羅亞男 李景煒 李若冰 梅志剛

1.三峽大學(xué)健康醫(yī)學(xué)院國(guó)家中醫(yī)藥管理局中藥藥理學(xué)三級(jí)實(shí)驗(yàn)室，湖北宜昌 443002；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合心腦疾病防治湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南長(zhǎng)沙 410208

腦缺血再灌注損傷（cerebral ischemia-reperfusion injury，CIRI）是缺血性腦卒中溶栓后的二次腦損傷，具有高致殘率、高病死率的特征，目前尚無(wú)統(tǒng)一的防治CIRI 方法[1-4]，深入揭示CIRI 發(fā)病機(jī)制并尋找其潛在的干預(yù)靶點(diǎn)仍是研究CIRI 的熱點(diǎn)。

微小RNA（microRNAs，miRNA）是一類(lèi)普遍存在的內(nèi)源性非編碼單鏈RNA，通過(guò)調(diào)控下游靶基因和蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)的表達(dá)參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡等生理過(guò)程[5-6]。隨著對(duì)miRNA 研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)其在CIRI 的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著不可或缺的作用。目前，該領(lǐng)域研究越來(lái)越廣泛，但相關(guān)文獻(xiàn)冗雜，尚無(wú)有關(guān)miRNA 在CIRI 的知識(shí)圖譜分析。

作為一款可視化文獻(xiàn)分析軟件，CiteSpace 能夠顯示一個(gè)知識(shí)域在一定時(shí)期發(fā)展的趨勢(shì)與動(dòng)向[7-9]。本研究運(yùn)用CiteSpace 分別對(duì)國(guó)內(nèi)外miRNA 在CIRI相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行可視化分析，梳理miRNA 在CIRI 的研究熱點(diǎn)及發(fā)展趨勢(shì)，以期為今后相關(guān)研究者提供參考和借鑒。

1 資料與方法

1.1 檢索策略

以中國(guó)知網(wǎng)（China national knowledge infrastructure，CKNI）和Web of Science（WoS）數(shù)據(jù)庫(kù)為本研究文獻(xiàn)來(lái)源；發(fā)表時(shí)間設(shè)定為建庫(kù)至2022年6 月30 日； 以“micro RNA”“mi RNA”“mi RNAs”“micro RNAs”“miR”“腦缺血再灌注損傷”“Cerebral Ischemia/Reperfusion Injury”和“Brain Ischemia-Reperfusion Injury”為檢索詞進(jìn)行檢索。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：公開(kāi)發(fā)表的與檢索主題詞相關(guān)的完整、真實(shí)可靠的研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：信息不全、不能獲得全文的文獻(xiàn)或重復(fù)文獻(xiàn)；會(huì)議論文、新聞報(bào)道、圖書(shū)等非期刊論文。

1.3 方法

使用CiteSpace 5.8.R3 軟件對(duì)納入的文獻(xiàn)進(jìn)行可視化分析并繪制圖譜。節(jié)點(diǎn)類(lèi)型（node types）包括作者（author）、機(jī)構(gòu)（institution）、關(guān)鍵詞（keyword）。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)檢索結(jié)果

CNKI 和WoS 初篩分別納入496 篇和492 篇中、英文文獻(xiàn)。刪除數(shù)據(jù)不完整、會(huì)議記錄和修訂等非期刊論文，最后納入165 篇中文文獻(xiàn)、433 篇英文文獻(xiàn)。

2.2 作者合作網(wǎng)絡(luò)分析

中文作者合作網(wǎng)絡(luò)圖譜共有211 個(gè)節(jié)點(diǎn)、321條連線，提示有211 位作者被納入分析，形成了以何灝龍、彭麗佳等為主的核心研究團(tuán)隊(duì)，團(tuán)隊(duì)間合作關(guān)系較為緊密；英文圖譜共有286 個(gè)節(jié)點(diǎn)、394條連線，提示有286 位作者被納入分析，形成了以LI ZHANG、HONG WANG 等為主的核心研究團(tuán)隊(duì)，這些核心團(tuán)隊(duì)內(nèi)部相互合作，見(jiàn)圖1。

圖1 中、英文作者合作網(wǎng)絡(luò)圖譜

2.3 機(jī)構(gòu)合作網(wǎng)絡(luò)分析

中文文獻(xiàn)機(jī)構(gòu)合作圖譜中共獲得126 家研究機(jī)構(gòu)，其中湖南中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院和昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院發(fā)文量最多，均為4 篇；英文文獻(xiàn)共包含181 家研究機(jī)構(gòu)，其中發(fā)文前3位的機(jī)構(gòu)均來(lái)自中國(guó)，分別為首都醫(yī)科大學(xué)（13篇）、重慶醫(yī)科大學(xué)（11 篇）和鄭州大學(xué)（10 篇）。見(jiàn)圖2。

圖2 中、英文文獻(xiàn)機(jī)構(gòu)合作圖譜

2.4 關(guān)鍵詞共現(xiàn)分析

中、英文關(guān)鍵詞共現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)分別由121 個(gè)節(jié)點(diǎn)、183 條連線和287 個(gè)節(jié)點(diǎn)、977 條連線組成。根據(jù)關(guān)鍵詞共現(xiàn)頻次篩選分析，該領(lǐng)域側(cè)重于miRNA 對(duì)CIRI 作用機(jī)制的探索，包括凋亡、氧化應(yīng)激、自噬、炎癥；干預(yù)手段以針刺、電針為主；基礎(chǔ)研究、綜述為主要文獻(xiàn)形式，見(jiàn)圖3。深入挖掘關(guān)鍵詞共現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)中出現(xiàn)的miRNA，有近百種（表1），提示這些miRNA 為CIRI 中的研究熱點(diǎn)。

表1 中、英文文獻(xiàn)出現(xiàn)頻次前5位的miRNA

圖3 中、英文文獻(xiàn)關(guān)鍵詞共現(xiàn)圖譜

2.5 關(guān)鍵詞聚類(lèi)分析

CNKI 和WoS 圖譜中聚類(lèi)模塊指數(shù)Q＞0.3、輪廓指數(shù)S＞0.7，說(shuō)明聚類(lèi)板塊是顯著的。中文文獻(xiàn)獲得凋亡（#0）、大鼠（#1）、針刺（#2）等6 個(gè)主要聚類(lèi)標(biāo)簽；英文文獻(xiàn)顯示down-regulating ddr1（#0）、injure-induced cell apoptosis（#1）等11 個(gè)主要聚類(lèi)標(biāo)簽，代表了miRNA 在CIRI 的主要研究方向，見(jiàn)圖4。

圖4 中、英文文獻(xiàn)關(guān)鍵詞聚類(lèi)圖譜

3 討論

隨著測(cè)序技術(shù)和生物信息學(xué)分析的發(fā)展，miRNA 在CIRI 中的作用逐漸受到眾多學(xué)者的廣泛關(guān)注，文獻(xiàn)年發(fā)文量持續(xù)增長(zhǎng)。近年來(lái)活躍在國(guó)內(nèi)期刊的學(xué)者何灝龍主要研究miRNA 在針刺改善CIRI 中的調(diào)控作用[10-11]，彭麗佳則主要研究miRNA 在CIRI 中的機(jī)制探討[12]。

關(guān)鍵詞可以反映當(dāng)前研究現(xiàn)狀及預(yù)測(cè)未來(lái)熱點(diǎn)趨勢(shì)[13]。綜合分析關(guān)鍵詞共現(xiàn)及聚類(lèi)圖譜，發(fā)現(xiàn)目前對(duì)miRNA 在CIRI 中的機(jī)制調(diào)控、干預(yù)方法、文獻(xiàn)類(lèi)型等方面均展開(kāi)了研究。該領(lǐng)域在機(jī)制探索上非常廣泛，miR-155、miR-29 等是國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中重點(diǎn)關(guān)注的miRNA。Shi 等[14]發(fā)現(xiàn)MiR-155-5p 通過(guò)調(diào)節(jié)NF-κB 和MAPKs 通路靶向DUSP14 加重CIRI。相關(guān)研究[15]發(fā)現(xiàn)外泌體內(nèi)miRNA 作為細(xì)胞間的交流信使，在CIRI中發(fā)揮著不同作用，Xu 等[16]發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元通過(guò)分泌含有miR-132 的外泌體作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞Eef2k 基因，增強(qiáng)血管完整性。因此，研究外泌體內(nèi)miRNA 的作用靶點(diǎn)、調(diào)控機(jī)制以及特異性分子標(biāo)志物可能會(huì)為CIRI 的診療帶來(lái)新的突破。調(diào)控miRNA 可作為CIRI 的潛在治療靶標(biāo)，根據(jù)它們?cè)贑IRI 發(fā)展中的不同作用，除了通過(guò)siRNA[17]、過(guò)表達(dá)[18]、shRNA[19]等多種技術(shù)手段，還可通過(guò)一些治療方法在體內(nèi)外模型上得到驗(yàn)證，如針刺[20]、電刺激[21]、左旋樟腦[22]、缺血預(yù)處理[23]等。Zhang等[24]發(fā)現(xiàn)電針通過(guò)外泌體miR-146b 促進(jìn)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞分化；Yao 等[25]發(fā)現(xiàn)人參皂甙可能通過(guò)miR-139-5p/FoxO1/Keap1/Nrf2 軸的抗焦亡作用改善CIRI?？梢?jiàn)，調(diào)控miRNA 的研究為當(dāng)前改善CIRI 提供了相關(guān)的靶點(diǎn)，但miRNA 在CIRI 中的作用還沒(méi)有詳細(xì)的報(bào)道，其在神經(jīng)元或腦組織相關(guān)信號(hào)通路中的協(xié)調(diào)或拮抗作用機(jī)制還需進(jìn)一步研究。在研究類(lèi)型上，國(guó)內(nèi)外均以基礎(chǔ)研究、綜述為主。基礎(chǔ)研究主要集中在MCAO/R 模型和OGD/R 細(xì)胞模型，其在臨床上的應(yīng)用仍需更高水平的臨床證據(jù)支持。

本研究使用CiteSpace 軟件對(duì)CIRI 相關(guān)文獻(xiàn)中的miRNA 進(jìn)行可視化分析，初步展示了該領(lǐng)域的研究現(xiàn)狀及發(fā)展動(dòng)態(tài)，但也存在一定的局限性。由于軟件閾值設(shè)置的主觀性，關(guān)鍵詞突現(xiàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可能存在一定片面性。隨著可視化軟件不斷完善，將進(jìn)一步深入挖掘，以便更加科學(xué)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)靥接憁iRNA 在CIRI 的研究熱點(diǎn)及趨勢(shì)。