吳詩陽?，孫加進，楊州

【摘要】支原體肺炎為常見疾病，采用血清學(xué)抗體檢測為實踐中常用的檢測技術(shù)。隨著肺炎支原體血清學(xué)抗體檢測的不斷發(fā)展，其也成為醫(yī)療技術(shù)發(fā)展的重要表現(xiàn)之一。肺炎支原體血清學(xué)抗體檢測技術(shù)較多，分為傳統(tǒng)檢測技術(shù)和新型檢測技術(shù)，各項檢測技術(shù)其操作復(fù)雜程度和反應(yīng)原理不同，在臨床中有著不同的診斷價值。肺炎支原體血清學(xué)抗體檢測中的標(biāo)志物種類、靈敏度和特異性均不相同，不同病程、不同性別、不同疾病下血清學(xué)抗體檢測技術(shù)的陽性檢出率不同，為了降低血清學(xué)抗體檢測的誤差需要多個措施進行佐證?，F(xiàn)就肺炎支原體的血清學(xué)抗體檢測的研究進展進行綜述，為臨床研究提供參考依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】肺炎支原體 ; 血清學(xué)抗體檢測 ; 酶聯(lián)免疫吸附法

【中圖分類號】R725.6【文獻標(biāo)識碼】A【文章編號】2096-3718.2023.20.0135.04

DOI：10.3969/j.issn.2096-3718.2023.20.044

肺炎支原體是一類常見的呼吸道病原體，其感染會導(dǎo)致肺炎和其他上呼吸道炎癥，具有人群性和季節(jié)流行性[1]。在肺炎支原體感染的診斷和監(jiān)測中，血清學(xué)抗體檢測是一種常用方法，且具有著重要的診斷價值，因此被廣泛使用。本文主要探討肺炎支原體血清學(xué)抗體檢測的研究進展，現(xiàn)綜述如下。

1 抗原的發(fā)現(xiàn)與使用

為了提高肺炎支原體感染的診斷準(zhǔn)確率，近年來不斷有新的肺炎支原體抗原被發(fā)現(xiàn)，除了傳統(tǒng)的血清學(xué)抗體檢測方法外，一些特異性的肺炎支原體抗原，如P1蛋白、蛋白I、蛋白J等，已被用于開發(fā)免疫測定法。

1.1 P1蛋白抗原的發(fā)現(xiàn) P1蛋白是肺炎支原體的主要抗原之一，具有高免疫原性。通過對P1蛋白的研究發(fā)現(xiàn)，其在肺炎支原體感染后持續(xù)存在，可作為診斷肺炎支原體感染的重要標(biāo)志物之一[2]。利用血清學(xué)抗體檢測方法，可以檢測出對P1蛋白的抗體水平變化，從而確定肺炎支原體感染的狀態(tài)。

1.2 蛋白I和蛋白J抗原的應(yīng)用 除了P1蛋白，蛋白I和蛋白J也是用于診斷肺炎支原體感染的重要抗原?；诖?，研究人員開發(fā)了蛋白I和蛋白J的免疫測定法，如酶聯(lián)免疫吸附法和免疫熒光分析法[3]。酶聯(lián)免疫吸附法和免疫熒光分析法均使用免疫標(biāo)記的方法來檢測蛋白I和蛋白J的抗體水平，為臨床提供了輔助診斷肺炎支原體感染的新途徑。

1.3 多抗原檢測方法的應(yīng)用 多抗原檢測是目前多個醫(yī)院檢驗科采用的方法，常用的方法是間接免疫熒光法和酶聯(lián)免疫吸附法。在臨床上，采用兩種方法對P1蛋白、蛋白I和蛋白J等多個抗原及相應(yīng)的抗體進行檢測，可以同時明確出多個抗體的水平變化，提供更全面和準(zhǔn)確的診斷結(jié)果[4]。

1.4 對肺炎支原體抗原的新鑒定和應(yīng)用 一些研究還致力于鑒定其他新的肺炎支原體抗原并探索其在血清學(xué)抗體檢測中的應(yīng)用。近年來，隨著醫(yī)療技術(shù)水平的逐漸提升，相應(yīng)的醫(yī)療設(shè)備應(yīng)用到科室中，對于肺炎支原體抗原的鑒定也有較大的進步。研究人員發(fā)現(xiàn)肺炎支原體的其他特異性蛋白，如P30、P116和P200等，也可能成為新的血清學(xué)抗體檢測抗原[5]。另外，隨著肺炎支原體抗原的應(yīng)用范圍不斷拓展，使得肺炎支原體抗原的新鑒定技術(shù)越來越先進。而進一步的研究還需要對這些抗原進行評估和驗證，以進一步完善對肺炎支原體感染的診斷和檢測方法。

2 抗體檢測方法的診斷價值

2.1 傳統(tǒng)檢測方法的診斷價值 傳統(tǒng)的肺炎支原體抗體檢測方法主要包括血清學(xué)方法和分離培養(yǎng)方法。血清學(xué)方法主要是利用抗原抗體反應(yīng)檢測患者血清中的肺炎支原體抗體，如酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、顆粒凝集法、凝集試驗等[6]。從文獻數(shù)量中可以看出，對于肺炎支原體抗體檢測方法的研究較多，尤其是針對酶聯(lián)免疫吸附法、間接免疫熒光法、膠體金法等方面的研究。這些方法雖然具有一定的準(zhǔn)確性，但存在操作繁瑣、耗時長、需要專業(yè)技術(shù)人員操作等缺點。分離培養(yǎng)法雖然可以直觀地檢測到肺炎支原體，但培養(yǎng)周期長，且需要特殊的培養(yǎng)基和實驗室條件，因此應(yīng)用受限。顆粒凝集法和凝集試驗在實際應(yīng)用中也比較廣泛，尤其在醫(yī)療條件不發(fā)達的地區(qū)這兩種方法的應(yīng)用更為廣泛。顆粒凝集法是一種快速檢測肺炎支原體抗體的方法。該方法通過將肺炎支原體與氧顆粒結(jié)合為致敏顆粒，與患者血清中的抗體反應(yīng)，觀察是否出現(xiàn)凝集現(xiàn)象來判斷是否存在肺炎支原體感染[7]。顆粒凝集法具有操作簡單、快速、特異性高等優(yōu)點，但靈敏度相對較低。凝集試驗是一種傳統(tǒng)的肺炎支原體抗體檢測方法，該方法通過將肺炎支原體抗原與患者血清中的抗體反應(yīng)，觀察是否出現(xiàn)凝集現(xiàn)象來判斷是否存在肺炎支原體感染。凝集試驗操作簡單、快速，但存在一定的人為誤差，且無法區(qū)分是自然感染還是接種疫苗后的免疫反應(yīng)[8]。

2.2 新技術(shù)的診斷價值

2.2.1 蛋白芯片和流式細(xì)胞術(shù)的診斷價值 近年來，隨著技術(shù)的進步，出現(xiàn)了新一代高通量技術(shù)，如蛋白芯片技術(shù)和流式細(xì)胞術(shù)。蛋白芯片技術(shù)的研究起步于2011年，有學(xué)者將蛋白芯片技術(shù)和膠體金法應(yīng)用于肺炎支原體抗體檢測中，并對兩者的診斷價值進行比較，研究表明，蛋白芯片技術(shù)檢測的敏感性和特異性均高于膠體金法[9]。相比之下，目前關(guān)于流式細(xì)胞術(shù)技術(shù)的研究不夠系統(tǒng)，更多的研究是將流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用于肺炎支原體患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測中[10]，而將其應(yīng)用于肺炎支原體抗體檢測中的研究較少，后續(xù)可以進一步研究。綜上，無論是蛋白芯片技術(shù)還是流式細(xì)胞術(shù)都使對肺炎支原體抗體進行全面和快速的檢測成為可能。肺炎支原體血清學(xué)抗體檢測方法對于疾病診斷和流行病學(xué)調(diào)查非常重要，然而，單獨的一次血清學(xué)檢測存在漏診的風(fēng)險。因此，如何改進檢測方法并提高準(zhǔn)確度是有必要進一步探究。

2.2.2 免疫印跡技術(shù)的診斷價值 免疫印跡技術(shù)是一種結(jié)合了蛋白質(zhì)印跡和免疫測定的技術(shù)，可以用于檢測樣品中特異性抗原的存在。該方法通過將抗原特異性抗體轉(zhuǎn)印至膜上，然后對膜進行顯色處理，從而檢測到特異性抗原的存在。近年來，研究人員將免疫印跡技術(shù)應(yīng)用于肺炎支原體抗體的檢測，并開發(fā)出了快速、靈敏的試劑盒，為臨床診斷提供了便利[11]。

2.2.3 基于納米材料的方法的診斷價值 納米材料具有獨特的物理化學(xué)性質(zhì)和大的體表面積，為生物分子的固定和檢測提供了良好的平臺。研究人員利用納米材料的特性，開發(fā)出了多種基于納米材料的檢測方法，如納米孔測序技術(shù)、納米線陣列等[12]?；诩{米材料的檢測方法具有高靈敏度、高特異性、快速等優(yōu)點，為臨床實踐肺炎支原體抗體的檢測中提供了新的思路。

2.2.4 微流控技術(shù)的診斷價值 微流控技術(shù)是一種將化學(xué)分析過程集成在微米級別的芯片上的技術(shù)。該技術(shù)可以實現(xiàn)樣品前處理、反應(yīng)和檢測的一體化操作，具有快速、高效、自動化等優(yōu)點。近年來，研究人員將微流控技術(shù)應(yīng)用于肺炎支原體抗體的檢測，并開發(fā)出了相應(yīng)的試劑盒和儀器設(shè)備，為臨床診斷提供了新的選擇[13]。

2.2.5 智能診斷系統(tǒng)的診斷價值 隨著人工智能和機器學(xué)習(xí)技術(shù)的發(fā)展，智能診斷系統(tǒng)開始在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮重要作用?；跈C器學(xué)習(xí)的智能診斷系統(tǒng)，通過對大量數(shù)據(jù)的分析處理，提高抗體檢測的準(zhǔn)確性和效率。這些系統(tǒng)可以通過對不同特征的分析和處理，實現(xiàn)自動化和智能化的診斷，提高診斷準(zhǔn)確率。

2.2.6 生物傳感器的診斷價值 生物傳感器是一種將生物分子識別與信號轉(zhuǎn)換器結(jié)合的裝置，可實現(xiàn)待測物的快速、靈敏、準(zhǔn)確地檢測[14]。近年來，研究人員將生物傳感器應(yīng)用于肺炎支原體抗體的檢測，如納米材料傳感器、光學(xué)傳感器等。這些傳感器具有操作簡單、靈敏度高、特異性好等優(yōu)點，為肺炎支原體抗體的檢測提供了新的選擇。

3 血清標(biāo)志物的研究

研究人員不僅追蹤肺炎支原體感染的抗體水平變化，還加大了對其他血清標(biāo)志物的研究，如炎癥因子[如白細(xì)胞介素-6（IL-6）、白細(xì)胞介素-8（IL-8）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）]和升高的急性期反應(yīng)蛋白[如C-反應(yīng)蛋白（CRP）]，而這些標(biāo)志物可以作為輔助診斷指標(biāo)，提供更準(zhǔn)確的肺炎支原體感染評估結(jié)果。肺炎支原體血清學(xué)抗體檢測是診斷肺炎支原體感染的重要方法之一，血清標(biāo)志物是肺炎支原體血清學(xué)抗體檢測方法的關(guān)鍵指標(biāo)，血清標(biāo)志物的類型、靈敏度、特異性、動態(tài)變化等均對臨床診斷有著重要研究價值。

目前，肺炎支原體血清學(xué)抗體檢測主要檢測的是IgG和IgM兩種抗體。其中，肺炎支原體IgM抗體（MP-IgM）是肺炎支原體感染后產(chǎn)生的特異性抗體，一般在感染后1周左右即可檢測到，在3～4周后達到高峰，之后逐漸降低[15]。因此，在一定程度上，MP-IgM的檢測結(jié)果可以反映肺炎支原體感染的早期情況。因此，MP-IgM的動態(tài)變化可以反映肺炎支原體感染的病程和治療效果。然而，MP-IgM在感染早期可能存在假陰性的問題，這可能會影響重癥和（或）難治病例的早期干預(yù)。另外一種標(biāo)志物是肺炎支原體IgG抗體（MP-IgG），這種抗體在感染后4～8周達到高峰，并且可以持續(xù)很長時間[16]。MP-IgG的動態(tài)變化可以反映人體的免疫反應(yīng)情況，并且對于再感染的監(jiān)測有一定的意義。此外，MP-IgM和MP-IgG聯(lián)合檢測可以提高檢測的靈敏度，降低漏診的風(fēng)險。非特異性早期IgM與紅細(xì)胞I抗原反應(yīng)可產(chǎn)生冷凝集現(xiàn)象，但冷凝集試驗的診斷價值尚不明確。

4 肺炎支原體血清學(xué)抗體檢測差異性分析

疾病的病程、年齡和其他因素可能會對血清學(xué)抗體檢測的陽性率產(chǎn)生影響。一般來說，對于一些急性感染疾病，如流感或病毒性上呼吸道感染，血清學(xué)抗體檢測通常在感染后幾天至幾周內(nèi)會出現(xiàn)陽性反應(yīng)。而對于慢性感染疾病，如乙型肝炎或人類免疫缺陷病毒（HIV）感染，陽性反應(yīng)可能會持續(xù)較長時間。需要注意的是，血清學(xué)檢測的陽性率受到多種因素的影響，例如檢測方法、檢測時間、個體免疫反應(yīng)等。因此，對于疑似肺炎支原體感染的患者，應(yīng)根據(jù)臨床癥狀、體征和實驗室檢查等多方面的信息進行綜合判斷。同時，由于不同實驗室采用的檢測方法可能存在差異，因此血清學(xué)檢測的陽性率也可能存在一定的差異。

4.1 不同年齡下血清學(xué)抗體檢測陽性率分析 臨床上，肺炎支原體感染在年輕人中較為常見，而老年人由于免疫系統(tǒng)的退化，對肺炎支原體的抵抗力較弱，因此感染率相對較高；此外，兒童也是肺炎支原體感染的易感人群，特別是在幼兒園、學(xué)校等集體場所，由于人員密集、空氣流通不暢，更容易導(dǎo)致肺炎支原體的傳播[17]。在血清學(xué)抗體檢測方面，不同年齡段患者的陽性率也會有所不同。通常急性期IgG抗體陽性率較低，而恢復(fù)期IgG抗體陽性率較高。同時，血清學(xué)方法檢測肺炎支原體抗體是常用的診斷方法，包括檢測IgM和IgG兩種抗體。通過檢測可以了解患者是否感染了肺炎支原體，并通過對不同年齡段患者血清學(xué)抗體的檢測，可以更好地了解肺炎支原體的感染規(guī)律和流行病學(xué)特征。

4.2 不同性別下血清學(xué)抗體檢測陽性率分析 在肺炎支原體感染中，男性和女性的陽性檢出率存在一定的差異，研究顯示，女性的陽性檢出率高于男性，這可能與女性免疫系統(tǒng)的應(yīng)答和生物學(xué)差異有關(guān)[18]。女性的免疫系統(tǒng)對感染的反應(yīng)可能更為強烈，這可能導(dǎo)致女性產(chǎn)生更多的支原體特異性抗體。此外，女性激素水平的變化也可能影響免疫系統(tǒng)的功能，從而影響血清學(xué)檢測的陽性率。需要注意的是，這種差異可能會因個體差異、感染程度和檢測方法等因素而有所不同。因此，對于不同性別的患者，應(yīng)根據(jù)具體情況進行綜合分析和處理。

4.3 不同病程下血清學(xué)抗體檢測陽性率分析 在感染初期，由于免疫系統(tǒng)的應(yīng)答，血清中會產(chǎn)生大量的支原體IgM抗體，這些抗體會在體內(nèi)持續(xù)存在一段時間[19]。因此，在感染后的2周內(nèi)，血清學(xué)檢測的陽性率會相對較高。隨著感染的進展，免疫系統(tǒng)對支原體的應(yīng)答可能會發(fā)生變化，導(dǎo)致血清中支原體的特異性抗體滴度逐漸降低。因此，在感染后的2周至1個月內(nèi)，血清學(xué)檢測的陽性率可能會有所下降。然而，即使在感染后期，血清學(xué)檢測的陽性率仍維持在一定水平。這是因為免疫系統(tǒng)可能會產(chǎn)生長期的記憶免疫反應(yīng)，使得血清中仍然可以檢測到支原體的特異性抗體。

4.4 不同疾病下血清學(xué)抗體檢測陽性率分析 首先，肺炎支原體感染本身就會引起機體產(chǎn)生一系列的免疫反應(yīng)，包括特異性抗體的產(chǎn)生，這些抗體在血清中的含量會隨著感染的發(fā)展而發(fā)生變化[20]。因此，血清學(xué)抗體檢測可以作為一種診斷肺炎支原體感染的方法。然而，需要注意的是，血清學(xué)抗體檢測的陽性率并不能準(zhǔn)確診斷。在感染初期，免疫系統(tǒng)可能還沒有產(chǎn)生足夠的特異性抗體，導(dǎo)致血清學(xué)檢測的陽性率較低。此外，不同個體對感染的反應(yīng)也可能不同，有些患者可能產(chǎn)生較少的特異性抗體，也導(dǎo)致陽性率下降[21]。另外，其他疾病也可能引起血清學(xué)抗體檢測的陽性反應(yīng)。例如，流行性感冒、傳染性單核細(xì)胞增多癥、肝硬化、雷諾病等病癥也可能導(dǎo)致非特異性抗體的產(chǎn)生，從而影響血清學(xué)檢測的準(zhǔn)確性[22]。因此，在進行血清學(xué)檢測時，需要考慮患者的具體病情和其他可能的因素。

4.5 肺炎支原體血清學(xué)抗體檢測的局限性 臨床上，雖然使用血清學(xué)抗體檢測對于肺炎支原體感染有一定的診斷價值，但是其結(jié)果會受到多種因素的影響。例如，在肺炎支原體感染的初期，患者體內(nèi)還沒有產(chǎn)生足夠的抗體，此時進行血清學(xué)抗體檢測可能會出現(xiàn)假陰性結(jié)果。而且不同實驗室采用的檢測方法、試劑和標(biāo)準(zhǔn)可能存在差異，同樣會對陽性率產(chǎn)生影響[23]。此外，血清學(xué)抗體檢測的特異性也較差，可能會出現(xiàn)假陽性結(jié)果，這是因為肺炎支原體與其他微生物有一定的相似性，而血清學(xué)抗體檢測基于免疫反應(yīng)，可能會對其他微生物產(chǎn)生交叉反應(yīng)，導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性結(jié)果。因此，在進行肺炎支原體感染的血清學(xué)抗體檢測時，需結(jié)合患者的臨床癥狀、其他實驗室檢查結(jié)果以及流行病學(xué)資料等信息，進行綜合分析和判斷，以得出更加準(zhǔn)確和可靠的診斷結(jié)果[24]。同時，也需要不斷優(yōu)化和改進血清學(xué)抗體的檢測方法和標(biāo)準(zhǔn)，提高其特異性和準(zhǔn)確性。

5 肺炎支原體血清學(xué)抗體檢測的保障措施

①選擇可靠的試劑和品牌，選擇質(zhì)量好的品牌和廠家，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。②嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，按照試劑盒說明書上的操作規(guī)程進行操作，避免操作失誤導(dǎo)致的結(jié)果不準(zhǔn)確。③保證標(biāo)本質(zhì)量，采集患者的血清標(biāo)本時，要保證采集的標(biāo)本質(zhì)量，避免污染和溶血等現(xiàn)象。④合理安排檢測時間，在采集標(biāo)本后，要盡快進行檢測，避免長時間放置導(dǎo)致血清標(biāo)本變質(zhì)。⑤結(jié)合患者臨床表現(xiàn)和其他檢查結(jié)果，血清學(xué)檢測結(jié)果陽性并不能準(zhǔn)確判定患者感染了肺炎支原體，需要結(jié)合患者的臨床表現(xiàn)和其他檢查結(jié)果進行綜合分析和判斷。⑥注意試劑的儲存和使用，試劑應(yīng)該按照說明書上的要求進行儲存和使用，避免陽光直射和潮濕環(huán)境。⑦定期進行室內(nèi)質(zhì)量控制和室間比對試驗，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

6 小結(jié)與展望

隨著醫(yī)療技術(shù)的逐漸發(fā)展，在肺炎支原體血清學(xué)抗體檢測抗原的發(fā)現(xiàn)與使用方面，多個蛋白被當(dāng)作抗原進行分析，如P1蛋白、蛋白I、蛋白J等，研究人員不斷努力探索新的抗原將其應(yīng)用于免疫測定中，以提高對肺炎支原體感染的診斷準(zhǔn)確性和靈敏度，這些研究進展為肺炎支原體感染的早期診斷和有效治療提供了重要的理論和技術(shù)支持。血清學(xué)檢測技術(shù)包括多個類型，例如傳統(tǒng)的檢測技術(shù)、新型的檢測技術(shù)等，不同的檢測技術(shù)在血清學(xué)檢測肺炎支原體的陽性檢出率中有著不同的診斷價值，而且關(guān)于血清學(xué)檢測肺炎支原體抗體的技術(shù)在不斷的發(fā)掘中，技術(shù)越來越精準(zhǔn)。血清學(xué)檢測肺炎支原體抗體的標(biāo)志物也在不斷的研究過程中，各項標(biāo)志物有著不同的靈敏度和特異性，而且在不同病程、不同性別、不同疾病下各項血清學(xué)檢測技術(shù)有著不同的靈敏度和特異性。同時為了保障血清學(xué)檢測技術(shù)的順利實施需要做好相關(guān)的保障措施，實現(xiàn)疾病的早發(fā)現(xiàn)早治療，減輕患者的痛苦和經(jīng)濟負(fù)擔(dān)。

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