李亞婷 李 強(qiáng) 李 娜 陳鵬浩 司雄元 檀華蓉 汪雪雁*

(1.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶與食品科技學(xué)院,合肥 230036;2.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)生物技術(shù)中心,合肥 230036)

牛油果(PerseaamericanaMill.)是一種熱帶水果,也稱為油梨、鱷梨、酪梨,屬樟科鱷梨屬。牛油果含有大量油脂,果肉含油量約為60%,果皮約為7%,種子約為2%[1]。牛油果油營養(yǎng)成分豐富,含有多種不飽和脂肪酸,少量植物甾醇、生育酚等有益活性物質(zhì),其中油酸含量最高[2-3]。高油酸被證明能調(diào)節(jié)血脂、降血糖、促進(jìn)傷口愈合、保護(hù)心臟,有益于癌癥、自身免疫病和炎癥性疾病的改善[4-5]。牛油果具有高能低糖的特性,能夠降低血液中脂質(zhì)和膽固醇含量,保護(hù)肝臟免受損傷,對由肥胖引起的代謝類疾病與心血管疾病可能有改善效果[1,6-9]。

肥胖癥被世界衛(wèi)生組織(WHO)定義為全球流行的代謝性疾病,常引起機(jī)體膽固醇代謝紊亂。目前,他汀類等合成藥物是降低膽固醇的重要藥物治療手段,但長期使用這類藥物可能會帶來肝功能、腎功能損傷等副作用,因此,使用天然產(chǎn)物替代化學(xué)合成藥物來改善機(jī)體膽固醇代謝紊亂對人體健康更有益。牛油果富含單不飽和脂肪酸,有助于膳食脂肪的消耗,但目前對牛油果的研究多集中于提取工藝、貯藏方法、理化性質(zhì)、組成和藥理作用等,對其作用機(jī)制研究較少。本研究通過評估牛油果油對由高脂飼糧誘導(dǎo)的肥胖小鼠生長性能、血脂代謝、肝臟和脂肪組織的影響,探究牛油果油調(diào)控膽固醇代謝的機(jī)制,為牛油果在食品、醫(yī)藥等方面的開發(fā)與利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與試劑

牛油果油,實驗室自制,于0～4 ℃貯藏;辛伐他汀片,杭州默沙東制藥有限公司;60%高脂飼糧(60%的熱量由脂肪提供,碳水化合物和蛋白質(zhì)供能比分別為20.6%和19.4%)、低脂對照飼糧(10%的熱量由脂肪提供,碳水化合物和蛋白質(zhì)供能比分別為75.9%和14.1%),江蘇南通特洛菲科技有限公司。

RNA later樣本保存液,美國Sigma-Aldrich公司;甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)試劑盒,南京建成生物工程研究所;RNAiso Plus、PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser試劑盒(Perfect Real Time)、TB Green?Premix Ex TaqTMⅡ (Tli RNaseH Plus)試劑盒,TaKaRa生物工程有限公司。

1.2 試驗設(shè)備與儀器

DF-101SZ集熱式磁力加熱攪拌器(上海凌科實業(yè)發(fā)展有限公司)、Beckman-Allegra高速冷凍離心機(jī)(美國Beckman科技公司)、GCMS-QP2010氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(日本島津公司)、全波段酶標(biāo)儀(美國Molecular Devices公司)、實時熒光定量PCR儀(美國Thermo Fisher公司)。

1.3 試驗動物

C57BL/6J雄性小鼠,無特定病原體(SPF)級,5周齡,浙江維通利華實驗動物技術(shù)有限公司[許可證號:SCX(浙)2019-0011];小鼠飼養(yǎng)于安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)SPF動物實驗中心,飼養(yǎng)環(huán)境溫度(23±2) ℃,相對濕度(50±10)%,晝夜節(jié)律12 h明暗循環(huán),小鼠自由飲食和飲水。試驗動物的飼養(yǎng)經(jīng)過安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)實驗動物倫理委員會批準(zhǔn),動物倫理編號為AHAU2021013。

1.4 牛油果油的提取與脂肪酸組成的測定

本試驗參考崔曉冰[10]和劉義軍等[11]的方法,采取水代法提取牛油果油。按照1∶2的料液比,將新鮮牛油果果肉置于適量蒸餾水中粉碎打漿,在水浴溫度為50 ℃下中低速攪拌2 h;取出已攪拌好的牛油果漿,在10 000 r/min下離心10 min,取出最上層的油脂與乳化層,放于-20 ℃冰箱冷凍過夜破乳,以10 000 r/min離心10 min,取上清液,置于4 ℃冰箱保存。

采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀對水代法提取的牛油果油中的脂肪酸成分進(jìn)行定性和定量分析。色譜條件:色譜柱為DB-5石英毛細(xì)管柱(60 m×0.25 mm,0.25 μm);升溫程序為150 ℃保持1 min,以15 ℃/min升至250 ℃,保持10 min;載氣為氦氣(99.999%),流速1.0 mL/min,壓力1 kPa,進(jìn)樣量10 μL;分流比=100∶1。質(zhì)譜條件:電子轟擊電離源(EI源)電壓為70 eV,離子源溫度為230 ℃,接口溫度為250 ℃,四極桿溫度為150 ℃,質(zhì)量掃描范圍質(zhì)荷比(m/z)為30～500。

1.5 C57BL/6J小鼠肥胖模型構(gòu)建

通過飼喂C57BL/6J小鼠高脂飼糧構(gòu)建肥胖模型。76只5周齡SPF級雄性C57BL/6J小鼠在屏障系統(tǒng)下適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,隨機(jī)取24只小鼠為低脂組(LFD組),給予低脂對照飼糧飼養(yǎng);剩下的52只小鼠為高脂組(HFD組),給予60%高脂飼糧飼養(yǎng)。所有小鼠自由采食和飲水,每隔2 d監(jiān)測1次攝食量和飲水量,每周稱量1次體重。在8周后,通過體重指標(biāo)即高脂組體重超過低脂組體重20%為標(biāo)準(zhǔn)篩選出達(dá)標(biāo)的小鼠,同時檢測血清生化指標(biāo)與肝臟和脂肪病理切片,最后選取出40只肥胖小鼠進(jìn)行干預(yù)試驗。

1.6 小鼠分組與牛油果油干預(yù)

將16只采用低脂對照飼糧飼養(yǎng)的小鼠分為對照組(LF組)和牛油果油組(LFA組),均給予低脂對照飼糧喂養(yǎng)。將選出的40只由60%高脂飼糧喂養(yǎng)的肥胖小鼠分為5組,分別為高脂對照組(HF組)、辛伐他汀組(HS組)、牛油果油低劑量組(AO-L組)、牛油果油中劑量組(AO-M組)和牛油果油高劑量組(AO-H組),每組8只小鼠。每2 d測量1次攝食量與飲水量,每周稱量1次體重,小鼠自由飲水與攝食。所有組均以灌胃方式給藥,每天在同一時間段灌胃1次,共干預(yù)4周。根據(jù)前期預(yù)試驗結(jié)果,LFA組以650 mg/(kg·d)的劑量灌胃牛油果油;AO-L、AO-M和AO-H組給予的牛油果油劑量分別為325(低劑量)、650(中劑量)和975 mg/(kg·d)(高劑量);HS組給予的辛伐他汀劑量為3 mg/(kg·d),辛伐他汀片用蒸餾水制成懸濁液進(jìn)行灌胃;LF和HF組灌胃0.2 mL的蒸餾水。

1.7 小鼠血清和組織的采集

灌胃結(jié)束后,所有小鼠禁食12 h,用4%水合氯醛溶液進(jìn)行麻醉;摘眼球取血,室溫放置后離心得到血清;然后頸椎脫臼處死,解剖,取肝臟、腎臟和附睪脂肪,稱重,計算肝臟系數(shù)和附睪脂肪系數(shù);取部分肝臟于4%多聚甲醛溶液中固定,室溫放置,部分放于RNA later樣本保存液中,緩凍,最后儲存于-80 ℃;取附睪脂肪組織于脂肪固定液中固定,室溫放置。

1.8 血清生化指標(biāo)分析

采用試劑盒測定血清中的4項血脂指標(biāo)(TC、TG、HDL-C、LDL-C含量)和2項肝功能指標(biāo)(ALT和AST活性)。

1.9 組織病理學(xué)分析

將固定在4%多聚甲醛溶液中的肝臟和固定在脂肪固定液中的附睪脂肪組織取出,進(jìn)行脫水、石蠟包埋、切片和蘇木精-伊紅(HE)染色,最后鏡檢,觀察并拍攝病理切片。

1.10 實時熒光定量PCR測定肝臟膽固醇代謝相關(guān)基因的表達(dá)

采用Trizol法提取肝臟總RNA,然后使用PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser試劑盒去除基因組DNA并通過反轉(zhuǎn)錄得到cDNA,最后用TB Green?Premix Ex TaqTMⅡ (Tli RNaseH Plus)試劑盒進(jìn)行實時熒光定量PCR,引物序列如表1所示。采用2-ΔΔCt的計算方法,以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)為內(nèi)參基因,計算目標(biāo)基因的mRNA相對表達(dá)量。

表1 實時熒光定量PCR引物序列Table 1 Primer sequences for qRT-PCR

1.11 數(shù)據(jù)處理與分析

采用SPSS 21.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)和Duncan氏法多重比較檢驗,P<0.05表示具有統(tǒng)計學(xué)差異;繪圖采用GraphPad Prism 8.0軟件。結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 牛油果油的脂肪酸組成

用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)法測定水代法提取的牛油果油的脂肪酸組成,其色譜圖見圖1。通過NIST11.L質(zhì)譜庫進(jìn)行檢索,并用歸一化法計算檢測出的化合物的相對百分含量,結(jié)果見表2。

1:棕櫚油酸 palmitoleic acid;2:棕櫚酸 palmitic acid;3:亞油酸 linoleic acid;4:油酸 oleic acid;5:13-十八碳烯酸 13-octadecenoic acid。圖1 牛油果油的脂肪酸GC-MS圖譜Fig.1 GC-MS spectrum of fatty acids in avocado oil

表2 牛油果油脂肪酸的主要成分及相對百分含量Table 2 Main components and relative percentage contents of fatty acids in avocado oil

牛油果油共含有5種脂肪酸(表2),其中不飽和脂肪酸的相對百分含量為77.64%,包括棕櫚油酸、亞油酸、油酸等,飽和脂肪酸的相對百分含量為22.36%。在牛油果油所含脂肪酸中,以油酸的相對百分含量最高,高達(dá)55.56%。

2.2 肥胖模型指標(biāo)

2.2.1 高脂飼糧對小鼠體重和血脂指標(biāo)的影響

本試驗用60%高脂飼糧進(jìn)行小鼠肥胖模型的構(gòu)建,造模期間,所有小鼠均正常攝食和飲水,精神狀態(tài)較好,無病態(tài)以及死亡現(xiàn)象。由表3可知,HFD組與LFD組小鼠的始重?zé)o統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),但在飼喂8周后,HFD組小鼠體重較LFD組小鼠增加了25.43%(P<0.001),這表明小鼠肥胖模型造模成功;相較于LFD組,HFD組血清TC和LDL-C含量分別提高了2.55和3.49倍(P<0.01),TG和HDL-C含量均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。

表3 高脂飼糧對小鼠體重和血脂指標(biāo)的影響Table 3 Effects of high-fat diet on body weight and blood lipid indexes of mice

表4 牛油果油對肥胖小鼠體重增加量、肝臟系數(shù)和附睪脂肪系數(shù)的影響Table 4 Effects of avocado oil on body weight gain, liver coefficient and epididymal fat coefficient of obese mice

2.2.2 高脂飼糧對小鼠肝臟和脂肪組織形態(tài)的影響

進(jìn)一步采用HE染色法檢查了高脂飼糧對小鼠肝臟和脂肪組織形態(tài)的影響(圖2和圖3),結(jié)果顯示,LFD組小鼠肝細(xì)胞形態(tài)正常,無明顯細(xì)胞質(zhì)空泡、腫脹和炎癥反應(yīng);HFD組小鼠可見明顯的肝細(xì)胞變性現(xiàn)象,部分細(xì)胞內(nèi)脂肪聚集嚴(yán)重且有較大脂滴形成;HFD組小鼠的脂肪組織細(xì)胞體積相較于LFD組變大,且排列較松散。

LFD:LFD組;HFD:HFD組。圖片均為原始圖片×200倍,比例尺為50 μm。下圖同。LFD: LFD group; HFD: HFD group. The pictures are 200 times larger than the original pictures, and the scale is 50 μm. The same as below.圖2 高脂飼糧對小鼠肝臟病理學(xué)變化的影響Fig.2 Effects of high-fat diet on liver pathological changes of mice

圖3 高脂飼糧對小鼠脂肪組織形態(tài)的影響Fig.3 Effects of high-fat diet on fat morphology of mice

2.3 牛油果油對肥胖小鼠體重增加量、肝臟系數(shù)和附睪脂肪系數(shù)的影響

在使用不同劑量牛油果油干預(yù)4周后,LFA組小鼠體重增加量相較于LF組無顯著差異(P>0.05);HF組小鼠體重增加量是LF組的4.26倍(P<0.001)。與HF組相比,HS、AO-L、AO-M和AO-H組體重增加量(P<0.001)和肝臟系數(shù)(P<0.05)均顯著降低,但附睪脂肪系數(shù)無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。由上述結(jié)果可知,牛油果油能顯著降低由高脂飼糧引起的小鼠體重和肝臟系數(shù)的增加。

2.4 牛油果油對肥胖小鼠血清生化指標(biāo)的影響

由表5可知,在血清TC、TG、LDL-C、HDL-C含量與ALT、AST活性上,LF組與LFA組均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。HF組血清TC、LDL-C含量與ALT、AST活性相較于LF組顯著增加(P<0.001)。與HF組相比,HS、AO-M和AO-H組血清TC、LDL-C含量和AST活性均顯著降低(P<0.01);HS、AO-L、AO-M和AO-H組血清ALT活性顯著降低(P<0.001);HS、AO-L、AO-M和AO-H組血清TG含量均有所下降,但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);AO-L、AO-M和AO-H組血清HDL-C含量均顯著增加(P<0.05)。以上結(jié)果表明,牛油果油能夠有效抑制肥胖小鼠血清TC、TG、LDL-C含量與ALT、AST活性的增加,促進(jìn)血清HDL-C含量的增加,從而有效降低肥胖小鼠的血脂水平,改善肥胖小鼠血脂代謝紊亂和肝功能損傷。

表5 牛油果油對肥胖小鼠血清生化指標(biāo)的影響Table 5 Effects of avocado oil on serum biochemical indexes of obese mice

2.5 牛油果油對肥胖小鼠肝臟和脂肪組織形態(tài)的影響

長期攝入高脂飼糧對肝臟會產(chǎn)生較大的影響,肝臟積蓄大量脂肪甚至引起脂肪肝[12]。從小鼠肝臟組織病理學(xué)檢查的結(jié)果(圖4)可以看出,LF和LFA組小鼠肝組織細(xì)胞形態(tài)正常,排列整齊;HF組小鼠可見明顯的肝細(xì)胞變性現(xiàn)象,脂滴浸潤嚴(yán)重。與HF組相比,HS、AO-L、AO-M和AO-H組肝臟病變均有減輕,脂滴空泡數(shù)量減少。

LF:LF組 LF group;LFA:LFA組 LFA group;HF:HF組 HF group;HS:HS組 HS group;AO-L:AO-L組 AO-L group;AO-M;AO-M組 AO-M group;AO-H:AO-H組 AO-H group。下圖同 the same as below。圖4 牛油果油對肥胖小鼠肝臟病理學(xué)變化的影響Fig.4 Effects of avocado oil on liver pathological changes of obese mice

附睪脂肪組織HE染色結(jié)果(圖5)顯示,LF組小鼠的脂肪細(xì)胞較小,排列緊湊;HF組小鼠的脂肪組織細(xì)胞的輪廓大于LF組,且排列較松散;與HF組相比,HS、AO-L、AO-M和AO-H組小鼠的脂肪細(xì)胞體積均有所變小,且細(xì)胞排列變緊密。

2.6 牛油果油對肥胖小鼠肝臟膽固醇合成的影響

如圖6所示,相比于LF組,LFA組肝臟中固醇調(diào)控元件結(jié)合蛋白2(SREBP2)的mRNA相對表達(dá)量顯著上調(diào)(P<0.05);與HF組相比,HS、AO-M和AO-H組肝臟中肝X受體(LXR)、腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPKα)的mRNA相對表達(dá)量顯著上調(diào)(P<0.05),AO-M和AO-H組肝臟中SREBP2的mRNA相對表達(dá)量顯著下調(diào)(P<0.05),HS組肝臟中SREBP2和3-羥基3-甲基戊二酰輔酶A還原酶(HMGCR)的mRNA相對表達(dá)量顯著上調(diào)(P<0.05)。

數(shù)據(jù)柱形標(biāo)注不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下圖同。Value columns with different small letters mean significant difference (P<0.05). The same as below.圖6 牛油果油對肥胖小鼠肝臟中膽固醇合成相關(guān)基因表達(dá)的影響Fig.6 Effects of avocado oil on expression of genes involved in cholesterol synthesis in liver of obese mice

2.7 牛油果油對肥胖小鼠肝臟膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)(RCT)的影響

膽固醇的逆轉(zhuǎn)運(yùn)是指外周組織細(xì)胞中膽固醇以HDL-C為載體轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟組織中,進(jìn)入機(jī)體的循環(huán),并且以膽汁酸形式排泄出體外的過程[13]。

2.7.1 牛油果油對肥胖小鼠肝臟膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因表達(dá)的影響

如圖7所示,LFA組肝臟中清道夫受體-BI(SR-BI)的mRNA相對表達(dá)量顯著低于LF組(P<0.05);與HF組相比,牛油果油與辛伐他汀的干預(yù)對肥胖小鼠肝臟中SR-BI、低密度脂蛋白受體(LDLR)的mRNA相對表達(dá)量無顯著影響(P>0.05),辛伐他汀以及低、中劑量的牛油果油干預(yù)均顯著下調(diào)了肥胖小鼠肝臟中ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G1(ABCG1)的mRNA相對表達(dá)量(P<0.05)。

圖7 牛油果油對肥胖小鼠肝臟中膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因表達(dá)的影響Fig.7 Effects of avocado oil on expression of genes involved in cholesterol transport in liver of obese mice

2.7.2 牛油果油對肥胖小鼠肝臟膽汁酸合成相關(guān)基因表達(dá)的影響

如圖8所示,相較于LF組,LFA組肝臟中法尼基衍生物X受體(FXR)的mRNA相對表達(dá)量顯著下調(diào)(P<0.05),膽固醇7α-羥化酶(CYP7A1)、膽固醇27α-羥化酶(CYP27A1)的mRNA相對表達(dá)量均顯著上調(diào)(P<0.05);與HF組相比,HS、AO-L、AO-M、AO-H組肝臟中FXR的mRNA相對表達(dá)量均顯著下調(diào)(P<0.05),CYP7A1的mRNA相對表達(dá)量均顯著上調(diào)(P<0.05);HS和AO-H組肝臟中CYP27A1的mRNA相對表達(dá)量均顯著上調(diào)(P<0.05)。

圖8 牛油果油對肥胖小鼠肝臟中膽汁酸合成相關(guān)基因表達(dá)的影響Fig.8 Effects of avocado oil on expression of genes involved in bile acid synthesis in liver of obese mice

2.8 牛油果油對肥胖小鼠肝臟膽固醇排出的影響

如圖9所示,相較于LF組,LFA組肝臟中ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G5(ABCG5)的mRNA相對表達(dá)量顯著下調(diào)(P<0.05),ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G8(ABCG8)的mRNA相對表達(dá)量顯著上調(diào)(P<0.05);相較于HF組,牛油果油和辛伐他汀干預(yù)均顯著上調(diào)了肥胖小鼠肝臟中ABCG5和ABCG8的mRNA相對表達(dá)量(P<0.05)。

圖9 牛油果油對肥胖小鼠肝臟中膽固醇排出相關(guān)基因表達(dá)的影響Fig.9 Effects of avocado oil on expression of genes involved in cholesterol excretion in liver of obese mice

3 討 論

3.1 牛油果油改善肥胖小鼠的體重和血脂代謝紊亂

牛油果是一種高油酸含量的食物,研究發(fā)現(xiàn)富含油酸的膳食模式具有預(yù)防肥胖、調(diào)節(jié)血糖、調(diào)節(jié)血脂和抗炎癥等多種保健作用[14]。當(dāng)亞油酸和油酸含量在一定比例時(含量相同或亞油酸含量低于油酸),有降低LDL-C的作用,HDL-C可以被相對地提高[15]。本研究發(fā)現(xiàn),牛油果油富含單不飽和脂肪酸,特別是油酸;對肥胖小鼠進(jìn)行干預(yù)后,牛油果油可抑制肥胖小鼠體重的增加,降低肝臟系數(shù),減少血清中TC、TG、LDL-C含量,增加血清中HDL-C含量,對肥胖小鼠的血脂代謝紊亂具有較好的調(diào)節(jié)作用。

3.2 牛油果油改善肥胖小鼠的肝臟損傷

肥胖不是指單純的體重增加,而是體內(nèi)脂肪組織積蓄過剩的狀態(tài)。ALT、AST是肝細(xì)胞受損的重要標(biāo)志,反映了肝臟細(xì)胞膜和細(xì)胞器的損傷程度,肝臟組織脂肪的過度堆積導(dǎo)致肝細(xì)胞中的ALT和AST進(jìn)入血液,因此血清中二者活性的高低可衡量肝臟受損程度[16]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),牛油果油干預(yù)后肥胖小鼠血清中ALT和AST活性顯著降低;此外,對肝臟組織和睪周脂肪組織進(jìn)行HE染色,發(fā)現(xiàn)牛油果油能有效抑制肥胖小鼠肝臟脂肪的堆積,減少脂滴的形成,控制脂肪組織的擴(kuò)張和脂肪細(xì)胞的變大。因此,牛油果油對由高脂飼糧引起的小鼠血清ALT、AST活性升高具有較好的抑制作用,對肝臟起到了保護(hù)作用,并且可抑制肝臟脂肪的堆積。

3.3 牛油果油調(diào)節(jié)肥胖小鼠膽固醇代謝途徑中相關(guān)基因的表達(dá)

膽固醇的生物合成過程受多方面調(diào)控,研究發(fā)現(xiàn)肝臟LXR基因敲除小鼠體內(nèi)的膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)、分解代謝和排出均被損害,這提示了肝臟LXR在全身膽固醇動態(tài)平衡中的重要性[17],有助于消除細(xì)胞內(nèi)多余的膽固醇,調(diào)節(jié)膽固醇代謝途徑中相關(guān)蛋白和基因的表達(dá)[18-19]。本研究結(jié)果顯示,中、高劑量的牛油果油顯著提高了肥胖小鼠肝臟中LXR的表達(dá),而LXR一直被認(rèn)為是體外和體內(nèi)ABCG5和ABCG8的正調(diào)節(jié)因子[20],能通過靶基因ABCG5和ABCG8調(diào)節(jié)中性類固醇進(jìn)入膽汁和腸腔,促進(jìn)肝臟內(nèi)膽固醇流入膽汁[21-22]。本試驗結(jié)果表明,牛油果油的干預(yù)能上調(diào)肥胖小鼠肝臟中ABCG5和ABCG8基因的表達(dá),促進(jìn)肝臟中膽固醇外排到膽汁,最終可能引起糞便中膽固醇排出量增加,降低血清膽固醇含量。

膽固醇生物合成途徑中的關(guān)鍵限速酶HMGCR是典型的SREBP2反應(yīng)基因,它的活性可通過可逆的磷酸化來調(diào)節(jié),抑制AMPKα的活性能激活HMGCR并促進(jìn)膽固醇的生物合成[23]。Tang等[24]研究表明,增加肝細(xì)胞AMPKα的磷酸化,可以下調(diào)SREBP2及其下游靶基因的表達(dá)來抑制肝臟膽固醇合成。本試驗結(jié)果顯示,牛油果油促進(jìn)了肥胖小鼠肝臟中AMPKα基因的表達(dá),從而抑制了SREBP2基因的表達(dá),對HMGCR基因的表達(dá)無顯著影響,但辛伐他汀使肥胖小鼠肝臟中HMGCR基因的表達(dá)顯著上調(diào),這可能是因為辛伐他汀通過減少膽固醇合成來降低血清LDL-C含量這一酶促途徑的靶向抑制導(dǎo)致了適應(yīng)性機(jī)制的出現(xiàn),為應(yīng)對這種代謝阻斷,肝臟中HMGCR基因的表達(dá)補(bǔ)償性上調(diào)[25-26]。他汀類藥物誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中膽固醇的耗竭又會激活SREBP2,SREBP2進(jìn)入細(xì)胞核激活其下游靶標(biāo)LDLR等基因的轉(zhuǎn)錄,清除血液中多余的LDL-C,以維持血脂的正常水平[27],因此本試驗中辛伐他汀組肝臟中SREBP2和LDLR基因的表達(dá)均顯著上調(diào)。而從本試驗結(jié)果分析,牛油果油沒有受到這一限制,牛油果油對LDLR的轉(zhuǎn)錄水平無顯著影響,這可能與LXR的激活有關(guān),在一種反調(diào)節(jié)機(jī)制中,LXR誘導(dǎo)LDLR的降解物(IDOL)表達(dá),并隨后降解LDLR,從而限制了外周組織如巨噬細(xì)胞對膽固醇的攝取[28];也可能是因為小鼠長期攝入高脂飼糧導(dǎo)致膽固醇積累過多。此外,膽固醇還可轉(zhuǎn)變成膽汁酸,這是膽固醇分解的重要途徑,主要由經(jīng)典途徑中的CYP7A1和替代途徑中的CYP27A1調(diào)控[29]。Zhang等[30]研究發(fā)現(xiàn),槲皮素能通過促進(jìn)大鼠膽固醇向膽汁酸的轉(zhuǎn)化來調(diào)節(jié)肝臟膽固醇代謝。本試驗結(jié)果顯示,肥胖小鼠肝臟中FXR基因的表達(dá)被抑制,影響了FXR介導(dǎo)的膽汁酸代謝的負(fù)反饋調(diào)節(jié),從而上調(diào)了CYP7A1和CYP27A1的表達(dá),促進(jìn)肝臟中膽固醇的分解,增加膽汁酸的合成。

4 結(jié) 論

① 牛油果油的主要脂肪酸成分為油酸(55.56%)、棕櫚酸(22.36%)、棕櫚油酸(7.50%)、亞油酸(7.42%)和13-十八碳烯酸(7.16%)。

② 牛油果油能降低肥胖小鼠的體重和肝臟系數(shù),促進(jìn)膽固醇和膽汁酸排出,改善血脂代謝異常和肝功能損傷,減少脂質(zhì)沉積。

③ 牛油果油能抑制肥胖小鼠肝臟中膽固醇的生物合成,促進(jìn)膽汁酸的合成和膽固醇的排出。