爾潤(rùn)清,張?jiān)獜?qiáng),柴引雄

1.渭源縣鍬峪鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站,甘肅 渭源 748206 2.隴西縣畜牧獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)中心,甘肅 隴西 748100

0 引言

胚胎移植是指將一個(gè)良種母畜配種后的早期胚胎移植到另一個(gè)相同生理狀態(tài)的同種母畜體內(nèi)繼續(xù)發(fā)育成新個(gè)體[1]。隨著畜牧業(yè)的高質(zhì)量發(fā)展,胚胎移植技術(shù)越來越受人們重視,促進(jìn)了胚胎移植技術(shù)的發(fā)展,近年來已經(jīng)有大批量的胚胎牛、羊出生,胚胎移植技術(shù)已相對(duì)成熟,并應(yīng)用于畜牧業(yè)生產(chǎn)實(shí)踐中。胚胎移植技術(shù)是一項(xiàng)快速有效的制種技術(shù),能夠建立起一定數(shù)量的良種肉羊種群,不僅能滿足當(dāng)?shù)厝庋虬l(fā)展的種質(zhì)需求,還能夠帶動(dòng)當(dāng)?shù)丶爸苓厖^(qū)域肉羊產(chǎn)業(yè)的轉(zhuǎn)型升級(jí),最終實(shí)現(xiàn)由常規(guī)肉羊生產(chǎn)轉(zhuǎn)為種羊生產(chǎn)。在常規(guī)條件下,冷凍后的胚胎移植成功率為20%～30%,而鮮胚的移植成功率可達(dá)45%～60%。

目前定西市示范推廣的肉羊胚胎移植僅限于肉羊發(fā)情季節(jié)進(jìn)行移植生產(chǎn),時(shí)間短、數(shù)量少,普及面小,本試驗(yàn)通過在綿羊非發(fā)情季節(jié)進(jìn)行肉羊冷凍胚胎移植并觀測(cè)其移植效果,大力推廣肉羊胚胎移植技術(shù),以解決當(dāng)?shù)貙Ｓ眯腿庋蚍N群規(guī)模小、擴(kuò)繁能力有限、肉羊活體引進(jìn)成本高、推廣面小、周期長(zhǎng)等問題,縮短品種改良周期,提高良種覆蓋率,推進(jìn)現(xiàn)代肉羊產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程。

1 材料與方法

1.1 材料

材料包括:進(jìn)口肉羊冷凍胚胎、受體母羊、試情公羊、同期發(fā)情藥品(前列腺素孕馬血清、CIDR硅膠栓、亞硒酸鈉VE)、腹腔鏡、體視顯微鏡、全數(shù)字B型超聲診斷儀。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

在同一養(yǎng)殖場(chǎng)的不同季節(jié)挑選健康的經(jīng)產(chǎn)母羊,進(jìn)行布病篩查后組建受體母羊群4個(gè)。在基礎(chǔ)日糧配方、同期發(fā)情處理程序完全相同的情況下,分別在春、夏、秋、冬季利用同品種同批次冷凍胚胎進(jìn)行移植,移植結(jié)束后60 d利用全數(shù)字B型超聲診斷儀檢測(cè)其受孕情況進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄,150 d后對(duì)其產(chǎn)羔情況做好數(shù)據(jù)記錄并分析。

1.3 試驗(yàn)場(chǎng)地及時(shí)間

試驗(yàn)選擇在定西市隴西縣福星瑞鑫養(yǎng)殖場(chǎng)(依托定西市良種肉羊冷凍胚胎移植制種技術(shù)推廣與應(yīng)用項(xiàng)目)進(jìn)行。試驗(yàn)于2021年5月開始,2023年5月結(jié)束,為期2年。

1.4 技術(shù)路線

1.4.1 受體母羊群組建

技術(shù)組成員與符合條件的養(yǎng)殖主體簽訂合作協(xié)議,明確各主體的初步移植規(guī)模,各協(xié)議主體按照1：1.2的比例,篩選繁殖性能良好、發(fā)情周期正常、無繁殖機(jī)能疾病、生產(chǎn)胎次3胎以內(nèi)、膘情中等以上、母性和泌乳性能良好的母羊組成受體母羊群。

1.4.2 受體母羊飼養(yǎng)管理

加強(qiáng)對(duì)受體母羊的飼養(yǎng)管理,須保證蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、全價(jià)混合飼料的供給,日喂混合飼料0.65～1 kg,同時(shí)保證每天補(bǔ)飼胡蘿卜、青貯、紫花苜蓿等飼料,并做到定時(shí)、定量,同時(shí)加強(qiáng)羊只運(yùn)動(dòng)。

1.4.3 受體母羊健康篩查與重大傳染病免疫

胚胎移植前45 d,由技術(shù)組人員對(duì)受體母羊群進(jìn)行群體健康篩查,剔除體弱、體小、體老、繁殖性能差的羊只后,全部采血由獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行布氏桿菌病病原學(xué)檢測(cè),確保受體母羊均無布氏桿菌病陽性羊只后,對(duì)篩查留用的全部羊只進(jìn)行口蹄疫、小反芻獸疫等重點(diǎn)傳染病的疫苗接種。

1.4.4 查孕

健康篩查完成后,借助全數(shù)字B型超聲診斷儀對(duì)所有羊只進(jìn)行妊娠檢查,剔除懷孕母羊,為移植做好準(zhǔn)備。

1.4.5 同期發(fā)情

待受體母羊確定好后,利用“前列腺素(PG)+CIDR硅膠栓”法進(jìn)行同期發(fā)情處理,即處理第1天(首次處理為第1天)進(jìn)行肌內(nèi)注射PG 0.1 mg/只,第5天在母羊陰道內(nèi)埋置CIDR硅膠栓1個(gè)/只,第16天上午注射孕馬血清(PMSG)330 IU/只,下午注射PG 0.1 mg/只并撤栓。第17～19天早晚利用試情公羊試情,試情公羊系好試情布,放入母羊群中試情,每30只受體母羊放1只試情公羊,以母羊站立接受試情公羊爬跨作為發(fā)情的標(biāo)準(zhǔn),發(fā)情的做好記錄并分圈,未發(fā)情則繼續(xù)注射PG 0.1 mg/只等待發(fā)情。

1.4.6 黃體檢查

在胚胎移植時(shí),采取腹腔鏡檢查,借助光源觀察卵巢上的黃體發(fā)育情況,選擇黃體發(fā)育良好的母羊確定為可移植受體羊,進(jìn)行凍胚移植。

1.4.7 胚胎解凍

從液氮罐中取出裝有胚胎的細(xì)管在空氣中停留10 s,拔掉細(xì)管口的活塞后放入32 ℃水中20 s,剪開細(xì)管口,推出胚胎,放入I液:糖、Holding液、乙二醇(1：1：1)6 min,放入Ⅱ液:乙二醇、Holding 液(1：1)6 min,在顯微鏡下檢查其數(shù)量和級(jí)別待用。

1.4.8 胚胎檢查

將解凍的胚胎利用體視顯微鏡將胚胎檢出,并進(jìn)行必要的凈化處理,然后根據(jù)其形態(tài)進(jìn)行質(zhì)量鑒定。在全部操作過程中,須做到胚胎不受到任何不良因素(物理的、化學(xué)的、微生物的)影響。

1.4.9 手術(shù)移植

準(zhǔn)備好手術(shù)臺(tái)、剃毛刀、剪毛剪、手術(shù)刀柄、止血鉗、巾帕鉗、持針器、手術(shù)刀片、縫合針、縫合線、創(chuàng)布、紗布、16號(hào)針頭(尖端鈍)、35 mm培養(yǎng)皿、移植器、針頭式細(xì)菌濾器、5 mL一次性注器注射器、酒精、碘酊、新潔爾滅、生理鹽水和青霉素等器械和藥品。待移植羊從第22天開始禁食禁水,在禁食24 h以上、保證空腹情況下進(jìn)行手術(shù),手術(shù)室要嚴(yán)格進(jìn)行消毒和無菌操作(利用紫外線燈照射消毒),做好照明取暖等工作,溫度保持在20～25 ℃,過高或過低均會(huì)影響到胚胎質(zhì)量。第23天進(jìn)行移植,移植前頸靜脈全身麻醉,待移植羊安全仰臥保定于手術(shù)架上,手術(shù)部位進(jìn)行剃毛、消毒和覆蓋創(chuàng)布,用穿刺針在乳房基部8 cm左右各打1個(gè)孔,一側(cè)插入腸鉗,另一側(cè)插入腹腔鏡找到子宮后利用腸鉗將子宮角拉出體外移入胚胎后再送入腹腔。在切口處縫合1針,用碘酊消毒傷口,最后肌注青霉素80萬IU 。每只受體羊移植1個(gè)胚胎。移植7 d后拆線,處理傷口。

1.4.10 移植后飼養(yǎng)管理

妊娠前期要滿足肉羊?qū)崃康臄z取,防止胚胎因營(yíng)養(yǎng)不良導(dǎo)致胚胎早期死亡。在妊娠后期要保證肉羊的營(yíng)養(yǎng)的全面需要,尤其是蛋白質(zhì)的需要,以滿足胎兒的充分發(fā)育。胚胎移植后對(duì)早期受孕羊的飼養(yǎng)管理尤為重要,應(yīng)保持環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定,避免應(yīng)激反應(yīng)。

1.4.11 確定懷孕與否

移植34 d后用試情公羊進(jìn)行早期妊娠診斷,連續(xù)試情17 d,發(fā)情羊只確定為未受胎羊,不發(fā)情羊只確定為受胎羊,移植60 d后應(yīng)用全數(shù)字B型超聲診斷儀進(jìn)行妊娠檢查。

1.4.12 同期發(fā)情處理程序及移植日程安排

根據(jù)綿羊的生理學(xué)及繁殖特性,在春、夏、秋、冬各季節(jié)確定本季節(jié)內(nèi)較好的氣候環(huán)境來選擇最佳的同期發(fā)情及移植時(shí)間段,具體日程安排如表1所示。

表1 胚胎移植日程安排

2 結(jié)果與分析

2.1 同期發(fā)情處理結(jié)果分析

從表2和圖1來看,在同期發(fā)情過程中,秋季和春季同期發(fā)情效果較好,這2個(gè)季節(jié)均為綿羊發(fā)情季節(jié),平均同期發(fā)情率為90.7%,而秋季同期發(fā)情率高于春季同期發(fā)情率3.2%;夏季和冬季為綿羊的非發(fā)情季節(jié),平均同期發(fā)情率為76.1%,而冬季同期發(fā)情率較夏季同期發(fā)情率較高1.6%,試驗(yàn)結(jié)果與張一玲 等[2]、張壽 等[3]試驗(yàn)結(jié)果相近,高于楊永林 等[4]試驗(yàn)結(jié)果。綜合分析來看,綿羊在非發(fā)情季節(jié)做同期發(fā)情處理后效果較為理想,同期發(fā)情率較季節(jié)同期發(fā)情率平均低了14.6%。

圖1 同期發(fā)情率統(tǒng)計(jì)

表2 同期發(fā)情處理數(shù)據(jù)記錄

2.2 移植結(jié)果分析

從表3和圖2可以看出,一年中在秋季做肉羊凍胚移植時(shí),移植成功率最高,為51.5%;春季次之,移植成功率為43.6%;夏季和冬季較低,移植成功率分別為31%和33.7%。

圖2 不同季節(jié)移植成功率統(tǒng)計(jì)

表3 不同季節(jié)移植及妊娠檢查記錄

從表4和圖3綜合分析來看,肉羊冷凍胚胎移植在非發(fā)情季節(jié)的平均成功率為32.6%,在發(fā)情季節(jié)的平均成功率為48.1%;非發(fā)情季節(jié)移植成功率較發(fā)情季節(jié)移植成功率降低了15.5%,降幅為32.2%。

圖3 發(fā)情季節(jié)和非發(fā)情季節(jié)平均移植成功率統(tǒng)計(jì)

表4 發(fā)情和非發(fā)情季節(jié)移植及妊娠檢查記錄表

3 討論

羊?qū)儆诩竟?jié)性發(fā)情動(dòng)物,一般在春、秋季節(jié)發(fā)情配種。在非季節(jié)性肉羊冷凍胚胎移植效果的觀測(cè)來看,肉羊冷凍胚胎移植在隴中地區(qū)的非季節(jié)時(shí)間段完全可以開展生產(chǎn),只是同期發(fā)情和移植成功率較季節(jié)發(fā)情時(shí)間段相對(duì)較低,需要在受體母羊的選擇、營(yíng)養(yǎng)的調(diào)配、圈舍溫濕度環(huán)境的控制、移植手術(shù)室無菌操作等方面達(dá)到更高的要求。繼續(xù)開展良種肉羊胚胎移植制種技術(shù)大面積推廣應(yīng)用,達(dá)到快速制種擴(kuò)群目的,可有效解決純種肉羊繁育受發(fā)情季節(jié)的影響而產(chǎn)生的肉羊種質(zhì)匱乏、種群繁育時(shí)間過長(zhǎng)、投資費(fèi)用過高等制約性因素。從國(guó)外引入良種羊胚胎,代替直接購進(jìn)活羊,降低活羊引種的繁瑣程序,降低引種周期,在保證引入良種質(zhì)量的同時(shí),又能避免部分疾病的傳播,節(jié)省了引種成本,有利于提高養(yǎng)殖效益。

4 結(jié)論

由本文試驗(yàn)可知,一年中秋季肉羊凍胚移植時(shí)成功率最高,在發(fā)情季節(jié)的移植平均成功率最于非發(fā)情季節(jié)。由此,建議隴中地區(qū)的肉羊胚胎移植工作,可在秋季或動(dòng)物發(fā)情期進(jìn)行,成功率較高。