夏安亮，孫倍成

南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院普外科，江蘇 南京 210008

從胚胎到成年，巨噬細(xì)胞存在于身體的各個器官［1］。巨噬細(xì)胞是高度可塑性的細(xì)胞，通過改變其形態(tài)和功能來感知周圍或全身環(huán)境，進(jìn)而發(fā)生應(yīng)答［2］。巨噬細(xì)胞屬于免疫細(xì)胞，具有較強(qiáng)的吞噬能力。在免疫系統(tǒng)激活過程中，巨噬細(xì)胞參與了快速、非特異性的防御反應(yīng)和長期、特異性的適應(yīng)性反應(yīng)（包括招募其他免疫細(xì)胞）［2］。巨噬細(xì)胞還能產(chǎn)生大量的細(xì)胞因子、趨化因子和生長因子等，這些因子參與了感染反應(yīng)和組織修復(fù)。此外，除了在組織穩(wěn)態(tài)和防御病原體中發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用外，巨噬細(xì)胞還限制了一些疾病的發(fā)展，包括敗血癥、慢性炎癥性疾病、神經(jīng)退行性疾病和癌癥［3-6］。在代謝性疾?。òǚ蔷凭灾拘愿尾。┲?，巨噬細(xì)胞也發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。

肝臟是一個重要的代謝器官，而肝臟中的巨噬細(xì)胞作為防御胃腸道有害物質(zhì)通過門靜脈循環(huán)進(jìn)入肝臟的第一道防線，其存在維持著肝臟的穩(wěn)態(tài)［7］。在非酒精性脂肪性肝病中，肝臟中存在不同的巨噬細(xì)胞以及動態(tài)的演變和功能的變化［8-9］。本文將從肝臟巨噬細(xì)胞的分類、異質(zhì)性以及在非酒精性脂肪性肝病中的作用等方面進(jìn)行綜述。

1 肝臟巨噬細(xì)胞的分類

1.1 枯否細(xì)胞

枯否細(xì)胞于1876 年由Wilhem von Kupffer 首次描述，20 年后Tadeusz Browicz 將枯否細(xì)胞鑒定為巨噬細(xì)胞［10-11］。巨噬細(xì)胞均表達(dá)通用的標(biāo)志物，包括CD64、F4/80和MerTK。近年來，對小鼠枯否細(xì)胞的區(qū)分有了長足進(jìn)展。CLEC4F被確定為小鼠枯否細(xì)胞的特異性標(biāo)志物，因而可以建立Clec4f-Dtr 和Clec4f-cre小鼠模型，以分別特異性地去除或靶向枯否細(xì)胞［12-15］。雖然CLEC4F 是一種有用的枯否細(xì)胞標(biāo)志物，但是它也有其局限性。首先，它在枯否細(xì)胞中表達(dá)相對較晚，因此很難識別正在發(fā)展成枯否細(xì)胞的那些早期和中間態(tài)細(xì)胞［13-14，16-17］。對于正常肝臟來說，枯否細(xì)胞主要來源于胚胎，并在整個生命過程中自我維持、自我更新，因而CLEC4F的較晚表達(dá)無關(guān)緊要［18-19］。但是，對于疾病狀態(tài)下的肝臟（如非酒精性脂肪性肝病）來說，駐留巨噬細(xì)胞會逐漸減少或者丟失。其中一個重要的發(fā)現(xiàn)是胚胎來源的枯否細(xì)胞自我維持、自我更新能力受損，進(jìn)而發(fā)生死亡，被單核細(xì)胞衍生的枯否細(xì)胞所替代［17，20-22］。單核細(xì)胞衍生的枯否細(xì)胞可能需要近1周的時(shí)間才表達(dá)CLEC4F，然后才能將它們與其他肝臟巨噬細(xì)胞區(qū)分開來。其次，盡管CLEC4F 在許多物種中保守，但在人類中并沒有保守性［23］，這導(dǎo)致真正的人類枯否細(xì)胞無法被識別。

近年來，單細(xì)胞RNA 測序技術(shù)的出現(xiàn)，便于人們解析正常肝臟的細(xì)胞圖譜，揭示人類枯否細(xì)胞的真實(shí)身份。然而，每項(xiàng)研究所得出的關(guān)于人類枯否細(xì)胞身份的結(jié)論不盡相同。盡管如此，利用單細(xì)胞RNA 測序技術(shù)（基于RNA 水平）比較人和小鼠基因表達(dá)圖譜，發(fā)現(xiàn)了枯否細(xì)胞較為特異的一些標(biāo)志物，包括CD5L、VSIG4、CD163、FOLR2、MARCO 和SLC40A1，可用于在7 個不同物種的肝臟中識別單一均質(zhì)的枯否細(xì)胞群［23］。此外，通過流式細(xì)胞術(shù)（基于蛋白水平）也能識別不同物種中的枯否細(xì)胞，包括VSIG4、CD163和FOLR2。另外，小鼠肝臟枯否細(xì)胞表面的其他受體包括CLEC2 和CD206 也可進(jìn)一步區(qū)分不同來源的肝臟巨噬細(xì)胞。CLEC2（由Clec1b編碼）是枯否細(xì)胞非常早期的標(biāo)志物，并在其整個壽命期間均保持表達(dá)［17，21］。因此，這是一個非常有用的標(biāo)志物，能夠區(qū)分單核細(xì)胞衍生的枯否細(xì)胞。在小鼠中，單核細(xì)胞衍生的枯否細(xì)胞主要限于疾病狀態(tài)的肝臟，然而在正常人體肝臟中，已有研究通過單細(xì)胞測序鑒定了此類細(xì)胞的存在。潛在原因可能是人類暴露于病原體、高脂飲食、酒精和其他毒素等，導(dǎo)致單核細(xì)胞衍生的枯否細(xì)胞的招募［23］。然而，這些細(xì)胞是否是嚴(yán)格意義上的單核細(xì)胞衍生的枯否細(xì)胞仍需進(jìn)一步探究。此外，基于CD206和ESAM 的表達(dá)，枯否細(xì)胞可以分為兩個亞群，即CD206-ESAM-KC1 和CD206+ESAM+KC2［24-25］，其中CD206-ESAM-KC1是主要的枯否細(xì)胞亞群。轉(zhuǎn)錄組分析表明所有特異性表達(dá)于KC2 的基因也都被肝竇內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)，提示這些細(xì)胞可能是雙重細(xì)胞或者消化產(chǎn)物［23，26］。因此，通過整合枯否細(xì)胞特異的表面標(biāo)志物（包括CD5L、VSIG4、CD163、FOLR2、MARCO、SLC40A1、CLEC2和CLEC4F），進(jìn)而區(qū)分枯否細(xì)胞和其他巨噬細(xì)胞。

1.2 枯否細(xì)胞以外的其他巨噬細(xì)胞

除了枯否細(xì)胞，正常肝臟中還存在其他巨噬細(xì)胞群體。首先，肝包膜巨噬細(xì)胞已經(jīng)被證實(shí)存在于人和小鼠的肝臟中［23，27］。肝包膜由一層間皮細(xì)胞和一層位于肝表面下方的包膜成纖維細(xì)胞組成［28］，而肝包膜巨噬細(xì)胞存在于此。在小鼠肝臟中，肝包膜巨噬細(xì)胞來源于單核細(xì)胞，在斷奶時(shí)積累在包膜中［27］。它們表達(dá)通用的巨噬細(xì)胞標(biāo)志物，如F4/80 和CD64，但不表達(dá)枯否細(xì)胞的標(biāo)志物，如VSIG4、CLEC4F、FOLR2 或CLEC2［23］。此外，它們也表達(dá)CX3CR1 和CD207［23，27］。肝包膜巨噬細(xì)胞盡管在小鼠中具有明確的特征，但在人類中特征仍不明確。一方面，可能是因?yàn)橄嚓P(guān)標(biāo)志物在人和小鼠中缺乏保守性［23］；另一方面，可能是人類肝活檢組織中缺乏包膜組織。此外，肝包膜巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄特征在小鼠肝臟中并不是獨(dú)特的。中央靜脈區(qū)存在一群巨噬細(xì)胞，其轉(zhuǎn)錄特征與肝包膜巨噬細(xì)胞相似［23］。此外，在正常人和小鼠的肝臟中還發(fā)現(xiàn)了另外一群巨噬細(xì)胞。它們靠近膽管［23］，其轉(zhuǎn)錄譜在不同物種間是一樣的，與脂肪組織和脂肪肝中的脂質(zhì)相關(guān)巨噬細(xì)胞相似［17，29］。因此，我們將這些細(xì)胞稱為膽管-脂質(zhì)相關(guān)巨噬細(xì)胞［23］。在小鼠肝臟中，膽管-脂質(zhì)相關(guān)巨噬細(xì)胞沒有特異的表面標(biāo)志物，而在人體肝臟中，通過CITE-seq 分析CD14、CD11a、CD26、CD141和CD9進(jìn)而識別膽管-脂質(zhì)相關(guān)巨噬細(xì)胞［23］。

2 肝臟巨噬細(xì)胞的分區(qū)和相互作用

單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞具有較強(qiáng)的可塑性，以便快速適應(yīng)微環(huán)境的改變。2004 年的一項(xiàng)研究使用免疫組織化學(xué)和地高辛-膠原酶灌注分離方法，發(fā)現(xiàn)枯否細(xì)胞在門區(qū)和靜脈周圍存在功能差異［30］。2021 年的一項(xiàng)研究使用定量多重共聚焦成像和數(shù)學(xué)建模評估了肝臟免疫細(xì)胞的定位，發(fā)現(xiàn)枯否細(xì)胞聚集在門區(qū)周圍［31］。免疫分區(qū)是一個依賴于腸道菌群的動態(tài)過程，而肝竇內(nèi)皮細(xì)胞被確定為免疫分區(qū)過程中的關(guān)鍵細(xì)胞，主要通過影響趨化因子成分而發(fā)生作用［31］。在人體正常肝臟中，MARCO 陽性枯否細(xì)胞在門區(qū)相對富集［32］。近年來，空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)的出現(xiàn)，證實(shí)了人體CD68+MARCO+駐留枯否細(xì)胞定位于門區(qū)，而招募的CD68+MARCO-巨噬細(xì)胞靠近中央靜脈［33］。然而，小鼠研究未能揭示巨噬細(xì)胞的任何特定分區(qū)，僅能發(fā)現(xiàn)一些單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞位于大血管周圍［15-17，24］。

肝臟中巨噬細(xì)胞與其他細(xì)胞相互作用。巨噬細(xì)胞的特異性是由肝竇內(nèi)皮細(xì)胞、肝星狀細(xì)胞和肝細(xì)胞共同塑造的。這些細(xì)胞表達(dá)CSF1、DDL4、TGF-β和BMP9 等配體，進(jìn)而激活巨噬細(xì)胞中的一些轉(zhuǎn)錄因子，如LXRα、SPIC、RBPJ、SMADs 和ID3，從而維持巨噬細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄［14-16］。

3 巨噬細(xì)胞在非酒精性脂肪性肝病中的異質(zhì)性

巨噬細(xì)胞在肝臟疾病環(huán)境中由于受到不同的代謝和免疫等信號刺激，會表現(xiàn)不同的功能。單細(xì)胞RNA 測序研究揭示了正常和代謝疾病中肝臟內(nèi)多種巨噬細(xì)胞群體。代謝性疾病中肝臟巨噬細(xì)胞多樣性的研究大多集中在非酒精性脂肪性肝病的后期階段，包括非酒精性脂肪性肝炎。

在非酒精性脂肪性肝炎中，單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞數(shù)目和比例顯著增加，可由正常情況下的10%增加到50%，打破了原有駐留巨噬細(xì)胞和招募的巨噬細(xì)胞之間的平衡［17，20-22，34］。這些招募的巨噬細(xì)胞包括過渡型巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞衍生的枯否細(xì)胞和脂質(zhì)相關(guān)巨噬細(xì)胞［17，20，22］。與非脂質(zhì)相關(guān)巨噬細(xì)胞相比，脂質(zhì)相關(guān)巨噬細(xì)胞在非酒精性脂肪性肝炎進(jìn)程中表現(xiàn)出促炎表型［17，20］。由于胚胎來源的枯否細(xì)胞的喪失，單核細(xì)胞衍生的枯否細(xì)胞增加，以彌補(bǔ)枯否細(xì)胞池。在非酒精性脂肪性肝炎中，枯否細(xì)胞也可被劃分為Trem2high、Trem2low、胚胎來源和單核細(xì)胞衍生的枯否細(xì)胞，Trem2high枯否細(xì)胞表型類似于脂質(zhì)相關(guān)巨噬細(xì)胞［17，20-21，35］。2021年的一項(xiàng)研究揭示了一種胚胎來源的枯否細(xì)胞，通過表達(dá)CD36，對肥胖相關(guān)的氧化應(yīng)激具有至關(guān)重要的作用［24］。

單細(xì)胞測序分析人和小鼠肝臟巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄圖譜，發(fā)現(xiàn)人體TREM2+CD9+瘢痕相關(guān)巨噬細(xì)胞和小鼠脂質(zhì)相關(guān)巨噬細(xì)胞重疊，表明人和鼠中這兩個巨噬細(xì)胞群可能是相同的細(xì)胞群［17］。在纖維化的微環(huán)境中，瘢痕相關(guān)巨噬細(xì)胞逐漸增加，并上調(diào)促纖維化基因，包括Spp1、Lgals3、Ccl2、Cxcl8、Pdgfb和Vegfa［36］。因此，單細(xì)胞測序技術(shù)在非酒精性脂肪性肝炎進(jìn)程中，有助于揭示肝臟巨噬細(xì)胞促纖維化表型。雖然這些研究揭示了單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞在人和鼠中的有害作用，但2021年的一項(xiàng)研究表明，胚胎來源的肝臟巨噬細(xì)胞對肝臟脂肪變性相關(guān)的氧化應(yīng)激有促進(jìn)作用［24］。因此，無論是胚胎來源的巨噬細(xì)胞還是單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞，它們在非酒精性脂肪性肝炎中的作用可能是一個動態(tài)的演變過程。

4 巨噬細(xì)胞在非酒精性脂肪性肝病中的作用

4.1 炎癥作用

肝臟巨噬細(xì)胞在代謝性疾病中的重要性不言而喻。肝臟巨噬細(xì)胞的清除可減輕炎癥。小鼠在高脂飲食喂養(yǎng)15～20周后，通過RNA測序分析肝臟駐留的巨噬細(xì)胞和招募的巨噬細(xì)胞，提示在肥胖和肝臟脂肪變性時(shí)，炎性標(biāo)志物只在單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞而不是駐留的枯否細(xì)胞中表達(dá)［37］。然而，這兩種細(xì)胞群體只是根據(jù)表面標(biāo)志物F4/80 和CD11b 表達(dá)水平來定義的，即F4/80lowCD11b+代表招募的巨噬細(xì)胞，F(xiàn)4/80highCD11b+代表駐留的巨噬細(xì)胞，無法區(qū)分駐留和招募的巨噬細(xì)胞不同亞群。在另外一種非酒精性脂肪性肝炎的模型中，即蛋氨酸-膽堿缺乏飲食6周的小鼠中，通過轉(zhuǎn)錄組分析證實(shí)，與胚胎來源的巨噬細(xì)胞相比，單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞處于更高的促炎狀態(tài)［21］。在兩種巨噬細(xì)胞中，脂代謝相關(guān)基因在非酒精性脂肪性肝炎中是最易受調(diào)節(jié)的。該研究也表明了在非酒精性脂肪性肝炎中，駐留的巨噬細(xì)胞減少，而單核細(xì)胞浸潤增加。然而在單純脂肪變時(shí)并沒有發(fā)生這種情況，表明單核細(xì)胞的浸潤和炎癥的增加僅發(fā)生在非酒精性脂肪性肝病的后期階段，即非酒精性脂肪性肝炎。一致的是，肥胖合并單純脂肪變患者肝臟巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析揭示，這些巨噬細(xì)胞沒有任何炎癥激活［38］。

單細(xì)胞測序技術(shù)允許深入研究巨噬細(xì)胞亞群表型以及根據(jù)它們的來源、功能和相關(guān)的炎性表型區(qū)分細(xì)胞［39］。肝臟巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥依賴于單核細(xì)胞的招募和肝臟疾病的嚴(yán)重程度。單細(xì)胞測序分析了飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型中肝臟巨噬細(xì)胞亞群的轉(zhuǎn)錄組學(xué)特征。單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞具有更明顯的促炎特征，而胚胎來源的巨噬細(xì)胞要么沒有促炎特征，要么比其健康對照組略具促炎特征［17，20，22，35，40］。因此，這些研究證實(shí)了非酒精性脂肪性肝炎中炎癥和單核細(xì)胞招募之間的關(guān)系。

此外，非酒精性脂肪性肝病的巨噬細(xì)胞高表達(dá)p38α和FoxO1。使用巨噬細(xì)胞特異性敲除P38a和Foxo1的小鼠，證實(shí)了P38a和Foxo1的敲除可減少促炎細(xì)胞因子的分泌，增加M2巨噬細(xì)胞的極化，降低炎癥，抑制非酒精性脂肪性肝炎的發(fā)展［41-42］。而巨噬細(xì)胞XBP1通過激活巨噬細(xì)胞NLRP3信號促進(jìn)促炎細(xì)胞因子表達(dá)和M1 巨噬細(xì)胞的極化，加重炎癥，促進(jìn)非酒精性脂肪性肝炎的進(jìn)展［43］。

4.2 胰島素抵抗

巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的胰島素抵抗，是獨(dú)立于炎癥而存在的，并且在炎癥發(fā)生前出現(xiàn)［38］。在高脂飲食早期且沒有炎癥的情況下，清除肝臟巨噬細(xì)胞可以改善胰島素的敏感性［44-45］。通過在肝臟巨噬細(xì)胞中特異性敲除炎癥主要調(diào)節(jié)因子NF-κB，可以減少IL-1β表達(dá)并改善肥胖小鼠的肝臟胰島素敏感性，表明肝臟巨噬細(xì)胞源性IL-1β在肥胖引起的肝功能障礙中發(fā)揮了直接作用［46］。然而，在肝臟巨噬細(xì)胞中特異性敲除Il1b未能改善肥胖小鼠的肝臟胰島素敏感性［38］。這一發(fā)現(xiàn)表明，肝臟巨噬細(xì)胞中的NF-κB可能獨(dú)立于IL-1β調(diào)節(jié)肥胖小鼠的肝臟胰島素敏感性。因此，研究肝臟巨噬細(xì)胞中NF-κB下游的轉(zhuǎn)錄調(diào)控以及驗(yàn)證其靶基因在胰島素敏感性中的功能將是未來的研究方向。

此外，脂肪組織巨噬細(xì)胞上表皮生長因子受體的激活可加重胰島素抵抗。研究表明高脂飲食增加了脂肪組織巨噬細(xì)胞中表皮生長因子受體及其配體雙調(diào)蛋白的表達(dá)。而選擇性去除脂肪組織巨噬細(xì)胞上表皮生長因子受體，可抑制肥胖和胰島素抵抗的發(fā)展［47］。據(jù)報(bào)道，脂肪組織巨噬細(xì)胞來源的miR-29a，可通過外泌體轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟，進(jìn)而誘導(dǎo)胰島素抵抗。其作用機(jī)制與下游PPAR-δ密切相關(guān)。GW501516，作為PPAR-δ的激動劑，可改善miR-29a誘導(dǎo)的胰島素抵抗［48］。然而，也有研究表明，M2 極化的骨髓源性巨噬細(xì)胞分泌含有miR-690 的外泌體，可以改善肥胖小鼠葡萄糖耐受和胰島素敏感性，提示miR-690 可能成為治療代謝性疾病的新胰島素增敏劑［49］。

4.3 脂代謝和氧化應(yīng)激

肝臟中肝細(xì)胞脂肪酸過度積累時(shí)，會發(fā)生脂毒性，進(jìn)而導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、氧化應(yīng)激、肝細(xì)胞衰老和凋亡。脂肪變的肝細(xì)胞分泌細(xì)胞因子和趨化因子，包括CCL2、CXCL10 和細(xì)胞外囊泡，進(jìn)而激活非實(shí)質(zhì)細(xì)胞（包括肝星狀細(xì)胞、肝竇內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞）［50-51］。另外，游離膽固醇也可以介導(dǎo)脂肪肝中巨噬細(xì)胞的活化［52］。正常情況下，巨噬細(xì)胞具有模式識別受體（介導(dǎo)促炎信號）和清道夫受體（參與脂質(zhì)攝取和吞噬）。而在非酒精性脂肪性肝病中，清道夫受體A和脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白CD36受到廣泛關(guān)注，因?yàn)樗鼈兘閷?dǎo)低密度脂蛋白的攝?。?3-54］。

已有研究表明小鼠體內(nèi)枯否細(xì)胞的清除，可減少高脂飲食誘導(dǎo)的肝臟脂肪變性和炎癥［55］。活化的枯否細(xì)胞會分泌促炎細(xì)胞因子，包括IL-1β和TNF，而這些細(xì)胞因子通過PPAR-α途徑抑制參與肝細(xì)胞脂質(zhì)代謝的基因，從而促進(jìn)肝細(xì)胞脂肪變性［44，56］。有趣的是，富含脂肪的巨噬細(xì)胞在攝取凋亡的脂肪變性肝細(xì)胞后，也可轉(zhuǎn)變成抗炎表型［57］。此外，Blériot等［24］使用單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組分析和命運(yùn)圖譜方法證實(shí)在健康和肥胖者中，除了主要的CD206lowESAM-枯否細(xì)胞群外，還有CD206highESAM+亞群，均通過CD36的表達(dá)參與脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)。Weiss等［58］的最新研究表明巨噬細(xì)胞來源的衣康酸反式作用于肝細(xì)胞，以調(diào)節(jié)肝臟代謝脂肪酸的能力。

2019年的一項(xiàng)研究表明，在肥胖和胰島素抵抗的人和小鼠中，肝臟巨噬細(xì)胞并不會變成促炎巨噬細(xì)胞［38］。小鼠在高脂飲食9 周后出現(xiàn)肥胖、肝臟脂肪變和胰島素抵抗，此時(shí)并沒有招募促炎單核細(xì)胞。小鼠在高脂飲食至少12周后，才開始招募促炎單核細(xì)胞［38］。通常認(rèn)為，肝臟巨噬細(xì)胞產(chǎn)生胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白7，直接調(diào)節(jié)肥胖小鼠和人中的胰島素信號和脂質(zhì)堆積，從而促進(jìn)代謝性疾病的發(fā)展［38］。雖然巨噬細(xì)胞在早期階段并未獲得促炎表型，但是它們已經(jīng)不同于健康對照組中的肝臟巨噬細(xì)胞，高達(dá)1 000個基因的表達(dá)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異［38］。而這些差異基因大多數(shù)參與氧化應(yīng)激［59］。脂質(zhì)過氧化功能障礙和活性氧的過度產(chǎn)生促進(jìn)了氧化應(yīng)激。

Barreby 等［60］利用單細(xì)胞測序分析發(fā)現(xiàn)在肥胖人群中，保護(hù)性駐留肝髓細(xì)胞（稱為肝髓細(xì)胞2）的比例會降低。功能性實(shí)驗(yàn)表明，肝髓細(xì)胞2 的存在可以改善與肥胖相關(guān)的氧化應(yīng)激。因此，肝髓細(xì)胞2可能是非酒精性脂肪性肝病相關(guān)氧化應(yīng)激的潛在治療靶點(diǎn)。

4.4 纖維化

肝纖維化是非酒精性脂肪性肝炎晚期的一個關(guān)鍵特征，與其預(yù)后密切相關(guān)［61］。伴有纖維化的非酒精性脂肪性肝炎患者，可進(jìn)一步發(fā)展成為肝硬化、門靜脈高壓、器官功能受損和肝細(xì)胞癌［62］。纖維化的嚴(yán)重程度是肝臟疾病相關(guān)發(fā)病率和病死率的重要預(yù)測因素［63］。免疫細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和肝星狀細(xì)胞等相互作用，共同構(gòu)成了纖維化生態(tài)位［36］。巨噬細(xì)胞是肝纖維化的一個調(diào)節(jié)因子。

RNA測序分析表明單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞，而不是枯否細(xì)胞，上調(diào)與纖維化進(jìn)展相關(guān)的生長因子和細(xì)胞因子，揭示單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞在肝臟纖維化形成中起主要作用［64］。一致的是，Ccr2-/-小鼠表現(xiàn)出較少的單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞和較輕的纖維化［65］。

然而，纖維化生態(tài)位上的單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞存在功能異質(zhì)性。近年來，單細(xì)胞測序發(fā)現(xiàn)小鼠肝臟中單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞定位于與desmin+肝星狀細(xì)胞非常接近的纖維化組織區(qū)域，這表明它們可能參與肝纖維化［17］。與此同時(shí)，在人類肝硬化的肝臟中也發(fā)現(xiàn)了類似的現(xiàn)象，具有促纖維化特征的Trem2+Cd9+單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞在人類肝纖維化過程中明顯增多［36］，其轉(zhuǎn)錄組學(xué)特征包含調(diào)節(jié)纖維化生成的一些基因，包括Spp1、Lgals3、Ccl2和Pdgfb［36］。有趣的是，該巨噬細(xì)胞群與正常和脂肪變肝臟中發(fā)現(xiàn)的脂質(zhì)相關(guān)巨噬細(xì)胞群具有很大的相似性［22-23］。Hendrikx等［66］利用空間轉(zhuǎn)錄組分析發(fā)現(xiàn)Trem2+巨噬細(xì)胞也定位于纖維化區(qū)域。另一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)了Ceacam1+Msr1+Ly6C-F4/80-Mac1+單核細(xì)胞群，根據(jù)其分離的核形狀和細(xì)胞質(zhì)顆粒，被稱為分離的含核非典型單核細(xì)胞。其受C/EBPβ調(diào)節(jié)，具有促纖維化作用［67］。此外，表達(dá)骨橋蛋白的CLEC4F-單核細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞也具有促纖維化作用［17］。目前，雖然這些不同巨噬細(xì)胞亞群之間的確切關(guān)系尚不清楚，但是它們的相關(guān)性得到了臨床數(shù)據(jù)的支持，即非酒精性脂肪性肝炎伴有纖維化患者的血清和肝臟樣本中骨橋蛋白、CCL2和IL-8表達(dá)上調(diào)［68］。此外，巨噬細(xì)胞也是纖維化消退和組織完整性恢復(fù)的重要調(diào)節(jié)因子，因?yàn)樗鼈兛梢越到饧?xì)胞外基質(zhì)并具有免疫調(diào)節(jié)功能。清除CX3CR1+CCR2+脂質(zhì)相關(guān)巨噬細(xì)胞增加了肝纖維化，表明這群細(xì)胞對纖維化起著抑制作用［22］。

纖維化生態(tài)位離不開巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和肝星狀細(xì)胞之間的相互作用。巨噬細(xì)胞來源的TNF-α、IL-1β、TGF-β和galectin-3 是重要的促纖維化信號，可激活肝星狀細(xì)胞中的NF-κB通路，誘導(dǎo)膠原生成并促進(jìn)其存活［43，69-71］。巨噬細(xì)胞中的YAP信號介導(dǎo)纖維化血管內(nèi)皮細(xì)胞亞群的交流［72］。因此，巨噬細(xì)胞在纖維化過程中發(fā)揮重要作用。

5 結(jié)語與展望

在巨噬細(xì)胞分區(qū)、細(xì)胞代謝和細(xì)胞間相互作用以及功能驗(yàn)證上所取得的進(jìn)展，將有利于闡明肝臟巨噬細(xì)胞亞群在非酒精性脂肪性肝病中的具體作用。探索肝臟巨噬細(xì)胞的多樣性有利于進(jìn)一步了解非酒精性脂肪性肝病。單細(xì)胞測序技術(shù)，更有助于了解肝臟疾病不同階段巨噬細(xì)胞亞群的轉(zhuǎn)錄譜改變。此外，采用靶向方法來清除特定的肝臟巨噬細(xì)胞亞群，以確定巨噬細(xì)胞亞群在非酒精性脂肪性肝病中的作用，為后續(xù)非酒精性脂肪性肝病的治療提供了新的策略。