戴悅欣,楊利峰,趙德明,周向梅

(中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院國(guó)家動(dòng)物海綿狀腦病實(shí)驗(yàn)室,北京 100193)

隨著伴侶動(dòng)物壽命的增加以及腫瘤分類體系的逐漸完善,研究者們發(fā)現(xiàn)犬貓牙源性腫瘤的發(fā)病率逐漸增加[1],是犬貓最常見(jiàn)的口腔良性腫瘤[2-3],發(fā)生于頜骨內(nèi)或頜骨外的牙齦內(nèi),但是由于牙齒的解剖學(xué)和發(fā)育過(guò)程較復(fù)雜,診斷通常具有挑戰(zhàn)性。歷史上對(duì)于牙源性腫瘤的分類缺乏統(tǒng)一性。Meuten[4]參照WHO對(duì)人類牙源性腫瘤的分類,在《家畜腫瘤(第五版)》中將犬貓牙源性腫瘤分為5大類:1)含成熟纖維基質(zhì)的牙源性上皮腫瘤,無(wú)牙源性外胚層間質(zhì);2)含牙源性外胚層間質(zhì)的牙源性上皮瘤,有或無(wú)牙齒硬組織形成;3)有或無(wú)牙源性上皮的間質(zhì)和/或牙源性外胚層間質(zhì)腫瘤;4)牙源性囊腫;5)非腫瘤性腫物[4]。牙源性腫瘤一般由牙源性上皮與牙源性外胚層間充質(zhì)兩種成分構(gòu)成。在組織病理學(xué)對(duì)牙源性腫瘤的診斷中,牙源性上皮的存在是其診斷的關(guān)鍵之一。牙源性上皮細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞角蛋白(cytokeratin,CK)7、13、14、19,其中CK14在牙源性上皮發(fā)育的各個(gè)階段均表達(dá),包括牙板及星狀網(wǎng)[5-6]。波形蛋白(vimentin)表達(dá)于牙源性腫瘤的間充質(zhì)細(xì)胞[7]。本文按照Meuten的分類對(duì)近15年的犬貓牙源性腫瘤發(fā)病情況以及組織病理學(xué)特征進(jìn)行回顧性分析。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病例選擇 腫瘤樣本選自2007—2022年,國(guó)家海綿狀腦病實(shí)驗(yàn)室診斷的來(lái)自全國(guó)多家寵物醫(yī)院送檢組織樣本或切片,共收集口腔腫瘤371例,其中牙源性腫瘤117例,犬93例,貓24例。

1.1.2 試劑與儀器 CK14抗體(bs-1792R; Bioss),vimentin抗體(ab8069; Abcam),GTVisionTM+Detection system/Mo&Rb (GK600710; Gene Tech),OLYMPUSU-SRG數(shù)碼顯微鏡。

1.2 方法

1.2.1 制備切片和HE染色 將腫瘤組織樣本固定于中性10%福爾馬林溶液中,石蠟包埋,以3 μm厚度進(jìn)行連續(xù)切片,常規(guī)制備石蠟切片,HE染色。顯微鏡觀察采集圖像,記錄結(jié)果。

1.2.2 免疫組織化學(xué)染色 免疫組織化學(xué)染色采用EnVisioner二步法,一抗CK14抗體購(gòu)自Bioss公司,vimentin抗體購(gòu)自Abcam公司。二抗抗體采用Gene Tech公司兔/鼠通用型試劑。用二氨基聯(lián)苯胺( diaminobenzidine,DAB) 顯色,陽(yáng)性信號(hào)為棕黃色顆粒。顯微鏡觀察并采集圖像,記錄結(jié)果。

2 結(jié) 果

2.1 2007—2022年犬、貓牙源性腫瘤病例統(tǒng)計(jì)

2007—2022年,作者共收集犬貓口腔腫瘤371例,其中牙源性腫瘤117例。通過(guò)分析可以看出,犬比貓更容易發(fā)生牙源性腫瘤。在犬中,外周牙源性纖維瘤的發(fā)病率最高(50.5%),雄性發(fā)病率(57.4%)高于雌性。其次是犬棘細(xì)胞型成釉細(xì)胞瘤(22.6%),同樣是雄性犬高發(fā)(61.9%)。第三種犬最常見(jiàn)的類型是牙齦增生(10.8%),雄性高發(fā)(50%)。成釉細(xì)胞瘤排名第四(7.5%),雄性發(fā)病率遠(yuǎn)高于雌性(85.7%)。此外,在收集到的病例中,成釉細(xì)胞纖維瘤和成釉細(xì)胞纖維牙瘤(6.5%)以及混合型牙瘤(2.2%)也曾發(fā)生,但發(fā)病率較低。在貓中,牙齦增生的發(fā)生率最高(66.7%),無(wú)明顯的性別差異。第二常見(jiàn)的類型是成釉細(xì)胞瘤(20.8%),雄性發(fā)病率較高。外周牙源性纖維瘤居第3位(12.5%)。具體數(shù)據(jù)如表1所示。

表1 2007—2021犬貓牙源性腫瘤病例統(tǒng)計(jì)

2.2 犬貓牙源性腫瘤組織病理學(xué)特征

2.2.1 外周牙源性纖維瘤 犬貓外周牙源性纖維瘤屬于牙源性外間質(zhì)腫瘤[4]。HE染色后鏡下可見(jiàn)腫瘤大部分由密度不等的膠原纖維和均勻分布的星狀細(xì)胞構(gòu)成,可見(jiàn)結(jié)締組織中存在大量空的大血管,類似牙周韌帶(圖1A、B)?？赡芤嗫梢?jiàn)少量的牙源性上皮細(xì)胞島鑲嵌其中。牙齒硬組織的形成在外周牙源性纖維瘤中也比較常見(jiàn)。對(duì)外周牙源性纖維瘤石蠟切片進(jìn)行vimentin免疫組織化學(xué)染色,可見(jiàn)間質(zhì)細(xì)胞中表現(xiàn)出陽(yáng)性信號(hào)(圖1C)。

A. 外周牙源性纖維瘤由大量牙源性外間質(zhì)成分構(gòu)成(100×);B. 外周牙源性纖維瘤內(nèi)可見(jiàn)均勻間隔分布的星狀細(xì)胞和較大的牙周膜樣空血管(400×);C. 外周牙源性纖維瘤中,牙源性外胚間質(zhì)表達(dá)波形蛋白(200×)A. Peripheral odontogenic fibroma is composed of odontogenic ectomesenchyme (100×); B. eripheral odontogenic fibroma with evenly spaced stellate cells and larger empty vessels represent the PDL (arrow) (400×); C. Immunohistochemical expression of vimentin in the odontogenic ectomesenchyme (200×)圖1 外周牙源性纖維瘤(HE染色,IHC染色)Fig.1 Peripheral odontogenic fibroma (HE staining, IHC staining)

2.2.2 犬棘細(xì)胞型成釉細(xì)胞瘤 犬棘細(xì)胞型成釉細(xì)胞瘤是一種牙源性上皮來(lái)源的腫瘤,由于其在臨床表現(xiàn)出更強(qiáng)的侵襲性,常侵襲周圍骨質(zhì)而被獨(dú)立于成釉細(xì)胞瘤,單獨(dú)分為一類[4]。不同于成釉細(xì)胞瘤,犬棘細(xì)胞型成釉細(xì)胞瘤的非基底層上皮細(xì)胞間可見(jiàn)明顯的細(xì)胞間橋結(jié)構(gòu),是復(fù)層鱗狀上皮中棘細(xì)胞的標(biāo)志性形態(tài)(圖2A、B)。牙源性上皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)CK14陽(yáng)性信號(hào)可以輔助對(duì)細(xì)胞來(lái)源的鑒別(圖2C)。

2.2.3 成釉細(xì)胞瘤 犬貓成釉細(xì)胞瘤在HE染色下,增生的牙源性上皮細(xì)胞呈片狀或島嶼狀排列。分化成熟的成釉細(xì)胞瘤中可見(jiàn)兩種形態(tài)的上皮細(xì)胞,其一是外周基底層細(xì)胞,呈高柱狀,排列成柵欄樣,其二為中央非基底層細(xì)胞胞質(zhì)相互吻合,稱星狀網(wǎng)(圖3A、B)。低分化的成釉細(xì)胞瘤中腫瘤細(xì)胞形態(tài)相似,呈橢圓形或圓形,細(xì)胞核呈圓形,深染,大小相似,未形成特征性星狀網(wǎng)(圖3D、E),為了對(duì)牙源性上皮成分進(jìn)行鑒別,對(duì)石蠟切片進(jìn)行CK14免疫組織化學(xué)染色,可見(jiàn)牙源性上皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)陽(yáng)性信號(hào)(圖3C、F)。

2.2.4 成釉細(xì)胞纖維瘤與成釉細(xì)胞纖維牙瘤 犬貓成釉細(xì)胞纖維瘤與成釉細(xì)胞纖維牙瘤并不常見(jiàn)。在作者收集的117個(gè)牙源性腫瘤中,成釉細(xì)胞纖維瘤6例(5.1%),成釉細(xì)胞纖維牙瘤2例(1.7%)。腫瘤中可見(jiàn)2種組織來(lái)源的細(xì)胞,一種是呈索狀或片狀排列的牙源性上皮細(xì)胞,一種是豐富、分化良好、疏松的牙源性外間質(zhì),類似牙周韌帶結(jié)構(gòu)。間質(zhì)中可見(jiàn)細(xì)膠原纖維束,均勻分布的數(shù)量和密度不等的星狀細(xì)胞,以及擴(kuò)張但內(nèi)無(wú)紅細(xì)胞的血管(圖4A、B)。當(dāng)腫瘤內(nèi)形成牙本質(zhì)等牙齒硬組織時(shí),病理診斷應(yīng)為成釉細(xì)胞纖維牙瘤(圖4E、F)?？梢允褂肅K14及Vimentin免疫組化標(biāo)記物對(duì)牙源性上皮(圖4D、H)及牙源性外間質(zhì)(圖4C、G)成分進(jìn)行鑒別。

2.2.5 混合型牙瘤 犬貓混合型牙瘤是牙瘤的一種,發(fā)病率較低。在作者收集的117例病例中,僅有2例(1.7%)。HE染色下可見(jiàn)腫瘤由無(wú)規(guī)則排列的各種發(fā)育階段的牙源性組織組成。包括細(xì)胞成分豐富間質(zhì)結(jié)締組織及牙骨質(zhì),牙釉形成(圖5A),腫瘤中可見(jiàn)少量島嶼狀排列的牙源性上皮島(圖5B)。

A. 復(fù)合型牙瘤中可見(jiàn)牙骨質(zhì)(三角形)和牙釉質(zhì)(方形)形成(100×);B. 復(fù)合型牙瘤中含有少量牙源性上皮(箭頭所示)(400×)A. Complex odontoma with cementum (triangle) and enamel (square) formation (100×); B. Complex odontoma with small amount of odontogenic epithelium (arrow) (400×)圖5 復(fù)合型牙瘤(HE染色)Fig.5 Complex odontoma (HE staining)

2.2.6 牙齦增生及增生性齒齦炎 犬貓牙齦增生,特別是黏膜下層的增生,是犬貓中常見(jiàn)的非腫瘤性增生[4,8]。由于牙齦增生表現(xiàn)為大量結(jié)締組織的增生,它有時(shí)會(huì)與外周牙源性纖維瘤混淆。然而,HE染色下可見(jiàn)牙齦增生多為成熟的纖維結(jié)締組織被增生性鱗狀上皮覆蓋,缺乏PDL-樣空的擴(kuò)張血管。另外,與牙源性腫瘤不同的是,牙齦增生不會(huì)有牙源性上皮和牙齒硬組織形成(圖6A、B)。牙齦增生通常繼發(fā)炎癥,則稱為增生性牙齦炎[9]。在本例中可見(jiàn)大量漿細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)(圖6C、D)。

A. 牙齦增生主要為成熟的纖維結(jié)締組織被增生性鱗狀上皮所覆蓋(100×);B. 膠原豐富的成熟纖維結(jié)締組織(400×);C. 增生性牙齦炎結(jié)締組織間可見(jiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)(100×);D. 增生性牙齦炎中可見(jiàn)漿細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)(400×)A. Gingival hyperplasia is mostly composed of mature fibrous connective tissue covered with hyperplastic squamous epithelium (100×); B. Dense collagen in gingival hyperplasia (400×); C. A large number of inflammatory cells is seen in proliferative gingivitis (100×); D. Plasma cells and neutrophils in proliferative gingivitis (400×)圖6 牙齦增生與增生性牙齦炎(HE染色)Fig.6 Gingival hyperplasia and proliferative gingivitis (HE staining)

3 討 論

在本文中,作者對(duì)117例犬貓牙源性腫瘤進(jìn)行了回顧性病理學(xué)分析,統(tǒng)計(jì)了各類牙源性腫瘤的發(fā)病情況,并且通過(guò)HE染色和免疫組化顯示了不同牙源性腫瘤的組織學(xué)特征。作者發(fā)現(xiàn),在犬貓中牙源性腫瘤的發(fā)病率相當(dāng)高,占所有口腔腫瘤的31.5%。犬比貓的發(fā)病率更高。在犬中,外周牙源性纖維瘤的發(fā)病率最高(50.5%),其中雄性(57.4%)的發(fā)病率高于雌性。在先前的研究中曾提到,絕育雄性犬似乎擁有更高的發(fā)病率,而未絕育的雌性犬則較少[8]。犬中第二常見(jiàn)的牙源性腫瘤類型是犬棘細(xì)胞型成釉細(xì)胞瘤(22.6%),雄性發(fā)病率高(61.9%)。然而,在之前的一部分研究中顯示雌性發(fā)病率高[10],而另外一些研究則表示沒(méi)有發(fā)現(xiàn)顯著的性別差異[8],這可能與統(tǒng)計(jì)的病例數(shù)量有關(guān)。第三種常見(jiàn)類型為牙齦增生(10.8%)。這是一種由牙菌斑或牙結(jié)石引起的反應(yīng)性病變[11],雄性發(fā)病率高(50%),與前人的研究相似[8]。成釉細(xì)胞瘤排在第四位(7.5%),雄性比例更高(85.7%)。此外,成釉細(xì)胞纖維瘤、成釉細(xì)胞纖維牙瘤、牙瘤發(fā)病率較低。在貓中,牙齦增生的發(fā)病率最高(66.7%),沒(méi)有明顯的性別傾向。第二常見(jiàn)類型為成釉細(xì)胞瘤(20.8%),雄性發(fā)病率較高。而之前的研究中顯示沒(méi)有性別偏好[12]。外周牙源性纖維瘤排名第三(12.5%)。牙齒的發(fā)育和解剖學(xué)是復(fù)雜的,這使得牙源性腫瘤的診斷具有挑戰(zhàn)性。值得一提的是,目前越來(lái)越多的學(xué)者傾向于將牙瘤判定為發(fā)育異?；蝈e(cuò)構(gòu)瘤,因?yàn)樗饕憩F(xiàn)為增生的正常組織的異常排列[13-14]。作者認(rèn)為是非常有道理的。

更好地識(shí)別其組織學(xué)特征有助于準(zhǔn)確診斷各種類型的牙源性腫瘤,并進(jìn)一步支持更好的特異性臨床治療方法。另外,本研究還確認(rèn),CK14和vimentin的表達(dá)能準(zhǔn)確識(shí)別各個(gè)發(fā)育階段的牙源性上皮和牙源性外胚層間質(zhì),對(duì)牙源性腫瘤的準(zhǔn)確診斷具有重要的輔助診斷意義。

4 結(jié) 論

在國(guó)家海綿狀腦病實(shí)驗(yàn)室2007―2021年收集的全部牙源性腫瘤病例中,犬發(fā)病率高于貓。在犬中,外周牙源性纖維瘤最高發(fā),其次是犬棘細(xì)胞型成釉細(xì)胞瘤,牙齦增生,成釉細(xì)胞瘤。在貓中,牙齦增生最高發(fā),其次是成釉細(xì)胞瘤,外周牙源性纖維瘤。對(duì)于牙源性腫瘤中各類成分的鑒別,對(duì)組織進(jìn)行CK14和vimentin免疫組織化學(xué)染色可以較明顯地區(qū)分牙源性上皮細(xì)胞以及牙源性外間質(zhì)。