蒙炳超 馬 萍 李照偉 何 毅 陸躍堂 柏 城 鄭敏萍

(1 黔南州養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展中心，貴州都勻 558000；2 貴州省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州貴陽(yáng) 550008；3 獨(dú)山縣養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展中心，貴州獨(dú)山 558200；4 貴州日泉農(nóng)牧有限公司，貴州獨(dú)山 558200；5 上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院，上海 201600）

豬偽狂犬病是由偽狂犬病病毒感染引起的一種以生殖系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)出現(xiàn)臨床癥狀的傳染病，主要危害妊娠母豬和仔豬，造成母豬流產(chǎn)、產(chǎn)木乃伊胎、產(chǎn)死胎、仔豬死亡率升高等，病毒可通過(guò)母體垂直傳播，也可通過(guò)犬、貓、鼠等儲(chǔ)存宿主傳播，還可通過(guò)被豬偽狂犬病病毒污染的工作人員服裝、器具及空氣等進(jìn)行傳播[1,2]。豬感染偽狂犬病病毒后沒(méi)有特效治療藥物，預(yù)防和控制豬偽狂犬病的有效方法是凈化豬群和疫苗免疫[3]。根據(jù)《動(dòng)物疫病凈化場(chǎng)評(píng)估管理指南》 《動(dòng)物疫病凈化場(chǎng)評(píng)估技術(shù)規(guī)范》的相關(guān)要求和標(biāo)準(zhǔn)[4]，應(yīng)采用偽狂犬病的疫苗免疫、監(jiān)測(cè)、規(guī)范飼養(yǎng)、生物安全管理的凈化技術(shù)，推動(dòng)種豬場(chǎng)通過(guò)省級(jí)以上動(dòng)物疫病凈化評(píng)估、實(shí)現(xiàn)豬偽狂犬病的免疫凈化目標(biāo)。貴州日泉農(nóng)牧有限公司（以下簡(jiǎn)稱“日泉公司”）泉興種豬場(chǎng)開(kāi)展了豬偽狂犬病免疫凈化探索。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

國(guó)產(chǎn)商品化豬偽狂犬病gE抗體（簡(jiǎn)稱“gE 抗體”）ELISA 檢測(cè)試劑盒和豬偽狂犬病gB 抗體（簡(jiǎn)稱“gB 抗體”）ELISA 檢測(cè)試劑盒。豬偽狂犬病疫苗采用勃林格殷格翰公司生產(chǎn)的豬偽狂犬病弱毒疫苗（Bartha-K61）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 建立保障措施

一是組織保障，成立由公司總經(jīng)理?yè)?dān)任組長(zhǎng)、場(chǎng)長(zhǎng)為副組長(zhǎng)、種豬場(chǎng)內(nèi)各部門負(fù)責(zé)人、實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人為成員的疫病凈化工作實(shí)施小組；二是技術(shù)保障，邀請(qǐng)當(dāng)?shù)貏?dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)專家、集團(tuán)公司養(yǎng)豬技術(shù)事業(yè)部專家及高校老師組成疫病凈化技術(shù)指導(dǎo)專家，全面負(fù)責(zé)動(dòng)物疫病凈化的技術(shù)指導(dǎo)工作；三是經(jīng)費(fèi)保障，將疫苗、動(dòng)物疫病檢測(cè)、消毒等經(jīng)費(fèi)列入養(yǎng)豬企業(yè)的年度經(jīng)費(fèi)預(yù)算。

1.2.2 完善生物安全和飼養(yǎng)管理

按照動(dòng)物疫病凈化評(píng)估要求，結(jié)合生物安全和飼養(yǎng)管理實(shí)際情況，邀請(qǐng)當(dāng)?shù)貏?dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)、集團(tuán)公司、大專院校的專家?guī)椭粩嗤晟粕锇踩惋曫B(yǎng)管理相關(guān)的制度、操作規(guī)程、消毒效果評(píng)估等，并督促、指導(dǎo)做好管理措施的落實(shí)。

1.2.3 建立gE 抗體陰性種豬群

⑴在引種前逐頭采集豬只血清檢測(cè)gE 抗體和gB 抗體，選擇gE 抗體陰性、gB 抗體陽(yáng)性豬作為引種豬只，引種豬只調(diào)入種豬場(chǎng)專用引種隔離舍隔離21 d，再做gE 抗體和gB 抗體檢測(cè)。如果引種目標(biāo)場(chǎng)未開(kāi)展豬偽狂犬病疫苗免疫，則gB 抗體和gE 抗體均為陰性豬作為引種目標(biāo)豬。通過(guò)引種建立gE 抗體陰性種豬群。

⑵逐頭采集免疫豬偽狂犬病疫苗21 d 后的后備豬血清，檢測(cè)gE 和gB 抗體，gE 抗體為陰性、gB 免疫抗體為陽(yáng)性的豬只，可從后備舍轉(zhuǎn)入種豬舍。gE 抗體陽(yáng)性豬只立即復(fù)檢，若復(fù)核結(jié)果仍為陽(yáng)性豬只，則立即淘汰。

1.2.4 種豬群凈化維持

⑴1年內(nèi)分區(qū)域、分批次對(duì)種豬群進(jìn)行1 次豬偽狂犬病gE抗體全覆蓋檢測(cè)，gE 抗體檢測(cè)陰性的豬群不能與未經(jīng)gE 抗體檢測(cè)的豬群交叉混養(yǎng)，如果檢出gE 抗體陽(yáng)性豬，則對(duì)陽(yáng)性豬進(jìn)行淘汰處理。

⑵全群檢測(cè)階段外的豬群，以不少于無(wú)疫公式（CL＝95%、P＝3%）的采樣數(shù)量，每季度采集1 次種公豬、基礎(chǔ)母豬及后備豬血清樣品進(jìn)行g(shù)E 抗體檢測(cè)，檢測(cè)出gE 抗體陽(yáng)性豬則立即淘汰[4,5]。

⑶以不少于預(yù)估期望值公式（CL＝95%、P＝90、e＝10%），每季度采集1 次種公豬、基礎(chǔ)母豬、后備豬血清進(jìn)行g(shù)B 抗體檢測(cè)，評(píng)估豬偽狂犬病群體免疫效果。檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)群體免疫抗體合格率＜90%時(shí)，進(jìn)行全群補(bǔ)免，補(bǔ)免后再次采集血清樣品進(jìn)行檢測(cè)[4]。

⑷貴州省黔南州和獨(dú)山縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)按照《動(dòng)物疫病凈化評(píng)估技術(shù)規(guī)范》相關(guān)要求，每年對(duì)種豬場(chǎng)至少開(kāi)展2 次監(jiān)督檢驗(yàn)，采樣覆蓋不同豬群，每次采樣不少于30 頭份，分別檢測(cè)gE 抗體和gB 抗體[4]。

2 凈化結(jié)果

2.1 引種

2018年日泉公司按照1年內(nèi)引種的檢測(cè)方案，引進(jìn)PIC 種豬8 500 頭，在隔離場(chǎng)對(duì)8 500 頭種豬全部進(jìn)行g(shù)E 和gB 抗體檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果均為陰性（引種前未進(jìn)行豬偽狂犬病疫苗免疫）后轉(zhuǎn)入種豬場(chǎng)，建立種豬場(chǎng)gE抗體陰性種豬群。

2.2 維持凈化

2.2.1 監(jiān)測(cè)抽檢

種豬入場(chǎng)后，按程序開(kāi)展豬偽狂犬病的疫苗免疫，并按照維持豬場(chǎng)偽狂犬病凈化的方法，對(duì)gE 抗體和gB抗體進(jìn)行檢測(cè)。在2019年1月至2021年7月的抽檢和監(jiān)督檢驗(yàn)中，共檢測(cè)基礎(chǔ)母豬、后備豬、公豬gE 抗體7 659 份，檢測(cè)結(jié)果全為陰性；檢測(cè)gB 抗體7 121 份，gB 抗體合格率為99.9%。

2.2.2 全群檢測(cè)

2021年8月至2022年5月，分7 批完成全群種豬的gE 抗體檢測(cè)，共檢測(cè)8 427 份（含2 次監(jiān)督檢驗(yàn)），gE 抗體全為陰性；在開(kāi)展gE 全群檢測(cè)的同時(shí)，共抽檢1 052 份豬血清樣品進(jìn)行g(shù)B 抗體檢測(cè)（含2 次監(jiān)督檢驗(yàn)），gB 抗體合格率為97.1%。

4年來(lái)，在維持階段，企業(yè)和官方對(duì)種豬場(chǎng)種公豬、基礎(chǔ)母豬、后備豬進(jìn)行豬偽狂犬病監(jiān)測(cè)，共計(jì)檢測(cè)gE抗體16 086 份，檢測(cè)結(jié)果全為陰性，檢測(cè)gB 抗體8 173 份，gB 免疫抗體平均合格率為99.5%，全場(chǎng)無(wú)豬偽狂犬病病例發(fā)生。

2.3 形成凈化佐證資料

按照《動(dòng)物疫病凈化場(chǎng)評(píng)估技術(shù)規(guī)范》要求，對(duì)照《規(guī)模豬場(chǎng)主要?jiǎng)游镆卟艋瘜彶樵u(píng)分表》，建立或完善人員培訓(xùn)、凈污道錯(cuò)時(shí)使用及消毒、無(wú)害化處理、消毒管理、生產(chǎn)管理、防疫管理、疫病監(jiān)測(cè)等相關(guān)的制度、方案、操作規(guī)程，督促做好記錄和資料的歸檔等，做到各評(píng)分項(xiàng)有充分的材料或?qū)嵨镏巍?/p>

3 討論與分析

根據(jù)國(guó)內(nèi)外動(dòng)物疫病凈化探索和實(shí)踐，在規(guī)?；N豬場(chǎng)開(kāi)展豬偽狂犬病、豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征等疫病的凈化，逐步形成一套我國(guó)規(guī)模化種豬場(chǎng)主要疫病凈化技術(shù)方案和評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)，也建設(shè)一批主要?jiǎng)游镆卟艋痉秷?chǎng)[6,7]。按照國(guó)家的動(dòng)物疫病凈化評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)的動(dòng)物疫病檢測(cè)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，口蹄疫、豬瘟的凈化需要采集活體豬扁桃體進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)，常規(guī)的口蹄疫、豬瘟和高致病性豬繁殖與呼吸綜合征等的血清學(xué)檢測(cè)難以區(qū)分野毒感染和疫苗免疫產(chǎn)生的抗體[5,6]。在工作實(shí)踐中，由于活體采集豬扁桃體技術(shù)要求高，豬只易產(chǎn)生應(yīng)激等影響種豬生產(chǎn)，養(yǎng)殖企業(yè)接受程度不高。豬偽狂犬病疫苗為gE 基因缺失苗，用商品化的gE 和gB 抗體檢測(cè)試劑盒，即可快速、便捷和低成本地區(qū)分疫苗抗體和野毒感染抗體[8]。本文綜合檢測(cè)技術(shù)、養(yǎng)殖企業(yè)對(duì)采樣方式的接受度、經(jīng)費(fèi)需求、技術(shù)要求等因素考慮，將豬偽狂犬病免疫凈化作為本文凈化探索的病種。

動(dòng)物疫病凈化是一項(xiàng)長(zhǎng)期的工作，為此公司高度重視，統(tǒng)籌做好組織保障、經(jīng)費(fèi)保障和技術(shù)保障工作。通過(guò)成立豬偽狂犬病凈化工作小組、做好疫病凈化經(jīng)費(fèi)保障、建立專家指導(dǎo)機(jī)制和養(yǎng)豬技術(shù)外部審計(jì)機(jī)制等4 方面開(kāi)展工作。為了通過(guò)省級(jí)以上豬偽狂犬病凈化評(píng)估和實(shí)現(xiàn)豬偽狂犬病免疫凈化的目標(biāo)，在實(shí)施種豬場(chǎng)豬偽狂犬病免疫和檢測(cè)凈化技術(shù)的基礎(chǔ)上，按照《動(dòng)物疫病凈化示范場(chǎng)評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)（試行）》，將疫病凈化檢測(cè)與綜合防控措施同步建立、同步實(shí)施，由資料組負(fù)責(zé)人員管理、衛(wèi)生環(huán)保、無(wú)害化處理、消毒管理和疫病監(jiān)測(cè)等相關(guān)的制度、方案、操作規(guī)程、記錄表格的制定和資料歸檔等，確保4年來(lái)動(dòng)物疫病凈化資料的完整，做到各打分項(xiàng)有材料或?qū)嵨镒鳛橹?。黔南州和?dú)山縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)從2019年開(kāi)始，將種豬場(chǎng)豬偽狂犬病凈化的監(jiān)督檢驗(yàn)列入年度動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)計(jì)劃，每年開(kāi)展不少于2次的監(jiān)督檢驗(yàn)[9]。根據(jù)《規(guī)模化種豬場(chǎng)主要疫病凈化評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)》，豬場(chǎng)在開(kāi)展豬偽狂犬病凈化的同時(shí)，積極推動(dòng)開(kāi)展豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬口蹄疫等疫病的凈化探索，制定并落實(shí)凈化監(jiān)測(cè)方案，按照非洲豬瘟無(wú)疫小區(qū)的管理要求，做好非洲豬瘟病毒的監(jiān)測(cè)和防控[10]。

由于泉興種豬場(chǎng)是新建場(chǎng)，且引種豬只全部為豬偽狂犬病gE抗體陰性個(gè)體，因此，在凈化策略上，主要是實(shí)施免疫凈化，做好維持和證明無(wú)豬偽狂犬病病毒感染。在凈化的維持階段，每次采集不少于100 頭份血清樣品進(jìn)行g(shù)E 抗體檢測(cè)，基于本文選用的幾種國(guó)產(chǎn)gE 和gB ELISA 抗體檢測(cè)試劑都沒(méi)有標(biāo)注試劑的敏感性和特異性，抽樣方法存在誤差等，為更全面地評(píng)估和掌握豬場(chǎng)的豬偽狂犬病維持情況，決定分批次開(kāi)展一次gE 抗體的全群采樣檢測(cè)。但是全群采樣檢測(cè)對(duì)時(shí)間、人力、財(cái)力要求較高，同行在開(kāi)展無(wú)疫證明時(shí)，根據(jù)時(shí)間、人力、經(jīng)費(fèi)等情況，可增加抽檢頻次、調(diào)整證明無(wú)疫公式中的預(yù)期流行率等參數(shù)，或者在gE 抗體檢測(cè)的基礎(chǔ)上，對(duì)流產(chǎn)母豬、有疑似臨床癥狀豬只、種豬場(chǎng)內(nèi)部環(huán)境、病死豬無(wú)害化處理區(qū)環(huán)境等高風(fēng)險(xiǎn)環(huán)節(jié)，引入豬偽狂犬病熒光RT-PCR、病毒分離等病原學(xué)檢測(cè)方法，增加抽樣檢測(cè)的準(zhǔn)確性，也可較為科學(xué)地評(píng)估豬場(chǎng)豬偽狂犬病的流行情況[11-13]。該場(chǎng)在開(kāi)展豬偽狂犬病凈化之初，即按照《動(dòng)物疫病凈化場(chǎng)評(píng)估技術(shù)規(guī)范》，建立并不斷完善飼養(yǎng)和生物安全管理的相關(guān)制度、方案、記錄等，有完整的豬場(chǎng)健康巡欄、診療、無(wú)害化處理、引種、淘汰、銷售等記錄，科學(xué)的生產(chǎn)性能指標(biāo)統(tǒng)計(jì)和分析方法，當(dāng)?shù)貏?dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)嚴(yán)格做好監(jiān)督檢驗(yàn)等，可更全面地加以佐證豬場(chǎng)的凈化效果，同時(shí)也為凈化評(píng)估做好支撐。在嚴(yán)峻的非洲豬瘟防控形勢(shì)下，豬場(chǎng)建立了全面的生物安全管理體系，提升生物安全管理水平，2020年該種豬場(chǎng)通過(guò)“國(guó)家首批非洲豬瘟無(wú)疫小區(qū)”評(píng)估認(rèn)證[14-17]。在完整的資料支撐和科學(xué)的檢測(cè)保障下，2023年該種豬場(chǎng)的豬偽狂犬病免疫凈化通過(guò)“國(guó)家級(jí)動(dòng)物疫病凈化場(chǎng)”評(píng)估認(rèn)證。因此，建議在開(kāi)展動(dòng)物疫病凈化工作中，應(yīng)提前謀劃，重視相關(guān)資料收集和做好疫病監(jiān)測(cè)。

4 結(jié)論

在4年的豬偽狂犬病凈化過(guò)程中，通過(guò)gE 抗體抽檢和全群采樣檢測(cè)，gE 抗體檢測(cè)都為陰性，抽檢gB 抗體合格率都大于90%，且在臨床觀察中，未發(fā)現(xiàn)豬偽狂犬病臨床病例。此外，加以完整的健康巡欄、診療、無(wú)害化處理、引種、淘汰、銷售等記錄和科學(xué)的生產(chǎn)數(shù)據(jù)及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)等的佐證，較為全面反映了種豬場(chǎng)豬偽狂犬病的監(jiān)測(cè)凈化情況，嚴(yán)格落實(shí)重大動(dòng)物疫病防控措施，該種豬場(chǎng)于2022年通過(guò)“國(guó)家級(jí)豬偽狂犬病動(dòng)物疫病凈化場(chǎng)”評(píng)估認(rèn)證，實(shí)現(xiàn)豬偽狂犬病的免疫凈化目標(biāo)。