管婧 李花 陳龍 劉建福 吳新泉

摘要要：【目的】姜黃是我國(guó)的傳統(tǒng)中藥材，被國(guó)家列入藥食同源目錄。通過噴施不同質(zhì)量濃度的油菜素內(nèi)酯（BR），分析外源BR對(duì)姜黃代謝產(chǎn)物的影響，為姜黃栽培提供理論依據(jù)?！痉椒ā恳越S盆栽苗為試驗(yàn)材料，采用完全隨機(jī)分組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，葉面分別噴施0.01、0.05、0.1和0.2 mg/L BR后，檢測(cè)姜黃根狀莖的氨基酸、總黃酮、姜黃素類化合物和揮發(fā)油的含量?！窘Y(jié)果】噴施0.1 mg/L BR后，姜黃總黃酮、姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素含量顯著提高，分別比對(duì)照提高128.99%、73.05%、99.56%和97.42%；0.01和0.05 mg/L BR顯著提高姜黃揮發(fā)油含量；亮氨酸與天冬氨酸含量在0.05 mg/L BR時(shí)達(dá)到最大值?！窘Y(jié)論】噴施0.05～0.1 mg/L外源BR能夠促進(jìn)姜黃次生代謝產(chǎn)物的生物合成，進(jìn)而提高姜黃的藥材品質(zhì)。

關(guān)鍵詞：姜黃；油菜素內(nèi)酯；揮發(fā)油；代謝產(chǎn)物

中圖分類號(hào)：S685.99? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文章編號(hào)：2095-5774（2023）03-0172-05

Effect of Brassinolide on Synthesis of Secondary Metabolites in Turmeric（Curcuma longa L.）

Guan Jing1，Li Hua1，Chen Long1，Liu Jianfu1*，Wu Xinquan2

（1 Institute of Horticultural Science and Engineering，Huaqiao University，Xiamen，F(xiàn)ujian 361021，China；

2 Quanzhou Quanfeng Biotechnology Co.，Ltd.，Quanzhou，F(xiàn)ujian 362014，China）

Abstract：【Objective】Turmeric is a traditional Chinese medicinal herb in China，which has been included in the national list of medicinal and food sources. By spraying different concentrations of brassinolide （BR），the effect of exogenous BR on the metabolites of turmeric potted seedlings was explored，providing a theoretical basis for its cultivation. 【Method】Using potted seedlings of Curcuma longa L. as the experimental material，a completely randomized block design was used. After spraying 0.01 mg/L，0.05 mg/L，0.1 mg/L，and 0.2 mg/L BR on the leaves，the content of amino acids，total flavonoids，curcumin，and volatile oil in the rhizome of Curcuma longa L. were determined. 【Result】After spraying 0.1 mg/L BR，the contents of total flavonoids，curcumin，demethoxycurcumin，and didemethoxycurcumin all reached their maximum values，increasing by 128.99%，73.05%，99.56%，and 97.42%，respectively compared to the control；0.01 mg/L and 0.05 mg/L BR significantly increased the content of volatile oil in turmeric. The content of leucine and aspartic acid reaches maximum value after spraying 0.05 mg/L BR. 【Conclusion】Spraying appropriate 0.05-0.1 mg/L BR exogenous BR can promote the biosynthesis of secondary metabolites in turmeric，thereby improving the medicinal quality of turmeric.

Key words：Curcuma longa L.；Brassinolide；Volatile oil；Metabolites

姜黃（Curcuma longa L.）是姜科多年生草本植物，原產(chǎn)于印度和東南亞地區(qū)［1］。目前我國(guó)姜黃種植面積已經(jīng)超過6 667 hm2，主要集中在四川、云南、廣東、福建等地。姜黃的藥用歷史可以追溯到五千年前，是印度瑜伽及傳統(tǒng)養(yǎng)生療法阿育吠陀的一種重要草藥。姜黃的藥用部位以根狀莖和塊根為主，其藥用成分主要為姜黃素類和揮發(fā)油，包括黃酮類化合物、甾醇類、多肽類、脂肪酸、生物堿及微量元素等活性成分，具有抗菌、抗炎、祛痰、止咳、平喘、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫、抗衰老等藥理作用［2，3］。

油菜素內(nèi)酯（Brassinolide，BR）是一種甾醇類激素，參與調(diào)控植物的各項(xiàng)生長(zhǎng)發(fā)育過程［4］，可以促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)與分裂，增強(qiáng)光合作用，促進(jìn)種子和幼苗生長(zhǎng)，提高作物的品質(zhì)，增強(qiáng)作物在逆境抗性等［5-7］。有研究表明，BR在提高藥用植物活性成分方面具有顯著作用，如促進(jìn)青蒿中青蒿素合成［8］，提高半夏［9］、甘草［10］、黃芩［11］的生物活性成分含量，但對(duì)姜黃素和揮發(fā)油等姜黃次生代謝產(chǎn)物合成調(diào)控尚未見報(bào)道，本研究通過姜黃葉面噴施BR，測(cè)定根狀莖中氨基酸、總黃酮、姜黃素類化合物和揮發(fā)油等物質(zhì)含量，分析BR對(duì)姜黃生物活性成分合成代謝的影響，也為外源激素提高姜黃藥用成分的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)在華僑大學(xué)廈門校區(qū)溫室內(nèi)進(jìn)行。供試材料為姜黃品種‘桂熱1號(hào)，由泉州市泉豐生物科技有限公司提供。2022年3月姜黃將根狀莖種植于上口直徑15 cm、高10 cm的花盆中，取草炭與菜園土按12混合作為栽培土，每盆裝土3 kg，培養(yǎng)3個(gè)月后，株高為60～70 cm，葉片為5～6片，選取長(zhǎng)勢(shì)一致的幼苗用于試驗(yàn)，試驗(yàn)期間按常規(guī)進(jìn)行水肥管理。

1.2 試驗(yàn)方法

在姜黃株高30 cm左右時(shí)進(jìn)行葉片噴施BR處理；BR設(shè)置4個(gè)濃度處理，分別為0.01、0.05、0.1、0.2 mg/L，以蒸餾水為對(duì)照；每個(gè)處理5盆，重復(fù)3次，隔7 d噴施1次，共噴3次，噴施時(shí)間在1700左右，以葉片正反面濕潤(rùn)，葉尖掛水珠為止。噴施結(jié)束7 d后進(jìn)行取樣，截取各處理姜黃根狀莖，清洗干凈后，將根狀莖切成約5 mm薄片，放入55 ℃烘箱中24 h烘至恒重，使用打粉機(jī)研磨成粉末后經(jīng)20目篩網(wǎng)過篩，放入密封罐常溫陰涼處保存。

1.3 測(cè)定指標(biāo)與方法

姜黃氨基酸（亮氨酸與天冬氨酸）含量測(cè)定采用茚三酮顯色法［12］，總黃酮含量測(cè)定采用蘆丁比色法［13］，姜黃素類化合物（姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素）含量測(cè)定采用HPLC法［14］，揮發(fā)油含量采用水蒸餾法提取［15］。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用Microsoft Excel 2019軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用Origin 2019軟件進(jìn)行作圖，采用SPSS Statistics 22軟件進(jìn)行顯著性差異分析。

2? 結(jié)果與分析

2.1 BR對(duì)姜黃氨基酸含量的影響

BR能夠提高姜黃根狀莖中氨基酸的含量（圖1），亮氨酸與天冬氨酸的含量均隨著BR的濃度增加先升高后降低。噴施BR后，亮氨酸與天冬氨酸含量均顯著提高，且各處理中天冬氨酸含量均高于亮氨酸含量；0.05 mg/L BR時(shí)，亮氨酸與天冬氨酸含量達(dá)到最大值，分別比對(duì)照提高483.23%和494.46%；0.1 mg/L和0.2 mg/L處理含量下降。因此，0.05 mg/L BR有利亮氨酸與天冬氨酸的合成。

2.2 BR對(duì)姜黃總黃酮含量的影響

總黃酮是藥用植物的主要活性成分，其含量受到植物生長(zhǎng)環(huán)境因子的影響［13］。由圖2可知，噴施0.01～0.10 mg/L BR后，顯著提高了姜黃中總黃酮含量，且隨著BR濃度的升高而升高；0.1 mg/L BR時(shí)，姜黃總黃酮含量達(dá)到最大值，比對(duì)照提高128.99%。0.2 mg/L BR時(shí)，總黃酮含量高于對(duì)照，但與對(duì)照差異不顯著。因此，0.1 mg/L BR有利姜黃總黃酮的合成。

2.3 BR對(duì)姜黃中姜黃素類化合物含量的影響

姜黃進(jìn)行BR處理后，姜黃中姜黃素類化合物的含量得到提高，其中姜黃素含量高于去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素含量（圖3）。隨著BR濃度的增加，姜黃素類化合物含量表現(xiàn)出先升高后下降；0.1 mg/L BR時(shí)，姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素含量均達(dá)最大值，分別比對(duì)照提高73.05%、99.56%和97.42%。0.2 mg/L BR時(shí)，姜黃素類化合物含量高于對(duì)照，但與對(duì)照差異不顯著。因此，噴施0.1 mg/L BR有利姜黃素類化合物的合成。

2.4 BR對(duì)姜黃揮發(fā)油含量的影響

由圖4可知，隨著噴施BR濃度的增加，姜黃揮發(fā)油含量表現(xiàn)為先升高后降低；0.01～0.05 mg/L BR顯著提高姜黃揮發(fā)油含量；0.01 mg/L BR時(shí)，揮發(fā)油含量達(dá)到最大值為0.493 mL/g，比對(duì)照提高20.86%。0.1 mg/L BR時(shí)，揮發(fā)油含量與對(duì)照差異不顯著；0.2 mg/L BR時(shí)，姜黃揮發(fā)油含量最小，為0.323? mL/g，比對(duì)照組降低20.86%，且差異顯著。因此，0.01～0.05? mg/L BR有利姜黃揮發(fā)油的合成。

3? 結(jié)論與討論

油菜素內(nèi)酯（BR）是一類廣泛存在于植物中的甾醇類激素，自從作為第六大植物激素被發(fā)現(xiàn)以來廣受關(guān)注。油菜素內(nèi)酯在植物的生長(zhǎng)發(fā)育、提高植物初生代謝產(chǎn)物和次生代謝產(chǎn)物含量方面都有重要的作用，參與植物各個(gè)生長(zhǎng)過程的調(diào)控［4］。油菜素內(nèi)酯通過提高卡爾文循環(huán)關(guān)鍵酶的活力及基因表達(dá)而提高植物的光合效率，通過影響其合成的關(guān)鍵基因?qū)Υ紊x產(chǎn)物起調(diào)控作用［10］。外源油菜素內(nèi)酯通過促進(jìn)青蒿素生物合成關(guān)鍵基因ADS、CYP71AV1和DBR2的表達(dá)而促進(jìn)青蒿中青蒿素的合成，對(duì)藥用植物青蒿中的倍半萜類次生代謝產(chǎn)物—青蒿素的生物合成具有重要的調(diào)控作用［8］；申雨肖等［9］施用油菜素內(nèi)酯顯著促進(jìn)半夏生物堿的含量；王孟珂［16］發(fā)現(xiàn)EBR能顯著提高銀杏葉片中黃酮類化合物的含量；EBR具有調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)發(fā)育和次生代謝的作用，特別是對(duì)類黃酮化合物的合成和積累有顯著的促進(jìn)作用。

姜黃是中國(guó)的傳統(tǒng)中藥，其功效成分為揮發(fā)油和姜黃素。揮發(fā)油主要以萜類化合物為主，還有姜黃酮、姜油烯等；酚性成分主要有姜黃素類化合物等［17］。姜黃次生代謝產(chǎn)物的生成受到苯丙烷代謝和萜類代謝等多條合成途徑關(guān)鍵酶基因的調(diào)控［18］，同時(shí)也受到植物激素的影響；2，4-表油菜素內(nèi)酯（EBR）可通過誘導(dǎo)苯丙氨酸解氨酶、肉桂酸-4-羥化酶、香豆酸輔酶A連接酶活性上升，增加總酚和類黃酮含量［19］。本研究表明姜黃噴施0.05～0.10 mg/L油菜素內(nèi)酯可能顯著提高苯丙烷合成途徑代謝，促進(jìn)姜黃素類化合物、萜類物質(zhì)、氨基酸和總黃酮物質(zhì)的合成。

參考文獻(xiàn)：

［1］陳欽，高俊杰，劉建福，等．姜黃不同種質(zhì)生物學(xué)特性及品質(zhì)成分比較［J］．云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)），2017，32（1）：101-105．

［2］吳萍，郭俊霞，王曉宇，等．環(huán)境因子對(duì)姜黃產(chǎn)量及品質(zhì)相關(guān)成分的影響［J］．中藥材，2019，42（9）：1969-1972．

［3］楊旭，楊志玲，劉若楠，等．姜黃根莖中姜黃素類成分含量的產(chǎn)地差異及其與環(huán)境因子的CCA分析［J］．植物資源與環(huán)境學(xué)報(bào)，2011，20（3）：16-23．

［4］陳晨，陳虹，倪銘，等．油菜素內(nèi)酯調(diào)控植物生長(zhǎng)發(fā)育的研究進(jìn)展［J］．林業(yè)科學(xué)，2022，58（7）：144-155．

［5］喬子純，賀琰，代紅軍，等．外源油菜素內(nèi)酯對(duì)美樂葡萄光合特性和果實(shí)品質(zhì)的影響［J］．南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2022，53（8）：2251-2260．

［6］丁美云，劉麗杰，于夢(mèng)迪，等．油菜素內(nèi)酯對(duì)寒地冬小麥越冬期生理代謝的影響［J］．麥類作物學(xué)報(bào)，2022，42（7）：864-871．

［7］李雅潔，張其安，陸曉民．油菜素內(nèi)酯對(duì)硝酸鈣脅迫下黃瓜幼苗抗氧化系統(tǒng)及可溶性蛋白表達(dá)的影響［J］．安徽科技學(xué)院學(xué)報(bào)，2017，31（1）：35-40．

［8］池劍亭，申亞琳，舒位恒，等．油菜素內(nèi)酯促進(jìn)藥用植物青蒿中青蒿素的生物合成［J］．中國(guó)科學(xué)院大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，32（4）：476-481．

［9］申雨肖，姚曉芹，張世豪，等．油菜素內(nèi)酯對(duì)半夏品質(zhì)及產(chǎn)量的影響［J］．北方園藝，2021（16）：116-122.

［10］喬晶，胡峻，李妍芃，等．油菜素內(nèi)酯對(duì)甘草性狀及7種化學(xué)成分含量的影響［J］．中國(guó)中藥雜志，2016，41（2）：197-204．

［11］李小玲，華智銳，王怡．油菜素內(nèi)酯和吲哚乙酸對(duì)黃芩生長(zhǎng)及品質(zhì)的影響［J］．貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，46（7）：121-125．

［12］吳志奡，張立杰，謝麗雪，等．12個(gè)藍(lán)莓品種果實(shí)氨基酸含量及組成分析［J］．中國(guó)南方果樹，2023，52（3）：149-153．

［13］舒泉湧，崔蕾，朱愛華，等．倒卵葉五加根與莖總黃酮含量測(cè)定方法研究［J］．西部中醫(yī)藥，2023，36（07）：43-46．

［14］劉建福，范燕萍，王明元，等．發(fā)光二級(jí)管不同光質(zhì)對(duì)姜黃光合特性和姜黃素含量的影響［J］.生態(tài)學(xué)雜志，2014，33（3）：631-636．

［15］宋玉丹，王書林，余弦，等．姜黃揮發(fā)油兩種提取方法比較［J］．醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2015，34（2）：240-244．

［16］王孟珂. 2，4-表油菜素內(nèi)酯對(duì)銀杏類黃酮代謝的影響及相關(guān)基因的功能研究［D］. 南京林業(yè)大學(xué)，2023.

［17］李潔．姜黃油細(xì)胞發(fā)育及揮發(fā)油生物活性譜效關(guān)系研究［D］．華僑大學(xué)，2023．

［18］王璐瑤，韓雪，王鳳忠，等．姜黃素類化合物生物合成研究進(jìn)展［J］．生物工程學(xué)報(bào)，2021，37（2）：404-417．

［19］李輝，左欽月，涂升斌．油菜素內(nèi)酯生物合成和代謝研究進(jìn)展［J］．植物生理學(xué)報(bào)，2015，51（11）：1787-1798．

（責(zé)任編輯：馮新）