袁海延，李闊臣，劉洪健，張瑞雪，張肖肖，周井祥，王秋舉

(1.吉林省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站，吉林 長春 130012；2.吉林農(nóng)業(yè)大學，吉林 長春 130118)

賴氨酸廣泛分布于動物體內(nèi)，參與多種酶的代謝活動，有很強的促生長作用；參與機體蛋白質(zhì)合成過程，有一定的免疫調(diào)節(jié)功能。在常見植物蛋白源中，賴氨酸水平相對較低，這就要求動物性蛋白原料添加不足時必須額外補充一定量的賴氨酸，才能滿足水產(chǎn)動物對其需求。紅螯螯蝦別名澳洲淡水龍蝦、紅螯光殼螯蝦、四脊光殼螯蝦，具有生長速度快、生長周期短和適應(yīng)性強等特點，在我國養(yǎng)殖發(fā)展?jié)摿Υ?，但目前有關(guān)賴氨酸對紅螯螯蝦消化功能和抗氧化功能的研究尚未有所報道。本試驗分析了飼料不同賴氨酸水平對紅螯螯蝦幼蝦的生長性能、肝胰腺和腸道消化酶活性、肝胰腺和肌肉抗氧化酶活性的影響，研究紅螯螯蝦幼蝦對賴氨酸營養(yǎng)的適宜需求及飼料中的科學配比，為進一步探討其優(yōu)質(zhì)飼料配方提供理論性基礎(chǔ)。

一、材料與方法

1.試驗飼料

以味精蛋白、菜粕、葵花粕、花生粕為蛋白源，磷脂油為脂肪源，面粉和米糠為糖源，纖維素為填充物，配制蛋白質(zhì)水平約為25%、脂肪水平約為6%的配合飼料(表1)。飼料中賴氨酸鹽(純品賴氨酸水平為78.8%)的添加量(質(zhì)量比，下同)分別為1.3%、1.6%、1.9%、2.2%、2.5%，配制不同賴氨酸水平的5種等氮、等能配合飼料。其中各組飼料賴氨酸的實測值分別是1.15%、1.46%、1.75%、2.05%、2.27%，占飼料蛋白質(zhì)的4.60%、5.84%、7.00%、8.2%、9.08%。將試驗飼料原料粉碎過60 目篩，按配方稱重，混合均勻，壓制成粒徑為1.5毫米，干燥后放入4℃冰箱備用。

表1 飼料配方及主要營養(yǎng)成分(風干基礎(chǔ)) %

2.試驗所用主要試劑

消化酶有淀粉酶、胃蛋白酶、脂肪酶，抗氧化酶有超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、過氧化氫酶(CAT)，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物為丙二醛(MDA)，測定用試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

3.試驗方法

(1)飼養(yǎng)管理。試驗選取初始體重為0.45克的紅螯螯蝦900 尾，隨機分為A、B、C、D、E 5 組，每組3 個重復，分別飼喂賴氨酸水平為1.15%、1.46%、1.75%、2.05%、2.27%的5種等氮、等能飼料。紅螯螯蝦蝦苗來自于吉林公主嶺市藍谷水產(chǎn)養(yǎng)殖農(nóng)民專業(yè)合作社，飼養(yǎng)試驗在吉林公主嶺稻漁科技小院的試驗養(yǎng)殖箱進行(400 厘米×120 厘米×80 厘米)，飼養(yǎng)開始前預(yù)飼4 周，24 小時不間斷充氧，水體循環(huán)過濾。水溫在24～29℃，氨氮＜0.3 毫克/升，亞硝酸鹽＜0.05 毫克/升，溶氧5～10 毫克/升，pH 在7.0～7.5。預(yù)飼結(jié)束后，挑選個體健康、附肢健全且活躍靈敏的紅螯螯蝦幼蝦進行養(yǎng)殖。試驗時間為2022 年7 月8 日－9 月2 日，共8 周養(yǎng)殖試驗。試驗過程中投喂堅持“四定”原則，分兩次飼喂(7:00、18:00)，日投飼量為蝦體重的3%～5%，其中早上飼喂量占日投飼量的30%、下午飼喂量占日投飼量的70%。每周換1次水，每次換水1/4～1/3，保證養(yǎng)殖水體水質(zhì)清新，每天記錄養(yǎng)殖箱中蝦的攝食情況，觀察蝦的活動狀態(tài)。

(2)樣品收集。試驗結(jié)束后停食24小時，將養(yǎng)殖蝦進行稱重，用游標卡尺測量殼長、殼寬等生長指標。從每組中隨機選取10 尾紅螯螯蝦幼蝦置于冰盤中。蝦通過冰浴解剖的方式分離肝胰腺及腸道和肌肉組織，用于相關(guān)酶活的測定。

將試驗蝦取出肝胰腺及肌肉樣品分別進行稱重(精準到0.001 克)用于計算出肉率和肝胰腺指數(shù)。所取組織均按照質(zhì)量體積比1∶9 的比例加入預(yù)冷過的濃度為0.9%的生理鹽水，置于10 毫升無酶離心管中，在冰水浴的條件下通過勻漿器10 秒，并重復至少3 次，每次間隔10 秒。組織勻漿后，使用4℃離心機以3 500轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速離心10分鐘，取上清液保存于4℃冰箱中用于酶活測定。

紅螯螯蝦幼蝦消化酶活性的測定：組織勻漿得到上清液后，分別對紅螯螯蝦幼蝦肝胰腺、腸道的組織蛋白、胃蛋白酶(比色法)、淀粉酶(淀粉－碘比色法)、脂肪酶(比色法)進行活性測定，其中試劑盒均購于南京建成生物工程研究所，組織蛋白濃度采用考馬斯亮藍法進行測定。

抗氧化能力酶活性的測定：組織勻漿后得到的上清液分別測定肝胰腺和肌肉的SOD(羥胺法)、GSH- Px( 分 光 光 度 計 法)、 CAT( 可 見 光 法)、MDA(TBA法)的酶活力值。

二、結(jié)果與分析

1.飼料不同賴氨酸水平對紅螯螯蝦幼蝦生長及飼料利用率的影響

試驗結(jié)果表明，紅螯螯蝦幼蝦的終末體重、特定生長率、增重率在賴氨酸水平為2.05%時達到最大值，組間有顯著差異(P＜0.05)；當賴氨酸水平為2.27%時，上述指標出現(xiàn)下降。飼料不同賴氨酸水平對出肉率、肝胰腺指數(shù)、成活率以及飼料系數(shù)的影響差異不顯著(P＞0.05)。

2.飼料不同賴氨酸水平對紅螯螯蝦幼蝦消化酶活性的影響

試驗結(jié)果表明，紅螯螯蝦幼蝦肝胰腺蛋白質(zhì)酶和脂肪酶活性在飼料賴氨酸水平為2.05%時最高，各組間酶活性有顯著差異(P＜0.05)。隨著賴氨酸水平的不斷提高，紅螯螯蝦幼蝦腸道淀粉酶活性差異不顯著(P＞0.05)；其中E 組的淀粉酶活性高于其他各組，與脂肪酶和蛋白質(zhì)酶先升高、后下降的結(jié)果有所不同。

不同賴氨酸水平對紅螯螯蝦幼蝦腸道消化酶活性的影響：蛋白質(zhì)酶和脂肪酶活性在賴氨酸水平為2.05%時達到最大值，各組間有顯著差異(P＜0.05)。隨著賴氨酸水平的不斷提升，紅螯螯蝦幼蝦腸道淀粉酶活性差異不顯著(P＞0.05)。

3.飼料不同賴氨酸水平對紅螯螯蝦幼蝦抗氧化酶活性的影響

不同賴氨酸水平對紅螯螯蝦幼蝦肝胰腺抗氧化酶活性的影響：SOD、CAT 以及GSH-Px 的活性均隨著飼料賴氨酸水平的提高而上升，在賴氨酸水平達最適濃度后變?yōu)橄陆第厔荩珼組酶活性均顯著高于其他各組(P＜0.05)。MDA 含量與飼料賴氨酸水平成負相關(guān)，C 組MDA 含量低于其他各組，有顯著性差異(P＜0.05)。

不同賴氨酸水平對紅螯螯蝦幼蝦肌肉抗氧化酶活性的影響：SOD、CAT 的活性均隨著飼料賴氨酸水平的提高而上升，在賴氨酸水平達到最適水平后改為下降趨勢，D組酶活性顯著高于其他各組(P＜0.05)。GSH-Px 活性、MDA 含量與飼料賴氨酸水平成負相關(guān)，差異不顯著(P＞0.05)。

三、討論

1.飼料不同賴氨酸水平對紅螯螯蝦幼蝦生長及飼料利用率的影響

在蝦、蟹的生長與發(fā)育過程中，賴氨酸作為第一限制性氨基酸，發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。許多研究發(fā)現(xiàn)，當飼料中賴氨酸不足時，蝦、蟹對飼料的利用率會下降，從而導致生長發(fā)育緩慢。隨著飼料中賴氨酸水平的升高，蝦、蟹對飼料的利用率會逐漸提高，生長發(fā)育變快。但當飼料中賴氨酸水平過高時，同樣不利于蝦、蟹的生長發(fā)育，說明賴氨酸對蝦、蟹的生長發(fā)育、飼料利用等具有重要影響。邱紅等(2015)通過在黃顙魚幼魚飼料中添加賴氨酸進行試驗，結(jié)果表明適量的賴氨酸能促進其生長發(fā)育、提高飼料利用率，且最適賴氨酸添加水平為2.61%。張瑩等(2022)的研究表明，飼料中添加適量的賴氨酸能促進幼鱖魚的生長發(fā)育，而賴氨酸缺乏或過多會使幼鱖魚生長變慢，飼料利用率下降。在本試驗中，當紅螯螯蝦飼料中賴氨酸水平為2.05%時，特定生長率、增重率達到最大值，此時飼料系數(shù)最低，飼料利用率最高；當賴氨酸水平超過2.05%時，特定生長率、增重率下降，飼料系數(shù)上升，飼料利用率降低。這與上述研究趨勢相同，表明當飼料中賴氨酸缺乏時，會使蛋白質(zhì)利用率下降，致使氨基酸平衡被打破，進而影響紅螯螯蝦的生長發(fā)育以及飼料利用率；當飼料中賴氨酸過量時，會導致氨基酸不平衡，阻礙對其他氨基酸的吸收利用，進而影響紅螯螯蝦幼蝦的生長發(fā)育和對飼料的消化與吸收。此外，賴氨酸的缺乏或過量也會使飼料的適口性下降，影響紅螯螯蝦幼蝦對飼料的攝食，進而攝食量下降，對飼料的吸收利用率降低，從而導致紅螯螯蝦的生長發(fā)育緩慢。

2.飼料不同賴氨酸水平對紅螯螯蝦幼蝦消化功能的影響

為了更好地消化、吸收和利用營養(yǎng)物質(zhì)，蝦、蟹對于攝食的不同營養(yǎng)物質(zhì)會分泌不同的消化酶，且各種消化酶的分泌量不同，這體現(xiàn)出蝦、蟹對飼料組成的明顯適應(yīng)性(潘魯青等，2006)。張微微等(2013)對于賴氨酸對克氏原螯蝦消化功能的影響進行研究，結(jié)果表明當飼料賴氨酸水平為1.22%時，腸道蛋白質(zhì)酶活性最高；賴氨酸水平高于1.22%時，酶活性下降。在本試驗中，腸道和肝胰腺中脂肪酶、淀粉酶、胃蛋白質(zhì)酶的活性在飼料賴氨酸水平為2.05%時最高，賴氨酸水平高于2.05%時，酶活性下降。基于以上結(jié)果，說明在蝦飼料中添加適量的賴氨酸可以有效提高肝胰腺和腸道中的消化酶活性，從而提高蝦的消化功能。但當蝦飼料中賴氨酸過量時，消化酶活性則會下降，原因可能是當蝦攝入賴氨酸過量時，導致機體氨基酸失衡，為了維持體內(nèi)氨基酸平衡，抑制了肝胰腺和腸道中消化酶的活性。

3.飼料不同賴氨酸水平對紅螯螯蝦幼蝦抗氧化能力的影響

生物在受到外界脅迫時，可促使機體細胞內(nèi)線粒體、胞質(zhì)的酶系統(tǒng)和非酶系統(tǒng)反應(yīng)，還原產(chǎn)生活性氧等，若不及時清除會造成生物體活性氧損傷(蔣琦辰等，2013)。因此，生物體內(nèi)的超氧化物歧化酶、過氧化氫酶及谷胱甘肽過氧化物酶等通過催化抗氧化劑清除活性氧等，保護細胞免受氧化損傷。其中，SOD 在清除活性氧反應(yīng)過程中首先發(fā)揮作用，將超氧陰離子自由基快速歧化為過氧化氫和分子氧。桂聰?shù)?2022)通過對低蛋白質(zhì)水平飼料中添加蛋氨酸和賴氨酸進行大口黑鱸抗氧化性能的研究，結(jié)果表明在低蛋白質(zhì)水平飼料中添加賴氨酸，能夠有效降低大口黑鱸在機體脂質(zhì)氧化過程中所受的損傷。在本試驗中，當飼料賴氨酸水平為1.75%～2.05%時，SOD、CAT 以及GSH-Px 的活性顯著高于其他各組。此外，肝胰腺中脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA 含量以1.75%組為最低，肌肉中MDA 含量以2.05%組為最低?；谝陨涎芯?，表明飼料中添加適量的賴氨酸能提高紅螯螯蝦抗氧化能力，減少脂質(zhì)氧化過程對機體造成的損傷。這與桂聰?shù)?2022)的研究結(jié)果一致，證實了賴氨酸在提高機體抗氧化能力方面有重要作用。

本試驗結(jié)果表明，紅螯螯蝦飼料中賴氨酸水平為1.75%～2.05%時明顯提高了紅螯螯蝦幼蝦的生長發(fā)育、飼料利用率，賴氨酸水平為2.05%時消化功能最佳，賴氨酸水平為1.75%～2.05%時抗氧化能力明顯提高。綜上，紅螯螯蝦幼蝦飼料中賴氨酸水平宜控制在1.75%～2.05%。