余丹丹，吳家雄,2，劉英，汪麗霞，楊興良，葉興乾,2，陳士國,2，陳健樂,2*

（1.浙江大學(xué)生物系統(tǒng)工程與食品科學(xué)學(xué)院，智能食品加工技術(shù)與裝備國家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室/浙江省農(nóng)產(chǎn)品加工技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/馥莉食品研究院，浙江 杭州 310058；2.浙江大學(xué)寧波科創(chuàng)中心，浙江 寧波 315100；3.杭州職業(yè)技術(shù)學(xué)院生態(tài)健康學(xué)院，浙江 杭州 310018；4.常山縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，浙江 衢州 324299）

常山胡柚（Citrus×aurantiumL.Changshanhuyou）作為浙江省的地方優(yōu)勢(shì)特色柑橘品種，主產(chǎn)于浙江省衢州市常山、龍游等地，以常山為重點(diǎn)產(chǎn)區(qū)。常山胡柚又名常山柚橙，是蕓香科植物酸橙的栽培變種[1]，具有獨(dú)特的風(fēng)味，且含有豐富的生理活性成分，是較適合精深加工與深度挖掘開發(fā)的柑橘品種之一。目前，常山胡柚深加工產(chǎn)品種類主要包括胡柚汁胞飲料、糖水胡柚罐頭、胡柚囊胞罐頭、胡柚皮蜜餞等[2]。其非可食部位（白皮層和油胞層）約占全果質(zhì)量的1/3，榨汁后又會(huì)產(chǎn)生1/3 左右的加工副產(chǎn)物（果渣和籽），它們大部分被當(dāng)作垃圾丟棄，造成生態(tài)資源浪費(fèi)[3]。

柑橘類果實(shí)的主要功能性成分包括多酚類物質(zhì)（黃酮類化合物和酚酸類）、果膠類物質(zhì)、類檸檬苦素等。隨著常山胡柚皮、胡柚青果的功效成分及藥用價(jià)值相繼被發(fā)現(xiàn)，趙雪梅等[4-5]對(duì)常山胡柚成熟果皮中的揮發(fā)性成分、黃酮類成分進(jìn)行了分離提取，并對(duì)相關(guān)成分的抗氧化活性、免疫生物活性做了大量的研究工作。對(duì)常山胡柚果實(shí)不同部位中總黃酮、總酚、檸檬苦素的含量，以及不同發(fā)育階段胡柚小青果和枳殼中黃酮類化合物含量變化的相關(guān)研究也有報(bào)道[3,6-7]。以往的研究多關(guān)注于胡柚皮或者皮渣中主要的黃酮類化合物如柚皮苷、圣草次苷和新橙皮苷等，且檢測(cè)到的種類較少，而對(duì)于胡柚果實(shí)5個(gè)不同部位（果實(shí)油胞層、白皮層、囊衣、汁胞和籽）中多酚類物質(zhì)的全面分析及比較鮮見報(bào)道。柑橘果皮或皮渣作為果膠多糖的主要加工來源，其傳統(tǒng)提取方法包括熱水煮提、酸堿提取和酶法提取等，但傳統(tǒng)提取方法提取率低，且提取過程中pH值等劇烈變化會(huì)導(dǎo)致多糖結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。果膠多糖的新興提取方法包括超聲波輔助提取、微波提取、亞臨界水萃取和高壓提取等，這些方法的作用原理是通過電磁、聲波或高壓等造成細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)破壞，從而促進(jìn)多糖釋放，但相關(guān)設(shè)備價(jià)格昂貴，且高壓或聲波處理會(huì)造成多糖中性側(cè)鏈降解，導(dǎo)致天然多糖靶向提取過程中提取方式對(duì)多糖結(jié)構(gòu)產(chǎn)生較大影響[8-10]。作為研究植物細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的常用方法，順序提取技術(shù)將熱水提取、螯合劑提取、弱酸/堿提取等方法組合，分步提取出不同結(jié)構(gòu)的植物多糖，具有提取率較高、對(duì)多糖結(jié)構(gòu)破壞小等優(yōu)勢(shì)[11-12]。在該提取技術(shù)中，主要步驟螯合劑提取常采用1，2-環(huán)己二胺四乙酸[(1, 2-cyclohexylenedinitrilo)-tetraacetic acid, CDTA]或乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid, EDTA）螯合鈣、鎂等金屬離子，將以鈣鹽或鎂鹽等形式存在的原果膠有效轉(zhuǎn)化為水溶性果膠并浸提出來；弱堿提取常采用低濃度碳酸鈉（Na2CO3）或氫氧化鈉（NaOH）處理上一步的殘?jiān)商崛〖?xì)胞壁中與半纖維素結(jié)合的果膠多糖，從而充分提取剩余的果膠多糖。淀粉由α-1，4 糖苷鍵連接葡萄糖而成，為避免樣品中殘余的淀粉干擾后續(xù)多糖結(jié)構(gòu)的測(cè)定，通常采用淀粉酶水解法去除樣品中的淀粉[13]。因此，本研究采用淀粉酶輔助EDTA 溶液-NaOH 溶液順序提取法提取胡柚果實(shí)不同部位中的果膠多糖，并通過比較果實(shí)不同部位中21 種柑橘黃酮類化合物成分、9 種酚酸類成分和果膠多糖的含量，探索胡柚（果實(shí)油胞層、白皮層、囊衣、汁胞和籽）中功能性成分的分離和純化方法，拓展其利用途徑，以期提高胡柚的附加值，促進(jìn)常山胡柚產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

原料：選用充分成熟、新鮮采摘、無腐爛變質(zhì)的常山胡柚鮮果為實(shí)驗(yàn)原料，所有原料均于2021年12月采摘于常山胡柚的原產(chǎn)地浙江省衢州市常山縣。

標(biāo)準(zhǔn)品：圣草次苷、柚皮蕓香苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、野漆樹苷、地奧司明、槲皮苷、香蜂草苷、枸橘苷、槲皮素、柚皮素、橙皮素、山柰酚、香葉木素、甜橙黃酮、川陳皮素、橘皮素、去甲基川陳皮素、阿魏酸、咖啡酸、綠原酸、沒食子酸、蘆丁、新北美圣草苷，均購自上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；原兒茶酸、香草酸、對(duì)羥基苯甲酸、對(duì)香豆酸、芥子酸，均購自上海源葉生物科技有限公司；巖藻糖（fucose, Fuc）、鼠李糖（rhamnose, Rha）、阿拉伯糖（arabinose, Ara）、半乳糖（galactose, Gal）、葡萄糖（glucose, Glu）、甘露糖（mannose, Man）、木糖（xylose,Xyl）、半乳糖醛酸（galacturonic acid, GalA）、葡糖醛酸（glucuronic acid, GlcA），均購自西格瑪-奧德里奇（上海）貿(mào)易有限公司。

試劑：三氟乙酸、耐高溫α-淀粉酶、EDTA，均購自阿拉丁試劑（上海）有限公司；甲醇、甲酸（色譜純），均購自德國Merck公司；NaOH、鹽酸（HCl），均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

超高效液相色譜儀（Waters ACQUITY UPLC，美國Waters公司）、串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀（Waters Xevo TQ-XS，美國Waters 公司）、去離子水發(fā)生器（Mili-Q，美國Millipore 公司）、離子色譜儀（ICS-5000，美國Thermo Fisher Scientific 公司）、高效液相色譜儀（Waters e2695，美國Waters 公司）、多角度光散射儀（DAWN HELEOS Ⅱ，美國Wyatt 技術(shù)公司）、示差檢測(cè)器（RID-20A，日本島津公司）、旋渦混合器（MS3，德國IKA公司）、可視孔氮吹儀（NK200-1B，杭州米歐儀器有限公司）、全自動(dòng)樣品快速研磨儀（JXFSTPRP-24L，上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 原料前處理

1.3.1.1 預(yù)處理

取新鮮的常山胡柚鮮果30只，將其洗凈、擦干，削皮機(jī)處理得到油胞層，再剝皮得到白皮層，剝?nèi)ツ乙隆⑷∽?，得到囊衣、汁胞和籽，分別稱量各部位質(zhì)量，并計(jì)算各部位在鮮果中的占比（圖1）。隨后，取常山胡柚果實(shí)不同部位進(jìn)行凍干，其中汁胞先粉碎均勻后再凍干，其余樣品凍干后各自粉碎混勻，再取樣采用快速研磨儀充分研磨混合，備用。

圖1 常山胡柚果實(shí)不同部位的視圖及其在鮮果中的占比Fig.1 Views of different parts of Citrus×aurantium L.Changshanhuyou and their proportions of fresh fruits

1.3.1.2 多酚類物質(zhì)提取

參照ZHANG等[14]的多酚類物質(zhì)提取方法，精確稱取100.0 mg 樣品粉末置于10 mL 離心管中，加入80%甲醇溶液3 mL，再加入3粒鋼珠，以60 Hz振蕩60 s破壞細(xì)胞壁；再避光振蕩浸泡1 h后，取出鋼珠，加入100 μL 80%甲醇溶液沖洗2 次，以8 000 r/min離心5 min，收集上清液；沉淀中加入無水甲醇3 mL，避光振蕩浸泡1 h后，以8 000 r/min離心5 min，收集上清液；沉淀中加入無水甲醇3 mL 并重復(fù)上述操作；合并3次上清液，即為待測(cè)樣品。

1.3.1.3 果膠多糖提取

參照YU等[15]的果膠多糖提取方法，收集1.3.1.2節(jié)中沉淀后于45 ℃下減壓干燥，先采用淀粉酶輔助EDTA 溶液提取法（amylase-assisted EDTA solution extraction, AESE），向干燥樣品加入2.0 mL 0.05 mol/L EDTA溶液（用氨水調(diào)節(jié)溶液pH值至6.5），加入2粒鋼珠，以60 Hz振蕩混合60 s；再加入200 μL耐高溫α-淀粉酶溶液，在90 ℃水浴中振蕩提取2 h，然后以60 Hz振蕩混合60 s。將混合液冷卻至室溫，取出鋼珠，加入1 mol/L HCl 溶液調(diào)節(jié)pH 值至3.0 并維持5 min滅酶，再用3 mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至6.0～7.0，以10 000 r/min離心10 min，收集上清液作為淀粉酶輔助EDTA溶液提取物。采用NaOH溶液提取法（NaOH solution extraction, NSE），向去除上清液后的沉淀加入0.05 mol/L NaOH 溶液（含20 mmol/L NaBH4）2 mL，在25 ℃下提取1 h 后，用0.3 mol/L HCl溶液調(diào)整pH值至6.0～7.0，以10 000 r/min離心10 min，收集上清液作為NaOH溶液提取物。

按體積比1∶2分別向上述淀粉酶輔助EDTA溶液提取物、NaOH溶液提取物中加入無水乙醇，混勻后在4 ℃下靜置2 h，以10 000 r/min離心10 min，棄上清液；再向沉淀中加入無水乙醇，重復(fù)上述操作，以10 000 r/min 離心10 min，棄上清液，將沉淀置于通風(fēng)櫥過夜，并于80 ℃下干燥至恒量，分別得到果膠多糖AESE樣品和NSE樣品。

1.3.2 多酚類物質(zhì)含量測(cè)定

參照雷美康等[16]的方法，采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)多酚類物質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)定。

色譜條件：使用Waters CORTECS UPLC C18柱（100 mm×2.1 mm，1.6 μm）。流動(dòng)相A 相為0.1%甲酸溶液，B 相為甲醇。梯度洗脫程序?yàn)?～7.0 min，10%～50% B；7.0～10.0 min，50%～80% B；10.0～10.1 min，80%～100% B；10.1～12.0 min，100% B；12.0～12.1 min，100%～10% B；12.1～15.0 min，10% B。柱溫為40 ℃，流速為0.3 mL/min，進(jìn)樣量為1 μL，運(yùn)行時(shí)間為15 min。

離子源條件：采用電噴霧離子源（electrospray ionization, ESI），多 反 應(yīng) 監(jiān) 測(cè)（multiple reaction monitoring, MRM）模式，毛細(xì)管電壓為0.5 kV，錐孔電壓為20 V，脫溶劑氣流速為1 000 L/h，脫溶劑氣溫度為600 ℃，錐孔氣流速為150 L/h。校準(zhǔn)方法為質(zhì)量軸自動(dòng)調(diào)諧校正。

1.3.3 果膠多糖的組成及分子量測(cè)定

1.3.3.1 單糖組成測(cè)定

果膠多糖的單糖組成采用高效陰離子交換色譜-脈沖安培檢測(cè)法（high-performance anion-exchange chromatography with pulsed amperometric detection,HPAEC-PAD）[17]進(jìn)行測(cè)定。

樣品制備：將2 mg 左右果膠多糖樣品溶于2 mol/L三氟乙酸水溶液中，并于110 ℃下水解8 h，冷卻至室溫后，加入甲醇進(jìn)行氮吹以獲得干燥樣品，加入6 mL 去離子水溶解樣品。樣品溶液經(jīng)0.22 μm水系濾膜過濾后進(jìn)樣。

離子色譜條件：色譜系統(tǒng)配備脈沖安培檢測(cè)器。分析柱為CarboPac-PA10（4 mm×250 mm）。洗脫條件為18 mmol/L NaOH 溶液洗脫15 min，含有18 mmol/L NaOH 的CH3COONa 溶液（100 mmol/L）洗脫35 min；流速為1 mL/min，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣量為25 μL。

1.3.3.2 分子量測(cè)定

果膠分子量的測(cè)定參照CHEN等[18]的方法。

通過尺寸排阻色譜-多角度激光光散射-示差折光檢測(cè)器聯(lián)用（size-exclusion chromatography-multiangle laser light scattering-differential refractive index,SEC-MALLS-RI）系統(tǒng)測(cè)定果膠的摩爾質(zhì)量分布等指標(biāo)。SEC-MALLS-RI系統(tǒng)包括LC-20高效液相色譜儀，Shodex OH SB-G、SB-804 HQ（8.0 mm×300 mm，10 μm；排 阻 限1×106）和SB-806 HQ（8.0 mm×300 mm，13 μm；排阻限2×107）色譜柱聯(lián)用，DAWN HELEOS Ⅱ多角度光散射儀（λ0=660 nm）以及RID-20A示差檢測(cè)器。

樣品前處理：將果膠多糖樣品溶于0.15 mol/L NaCl中制成3 mg/mL溶液，磁力攪拌溶解過夜。用0.22 μm水系濾膜過濾后進(jìn)樣。

色譜條件：流動(dòng)相為0.15 mol/L NaCl 溶液（含抑菌劑Proclin 300，pH 7.0），進(jìn)樣量為100 μL，運(yùn)行時(shí)間為60 min，溫度為40 ℃，流速為0.5 mL/min。

使用Astra 7.3.2 軟件采集和處理數(shù)據(jù)。所有樣品的絕對(duì)折射率增量（specific refractive index increment, dn/dc）值定義為0.138 mL/g[19]。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析，以評(píng)估數(shù)據(jù)間的差異顯著性，以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用Origin Pro 7.5軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 常山胡柚果實(shí)不同部位的黃酮類化合物組成

一些研究結(jié)果顯示，柚皮苷和新橙皮苷是常山胡柚中含量最高的成分，也可作為胡柚皮藥材指紋圖譜中已鑒別的特征指紋峰成分[14,20]。本研究發(fā)現(xiàn)，胡柚油胞層和白皮層中另外一種成分新北美圣草苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高，分別可達(dá)3 741.45 μg/g（按干質(zhì)量計(jì)，下同）和6 270.24 μg/g（表1）。已有文獻(xiàn)報(bào)道新北美圣草苷是枳殼、骨碎補(bǔ)中的主要藥效成分[21-22]，鄭雪良等[7]發(fā)現(xiàn)胡柚小青果中新北美圣草苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.32～17.65 mg/g，均顯著高于枳殼。與柚皮苷相比，新北美圣草苷對(duì)小鼠成骨細(xì)胞株MC3T3-E1細(xì)胞的體外增殖和成骨分化具有更顯著的促進(jìn)作用，具有治療骨質(zhì)疏松癥的潛力[23-24]。另外，胡柚油胞層中的柚皮蕓香苷、圣草次苷、槲皮苷含量均高于柚皮苷，白皮層和囊衣中的柚皮蕓香苷含量也高于柚皮苷（表1）。由此可見胡柚果皮層（包括油胞層和白皮層）、囊衣不僅是柚皮苷和新橙皮苷的重要來源，也可作為新北美圣草苷、柚皮蕓香苷、圣草次苷、槲皮苷的加工原料。尤其是胡柚果皮層和囊衣中含有豐富的新北美圣草苷，可作為治療骨質(zhì)疏松癥活性成分新的加工來源，具有極大的開發(fā)價(jià)值。

表1 常山胡柚果實(shí)不同部位的黃酮類化合物含量（按干質(zhì)量計(jì)）Table 1 Flavonoid contents in different parts of Citrus×aurantium L. Changshanhuyou fruits (by dry mass)μg/g

由表1 可知，常山胡柚果實(shí)不同部位的黃酮類化合物以黃烷酮類為主，其中，比較5個(gè)部位中含量較高的7種成分（新北美圣草苷、新橙皮苷、柚皮蕓香苷、圣草次苷、柚皮苷、橙皮苷、枸橘苷），發(fā)現(xiàn)白皮層中各成分含量均最高。胡柚白皮層和囊衣中質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高的均為新橙皮苷，分別為13 700.72 μg/g 和4 186.94 μg/g；油胞層中含量最高的是新北美圣草苷，其次是新橙皮苷和柚皮蕓香苷；汁胞中柚皮蕓香苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，為1 894.80 μg/g，其次是柚皮苷；籽中質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高的是柚皮蕓香苷（160.85 μg/g），但是與其他部位相比，籽中以上7種成分含量均最低。由此可知，胡柚不同部位的優(yōu)勢(shì)成分不同。過去對(duì)胡柚各部位黃酮類化合物組成的研究主要集中在黃烷酮類上，且檢測(cè)到的種類較少。ZHANG 等[25]發(fā)現(xiàn)柚皮苷和新橙皮苷在胡柚白皮層中含量最高，其次是在囊衣、油胞層、汁胞中。趙四清等[26]比較了胡柚果實(shí)不同部位中的柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷含量，發(fā)現(xiàn)各成分含量在不同部位的排序?yàn)楣ぃ灸乙拢竟?。本研究發(fā)現(xiàn)，黃烷酮類成分更多集中在胡柚白皮層中，而油胞層中黃酮和多甲氧基黃酮類含量總體上比其他部位更高，尤其是油胞層中的川陳皮素、橘皮素、地奧司明、去甲基川陳皮素含量較高，此與上述研究結(jié)果基本一致。

2.2 常山胡柚果實(shí)不同部位的酚酸類物質(zhì)組成

由表2 可知，胡柚油胞層、白皮層、囊衣、汁胞中肉桂酸類含量均高于苯甲酸類。油胞層中肉桂酸類含量最高，其中芥子酸和阿魏酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為55.49 μg/g 和46.54 μg/g；苯甲酸類以香草酸和對(duì)羥基苯甲酸為主，2 種成分在油胞層中含量最高，其次是在白皮層中。江萍等[27]比較了5 大類（寬皮橘類、甜橙類、檸檬、柚類、葡萄柚類）共15 種柑橘果皮中主要的酚酸類組成，得出各大類柑橘果皮中肉桂酸類的含量顯著高于苯甲酸類，且胡柚果皮中阿魏酸含量最高。SUN 等[28]發(fā)現(xiàn)胡柚果肉中對(duì)羥基苯甲酸、咖啡酸含量較高，而芥子酸、阿魏酸、香草酸含量較低。聶嘉琳等[29]分析了6 種柚果實(shí)中的酚酸類組分與含量差異，發(fā)現(xiàn)果皮中酚酸含量總體上高于果肉，且油胞層和白皮層中均以對(duì)香豆酸、阿魏酸和芥子酸為主，白皮層中酚酸含量更低，而果肉中則以芥子酸、阿魏酸和香草酸為主；與其他品種柚果實(shí)不同的是，胡柚中對(duì)香豆酸含量偏低。關(guān)于胡柚各部位中酚酸含量的研究不多，且研究結(jié)果差異較大，這可能與各研究使用的提取方法不同有關(guān)，也可能與胡柚的品種、產(chǎn)地或成熟度不同有關(guān)。

表2 常山胡柚果實(shí)不同部位的酚酸類含量（按干質(zhì)量計(jì)）Table 2 Phenolic acid contents in different parts of Citrus×aurantium L. Changshanhuyou fruits (by dry mass) μg/g

2.3 常山胡柚果實(shí)不同部位的果膠多糖組成及其性質(zhì)比較

本研究比較了常山胡柚果實(shí)不同部位的果膠多糖得率，由圖2 可知，油胞層、白皮層、囊衣AESE樣品的果膠多糖得率顯著高于籽和汁胞，在白皮層中可達(dá)27.46%。張妍楠[30]采用EDTA-2Na溶劑提取法提取胡柚果皮中果膠，得率可達(dá)26.31%，且該果膠具有良好的乳化性和增稠性。WANG等[31]研究結(jié)果顯示，超聲波輔助提取的胡柚皮果膠得率最高可達(dá)27.34%。本研究結(jié)果與上述研究相近，說明采用AESE時(shí)，果膠提取效果優(yōu)異。對(duì)各部位經(jīng)淀粉酶輔助EDTA溶液提取后的沉淀采用NaOH溶液再次提取，發(fā)現(xiàn)仍能提取出多糖類物質(zhì)，且得率較高，其中油胞層的NSE樣品果膠多糖得率最高（11.30%），汁胞的NSE 樣品果膠多糖得率最低（3.46%），說明AESE 仍不能完全提取出全部的細(xì)胞壁果膠多糖。因此，相較于單一提取法，順序提取法更有利于提高果膠多糖的提取率。

圖2 常山胡柚果實(shí)不同部位的果膠多糖得率Fig.2 Yields of pectin polysaccharides in different parts of Citrus×aurantium L. Changshanhuyou fruits

比較常山胡柚5 個(gè)部位果膠多糖的單糖組成，結(jié)果（表3）發(fā)現(xiàn)，各部位果膠多糖在單糖組成上相似，主要為半乳糖醛酸、阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖和葡萄糖。其中，油胞層、白皮層、囊衣、籽NSE 樣品的果膠多糖中半乳糖醛酸含量最高，其次為阿拉伯糖；而油胞層和汁胞AESE 樣品的果膠多糖中阿拉伯糖含量高于半乳糖醛酸。不同于其他部位，汁胞AESE 樣品的果膠多糖中葡萄糖含量最高，這可能與其中存在游離葡萄糖和淀粉干擾有關(guān)。比較不同部位果膠多糖中同型半乳糖醛酸聚糖（homogalacturonan, HG）和鼠李半乳糖醛酸聚糖Ⅰ型（rhamnogalacturonan-Ⅰ, RG-Ⅰ）結(jié)構(gòu)域占比，發(fā)現(xiàn)白皮層AESE和NSE樣品的果膠多糖具有最高的HG結(jié)構(gòu)域占比，分別為31.65%和39.45%（表3）。本研究中胡柚5個(gè)部位AESE和NSE樣品的果膠多糖RG-Ⅰ結(jié)構(gòu)域占比多在40%～60%，其中汁胞NSE 樣品的果膠多糖中RG-Ⅰ結(jié)構(gòu)域占比最高，為73.28%。上述結(jié)果表明，采用AESE 和NSE 方法得到的胡柚不同部位的果膠多糖具有半乳糖醛酸含量不高、中性糖側(cè)鏈較多的特點(diǎn)。結(jié)合得率來看，如需獲得高RG-Ⅰ結(jié)構(gòu)域占比的果膠多糖，油胞層和囊衣是較好的提取部位。

表3 常山胡柚果實(shí)不同部位果膠多糖的單糖組成Table 3 Monosaccharide compositions of pectin polysaccharides in different parts of Citrus×aurantium L. Changshanhuyou fruits%

高分子的分子量表示方法中，重均分子量（Mw）和數(shù)均分子量（Mn）最為常用。如表4 所示，胡柚油胞層、白皮層、囊衣NSE 樣品果膠多糖的上述分子量都小于AESE樣品，但籽中的結(jié)果卻大部分相反。AESE 和NSE 方法提取的油胞層的果膠多糖重均分子量均最高，分別為6.888×105g/mol 和2.343×105g/mol，而囊衣、汁胞和籽中的果膠多糖重均分子量相近。多糖一般都是多分散的化合物，具有較寬的分子量分布。重均分子量與數(shù)均分子量的比值稱為多分散指數(shù)（Mw/Mn），用來表征聚合物分子量分布寬度，其比值越大表明分子量分布越寬[18]。油胞層和籽NSE 樣品的果膠多糖具有較大的多分散指數(shù)，說明該類聚合物分子量分布較寬、成分較復(fù)雜。均方根旋轉(zhuǎn)半徑（Rz）可以衡量分子尺寸，Rz越小，表明分子尺寸越小、分子結(jié)合越緊密[18]。與NSE樣品的果膠多糖相比，AESE樣品的果膠多糖具有更大的均方根旋轉(zhuǎn)半徑。這說明NSE樣品的果膠多糖分子結(jié)構(gòu)更加緊密，這可能與其豐富的中性糖側(cè)鏈和復(fù)雜的結(jié)構(gòu)有關(guān)。綜上所述，胡柚皮的油胞層和白皮層的果膠多糖性質(zhì)差異較大，若作為果膠加工原料，宜將油胞層和白皮層分開后再分別進(jìn)行果膠提取。

表4 常山胡柚果實(shí)不同部位果膠多糖的分子量Table 4 Molecular weights of pectin polysaccharides in different parts of Citrus×aurantium L.Changshanhuyou fruits

3 結(jié)論

本研究全面分析了常山胡柚果實(shí)油胞層、白皮層、囊衣、汁胞和籽5 個(gè)部位中黃酮類化合物、酚酸類、果膠多糖組成。超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法可同步快速檢測(cè)胡柚不同部位中30 種柑橘多酚類物質(zhì)。本研究表明胡柚各部位黃酮類化合物以黃烷酮類為主，與前人研究結(jié)果一致。胡柚油胞層、白皮層和囊衣中含有豐富的新北美圣草苷、新橙皮苷、柚皮蕓香苷、圣草次苷、柚皮苷、橙皮苷、槲皮苷，尤其是白皮層中的新北美圣草苷、新橙皮苷含量較高。采用淀粉酶輔助EDTA 溶液-NaOH 溶液順序提取法提取胡柚各部位果膠多糖，發(fā)現(xiàn)油胞層、白皮層、囊衣的果膠多糖得率較高；AESE 和NSE 2種方法得到的果膠多糖均主要由半乳糖醛酸和阿拉伯糖組成，其中油胞層和汁胞的果膠多糖中RG-Ⅰ結(jié)構(gòu)域占比均大于50%。由此可見，常山胡柚油胞層、白皮層和囊衣可作為黃酮類化合物和果膠的加工來源，分離純化后的常山胡柚黃酮類化合物可進(jìn)一步開發(fā)為功能產(chǎn)品及藥物原料。胡柚加工過程中伴隨大量加工副產(chǎn)物產(chǎn)生，若能結(jié)合現(xiàn)代高新技術(shù)加以充分利用，不僅能夠提高胡柚加工產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益，而且可以減少環(huán)境污染。