王鏡純,吳 寶,白玉勤

(1.錦州醫(yī)科大學(xué)赤峰學(xué)院培養(yǎng)基地,內(nèi)蒙古 赤峰 024005;2.赤峰市醫(yī)院腫瘤內(nèi)科,內(nèi)蒙古 赤峰 024009;3.赤峰學(xué)院中醫(yī)蒙醫(yī)學(xué)院,內(nèi)蒙古 赤峰 024005;4.赤峰市腫瘤醫(yī)院病理科,內(nèi)蒙古 赤峰 024009)

肺腺癌(Lung adenocarcinoma,LUAD)是肺癌中最常見(jiàn)的一個(gè)病理亞型,約占所有肺癌發(fā)病率的60%,且其全球發(fā)病率還在逐年升高中[1]。LUAD臨床典型癥狀為咳嗽、低熱、氣短、胸痛,主要誘因?yàn)槲鼰?、職業(yè)暴露、遺傳因素等,早期與絕大多數(shù)肺癌癥狀表現(xiàn)一致,臨床難以區(qū)分,因此部分患者確診時(shí)已經(jīng)是中晚期LUAD[2]。晚期肺癌患者更傾向于分子靶向治療,現(xiàn)今臨床已經(jīng)推出了針對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體(Epidermal growth factor receptor,EGFR)、人表皮生長(zhǎng)因子受體2(Human epidermal growth factor receptor 2,HER2)、間變性淋巴瘤激酶(Anaplastic lymphoma kinase,ALK)等多個(gè)基因的靶向治療抑制劑,但仍有更多的基因靶向抑制劑有待挖掘[3-5]。多位學(xué)者發(fā)現(xiàn)預(yù)后生物標(biāo)志物在LUAD診療中具有重要意義,因此將焦點(diǎn)放到了對(duì)LUAD預(yù)后生物標(biāo)志物的探索上[6-7]。李成長(zhǎng)等[8]基于LUAD基因表達(dá)譜篩選出包括細(xì)胞分裂周期相關(guān)蛋白8(CDCA8)在內(nèi)的10個(gè)LUAD預(yù)后關(guān)鍵基因,表明它們有望成為L(zhǎng)UAD治療新的潛在藥物靶點(diǎn)。CDCA8是染色體乘客復(fù)合體(CPC)重要組分之一,CPC是調(diào)控有絲分裂的重要復(fù)合物,具有高度保守性,因此CDCA8在細(xì)胞分裂、著絲粒定位、染色體粘連上起著不可或缺的作用。且報(bào)道指出CDCA8在多個(gè)惡性腫瘤中呈上調(diào)表達(dá),但目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于CDCA8與LUAD組織病理參數(shù)、預(yù)后的相關(guān)性報(bào)道尚不多見(jiàn)。因此為進(jìn)一步明確CDCA8與病理特征、預(yù)后的關(guān)系,本研究擬分析LUAD組織CDCA8蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)、預(yù)后的相關(guān)性,報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇醫(yī)院2020年3月至2022年6月期間收治的98例LUAD患者。其中男56例,女42例,年齡29～84歲,平均(62.38±7.24)歲。病例納入標(biāo)準(zhǔn):①病理診斷為L(zhǎng)UAD[9];②經(jīng)手術(shù)切除治療,患者及家屬同意醫(yī)院收集患者新鮮癌組織;③入組前未接受放化療等抗腫瘤治療手段;④無(wú)其他惡性腫瘤病史;⑤臨床和病理資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):①手術(shù)禁忌證;②合并嚴(yán)重器質(zhì)性及全身系統(tǒng)性疾病;③合并精神疾病,不能配合研究。研究經(jīng)過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 標(biāo)本制作和免疫組化染色 將患者LUAD新鮮癌組織通過(guò)浸泡固定液、無(wú)水乙醇脫水、透明、浸蠟后在石蠟中進(jìn)行包埋,修整蠟塊邊緣切為厚度3 μm的薄片,在載玻片上進(jìn)行蘇木素-伊紅(HE)染色和CDCA8(1∶50和1∶500稀釋)染色,抗體為兔抗CDCA8多克隆抗體,購(gòu)自武漢三鷹生物有限公司。全部新鮮癌組織切片后均在同一條件下進(jìn)行染色,在適當(dāng)倍數(shù)下觀察LUAD癌細(xì)胞中CDCA8蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果判讀:由兩位高年資病理科醫(yī)師在未知病理情況下進(jìn)行結(jié)果解讀,以染色強(qiáng)度和陽(yáng)性率評(píng)分共同判斷CDCA8表達(dá)水平,染色強(qiáng)度判定:觀察組織染色情況,無(wú)染色對(duì)應(yīng)0分,淺黃色對(duì)應(yīng)1分,棕黃色對(duì)應(yīng)2分,黃褐色對(duì)應(yīng)3分,陽(yáng)性率判定:觀察陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量,無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞對(duì)應(yīng)0分,陽(yáng)性細(xì)胞<25%對(duì)應(yīng)1分,陽(yáng)性細(xì)胞為25%～50%對(duì)應(yīng)2分,陽(yáng)性細(xì)胞>50%對(duì)應(yīng)3分,染色強(qiáng)度和陽(yáng)性率的分值之和為CDCA8蛋白表達(dá)評(píng)估標(biāo)準(zhǔn),1～3分判定為CDCA8蛋白低陽(yáng)性表達(dá),4～6分判定為CDCA8蛋白高陽(yáng)性表達(dá)。按照CDCA8蛋白高陽(yáng)性、低陽(yáng)性表達(dá)將98例LUAD患者分為高陽(yáng)性組(67例)和低陽(yáng)性組(31例)。

1.3 觀察指標(biāo) 收集并比較兩組臨床病理參數(shù),包括年齡、性別、吸煙史、TNM分期(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期)、腫瘤體積(<10 mm3、10～30 mm3、>30 mm3)、腫物數(shù)量(單發(fā)、多發(fā))、腫瘤位置(左肺上葉、左肺下葉、右肺上葉、右肺中葉、右肺下葉)、分化程度(高分化、中分化、低分化)、胸膜侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。比較兩組預(yù)后情況,隨訪(門診、微信、電話等)截至2023年1月,記錄患者生存時(shí)間及死亡情況,繪制LUAD患者生存曲線,比較兩組隨訪期間的無(wú)病生存率和總生存率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料用[例(%)]表示,采用χ2檢驗(yàn);無(wú)病生存率和總生存率采用Kaplan-Meier曲線描述;檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1 兩組臨床病理參數(shù)比較 兩組TNM分期、腫瘤體積、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臟層胸膜侵犯比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組臨床病理參數(shù)比較[例(%)]

2.2 兩組臨床病理參數(shù)多因素分析結(jié)果比較 以CDCA8蛋白表達(dá)(高陽(yáng)性表達(dá)=1,低陽(yáng)性表達(dá)=0)為因變量,以TNM分期(Ⅰ期=1,Ⅱ期=2,Ⅲ期=3)、腫瘤體積(<10 mm3=1,10～30 mm3=2,>30 mm3=3)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(是=1,否=0)、臟層胸膜侵犯(是=1,否=0)為協(xié)變量,Logistics回歸分析結(jié)果顯示腫瘤體積10～30 mm3、腫瘤體積>30 mm3、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是CDCA8蛋白高陽(yáng)性表達(dá)的影響因素(均P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩組臨床病理參數(shù)多因素分析結(jié)果比較

2.3 CDCA8蛋白表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系 Kaplan-Meier生存曲線結(jié)果顯示CDCA8(1∶500稀釋)蛋白高陽(yáng)性組無(wú)病生存率為28.5%,低陽(yáng)性組無(wú)病生存率為51.6%,兩組無(wú)病生存率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=5.268,Log Rank=0.022);CDCA8蛋白高陽(yáng)性組總生存率為60.9%,低陽(yáng)性組總生存率為80.0%,兩組總生存率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=4.614,Log Rank=0.032)。(1∶50稀釋)蛋白均高表達(dá),與生存率無(wú)關(guān),見(jiàn)圖1、2。

圖1 高陽(yáng)性組(n=67)和低陽(yáng)性組(n=31)無(wú)病生存率比較

圖2 高陽(yáng)性組和低陽(yáng)性組的總生存率比較

3 討 論

肺癌是全球癌因性死亡排名第一的惡性腫瘤,LUAD屬于非小細(xì)胞肺癌,癌變起源于支氣管黏膜上皮細(xì)胞,位于肺部周邊,是肺癌最常見(jiàn)的病理類型。目前LUAD的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,但學(xué)者發(fā)現(xiàn)LUAD的發(fā)生具有獨(dú)特的基因突變特點(diǎn),臨床已開(kāi)發(fā)出多種治療LUAD的靶向藥物,其病死率雖得到控制,但仍處于較高水平,因此臨床還需探索更多分子靶向的靶點(diǎn)[10-12]。CDCA8作為CPC主成分之一,其功能會(huì)隨著分裂時(shí)期不同而呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化,在有絲分裂的前-中-后期變化分別從附著于染色體臂和著絲粒,到集中于著絲粒,再到移動(dòng)到紡錘體,最終定位于中體。據(jù)研究報(bào)道[13-15],CDCA8參與了包括甲狀腺癌、皮膚黑色素瘤、前列腺癌、LUAD在內(nèi)的多種癌癥的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后預(yù)測(cè),多位學(xué)者認(rèn)為其可以作為癌癥治療的潛在靶點(diǎn),具有深入探索意義。Hu等[16]發(fā)現(xiàn)CDCA8是LUAD致癌因子,受上游miR-133b的調(diào)節(jié),miR-133b可以通過(guò)靶向CDCA8來(lái)抑制LUAD的增殖、侵襲和遷移,繼而減少病死率。CDCA8具有促癌作用,現(xiàn)今研究[17]已明確指出CDCA8在癌組織中呈上調(diào)表達(dá),探究其表達(dá)水平對(duì)癌癥臨床病理參數(shù)及預(yù)后的影響有助于延緩病理變化、改善預(yù)后。

本研究結(jié)果顯示,CDCA8(1∶500稀釋)高陽(yáng)性組和低陽(yáng)性組的TNM分期、腫瘤體積、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臟層胸膜侵犯差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明相較于CDCA8低陽(yáng)性患者,高陽(yáng)性患者的TNM分期更大、腫瘤體積更大、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率更高、臟層胸膜侵犯率更高,提示了CDCA8高陽(yáng)性會(huì)促進(jìn)LUAD的增殖、侵襲和遷移。進(jìn)一步Logistic回歸分析結(jié)果顯示,僅腫瘤體積(10～30 mm3、>30 mm3)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是CDCA8蛋白高陽(yáng)性表達(dá)的影響因素,提示了降低蛋白CDCA8水平可能對(duì)減小LUAD腫瘤體積、阻止LUAD患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有幫助作用。CDCA8編碼Borealin蛋白,Borealin是參與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、組成染色質(zhì)微管和形成紡錘體的重要物質(zhì),與survivin蛋白共同控制CPC的定位,再由著絲粒中心蛋白INCENP來(lái)穩(wěn)定CPC,因此Borealin和其他CPC組分的互相作用是促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)和擴(kuò)散主要原因之一[18]。另外,CDCA8還需要與上下游基因相互作用才能實(shí)現(xiàn)促癌作用,研究報(bào)道,上游驅(qū)動(dòng)蛋白驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員18B(KIF18B)可以與CDCA8的啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合激活轉(zhuǎn)錄,促進(jìn)胰腺癌增殖[19];CDCA8可以促進(jìn)細(xì)胞周期G1期阻滯,還可以通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子P21、P27等下游效應(yīng)因子來(lái)導(dǎo)致乳腺癌不良預(yù)后[20]。故CDCA8高陽(yáng)性表達(dá)患者腫瘤體積更大、更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。Kaplan-Meier生存曲線結(jié)果表明顯示,CDCA8高陽(yáng)性表達(dá)患者無(wú)病生存率和總生存率均低于CDCA8低陽(yáng)性表達(dá)患者,說(shuō)明CDCA8高陽(yáng)性表達(dá)的LUAD患者生存時(shí)間短,生存率更低,臨床預(yù)后更差。徐雷棣等[21]也報(bào)道CDCA8直接參與LUAD的發(fā)生發(fā)展和免疫浸潤(rùn),故CDCA8表達(dá)水平與LUAD患者生存期密切相關(guān),可以作為L(zhǎng)UAD患者新的治療靶點(diǎn)。研究不足之處:①樣本量小,結(jié)果代表性有限,還需進(jìn)一步驗(yàn)證結(jié)果有效性;②研究對(duì)象納入不足,研究患者全部為手術(shù)患者,未包含無(wú)法通過(guò)手術(shù)治療的LUAD患者,影響結(jié)果可靠性;③單中心研究,結(jié)果存在偏倚。

綜上所述,CDCA8表達(dá)與CDCA8蛋白稀釋濃度及LUAD的病理參數(shù)及預(yù)后存在一定關(guān)聯(lián),CDCA8表達(dá)水平越高,LUAD疾病發(fā)展嚴(yán)重,預(yù)后越差,CDCA8可以作為臨床評(píng)估LUAD患者疾病進(jìn)展及預(yù)后的新型標(biāo)志物。