楊 銘 肖丹丹 于德偉 赫 慧 楊 明*

1.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，長(zhǎng)春 130012；2.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，長(zhǎng)春 130117

乳腺增生病，又稱乳腺小葉增生病，屬中醫(yī)乳癖范疇。是臨床上最常見(jiàn)的乳房疾病。其發(fā)病率占乳房疾病的首位[1]。中醫(yī)認(rèn)為本病是由于情志不遂憂郁不解，久郁傷肝，導(dǎo)致肝氣郁結(jié)，氣機(jī)瘀滯，蘊(yùn)結(jié)于乳房胃絡(luò)，乳絡(luò)經(jīng)脈阻塞不通，不通則痛而引起乳房疼痛；肝氣郁久化熱，熱灼津液為痰，氣滯痰凝，即可形成乳房腫塊。乳痛和乳房腫塊等兩大主癥為主要臨床表現(xiàn)。柴芍乳增膠囊處方是本課題組根據(jù)我院臨床應(yīng)用多年的內(nèi)部制劑處方，經(jīng)對(duì)各方藥配伍臨床觀察，結(jié)合臨床辨病與辨證，確立的治療乳腺增生病的處方，具有疏肝理氣、調(diào)沖和血，化痰散結(jié)之功效。本研究通過(guò)大鼠肉芽腫實(shí)驗(yàn)、小鼠熱板實(shí)驗(yàn)和醋酸扭體實(shí)驗(yàn)，觀察其抗炎、鎮(zhèn)痛作用及其機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供藥理學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 Wistar大鼠SPF級(jí)，雄性，體重180～200 g；KM小鼠，SPF級(jí)，雌雄兼用，19～21 g。購(gòu)自遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(遼)2020-0001。飼料：大小鼠維持飼料均購(gòu)自北京(天津)科奧協(xié)力飼料有限公司，許可證號(hào)：津飼證(2020)01005。動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)4 d，正常飲食。飼養(yǎng)環(huán)境：屏障環(huán)境動(dòng)物觀察室，溫度：20～24 ℃，相對(duì)濕度：40%～70%，換氣次數(shù) 10～15次/h，照明時(shí)間每日12/12 h交替照明。

1.2 藥物 柴芍乳增膠囊，規(guī)格：0.4 g/粒(3.875生藥/g)，批號(hào)：200601，由吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院提供。阿司匹林，規(guī)格：100 mg/片，批號(hào)：BJ54292，由拜耳醫(yī)藥保健有限公司生產(chǎn)。

1.3 試劑 前列腺素E2(PGE2)、腫瘤壞死因子(TNF-α)、ELISA 試劑盒，長(zhǎng)春晶美生物科技有限公司產(chǎn)品；一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)定試劑盒，南京建成生物工程研究所生產(chǎn)。

1.4 儀器 電子天平(d=0.1 mg)，上海精密科學(xué)儀器有限公司；GJ-8402型熱板測(cè)痛儀，浙江寧海白石電子醫(yī)療儀器廠產(chǎn)品；酶標(biāo)儀ST-360，上?？迫A實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有限公司；T6紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，北京普利生有限公司；TGL-16B高速離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠。

1.5 方法

1.5.1 對(duì)大鼠棉球肉芽腫及血清中PGE2、TNF-α、NO、SOD含量的影響 取大鼠50只，腹腔注射戊巴比妥鈉30 mg/kg，麻醉，消毒，于腋下左右兩側(cè)埋入重量20 mg的無(wú)菌棉球(青霉素 0.2 mg/0.2 mL，浸泡，烘干)各一個(gè)。于術(shù)后 2 h 分隨機(jī)分為5組，分別為柴芍乳增膠囊(膠囊粉)高、中、低(1.2 g/kg、0.6 g/kg、0.3 g/kg)三個(gè)劑量組、陽(yáng)性藥組(乳康片1.0 g/kg)及模型對(duì)照組(蒸餾水)，每日灌胃給藥一次(10 mL/kg)。連續(xù)給藥7 d后，戊巴比妥鈉30 mg/kg麻醉，使用眼科剪剪開(kāi)腹腔，腹主動(dòng)脈取血3 mL，室溫放置 20 min，離心20 min(速度3000 r/min，半徑 10 cm)分離血清。取血清按照試劑盒說(shuō)明書(shū)方法操作，檢測(cè)PGE2、TNF-α、NO、SOD含量。處死動(dòng)物，將兩側(cè)腋下棉球連同周?chē)Y(jié)締組織一起取出，剔除脂肪組織，在60 ℃烘箱中放置12 h后稱重。將稱得的重量減去棉球的重量即得肉芽腫重量。

1.5.2 對(duì)小鼠熱板的影響 取預(yù)先篩選合格(凡舔足時(shí)間小于5 s或大于30 s或跳躍者棄之不用)雌性小鼠50只，隨機(jī)分為5組，分別為柴芍乳增膠囊高、中、低(1.2 g/kg、0.6 g/kg、0.3 g/kg)三個(gè)劑量組、陽(yáng)性藥組(阿司匹林20 mg/kg)及溶劑對(duì)照組(蒸餾水)，灌胃給藥一次(20 mL/kg)。于給藥后2 h，將小鼠分別置于熱板上[溫度控制在(55±0.5)℃]，記錄小鼠自放在熱板上出現(xiàn)舔足所需時(shí)間(秒)作為該鼠的痛閾值。如痛閾值超過(guò) 60 s，即停止測(cè)試而按60 s計(jì)。觀察小鼠60 s內(nèi)痛閾值。

1.5.3 對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響 取雌性小鼠50只，按體重隨機(jī)分為5組，分別為柴芍乳增膠囊高、中、低(1.2、0.6、0.3 g/kg)三個(gè)劑量組、陽(yáng)性藥組(阿司匹林20 mg/kg)及溶劑對(duì)照組(蒸餾水)，灌胃給藥一次(20 mL/kg)。于給藥后2 h，腹腔注射0.8%醋酸溶液 0.1 mL/10 g，觀察小鼠15 min內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時(shí)間及扭體反應(yīng)次數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)大鼠棉球肉芽腫的的影響 柴芍乳增膠囊高、中、低劑量組及陽(yáng)性藥組肉芽腫重量明顯低于模型對(duì)照組，有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)。表明柴芍乳增膠囊能夠明顯抑制棉球肉芽腫重量。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 柴芍乳增膠囊對(duì)大鼠棉球肉芽腫的影響表

2.2 對(duì)棉球肉芽腫大鼠血清中PGE2、TNF-α、NO、SOD含量的影響 柴芍乳增膠囊高、中劑量組及陽(yáng)性藥組能明降低PGE2、TNF-α含量，高、中、低劑量組及陽(yáng)性藥組能明顯降低NO含量，增加SOD活性，與模型對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 柴芍乳增膠囊對(duì)棉球肉芽腫大鼠血清中PGE2、TNF-α、NO、SOD含量的影響表

2.3 對(duì)小鼠熱板的影響 柴芍乳增膠囊高、中、低劑量組及陽(yáng)性藥組能明顯延長(zhǎng)小鼠舔足出現(xiàn)時(shí)間提高痛閾值，與溶劑對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 柴芍乳增膠囊對(duì)小鼠熱板的影響表

2.4 對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響 柴芍乳增膠囊高、中、低劑量組和陽(yáng)性藥組能減少化學(xué)刺激所引起的小鼠扭體次數(shù)，高劑量組和陽(yáng)性藥組能延長(zhǎng)小鼠出現(xiàn)扭體時(shí)間，與溶劑對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 柴芍乳增膠囊對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響表

3 討論

柴芍乳增膠囊由柴胡、郁金、赤芍、夏枯草、香附、鹿角膠、橘核、玄參、浙貝母、海藻組成。疏肝理氣，調(diào)沖和血，化痰散結(jié)。用于肝郁氣滯，沖任失調(diào)，痰凝血瘀所致的乳房腫塊、乳房脹痛、煩躁易怒，西醫(yī)之乳腺小葉增生見(jiàn)上述證候者。方中柴胡具有和解少陽(yáng)、疏肝解郁、升陽(yáng)舉陷的功效，柴胡皂苷具有良好的抗炎、抗病毒作用[2]；郁金具有行氣化瘀止痛、清心解郁、利膽退黃涼血之功，能通過(guò)促炎性細(xì)胞因子的釋放發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用[3]；赤芍清熱涼血，散瘀止痛，有抗炎和解痙鎮(zhèn)痛的作用[4-5]；夏枯草清肝瀉火、明目、散結(jié)消腫，對(duì)乳腺炎及乳腺增生癥有治療作用[6]；香附具有行氣解郁、調(diào)經(jīng)止痛的功效，具有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛作用[7]；鹿角膠具有溫補(bǔ)肝腎、益精血、止血的功效，有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用[8]；橘核具有理氣、散結(jié)、止痛的功效，有較好的鎮(zhèn)痛抗炎作用[9]；玄參清熱涼血，滋陰降火，解毒散結(jié)，對(duì)炎癥因子的釋放具有抑制作用[10]；浙貝母具有鎮(zhèn)痛止咳、抗炎抑菌和抗癌抗腫瘤等功效[11]，海藻軟堅(jiān)、消痰、利水、退腫。研究結(jié)果表明，柴芍乳增膠囊能明顯減輕大鼠棉球肉芽腫的重量，顯示對(duì)炎癥有明顯的抑制作用；能明顯提高小鼠熱板痛閾值，減少醋酸所致的小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，顯示有明顯的鎮(zhèn)痛作用。

炎癥是在致炎因素的作用下，由炎癥細(xì)胞及其釋放的炎癥介質(zhì)參與引起的一系列病理生理過(guò)程。炎癥介質(zhì)中PGE2能增強(qiáng)血管通透性，從而吸引中性粒細(xì)胞引起發(fā)熱，誘導(dǎo)疼痛引發(fā)炎癥損傷。TNF-α能介導(dǎo)炎性細(xì)胞向炎癥局部聚集，最終造成組織損傷、炎癥等病理變化。NO可導(dǎo)致發(fā)生炎癥部位的滲出和水腫[12-14]。研究發(fā)現(xiàn)，柴芍乳增膠囊能降低棉球肉芽腫大鼠血清中PGE2、TNF-α、NO含量，同時(shí)能刺激機(jī)體產(chǎn)生大量的SOD，減輕氧自由基的損害。提示，其通過(guò)抑制炎癥介質(zhì)PGE2、TNF-α、NO釋放及增高SOD活性發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛作用。上述抗炎鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)研究為柴芍乳增膠囊臨床治療乳腺增生病提供了藥理學(xué)依據(jù)。