張 敏，鐘 瑩，石大剛，海金華，扎西澤仁，袁覺康，張潤慧*，葉忠明*

（1.甘孜藏族自治州畜牧業(yè)科學(xué)研究所，四川 康定 626000；2.西南民族大學(xué) 畜牧獸醫(yī)學(xué)院，四川 成都 610000；3.理塘縣農(nóng)牧農(nóng)村和科技局，四川 理塘 624300；4.得榮縣農(nóng)牧農(nóng)村和科技局，四川 得榮 627950；5.石渠縣農(nóng)牧農(nóng)村和科技局，四川 石渠 627350；6.稻城縣噶通鎮(zhèn)便民服務(wù)中心，四川 稻城 627750）

反芻動(dòng)物感染消化道寄生蟲易引起貧血、腹瀉等消化道炎癥，導(dǎo)致動(dòng)物生長發(fā)育受阻、飼料利用率下降，甚至死亡[1]。消化道寄生蟲感染在我國養(yǎng)羊業(yè)較常見，2021年我國羊腸道寄生蟲調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，羊寄生蟲感染常見于我國中部地區(qū)（93.6%）和東北部地區(qū)（94.8%），西南地區(qū)和西北地區(qū)感染率分別為79.6%和75.5%[2]。藏羊是青藏高原地區(qū)主要特色畜種之一，依賴天然草場放牧飼養(yǎng)，易受寄生蟲病的侵害。常艷凱[3]研究發(fā)現(xiàn)，西藏地區(qū)藏羊共檢測出8類寄生蟲，其感染率為89.2%（785/880），其中綿羊和山羊總感染率差異不大。王有為等[4]在2019年關(guān)于青海海南州5個(gè)縣的藏羊腸道寄生蟲感染的調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，藏羊寄生蟲感染率高達(dá)87%，主要優(yōu)勢蟲種為線蟲和球蟲。

甘孜州是四川省西北部的生態(tài)示范區(qū)和國家生態(tài)屏障區(qū)，是藏山羊和藏綿羊的主要產(chǎn)區(qū)之一。目前關(guān)于該地區(qū)藏羊寄生蟲流行病學(xué)的研究處于空白狀態(tài)。本研究對四川甘孜州牧區(qū)藏羊的寄生蟲病感染情況進(jìn)行調(diào)查，旨在摸清該地區(qū)藏羊腸道寄生蟲感染率，分析其與年齡、季節(jié)等因素的關(guān)系，掌握和豐富該地區(qū)藏綿羊、藏山羊消化道寄生蟲病的流行病學(xué)資料，為該病的綜合防治提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 樣本來源及采集 2021年12月至2022年12月在甘孜州理塘、得榮、石渠、瀘定、鄉(xiāng)城和稻城等6個(gè)縣選擇9個(gè)月未使用任何寄生蟲藥物的268只藏羊（綿羊170只、山羊98只），包括1歲及以上的成年羊（215只）和1歲以下的羔羊（53只）。清晨或夜間用直接采樣法隨機(jī)收集新鮮羊糞便樣本，每份30～50 g，并記錄采樣地點(diǎn)、海拔高度等信息（表1），再將采集樣品冷藏保存于潔凈自封袋中，運(yùn)送到西南民族大學(xué)寄生蟲實(shí)驗(yàn)室檢測。

表1 采樣地坐標(biāo)及海拔信息

1.1.2 主要試劑和儀器 飽和食鹽水，移液槍（LICHEN）、方形稱量盤（BKMAN）、顯微鏡（Olympus CX21）、飽和攪拌儀（DLAB MS-H280-Pro）、60目過濾篩、攪拌棍、壓舌板、離心機(jī)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 檢測方法 飽和食鹽水漂浮法：將新鮮糞便樣本取2～3 g置于稱量盤中，加入8 mL飽和食鹽水?dāng)嚢杈鶆?，至糞便混勻液中完全沒有大顆粒物質(zhì)后，用60目網(wǎng)篩過濾至15 mL離心管中，靜置15 min，取5 μL上清液均勻涂片后，放置在100倍、400倍顯微鏡下觀察。

水洗沉淀集卵法：取新鮮糞便樣本3～4 g置于稱量盤中，加入20 mL的蒸餾水?dāng)嚢杈鶆?，?0目網(wǎng)篩過濾至50 mL離心管中，再用30 mL蒸餾水沖洗篩子，沖洗液加入50 mL離心管中，靜置沉淀25 min，倒去上層液，保留沉渣，再加水混勻，重復(fù)沉淀直到上清液清亮為止，棄去上清液，用巴氏吸管取少許沉淀均勻涂抹在載玻片上，在100倍顯微鏡下蛇形觀察。

1.2.2 蟲種鑒定 根據(jù)顯微鏡下觀察到的寄生蟲蟲卵與卵囊的大小、顏色、形態(tài)結(jié)構(gòu)，按照文獻(xiàn)[5]對寄生蟲種類進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定。

1.2.3 寄生蟲蟲卵感染強(qiáng)度檢測 采用涂片計(jì)數(shù)法和麥克馬斯特計(jì)數(shù)法檢測感染強(qiáng)度。涂片計(jì)數(shù)法：將樣本按上述方法處理后在100倍顯微鏡下蛇形觀察。一個(gè)載玻片視野內(nèi)蟲卵數(shù)＜5，記為+；5＜蟲卵數(shù)＜10，記為++；蟲卵數(shù)≥10，記為+++。

麥克馬斯特計(jì)數(shù)法：取2 g新鮮糞便置于稱量盤內(nèi)，先加入8 mL飽和食鹽溶液，用玻璃棒搗碎混勻，再加入50 mL飽和食鹽溶液，混勻后立即用紗布或60目篩網(wǎng)過濾，然后立即吸取濾液加入麥?zhǔn)嫌?jì)數(shù)板，充滿2個(gè)計(jì)數(shù)室，在顯微鏡載物臺上靜置3～5 min后，100倍鏡下鏡檢計(jì)數(shù)。參照公式計(jì)算寄生蟲感染強(qiáng)度，即每克糞便蟲卵數(shù)（EPG）和每克糞便卵囊數(shù)（OPG）。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 使用Graphpad PRISM和IBM SPSS Statistics 27軟件對得到的藏羊消化道寄生蟲感染率采用卡方（X2）檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較，感染強(qiáng)度以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。P＜0.01表示差異極顯著，P＜0.05表示差異顯著，P＞0.05表示差異不顯著。

2 結(jié)果

2.1 寄生蟲感染情況

分別對藏綿羊、藏山羊樣本進(jìn)行寄生蟲實(shí)驗(yàn)室檢測，結(jié)果表明，藏羊消化道寄生蟲的總感染率為71.27%（191/268），其中藏綿羊感染率為62.35%（106/170），藏山羊感染率為86.73%（85/98）。共檢測出4類消化道寄生蟲，分別為艾美耳球蟲、線蟲、吸蟲和絳蟲（圖1）。感染藏綿羊的主要優(yōu)勢蟲種是艾美耳球蟲，感染率為49.41%（84/170）（表2）；感染藏山羊的主要優(yōu)勢蟲種是線蟲，感染率為78.57%（77/98）。藏綿羊的肝片吸蟲、前后盤吸蟲及莫尼茨絳蟲的感染率分別為12.94%、15.88%和1.18%；藏山羊的前后盤吸蟲和莫尼茨絳蟲的感染率分別為14.29%、1.18%，肝片吸蟲在藏山羊上未發(fā)現(xiàn)有感染。結(jié)果表明，藏山羊的線蟲感染（P＜0.01，X2=51.78，1）和肝片吸蟲感染（P＜0.01，X2=13.82，1）極顯著高于藏綿羊。

圖1 顯微鏡下寄生蟲檢測結(jié)果

表2 藏羊寄生蟲感染情況

2.2 寄生蟲混合感染情況

檢測發(fā)現(xiàn)，線蟲和球蟲混合感染的情況最為常見。甘孜州藏羊的消化道寄生蟲混合感染率為59.90%（115/192）。其中雙重感染感染率最高，為45.31%（87/192）；其次是單個(gè)寄生蟲，感染率為40.10%（77/192）；混合感染3種寄生蟲的感染率為10.42%（20/192）；混合感染4種以上寄生蟲的感染率為4.17%（8/192），詳見圖2。

圖2 藏羊寄生蟲混合感染情況

2.3 不同季節(jié)下藏羊寄生蟲感染情況

圓線蟲是常見的消化道寄生蟲（X2=53.824，P＜0.01），春季感染率達(dá)到100%（CI：79.61～100.00）、夏季為45.45%（CI：37.20～53.95）、冬季為82.00%（CI：69.20～90.23）。艾美耳球蟲春季感染率（33.33%，CI：15.17～58.28）與前后盤吸蟲一致，僅次于線蟲；在秋季，感染藏系羊的消化道寄生蟲蟲種最多，分別有線蟲（圓線蟲科、蛔蟲）、原蟲（艾美耳球蟲）、吸蟲（肝片吸蟲及前后盤吸蟲）。艾美耳球蟲為感染藏系羊的優(yōu)勢蟲種（60.50%，CI：48.94～71.11），其次為肝片吸蟲和前后盤吸蟲（30.99%，CI：21.44～42.48），線蟲的秋季感染率僅為25.35%（CI：16.68～36.55），蛔蟲最低（12.68%，CI：6.82～22.37）；肝片吸蟲僅在秋季檢測到蟲卵（30.99%，CI：21.44～42.48），與前后盤吸蟲的結(jié)果一致。冬季藏系羊感染的消化道寄生蟲蟲種最少，共3種，分別為圓線蟲科、艾美耳球蟲和前后盤吸蟲。其他蟲種感染情況見表3。

表3 不同季節(jié)下藏羊寄生蟲流行情況

2.4 不同海拔下藏羊寄生蟲感染情況

將所有樣本的采集地分為3個(gè)海拔區(qū)間，分別為＜2 500 m、2 500～3 500 m、＞3 500 m。檢測發(fā)現(xiàn)（表4），＞3 500 m的藏羊感染寄生蟲種類最多，包括圓線蟲（OR：52.16，CI：33.00～48.22）、蛔蟲（OR：5.84，CI：3.98～12.18）、艾美耳球蟲（OR：110.68，CI：51.13～66.39）、肝片吸蟲（OR：12.64，CI：9.50～20.43）、前后盤吸蟲（OR：14.69，CI：11.10～22.59）及莫尼茨絳蟲（OR：1，CI：0.23～4.55），其中球蟲為優(yōu)勢蟲種，感染率為58.97%（92/156），其次是圓線蟲，感染率為40.39%（63/156）。從OR值和置信區(qū)間可以看出，＞3 500 m除莫尼茨絳蟲外，其他蟲種均是感染藏羊的風(fēng)險(xiǎn)因素。海拔2 500～3 000 m，感染寄生蟲的種類比＞3 500 m少，前后盤吸蟲（14.29%，OR：6.83，CI：6.72～27.84）感染率較低，但是球蟲（57.14%，OR：54.67，CI：45.21～70.88）、圓線蟲（65.05%，OR：91.46，CI：53.97～80.93）感染率較高；＜2 500 m的藏系羊以感染圓線蟲最為常見（82.00%，OR：350.78，CI：69.20～90.23），與艾美耳球蟲（24.00%，OR：15.47，CI：14.30～37.41）、前后盤吸蟲（22.00%，OR：21.72，CI：12.75～35.24）同為感染藏系羊消化道寄生蟲的風(fēng)險(xiǎn)因素。

表4 不同海拔下藏羊寄生蟲流行情況

2.5 不同年齡的藏羊寄生蟲感染情況

根據(jù)年齡差異，將樣本分為1歲以上和1歲以下。如圖3所示，在藏綿羊中，羔羊感染球蟲（58.97%）、線蟲（46.15%）、前后盤吸蟲（17.95%）、肝片吸蟲（23.08%）、莫尼茨絳蟲（5.13%）及蛔蟲（15.38%）均高于成年羊。藏山羊除了蛔蟲外，羔羊的感染率也均高于成年羊，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

圖3 寄生蟲感染不同年齡段藏系羊比對圖

2.6 寄生蟲感染強(qiáng)度情況

本次研究只做了所有地區(qū)的球蟲與部分地區(qū)線蟲的計(jì)數(shù)，結(jié)果顯示（表5、表6），藏羊消化道蟲種以輕度感染為主，中度感染和重度感染的比率均較低?；紫x的輕度感染率為100%，肝片吸蟲的輕度感染率為90.00%，艾美耳球蟲的輕度感染率為89.06%，其他蟲種也都在75.00%以上。理塘的球蟲感染最嚴(yán)重，感染OPG值是瀘定球蟲感染OPG的1倍以上；球蟲感染最輕的為稻城。對于線蟲，感染最嚴(yán)重的地區(qū)是鄉(xiāng)城，其次是稻城，石渠感染最輕。

表5 不同地區(qū)的藏羊球蟲OPG與線蟲EPG感染強(qiáng)度

表6 不同寄生蟲的感染強(qiáng)度

3 討論與結(jié)論

本研究結(jié)果表明甘孜州藏羊寄生蟲感染率較高，且多為混合感染。感染藏羊的優(yōu)勢蟲種是線蟲和球蟲，與鄭雙健等[6]和劉生財(cái)[7]對藏羊消化道寄生蟲感染情況的檢測結(jié)果一致。線蟲在藏山羊的消化道寄生蟲感染中為優(yōu)勢蟲種，藏山羊線蟲感染率極顯著高于藏綿羊（P＜0.01）。感染藏綿羊的優(yōu)勢蟲種是艾美耳球蟲，感染率為49.41%（84/170），相較李棟梁等[8]對我國部分地區(qū)羊球蟲感染調(diào)查結(jié)果（73.73%）偏低。對比本研究藏羊球蟲感染結(jié)果，羊云飛等[9]針對四川紅原地區(qū)藏羊球蟲的檢測結(jié)果（66.67%）較低。調(diào)查結(jié)果可能由調(diào)查樣本數(shù)量、地區(qū)差異等不同因素造成。此外，本次研究顯示藏綿羊的肝片吸蟲感染率極顯著高于藏山羊（P＜0.01)，其原因可能是采樣的季節(jié)不同、藏綿羊與藏山羊的進(jìn)食習(xí)慣和生理結(jié)構(gòu)存在差異[10]。綿羊以食草為主，而山羊更多以灌木或樹木為食，因此綿羊易接觸到吸蟲的中間宿主淡水螺類，比山羊更易感染肝片吸蟲。

從季節(jié)來看，線蟲一年四季都能不同程度地感染藏羊。以往研究表明蠕蟲感染與季節(jié)存在一定聯(lián)系。本研究結(jié)果表明，甘孜州藏羊春季、夏季及冬季是感染線蟲的高峰期。春季圓線蟲感染率高達(dá)100%。球蟲感染在秋季最高（60.56%），冬季達(dá)到最低（24.00%）；李棟梁等[8]調(diào)查發(fā)現(xiàn)，羊球蟲感染率的季節(jié)動(dòng)態(tài)變化差異小，與本研究結(jié)果不一致。出現(xiàn)該情況可能是因?yàn)楦咴瓪夂颡?dú)特，冬季氣溫低且氣候干燥，不利于球蟲蟲卵生存。肝片吸蟲在春夏未檢測出蟲卵，只在秋季感染藏羊，且多數(shù)與前后盤吸蟲混合感染。肝片吸蟲和前后盤吸蟲的流行特點(diǎn)基本相似，主要發(fā)生在秋季，特別是多雨年份和多雨季節(jié)。春季得榮的總降水量僅有3.4 mm，而秋季理塘樣本當(dāng)時(shí)的降水量達(dá)到22 mm，可能是導(dǎo)致春季肝片吸蟲未檢測出的原因。

對不同海拔樣本進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，球蟲是海拔＞3 500 m的藏羊感染的優(yōu)勢蟲種。以往的調(diào)查多針對寄生蟲季節(jié)差異情況進(jìn)行分析，而對于不同海拔地區(qū)藏羊寄生蟲調(diào)查較少。僅張春霞[11]2021年對青海省藏羊腸道線蟲進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)寄生蟲感染與海拔有關(guān)，不同海拔高度線蟲感染強(qiáng)度不同。高寒草原海拔越高，晝夜溫差越大，不利于線蟲幼蟲感染階段的發(fā)育。因此，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)圓線蟲感染率隨海拔的升高有所下降，且差異顯著。海拔＞3 500 m的藏羊感染寄生蟲的種類最多，其中圓線蟲、蛔蟲、艾美耳球蟲、肝片吸蟲及前后盤吸蟲均為感染當(dāng)?shù)夭匮虻娘L(fēng)險(xiǎn)因素。在海拔2 500～3 500 m之間，艾美耳球蟲、圓線蟲及前后盤吸蟲為感染藏系羊的風(fēng)險(xiǎn)因素。

藏綿羊的年齡對比結(jié)果中可以看出，羔羊比成年羊的感染率略高，但差異不顯著。羔羊的抵抗力比成年羊低，更容易被寄生蟲感染，再加上成年羊是帶蟲者，羔羊與成年羊同期放牧也是造成羔羊感染率高的原因。每年羔羊還會經(jīng)歷胃腸炎潮，更降低了抵抗力，導(dǎo)致羔羊感染率高且容易死亡。

從感染強(qiáng)度來看，甘孜州鄉(xiāng)城縣的線蟲感染強(qiáng)度最高，平均EPG為725±698.47，孔繁瑤[12]等認(rèn)為羊糞中線蟲EPG＞1 000則表現(xiàn)為致病，本次調(diào)查結(jié)果提示，甘孜州藏羊線蟲感染程度雖然不嚴(yán)重，但應(yīng)引起重視。羊球蟲病是由羊球蟲入侵破壞宿主腸道上皮細(xì)胞的一類原蟲病，最常見的感染癥狀為腹瀉、體重增長緩慢等，嚴(yán)重則導(dǎo)致死亡[13]，成年羊通常為帶蟲者，無明顯臨床癥狀，但對羔羊危害較大。理塘的艾美耳球蟲感染強(qiáng)度最高，平均OPG為4 925±4 911.47，提示該地區(qū)應(yīng)對艾美耳球蟲病加強(qiáng)防治。

甘孜州理塘、得榮、瀘定、鄉(xiāng)城、稻城及石渠6個(gè)縣的藏羊消化道寄生蟲感染情況普遍存在，其中線蟲和球蟲感染尤為突出。作為青藏高原地區(qū)的重要經(jīng)濟(jì)畜種，應(yīng)加強(qiáng)對藏羊消化道寄生蟲的防治工作。