包瑞瑩， 王閆宇， 劉曉烜， 張海文， 王學(xué)梅 ， 馮 昆

（1.海南大學(xué)動物科技學(xué)院，海南?？?570228；2.遵義醫(yī)科大學(xué)珠海校區(qū)，廣東珠海 519041）

中草藥是我國的特色藥材，例如黨參、黃芪、皇竹草等已有數(shù)千年的發(fā)展歷史（Xu 等，2017）。作為飼料添加劑， 中草藥可以通過改善動物的免疫狀態(tài)、促進(jìn)動物的生長性能來提高其生產(chǎn)力，因此被廣泛用于畜禽生產(chǎn)（Gong 等，2014）。 中草藥渣是中草藥經(jīng)加工提取、 煎煮制劑后產(chǎn)生的大量廢棄物， 受提取工藝的限制， 其中還含有30% ～50%的藥用活性物質(zhì) （Huang 等，2021；Meng 等，2017）。 目前常用的中草藥渣處理方法有填埋、焚燒、 堆放等， 造成了嚴(yán)重的環(huán)境污染和資源浪費(fèi)（孟祥才等，2018）。發(fā)酵技術(shù)已應(yīng)用于非常規(guī)飼料原料處理多年，以此擴(kuò)大飼料資源，解決飼料短缺問題，其中常用的發(fā)酵菌種有乳酸菌、酵母菌、芽孢桿菌和藥用真菌等 （吳軍龍等，2022；Li 等，2020）。 張玉千（2020）研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加發(fā)酵中草藥渣可以提高斷奶仔豬的生產(chǎn)性能。 梁麗芬（2022）使用發(fā)酵羅漢果渣飼喂肉雞發(fā)現(xiàn)，其屠宰性能得到了顯著改善。安琦等（2021）研究表明，植物乳桿菌發(fā)酵的黃芩藥渣可以顯著提高斷奶仔豬的生長性能和免疫功能。 然而發(fā)酵中草藥渣作為飼料添加劑對家禽的相關(guān)研究報道有限。

文昌雞是海南地方雞品種，具有皮薄肉嫩、風(fēng)味獨(dú)特、營養(yǎng)豐富等特點(diǎn)，年產(chǎn)值約120 億元，對海南省畜禽養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展具有重要支撐作用（宋彥亭等，2021）。本試驗(yàn)以發(fā)酵中草藥渣為原料，研究其不同添加量對文昌雞生長、 屠宰性能和免疫機(jī)能的影響， 從而為發(fā)酵中草藥渣作為飼料添加劑提供可行性方向和理論支撐， 對提高文昌雞飼養(yǎng)效率等方面具有實(shí)踐意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 靈芝菌：由本課題組篩選鑒定。發(fā)酵中草藥渣的成分及處理方式：22%黨參藥渣，22%黃芪藥渣，44%皇竹草，11%麥麩，1%生石膏，65%蒸餾水。 經(jīng)121 ℃高壓滅菌20 min 后，接種靈芝菌有氧發(fā)酵30 d 所得發(fā)酵產(chǎn)物烘干粉碎制成。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計與飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)在海南大學(xué)動物科技學(xué)院動物養(yǎng)殖基地進(jìn)行， 試驗(yàn)雞由譚牛文昌雞種雞場提供。選擇192 只43 日齡的文昌雞母雞，隨機(jī)分為4 組，每組8 個重復(fù)，每個重復(fù)6 只雞。 對照組（CK 組） 飼喂基礎(chǔ)日糧，T1、T2、T3組的基礎(chǔ)日糧中分別添加0.5%、1.0%、1.5%的發(fā)酵中草藥渣替代麥麩。 試驗(yàn)共持續(xù)28 d，試驗(yàn)雞采取籠養(yǎng)的方式，期間自由采食和飲水，自然通風(fēng)和光照。 基礎(chǔ)日糧的配制符合中國禽類的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（NY/T 33-2004），基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 測定指標(biāo)與方法

1.3.1 生長性能 記錄每個重復(fù)的投料量和剩余料量。 試驗(yàn)第14 天和第28 天晚清空料槽內(nèi)的剩余飼料，并在試驗(yàn)雞空腹12 h 后進(jìn)行稱重，以重復(fù)為單位記錄總重。計算平均日增重、平均日采食量、料重比，公式如下。 每日觀察各組試驗(yàn)雞的健康狀態(tài)，統(tǒng)計死亡率。

平均日增重/（g/d）=（末重-初重）/試驗(yàn)天數(shù)；

平均日采食量/（g/d）=飼料消耗量/試驗(yàn)天數(shù)；

料重比=平均日采食量/平均日增重。

1.3.2 屠宰性能 試驗(yàn)結(jié)束后， 每個重復(fù)隨機(jī)選取2 只體型相近的空腹試驗(yàn)雞， 稱重后靜脈放血處死。 測定活體重、屠體重、半凈膛重、全凈膛重、腹脂重、左側(cè)腿肌重、左側(cè)翅膀重，并通過所得數(shù)據(jù)計算屠宰率、半凈膛率、全凈膛率、腹脂率、腿比率、翅膀率，具體方法參照《家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語和度量統(tǒng)計方法》（NY/T 823-2020）。 從試驗(yàn)雞尾根部切線向上沿第一切線剝離兩側(cè)皮膚， 使用游標(biāo)卡尺測量脂肪帶的寬度，得到皮下脂肪厚度。

屠宰率/%=胴體重/活體重×100；

半凈膛率/%=半凈膛重/活體重×100；

全凈膛率/%=全凈膛重/活體重×100；

腹脂率/%=腹脂重/（全凈膛重+腹脂重）×100；

腿比率/%=腿肌重/全凈膛重×100；

翅膀率/%=翅膀重/全凈膛重×100。

1.3.3 免疫器官指數(shù) 文昌雞屠宰后， 取胸腺和脾臟（剔除脂肪和系膜）分別稱重，計算免疫器官指數(shù)。

脾臟指數(shù)=脾臟重/活體重；

胸腺指數(shù)=胸腺重/活體重。

1.3.4 免疫組織形態(tài) 試驗(yàn)結(jié)束后每個處理隨機(jī)選取1 只文昌雞取胸腺和脾臟組織， 利用多聚甲醛固定，制作石蠟組織切片，經(jīng)H.E.染色法處理后，顯微鏡下觀察其淋巴細(xì)胞數(shù)量變化。

1.3.5 血清免疫指標(biāo) 分離血清后， 使用試劑盒（南京建成生物工程研究所）檢測血清免疫球蛋白A （IgA）、 免疫球蛋白G （IgG）、 免疫球蛋白M（IgM）含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理和分析 使用Excel 2007 對數(shù)據(jù)進(jìn)行初步整理， 再通過SPSS 17.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析，P ＜0.05 為差異顯著，P ＜0.01 為差異極顯著。 結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞生長性能的影響如表2 所示，飼料中添加發(fā)酵中草藥渣后，試驗(yàn)第1 ～14 天，T1、T2、T3 組平均日增重較CK 組分別提高了9.73%、5.64%、2.25%，其中T1、T2 組差異顯著（P ＜0.05）。 各處理組間的平均日采食量、料重比無顯著差異（P ＞0.05）；試驗(yàn)第15 ～28 天，各生長性能指標(biāo)均無顯著差異（P ＞0.05）。整個試驗(yàn)期間無試驗(yàn)動物死亡。

表2 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞生長性能的影響

2.2 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞屠宰性能的影響由表3 可知， 用一定比例的發(fā)酵中草藥渣替代部分基礎(chǔ)日糧后， 與CK 組相比，T1、T2、T3 組腿比率分別提高了5.04%、6.74%、7.67%（P ＜0.05），試驗(yàn)組的屠宰率呈遞增趨勢，T1、T2 組翅膀率有所增加，但是差異均不顯著（P ＞0.05）。 各處理組間的全凈膛率、腹脂率、皮下脂肪厚度均無顯著差異（P ＞0.05）。

表3 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞屠宰性能的影響

2.3 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞免疫機(jī)能的影響

2.3.1 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞免疫器官發(fā)育的影響 由表4 可見，T1、T2、T3 組脾臟質(zhì)量較CK 組分別提高了8.53%、21.33%、5.69%，其中T2 組差異顯著（P ＜0.05）。 各試驗(yàn)組的脾臟指數(shù)、胸腺質(zhì)量和胸腺指數(shù)均有增長的趨勢， 且T2 組增加最高，但是無顯著差異（P ＞0.05）。觀察圖1 可知，試驗(yàn)組中文昌雞脾臟和胸腺組織中的淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯多于CK 組。

圖1 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞脾臟、胸腺組織中淋巴細(xì)胞數(shù)量的影響

表4 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞免疫器官質(zhì)量和指數(shù)的影響

2.3.2 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞血清免疫蛋白的影響 如表5 所示， 添加一定含量的發(fā)酵中草藥渣后，T1、T2、T3 組文昌雞血清中的IgA、IgG 含量均高于CK 組，分別提高了26.75%、35.31%、26.54%和41.60%、55.33%、33.42%， 其中T1、T3 組增加顯著（P ＜0.05），T2 組增加極顯著（P ＜0.01）。 各處理組間血清中的IgM 含量無顯著差異 （P ＞0.05）。

表5 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞血清免疫蛋白的影響 μg/mL

3 討論

3.1 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞生長性能的影響中草藥渣中含有大量纖維素、脂肪和蛋白質(zhì)、多糖等生物活性成分 （馬遜風(fēng)等，2004； 吳純潔等，1998）。 在發(fā)酵過程中，微生物可以將中草藥渣中的大分子物質(zhì)分解為小分子物質(zhì)， 釋放其藥用活性成分， 降解中草藥渣中的有毒物質(zhì)以減少其副作用，從而更利于被動物直接吸收，微生物產(chǎn)生的大量代謝產(chǎn)物還可以促進(jìn)動物的生長發(fā)育（劉曉烜等，2021；Chen 等，2012；Himmel 等，2007）。 閆先超（2016）研究發(fā)現(xiàn)，在青腳麻雞的飼糧中添加黃芪藥渣發(fā)酵物后， 其平均日增重得到了顯著提高，生長性能得到了改善。盧浪（2022）將野生艾草和不同濃度黑曲霉發(fā)酵的艾草飼喂肉仔雞發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵艾草提高了其生長性能且效果優(yōu)于野生艾草。 譚雁婷（2022）發(fā)現(xiàn)，3%的香菇發(fā)酵料可以有效促進(jìn)黃羽肉雞的生產(chǎn)性能。本研究結(jié)果中，試驗(yàn)第1 ～14 天，飼喂發(fā)酵中草藥渣提高了文昌雞的平均日增重， 其中0.5%、1.0%的添加量組差異顯著，而各組的平均日采食量和料重比無顯著差異。試驗(yàn)第15 ～28 天，各指標(biāo)均無顯著差異，整個試驗(yàn)階段無死亡。 說明發(fā)酵中草藥渣對文昌雞無明顯副作用， 且對其生長發(fā)育起到了一定的促進(jìn)作用。 可能是發(fā)酵中草藥渣的活性物質(zhì)和微生物代謝產(chǎn)物改善了文昌雞的腸道功能， 促進(jìn)其消化吸收營養(yǎng)物質(zhì)的能力， 而試驗(yàn)后期文昌雞的生長逐漸達(dá)到平緩階段，基礎(chǔ)日糧已滿足自身需求（徐輝等，2021）。

3.2 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞屠宰性能的影響屠宰性能是反映禽類胴體品質(zhì)的重要指標(biāo)， 其中屠宰率和全凈膛率是衡量禽類產(chǎn)肉性能的主要指標(biāo)。 一般認(rèn)為屠宰率高于80%、 全凈膛率高于60%的禽類肉用性能良好（張紅等，2004）。腿比率和翅膀率越高說明禽類的腿和翅膀所占比率越大，產(chǎn)肉性能越好。腹脂率和皮下脂肪厚度反映了家禽的脂肪在腹部和皮下的沉積能力， 而脂肪沉積過多會導(dǎo)致雞的屠宰率和飼料轉(zhuǎn)化率降低，腹脂率和皮下脂肪厚度值越高， 則說明產(chǎn)肉率越?。◤埛f等，2022；韓文朋等，2019）。張強(qiáng)等（2022）研究發(fā)現(xiàn)， 基礎(chǔ)飼糧中添加3%的發(fā)酵穿心蓮粉可以顯著提高番鴨的屠宰率和胸肌率， 產(chǎn)肉性能得到了改善。高鳳磊（2022）研究表明，在黃花雞的基礎(chǔ)日糧中添加5%發(fā)酵劍麻渣可以顯著提高屠宰率。 本試驗(yàn)結(jié)果表明， 所有處理組的屠宰率大于87%，全凈膛率大于65%，說明試驗(yàn)所用文昌雞肉用性能良好。 在飼料中添加發(fā)酵中草藥渣對半凈膛率、腹脂率、皮下脂肪厚度均無顯著影響，但是提高了屠宰率，顯著增加了腿比率，0.5%、1.0%的發(fā)酵中草藥渣提高了文昌雞的翅膀率， 說明發(fā)酵中草藥渣有利于文昌雞的器官發(fā)育， 可以提高其屠宰性能，改善產(chǎn)肉能力。

3.3 發(fā)酵中草藥渣對文昌雞免疫機(jī)能的影響在家禽的生長發(fā)育過程中， 胸腺和脾臟是免疫系統(tǒng)中主要的免疫器官， 在抵抗外來病原微生物入侵的作用上起著不可取代的作用。 胸腺是中樞免疫器官，是免疫細(xì)胞發(fā)生、發(fā)育、分化與成熟的場所， 同時對外周免疫器官的發(fā)育起到主導(dǎo)作用。脾臟是外周免疫器官， 是參與免疫反應(yīng)的重要部位，主要免疫功能是產(chǎn)生抗體（欒維民，2008）。 免疫器官質(zhì)量增加是免疫力加強(qiáng)的表現(xiàn)， 免疫器官指數(shù)是免疫器官質(zhì)量占活體重的比例， 值越高則代表免疫器官的相對發(fā)育情況越好， 相應(yīng)免疫功能也越完善（江彥等，2018；余祖華等，2016）。陳柯源等（2020）使用枯草芽孢桿菌發(fā)酵當(dāng)歸、黃芪藥粉發(fā)現(xiàn)，其可以顯著增加肉雞的免疫器官指數(shù)。張曉靜等（2018）研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵黃芪-甘草水提物增強(qiáng)817 肉雞免疫功能的效果優(yōu)于未發(fā)酵產(chǎn)物。家禽血液中淋巴細(xì)胞的主要來源是胸腺， 淋巴細(xì)胞對抗原刺激進(jìn)行免疫應(yīng)答主要在脾臟中進(jìn)行，且血清中免疫球蛋白的主要來源是淋巴細(xì)胞，因此淋巴細(xì)胞的數(shù)量可在一定程度上評估家禽的免疫能力（杜平，2022；董淑珍等，2011）。 姜云瑤等（2016）使用扁靈芝發(fā)酵浸膏發(fā)現(xiàn)，可以促進(jìn)肉雞淋巴細(xì)胞的增殖。鄭全等（2013）研究發(fā)現(xiàn)，蟲草真菌固態(tài)發(fā)酵添加劑可以促進(jìn)加肉仔雞免疫組織淋巴細(xì)胞的成熟，增加其數(shù)量。 本研究結(jié)果顯示，飼喂發(fā)酵中草藥渣后文昌雞的免疫器官質(zhì)量均有提高， 其中1.0%的添加水平顯著增加了脾臟質(zhì)量，各試驗(yàn)組的免疫器官指數(shù)均高于對照組，且1.0%發(fā)酵中草藥渣組值最高， 并且發(fā)酵中草藥渣能夠明顯增加文昌雞淋巴細(xì)胞的數(shù)量。 說明在飼料中添加發(fā)酵中草藥渣對免疫器官的發(fā)育、 免疫活性細(xì)胞的增殖具有明顯促進(jìn)作用， 增強(qiáng)了機(jī)體的抗病力，提高機(jī)體免疫功能，其中添加量為1.0%時效果最佳。

IgA、IgG、IgM 是家禽血清中重要的抗體，當(dāng)細(xì)菌或病毒入侵機(jī)體時， 可以與相應(yīng)的抗原進(jìn)行特異性結(jié)合，激活體液免疫，達(dá)到清除細(xì)菌、病毒、致病物質(zhì)的作用，對機(jī)體有保護(hù)和防御功能，因此IgA、IgG、IgM 的含量越高代表家禽免疫功能越強(qiáng)（解軍亮等，2022）。 IgA 參與黏膜免疫，在局部損傷中發(fā)揮作用；IgG 是血清中含量最高、最重要的免疫球蛋白，在體液免疫中起主導(dǎo)作用；IgM 是機(jī)體受到抗原刺激時產(chǎn)生的第一種抗體， 在早期防御中起著重要作用 （Song 等，2020； 馬玉芳等，2008）。 范作良等（2016）研究發(fā)現(xiàn)，日糧中發(fā)酵后的中草藥制劑可以極顯著提高蛋雞血清中的I-gA、IgG、IgM 含量。許棟等（2021）在產(chǎn)蛋后期的蛋雞飼料中添加發(fā)酵中草藥發(fā)現(xiàn)， 其球蛋白含量有極顯著的提高。 謝全喜等（2016）使用鼠李糖乳桿菌發(fā)酵紫莖澤蘭脫毒草粉和麩皮， 聯(lián)合枯草芽孢桿菌飼喂黃羽肉雞發(fā)現(xiàn)，其盲腸內(nèi)容物sIgA 和血清IgG 含量得到顯著增加。本研究結(jié)果顯示，各處理組IgM 含量差異不顯著，推測可能是試驗(yàn)?zāi)┢谖牟u已渡過早期免疫階段， 因此發(fā)酵中草藥渣對抗原刺激誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答產(chǎn)生的IgM 水平影響不大，其機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。而飼料中添加0.5%、1.5%的發(fā)酵中草藥渣顯著提高了文昌雞血清中的IgA、IgG 含量，1.0%的發(fā)酵中草藥渣有極顯著的提高， 說明添加發(fā)酵中草藥渣能夠提高文昌雞的免疫抗體水平， 從而進(jìn)一步加強(qiáng)其免疫功能，且1.0%的添加量效果最佳，可能是發(fā)酵所使用的靈芝真菌與各中草藥渣成分發(fā)生協(xié)同作用，具有增強(qiáng)免疫力的功效， 且中草藥渣經(jīng)發(fā)酵后多糖等活性成分的增加也會引起免疫指標(biāo)水平的升高（解軍亮等，2022；陳柯源等，2020）。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明， 在飼料中添加發(fā)酵中草藥渣可以顯著改善文昌雞的生長性能、 屠宰性能和免疫機(jī)能， 以添加1.0%的發(fā)酵中草藥渣效果最優(yōu)。