粒細(xì)胞百分比（EO%）、嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)（BASO）、嗜堿性粒細(xì)胞百分比（BASO%）、血小板（PLT）、血小板比容（PCT） 19 項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)。

1.2.3 血清生化檢測(cè)

將非抗凝血按3000 r/min 離心10 min 后，分離血清，采用貝克曼庫爾特實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有限公司生產(chǎn)的全自動(dòng)生化分析儀AU5800 進(jìn)行丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、AST/ALT 比值、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、堿性磷酸酶（ALP）、Y-谷氨?；D(zhuǎn)移酶（GGT）、總膽紅素（TBIL）、肌酐（CREA）、尿酸（UA）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（CHOL）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）14 項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用SPSS 軟件進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，用t 檢驗(yàn)及二分類logistic 回歸進(jìn)行分析，P ＜0.05 為有統(tǒng)計(jì)上的差異。

2 結(jié)果

2.1 一般生理情況

682 只食蟹猴的年齡在2~8 歲之間，平均年齡為3.48±0.85 歲；平均體重為2.6±0.56 kg，其中雄性337 只，雌性345 只。

2.2 BV 抗體檢測(cè)結(jié)果

在采集682 只食蟹猴的血液樣本中，BV 抗體陽性為66 只，總陽性率為9.68%。其中幼兒組（≤3歲）猴群的陽性率最低，其陽性率依次以年齡遞增。不同年齡食蟹猴BV 抗體篩查結(jié)果見表1。

表1 不同年齡食蟹猴BV 抗體篩查結(jié)果

2.3 血液指標(biāo)比較

66 只BV 抗體陽性的食蟹猴與616 只健康食蟹猴的血常規(guī)及血清生化等33 項(xiàng)血液指標(biāo)相比，BV 陽性食蟹猴指標(biāo)比健康猴群高的有ALT、AST、AST/ALT、TBIL、CREA、CHOL、HDL7項(xiàng)，其中TBIL 差異顯著（P ＜0.05）?？贵w陽性食蟹猴指標(biāo)比健康猴群降低的有WBC、HGB、MCH、LYMPH、LYMPH%、MONO、MONO%、NEUT、NUET%、ALB、UA、TG、ALP、GGT、LDL15項(xiàng)，其中MONO 差異顯著（P ＜0.05）。其余11 個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目在兩者間沒有差異。BV 抗體陽性與健康食蟹猴的血液指標(biāo)對(duì)比情況見表2。

表2 BV 抗體陽性與健康食蟹猴的血液指標(biāo)對(duì)比情況

2.4 二分類logistic 回歸分析

將BV 抗體陽性作為因變量（1=陽性，0=陰性），將年齡、性別、體重及血常規(guī)、生化指標(biāo)等33 個(gè)變量，通過二分類Logistic 回歸分析顯示，年齡和總膽紅素對(duì)該模型具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。年齡是猴群感染BV 的風(fēng)險(xiǎn)因子。BV 感染后，食蟹猴血清總膽紅素顯著升高。BV 抗體陽性食蟹猴與健康食蟹猴二分類Logistic 回歸分析見表3。

表3 BV 抗體陽性食蟹猴與健康食蟹猴二分類Logistic 回歸分析

3 討論

BV 同人的單純性皰疹病毒相近，猴群感染后呈皰疹樣口炎的癥狀，一般于1-2 周內(nèi)自愈；但人類感染B 病毒后可引起較嚴(yán)重的癥狀，產(chǎn)生致死性腦炎或上行性腦脊髓炎。既往流調(diào)結(jié)果顯示，國(guó)內(nèi)各地養(yǎng)殖場(chǎng)猴群BV 抗體陽性率為23.11%至55.6%。1994 年廣東地區(qū)試驗(yàn)恒河猴BV 抗體陽性率為23.8%［5］，2007 年該省某個(gè)養(yǎng)殖中心的恒河猴BV 抗體陽性率已上升至55.6%［6］。2010 年云南昆明靈長(zhǎng)類研究中心人工飼養(yǎng)獼猴BV 抗體陽性率為23.11%［7］。2017 年安徽省實(shí)驗(yàn)獼猴陽性率為36.5%［8］。2003~2008 年來自中國(guó)7 個(gè)地區(qū)食蟹猴BV 抗體陽性率（43.49%）高于恒河猴（38.33%）［9］。不同地區(qū)養(yǎng)殖食蟹猴BV 陽性率也有不同的波動(dòng)。1991~1996 年廣西飼養(yǎng)食蟹猴BV 抗體陽性率為39.09%［10］。2007~2011 年柬埔寨的飼養(yǎng)食蟹猴陽性率為33.92%［11］。2008 年從馬來西亞進(jìn)口的野生食蟹猴BV 抗體陽性率高達(dá)68.5%［12］。本研究的人工飼養(yǎng)食蟹猴BV 抗體陽性率僅為9.68%，均低于之前的調(diào)查結(jié)果，與本研究前期抽查的結(jié)果一致［13］。國(guó)外研究者用PCR 方法在2009~2011 年對(duì)馬來西亞392 只野生長(zhǎng)尾猴進(jìn)行檢測(cè)，共檢出154 只陽性猴，陽性率為39.29%［14］。泰國(guó)研究者于2020~2021 年對(duì)野生長(zhǎng)尾猴常見傳染病的病原進(jìn)行檢測(cè)，但未能監(jiān)測(cè)到BV［15］。猴被BV感染后，一般終生攜帶抗體，抗體陽性代表猴已被感染或是曾被感染。

肝功能檢查是反映肝臟生理功能的檢測(cè)項(xiàng)目。猴感染BV 后，病毒在粘膜上皮細(xì)胞進(jìn)行復(fù)制，形成初發(fā)感染，在臨床癥狀出現(xiàn)之前有4-6 天的潛伏期，進(jìn)而在皮膚內(nèi)或局部如肝臟出現(xiàn)炎癥病變。處在潛伏期的病毒可被激活，大量復(fù)制，引起繼發(fā)性肝損傷或明顯的皮膚病變［16］?？贵w陽性食蟹猴的肝功能指標(biāo)出現(xiàn)升高的有ALT、AST、AST/ALT、TBIL、CREA、CHOL、HDL7 項(xiàng)，尤其是AST/ALT的比值，均大于1。在血清檢測(cè)中，反映肝功能損傷嚴(yán)重程度的是總膽紅素和凝血功能，總膽紅素越高，凝血功能越低，往往提示肝臟損傷越嚴(yán)重，有重型肝炎、肝壞死的傾向。本研究的總膽紅素在兩組比較中具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，推測(cè)本研究的BV 抗體陽性食蟹猴肝功能損傷較嚴(yán)重。

血清總蛋白和白蛋白檢測(cè)通常反映慢性肝損害狀況，亦反映肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的儲(chǔ)備功能［16］。在本研究中，抗體陽性食蟹猴猴群的生化功能指標(biāo)出現(xiàn)降低的有ALB、UA、TRIG、ALP、GGT、LDL等6項(xiàng)，提示陽性猴群中的肝臟合成及代謝功能可能出現(xiàn)障礙。但既往研究顯示，感染BV 的恒河猴除AST、BUM、CHOL 3 項(xiàng)指標(biāo)外，其他生化指標(biāo)均高于健康恒河猴群［4］，故推測(cè)檢測(cè)結(jié)果是否與猴群種屬的差異有關(guān)。

在既往研究中，單純性皰疹病毒感染會(huì)引起人的轉(zhuǎn)氨酶水平升高，同時(shí)伴有白細(xì)胞減少及血小板減少癥［16］。本研究的猴群血常規(guī)指標(biāo)僅出現(xiàn)白細(xì)胞群減少，其中單核細(xì)胞在兩者比較中具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但并未出現(xiàn)血小板減少的現(xiàn)象。推測(cè)可能是B病毒入侵后，單核細(xì)胞為了轉(zhuǎn)變巨噬細(xì)胞實(shí)行吞噬病毒的功能而遷移到組織，造成外周血單核細(xì)胞計(jì)數(shù)減少，進(jìn)而導(dǎo)致抗體陽性猴群的體內(nèi)免疫功能下降。反之，單核細(xì)胞減少可增加猴群復(fù)發(fā)感染的可能性。

本研究經(jīng)Logistic 回歸分析顯示，年齡和總膽紅素含量與食蟹猴感染BV 有顯著相關(guān)性。BV 抗體陽性食蟹猴的平均年齡為3.84±1.04 歲，高于健康猴群（3.44±0.81 歲）。既往研究［7，12］表明，隨著年齡的增長(zhǎng)，獼猴、食蟹猴的BV 感染率越高，其陽性率與年齡呈正相關(guān)關(guān)系。本研究結(jié)果也驗(yàn)證了同樣的趨勢(shì)，幼兒組的食蟹猴抗體陽性率僅為7.17%，而大于4 歲的食蟹猴陽性率高達(dá)18.39%，提示年齡是食蟹猴感染BV的危險(xiǎn)因素。感染BV后，猴的總膽紅素明顯升高，總膽紅素是反映其病情變化勢(shì)態(tài)的重要監(jiān)測(cè)指標(biāo)。

本研究初步探索BV 抗體陽性的食蟹猴與健康食蟹猴猴群之間血常規(guī)及血清生化指標(biāo)的差異性，為相關(guān)的試驗(yàn)研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。將來仍需進(jìn)一步的橫斷面及隊(duì)列研究，探討其病毒DNA 含量、病程對(duì)血液指標(biāo)及免疫力影響的相關(guān)性研究。