黃穎雪 繆麗蘭 田明明 吳繼春

基金項(xiàng)目：

黔科合基礎(chǔ)［2019］1023號(hào)。

作者簡(jiǎn)介：

黃穎雪（1997—），女，漢族，碩士研究生在讀，研究方向?yàn)橹兴幓瘜W(xué)。E-mail： 1412040400@qq.com

通信作者：

吳繼春（1982—），男，漢族，博士，副教授，研究方向?yàn)槊缢幬镔|(zhì)基礎(chǔ)。E-mail：493808408@qq.com

【摘? 要】

目的：分離鑒定積雪草的化學(xué)成分。方法：采用溶劑提取和硅膠柱層析分離化合物，通過(guò)核磁共振波譜數(shù)據(jù)鑒定結(jié)構(gòu)。結(jié)果：從中分離得到7個(gè)化合物，分別鑒定為3-Hydroxy-8-acetoxy-pentadecadien-（1，9）-diin-（4，6）（1）、β-谷甾醇（2）、1，3-dihydroxylpropyl-（9Z，12Z）-octadeca-9，12-dienate （3）、咖啡酸甲酯（4）、araliadiol （5）、山柰酚（6）、槲皮素（7）。結(jié)論：化合物1、3、4為首次從積雪草中分離得到。

【關(guān)鍵詞】

積雪草；聚炔；化學(xué)成分

【中圖分類號(hào)】R284.1??? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2023）22-0035-03

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2023.22.zgmzmjyyzz202322009

Isolation and Identification of Constituents from the Fresh Plant of Centella asiatica

HUANG Yingxue? MIAO Lilan? TIAN Mingming? WU Jichun*

Guizhou University of Traditional Chinese Medicine，? Guiyang 550025， China

Abstract：

Objective To isolate and identify the Constituents from the fresh plant of Centella asiatica. Methods The compounds were separated by solvent extraction and silica gel column chromatography， and their structures were identified by NMR data. Results Seven compounds were isolated and identified as 3-Hydroxy-8-acetoxy-pentadecadien-（1，9）-diin-（4，6）（1）， β-sitosterol （2）， 1，3-dihydroxylpropyl-（9Z，12Z）-octadeca-9，12-dienate （3）， methyl caffeic acid （4）， araliadiol （5）， kaempferol （6） and quercetin （7）. Conclusion Compounds 1， 3 and 4 were isolated from this plant for the first time.

Keywords：

Centella asiatica; Polyynes; Chemical Composition

積雪草Centella asiatica （L.） Urb.為傘形科積雪草屬多年生匍匐草本植物，廣泛分布于長(zhǎng)江流域以南各地。積雪草用藥歷史悠久，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有清熱利濕、解毒消腫的功效，主要用于治療濕熱黃疸、中暑腹瀉、石淋熱淋、癰腫瘡毒、跌撲損傷等病癥［1-2］。同時(shí)，鮮積雪草還是一種使用廣泛的鮮藥，內(nèi)服或外用治療流行性腮腺炎、傳染性肝炎、帶狀皰疹等［3］。目前，已從該植物中發(fā)現(xiàn)三萜及其苷類、多炔類、揮發(fā)油、黃酮類、生物堿等化學(xué)成分［4］。藥理研究［5］表明，積雪草提取物具有抗腫瘤、抗纖維化、抗炎、抗阿爾茲海默癥、改善學(xué)習(xí)記憶能力、抗抑郁、抑制瘢痕增生和修復(fù)皮膚損傷等作用，積雪草苷被認(rèn)為是發(fā)揮相關(guān)功效的主要活性成分。此外，積雪草總黃酮還具有促進(jìn)組織愈合、止血、止痛等活性［6］。對(duì)鮮積雪草化學(xué)成分的研究未見(jiàn)報(bào)道。研究表明，鮮藥與干藥中的化合物種類和含量可能存在差異，藥理作用也有區(qū)別［7］。據(jù)此，本實(shí)驗(yàn)對(duì)鮮積雪草全草95%乙醇提取物的化學(xué)成分進(jìn)行分離鑒定，得到7個(gè)化合物，其中3個(gè)化合物為首次從積雪草中分離得到。報(bào)道如下。

1? 儀器與材料

1.1? 儀器? Bruker Avance Neo-400 MHz核磁共振波譜儀（TMS為內(nèi)標(biāo)，德國(guó)Bruker公司）；Buchi旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi公司）；WFH-308B型三色紫外分析儀（上海精科實(shí)業(yè)有限公司）；超聲儀（上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司）；數(shù)顯熱風(fēng)槍（德力西電氣）。

1.2? 材料? 柱層析硅膠（200～300目、300～400目，青島海洋化工有限公司）；Sephadex LH-20葡聚糖凝膠（美國(guó)GE公司）；GF254薄層硅膠板（青島海洋化工有限公司）。其它試劑均為分析純。實(shí)驗(yàn)藥材于2019年11月采自貴州省貴陽(yáng)市花溪大學(xué)城，由貴州中醫(yī)藥大學(xué)江洪副教授鑒定為傘形科植物積雪草Centella asiatica （L.） Urb.的新鮮全草。

2? 提取與分離

鮮積雪草全草100 kg，洗凈切碎，95%乙醇（200 L）浸泡提取4次，提取液減壓濃縮得浸膏3.0 kg?？偨嗷鞈矣?0 L水中，分別用等體積石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。石油醚萃取部分（640 g）經(jīng)硅膠柱層析分離，石油醚∶乙酸乙酯（100∶0→0∶100）梯度洗脫，得到5個(gè)流分Fr.A～Fr.E。Fr.B經(jīng)硅膠柱層析分離，石油醚∶乙酸乙酯（10∶1）洗脫，得到Fr.B-1～Fr.B-2兩個(gè)流分。Fr.B-1經(jīng)硅膠柱層析（石油醚∶乙酸乙酯=5∶1洗脫）、Sephadex LH-20柱層析（二氯甲烷∶甲醇=1∶1洗脫）得到化合物1（150 mg）。Fr.C重結(jié)晶（乙酸乙酯）得化合物2（15 g）；母液經(jīng)硅膠柱層析（石油醚∶乙酸乙酯=5∶1洗脫）、Sephadex LH-20柱層析（二氯甲烷∶甲醇=1∶1洗脫）得到化合物3（20 mg）。乙酸乙酯萃取部分（100 g）通過(guò)硅膠柱層析，二氯甲烷∶甲醇（100∶0→0∶100）梯度洗脫，得到4個(gè)流分Fr.F～Fr.I。Fr.G采用硅膠柱層析（二氯甲烷∶甲醇=50∶1洗脫）、Sephadex LH-20柱層析（二氯甲烷∶甲醇=1∶1洗脫），最后重結(jié)晶（甲醇）得到化合物4（15 mg）。Fr.H采用硅膠柱層析（石油醚∶乙酸乙酯=1∶1洗脫）、Sephadex LH-20柱層析（二氯甲烷∶甲醇=1∶1洗脫），得到化合物5（10 mg）。Fr.I采用硅膠柱層析（石油醚∶乙酸乙酯=1∶1洗脫）分為Fr.I-1～Fr.I-3。Fr.I-1和Fr.I-3的沉淀分別用乙醇反復(fù)洗滌、離心得到化合物6（8.0 g）、7（10 g）。

3? 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：淡黃色油狀，易溶于石油醚、二氯甲烷，分子式為C17H22O3。1H NMR （400 MHz， CDCl3） δ： 5.95 （1H， dd， J=8.6， 4.3 Hz， H-8）， 5.70 （1H， m， H-2）， 5.48 （1H， dq， J=15.6， 7.5， 5.3 Hz， H-10）， 5.26 （1H ddd， J=22.3， 13.3， 5.6 Hz， H-9）， 5.01 （1H dd， J=10.5， 5.2 Hz， H-1）， 4.72 （1H， t， J=5.0 Hz， H-3）， 1.98 （2H， dd， J=10.0， 4.8 Hz， H-11）， 1.88 （3H， s， H-17）， 1.21 （2H， t， J=7.1 Hz， H-12）， 1.12 （4H， m， H-13， 14）， 0.72 （3H， dt， J=10.7， 5.0 Hz， H-15）; 13C NMR （100 MHz， CDCl3） δ： 169.7 （C-16）， 136.2 （C-10）， 135.8 （C-2）， 123.7 （C-9）， 116.8 （C-1）， 79.0 （C-4）， 75.9 （C-7）， 69.4 （C-5）， 69.4 （C-6）， 62.9 （C-3）， 60.1 （C-8）， 31.2 （C-13）， 28.6 （C-12）， 27.6 （C-11）， 22.3 （C-14）， 20.7 （C-17）， 13.9 （C-15）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］中的化合物8-acetoxyfalcarinol相似，但是對(duì)比1H NMR和13C NMR譜發(fā)現(xiàn)，化合物1比化合物8-acetoxyfalcarinol少了兩個(gè)亞甲基。通過(guò)CAS SciFinder數(shù)據(jù)庫(kù)檢索發(fā)現(xiàn)，化合物1與文獻(xiàn)［9］中的化合物Ⅲ數(shù)據(jù)一致，故鑒定化合物1為3-Hydroxy-8-acetoxy-pentadecadien-（1，9）-diin-（4，6）。

化合物2：白色針狀結(jié)晶，易溶于二氯甲烷、乙酸乙酯等溶劑，分子式為C29H50O。1H NMR （400 MHz， CDCl3） δ： 5.30 （1H， m， H-6）， 0.97 （3H， s， H-19）， 0.88 （3H， d， J=6.6 Hz， H-21）， 0.81 （3H， m， H-27）， 0.78 （3H， d， J=1.7 Hz， H-26）， 0.75 （3H， d， J=6.9 Hz， H-29）， 0.65 （3H， d， J=7.4 Hz， H-18）; 13C NMR （100 MHz， CDCl3） δ： 140.7 （C-5）， 121.4 （C-6）， 71.5 （C-3）， 56.7 （C-14）， 55.9 （C-17）， 50.0 （C-9）， 45.7 （C-24）， 42.2 （C-4）， 42.1 （C-13），? 39.6 （C-12）， 37.1 （C-1）， 36.4 （C-10）， 36.0 （C-20）， 33.8 （C-22）， 31.8 （C-8）， 31.7 （C-2）， 30.1 （C-7）， 29.0 （C-25）， 28.2 （C-16）， 25.9 （C-23）， 24.2 （C-15）， 22.9 （C-28）， 20.9 （C-11）， 19.7 （C-26）， 19.2 （C-19）， 18.9 （C-27）， 18.6 （C-21）， 11.9 （C-29）， 11.8 （C-18）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］一致，故鑒定化合物2為β-谷甾醇。

化合物3：棕黃色油狀，易溶于二氯甲烷、乙酸乙酯等溶劑，分子式為C21H38O4。1H NMR （400 MHz， CDCl3） δ： 5.39 （4H， m， H-9， 10， 12， 13）， 4.14 （3H， pd， J=11.7， 4.8 Hz， H-1′，2′，3′）， 2.34 （2H， t， J=7.5 Hz， -CH2-COO）， 0.88 （3H， t， J=4.1 Hz， H-18）; 13C NMR （100 MHz， CDCl3） δ： 173.8 （C-1）， 130.1 （C-10）， 129.9 （C-12）， 128.0 （C-13）， 127.8 （C-9）， 68.3 （C-2′）， 65.0 （C-1′，C-3′）， 34.0 （C-2）， 31.8 （C-6）， 31.4 （C-16）， 29.5 （C-7）， 29.3 （C-15）， 29.1 （C-4）， 29.0 （C-5）， 27.1 （C-8，C-14）， 25.6 （C-11）， 24.8 （C-3）， 22.5 （C-17）， 14.0 （C-18）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］一致，故鑒定化合物3為1，3-dihydroxylpropyl-（9Z，12Z）-octadeca-9，12-dienate。

化合物4：乳白色顆粒，溶于甲醇；分子式為C10H10O4。1H NMR （400 MHz， MeOD） δ： 7.58 （1H， d， J=15.9 Hz， H-7）， 7.16 （1H， d， J=1.9 Hz， H-2）， 7.05 （1H， dd， J=8.2， 2.0 Hz， H-6）， 6.80 （1H， d， J=8.1 Hz， H-5）， 6.30 （1H， d， J=15.9 Hz， H-8）， 3.87 （3H， s， -CH3）; 13C NMR （100 MHz， MeOD） δ： 170.9 （C-9）， 150.4 （C-3）， 149.3 （C-4）， 146.9 （C-8）， 127.7 （C-1）， 123.9 （C-6）， 116.4 （C-5）， 115.8 （C-2）， 111.6 （C-7）， 56.4 （C-10）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］一致，故鑒定化合物4為咖啡酸甲酯。

化合物5：黃色油狀，易溶于二氯甲烷、乙酸乙酯，分子式為C15H20O2。1H NMR （400 MHz， CDCl3） δ： 5.92 （1H， ddd， J=17.0， 10.1， 5.4 Hz， H-2）， 5.59 （1H， m， H-10）， 5.51 （1H， dd， J=8.3， 1.5 Hz， H-9）， 5.47 （1H， d， J=1.4 Hz， H-1）， 5.24 （1H， d， J=10.1 Hz， H-1）， 5.19 （1H， d， J=8.2 Hz， H-8）， 4.93 （1H， d， J=5.2 Hz， H-3）， 2.09 （2H， qd， J=7.3， 1.4 Hz， H-11）， 1.38 （2H， m， H-12）， 1.27 （4H， m， H-13， 14）， 0.87 （3H， t， J=6.8 Hz， H-15）; 13C NMR （100 MHz， CDCl3） δ： 135.6 （C-2）， 134.5 （C-10）， 127.5 （C-9）， 117.3 （C-1）， 79.74 （C-7）， 78.1 （C-4）， 70.2 （C-5）， 68.6 （C-6）， 63.3 （C-3）， 58.4 （C-8）， 31.3 （C-14）， 28.8 （C-12）， 27.5 （C-11）， 22.4 （C-13）， 13.9 （C-15）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］一致，故鑒定化合物5為araliadiol。

化合物6：黃色粉末，溶于甲醇；分子式為C15H10O6。1H NMR （400 MHz， MeOD） δ： 8.07 （2H， d， J=9.0 Hz， H-2′， 6′）， 6.89 （2H， d， J=8.9 Hz， H-3′， 5′）， 6.37 （1H， d， J=2.1 Hz， H-8）， 6.16 （1H， d， J=2.1 Hz， H-6）; 13C NMR （100 MHz， MeOD） δ： 177.2 （C-1）， 165.5 （C-7）， 162.4 （C-5）， 160.4 （C-4′）， 158.1 （C-9）， 147.9 （C-2）， 137.0 （C-3）， 130.6 （C-2′， C-6′）， 123.6 （C-1′）， 116.2 （C-3′， C-5′）， 104.5 （C-10）， 99.2 （C-6）， 94.4 （C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］一致，故鑒定化合物6為山柰酚。

化合物7：黃色粉末，溶于甲醇；分子式為C15H10O7。1H NMR （400 MHz， DMSO-d6） δ： 7.67 （1H， d， J=2.1 Hz， H-2′）， 7.54 （1H， dd， J=8.5， 2.2 Hz， H-6′）， 6.88 （d， J=8.5 Hz， H-5′）， 6.40 （1H， d， J=2.0 Hz， H-8）， 6.18 （1H， d， J=2.0 Hz， H-6）; 13C NMR （100 MHz， DMSO-d6） δ： 175.3 （C-4）， 163.4 （C-7）， 160.2 （C-5）， 155.6 （C-9）， 147.1 （C-2）， 146.2 （C-4′）， 144.5 （C-3′）， 135.2 （C-3）， 121.4 （C-1′）， 119.4 （C-6′）， 115.1 （C-5′）， 114.5 （C-2′）， 102.5 （C-10）， 97.6 （C-6）， 92.8 （C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］一致，故鑒定化合物7為槲皮素。

4? 討論

新鮮積雪草總浸膏采用硅膠、Sephadex LH-20凝膠柱層析等方法進(jìn)行分離純化，通過(guò)核磁共振波譜數(shù)據(jù)鑒定結(jié)構(gòu)，得到7個(gè)化合物，分別是3-Hydroxy-8-acetoxy-pentadecadien-（1，9）-diin-（4，6）（1）、β-谷甾醇（2）、1，3-dihydroxylpropyl-（9Z，12Z）-octadeca-9，12-dienate （3）、咖啡酸甲酯（4）、araliadiol （5）、山柰酚（6）、槲皮素（7）。其中化合物1、5是聚炔類化合物。聚炔具有抗微生物、抗腫瘤、異株克生等活性［16］。化合物1的活性研究未見(jiàn)報(bào)道，化合物5具有抑制人乳腺癌細(xì)胞（MCF-7）生長(zhǎng)［13］和保護(hù)神經(jīng)［17］等作用。雖然前人也從積雪草中得到多種聚炔成分，但是對(duì)這些成分的活性研究較少，有待深入?；衔?和7是黃酮類化合物，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)化合物在新鮮積雪草中含量較高。有文獻(xiàn)［18］報(bào)道積雪草中的山奈酚含量較低，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果矛盾。化合物6具有抗腫瘤、治療糖尿病和骨質(zhì)疏松、保護(hù)損傷細(xì)胞等作用［19］，化合物7具有抗糖尿病、抗高血壓、抗阿爾茨海默病、抗衰老及保護(hù)心血管等作用［20］。積雪草總黃酮在治療慢性肛裂的過(guò)程中能夠促進(jìn)組織聚合、止血、減少疼痛［6］，今后可以針對(duì)積雪草中的黃酮單體化合物展開(kāi)相關(guān)研究?；衔?、3、4為首次從積雪草中分離得到，同時(shí)化合物6的含量與前人報(bào)道矛盾，表明干鮮積雪草的化合物種類和含量可能均有差異。后續(xù)還需要系統(tǒng)分析產(chǎn)地、采收期、加工過(guò)程等因素對(duì)積雪草的化學(xué)成分和功效的影響，為合理開(kāi)發(fā)利用這一藥材提供依據(jù)。

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（收稿日期：2023-02-15? 編輯：劉? 斌）