蘇馨科，姚 敏，楊 磊，吳 鵬，金靜維，熊 平，黃俊明*，李冬利

(1. 五邑大學(xué)生物科技與大健康學(xué)院, 廣東 江門 529000；2. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)制藥工程系，廣東 廣州 510642)

陰香Cinnamomumburmanni是樟科樟屬喬木，又名陰草，主要分布于廣東、廣西、云南及福建等地，可治寒濕腹瀉、腹痛痢疾、風(fēng)濕骨痛等。陰香葉主要化學(xué)成分是萜類、酰胺類、甾體類、黃酮類、苯丙素類等化合物[1]，具有抗菌[2]、防蛀等功效。但目前對于陰香化學(xué)成分的研究集中在揮發(fā)油成分鑒定，對分離鑒定出的化合物結(jié)構(gòu)報道較少；對其生物活性研究多是針對陰香提取物進行篩選，對單體化合物的研究較少。作者選取廣東梅州種植的陰香為研究對象，對其葉的乙醇提取物進行分離純化，并進行結(jié)構(gòu)鑒定，篩選具有抗菌和抗炎活性的物質(zhì)，為陰香葉的開發(fā)應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與主要試劑儀器

陰香葉于2021 年4 月采自廣東省梅州市。由廣東江門中醫(yī)藥職業(yè)學(xué)院鄭小吉教授鑒定，憑證標(biāo)本藏于五邑大學(xué)生物科技與大健康學(xué)院。

柱色譜用硅膠(100～200 目、200～300 目)，青島海洋化工廠；小孔樹脂，日本三菱化學(xué)公司；C18反向硅膠，日本富士化學(xué)；D101 型大孔吸附樹脂，北京索萊寶科技有限公司；乙腈、甲醇，色譜純，安耐吉化學(xué)有限公司；甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、石油醚，分析純或工業(yè)純，上海泰坦化學(xué)有限公司。金黃色葡萄球菌(ATCC 6538)、大腸桿菌(CMCC 44102)，廣東省微生物菌種保藏中心；營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；二甲基亞砜(分子生物級)，德國Biofroxx；DMEM 培養(yǎng)基，美國 Gibco；胎牛血清 FB，美國 BI；PBS 緩沖液，美國 Gibco；噻唑藍(MTT)，美國 Sigma-Aldrich；Gresis Reagent Kit，美國 Biotium。

Bruker AVANCE NEO 500 型核磁共振波譜儀，德國Bruker 公司；BUCHI R-300 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，瑞士步琦公司；Waters 1525 型半制備高效液相色譜儀，美國沃特世公司。MLS-3781L-PC 型高壓蒸汽滅菌鍋，江陰濱江醫(yī)療設(shè)備廠；SPX-250B 型生化培養(yǎng)箱，上海虔鈞科學(xué)儀器有限公司；Infinite 200 多功能酶標(biāo)儀，賽默飛世爾科技公司；Series 8000WJ二氧化碳培養(yǎng)箱，美國 Thermo scientific。

1.2 化學(xué)成分提取與分離

取曬干粉碎的陰香葉13.5 kg，用95%乙醇常溫浸提3 次，每次7 d；合并提取液，減壓濃縮得浸膏1837.5 g。將浸膏分散于適量水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進行萃?。贿x取乙酸乙酯部分減壓濃縮得到浸膏208.5 g，經(jīng)D101 型大孔吸附樹脂分離，以30%、50%、70%、90%、100%乙醇-水梯度洗脫，TLC 監(jiān)測合并相似組分，得到5 個組分Fr.A～E。Fr.C 經(jīng)MCI 小孔樹脂分離，以30%、50%、70%、90%、100%乙醇-水梯度洗脫，TLC 監(jiān)測合并相似組分，得到4 個組分Fr.C1～C4。分別對4 個組分采用正反向硅膠、凝膠、半制備液相等分離技術(shù)進一步分離純化，最后從Fr.C1 (15.5 g)中得到化合物2 (476.5 mg)、3 (26.5 mg)、6 (5.6 mg)、11 (10.3 mg)、20 (9.3 mg)和21 (3.6 mg)，從Fr.C2 (22.5 g)中得到化合物1 (530.9 mg)、4 (1051.8 mg)、5 (304.5 mg)、7 (10.8 mg)、8 (2.3 mg)、10 (9.2 mg)、13 (14.4 mg)、18 (1164.4 mg)、19 (3.1 mg)、22 (8.0 mg)、23 (3.9 mg)、24 (64.3 mg)和25 (1.5 mg)，從Fr.C3 (7.5 g)中得到化合物9 (3.2 mg)、12 (10.1 mg)、15 (30.3 mg)、16 (4.1 mg)、17 (2.3 mg)和18 (335.9 mg)，從Fr.C4(1.4 g)中得到化合物14 (2.8 mg)。

通過理化鑒別、1H NMR 和13C NMR 等波譜學(xué)手段，確定了25 個單體化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)式如圖1 所示。

圖1 25 個化合物的結(jié)構(gòu)Fig. 1 Structures of 25 compounds isolated from Cinnamomum burmanni leaves

1.3 抗菌活性測定

采用微孔板法檢測分離得到的所有化合物對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的最小抑菌濃度(MIC)[3]。同時，在此基礎(chǔ)上進一步測試最小殺菌濃度(MBC)和抑菌動力學(xué)。

1.4 抗炎活性測定

以脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠小膠質(zhì)細胞(BV2)產(chǎn)生的一氧化氮(NO)的量為指標(biāo)，檢測分離得到的所有化合物的抗炎活性。用Greiss 試劑測定NO 含量，陽性藥為地塞米松。同時，采用MTT 法檢測化合物對BV2 細胞的毒性。

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)

化合物1：綠色粉末。ESI-MS m/s：431.2[M-H]-。分子式C21H20O10。1H NMR (500 MHz, Pyridine-d5): δ 8.55 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-2′′, 6′), 7.38 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-3′, 5′), 7.08 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-8), 6.83 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-6), 6.30 (1H, s, H-1′′), 4.75 (1H, s, H-5′′),4.69 (1H, dd,J= 9.2, 3.3 Hz, H-3′′), 4.41 (1H, t,J=9.3 Hz, H-2′′), 4.31 (1H, dd,J= 9.3, 6.2 Hz, H-4′′),1.65 (3H, d,J= 6.1 Hz, H-6′′);13C NMR (126 MHz,Pyridine-d5): δ 177.93 (C-4), 163.01 (C-5), 162.43(C-7), 161.45 (C-4′), 157.27 (C-9), 148.72 (C-2),138.67 (C-3), 131.17 (C-2′, 6′), 123.57 (C-1′), 116.94(C-3′, 5′), 106.53 (C-10), 100.50 (C-1′′), 100.22 (C-6),95.18 (C-8), 74.08 (C-4′′), 72.93 (C-3′′), 72.18(C-2′′), 71.95 (C-5′′), 19.14 (C-6′′)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[4]報道基本一致，故鑒定為kaempferol-7-Oα-L-rhamnopyranoside。

化合物2：黃色粉末。ESI-MS m/s：431.2[M-H]-。分子式C21H20O10。1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 7.65 (2H, d,J= 8.7 Hz, H-2′, 6′), 6.83 (2H, d,J= 8.7 Hz, H-3′, 5′), 6.24 (1H, d,J= 1.9 Hz, H-8), 6.08 (1H, d,J= 1.9 Hz, H-6), 5.29 (1H, s, H-1′′), 4.16 (1H, dd,J=3.0, 1.6 Hz, H-5′′), 3.64 (1H, dt,J= 6.2, 3.3 Hz, H-2′′),3.26 - 3.24 (2H, m, H-3′′, 4′′), 0.84 (3H, d,J= 5.0 Hz,-CH3);13C NMR (126 MHz, CD3OD): δ 179.48 (C-4),165.89 (C-7), 163.08 (C-5), 161.46 (C-9), 159.14 (C-4′),158.42 (C-2), 136.15 (C-3), 131.87 (C-2′, 6′), 122.58(C-1′), 116.45 (C-3′, 5′), 105.82 (C-1′′), 103.43 (C-10),99.84 (C-6), 94.77 (C-8), 73.17 (C-2′′), 72.06 (C-5′′),71.96 (C-4′′), 71.88 (C-3′′), 17.63 (C-6′′)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[5]報道基本一致，故鑒定為kaempferol-3-O-α-L-rhamnoside。

化合物3：黃色粉末。ESI-MS m/s：417.1[M-H]-。分子式C20H18O10。1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 7.91 (2H, d,J= 8.7 Hz, H-2′, 6′), 6.87 (2H, d,J= 8.7 Hz, H-3′, 5′), 6.35 (1H, s, H-8), 6.17 - 6.14 (1H, m,H-6), 5.44 (1H, s, H-1′′), 4.28 (1H, d,J= 2.3 Hz,H-2′′), 3.86 (1H, dd,J= 5.0, 3.0 Hz, H-3′′), 3.75 (1H, q,J= 4.5 Hz, H-4′′), 3.45 - 3.43 (2H, m, H-5′′);13C NMR (126 MHz, CD3OD): δ 179.89 (C-4), 166.07(C-7), 163.07 (C-5), 161.56 (C-4′), 159.36 (C-9),158.55 (C-2), 134.91 (C-3), 131.98 (C-2′, 6′), 122.76(C-1′), 116.50 (C-3′, 5′), 109.60 (C-1′′), 105.62 (C-10),99.88 (C-6), 94.80 (C-8), 87.99 (C-4′′), 83.34 (C-2′′),78.61 (C-3′′), 62.51 (C-5′′)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[6]報道基本一致，故鑒定為 kaempferol-3-O-α-Larabinofuranoside。

化合物4：白色粉末。ESI-MS m/s：387.1[M-H]-。分子式C21H24O7。1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 6.95 (1H, d,J= 1.8 Hz, H-2′), 6.81 (1H, dd,J= 8.2,1.8 Hz, H-6′), 6.76 (1H, d,J= 8.1 Hz, H-5′), 6.65 (2H,s, H-2, 6), 4.71 (2H, d,J= 4.4 Hz, H-7, 7′), 4.24 (2H,dtd,J= 9.1, 4.7, 2.4 Hz, H-9a, 9′a), 3.88 - 3.86 (2H, m,H-9b, 9′b), 3.85 (3H, s, 3′-OCH3), 3.84 (6H, s, 3,5-OCH3), 3.14 (2H, q,J= 4.7 Hz, H-8, 8′);13C NMR(126 MHz, CD3OD): δ 149.34 (C-3, 5), 149.12 (C-3′),147.32 (C-4′), 136.16 (C-4), 133.77 (C-1′), 133.13(C-1), 120.05 (C-6′), 116.06 (C-5′), 110.95 (C-2′),104.46 (C-2, 6), 87.66 (C-7), 87.48 (C-7′), 72.73 (C-9),72.62 (C-9′), 56.78 (3, 5-OCH3), 56.38 (3′-OCH3),55.56 (C-8), 55.33 (C-8′)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[7]報道基本一致，故鑒定為(+)-medioresinol。

化合物5：淺黃色晶體(甲醇)。ESI-MS m/s：417.3[M-H]-。分子式C22H26O8。1H NMR (500 MHz,CD3OD): δ 6.65 (4H, s, H-2, 2′, 6, 6′), 4.71 (2H, d,J=4.1 Hz, H-7, 7′), 4.26 (2H, dd,J= 8.9, 6.8 Hz, H-9a,9′a), 3.87 (2H, dd,J= 9.1, 3.3 Hz, H-9b, 9′b), 3.84(12H, s, 3, 3′, 5, 5′-OCH3), 3.14 (2H, q,J= 4.5 Hz,H-8, 8′);13C NMR (126 MHz, CD3OD): δ 149.33 (C-3,3′, 5, 5′), 136.16 (C-4, 4′), 133.11 (C-1, 1′), 104.46(C-2, 2′), 87.62 (C-7, 7′), 72.75 (C-9, 9′), 56.78 (C-3,3′, 5, 5′-OCH3), 55.51 (C-8, 8′)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[8]報道基本一致，故鑒定為(+)-syringaresinol。

化合物6：白色晶體(甲醇)。ESI-MS m/s：280.2[M]+。分子式C14H16O6。1H NMR (500 MHz,Pyridine-d5): δ 6.95 (2H, s, H-2, 6), 4.85 (1H, d,J= 6.7 Hz, H-7), 4.50 (1H, dd,J= 9.5, 6.6 Hz, H-12a), 4.45(1H, dd,J= 6.9, 2.7 Hz, H-9a), 4.42 (1H, d,J= 8.6 Hz,H-12b), 4.37 (1H, dd,J= 9.0, 3.7 Hz, H-9b), 3.84 (6H,s, 3, 5-OCH3), 3.65 (1H, td,J= 8.7, 3.6 Hz, H-10),3.28 (1H, dtd,J= 9.0, 6.7, 2.1 Hz, H-11);13C NMR(126 MHz, Pyridine-d5): δ 179.45 (C-14), 149.83 (C-3,5), 138.18 (C-4), 130.64 (C-1), 105.17 (C-2, 6), 87.33(C-7), 70.90 (C-12), 70.86 (C-9), 56.90 (3, 5-OCH3),49.32 (C-11), 47.14 (C-10)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[9]報道基本一致，故鑒定為zhepiresinol。

化合物 7 ： 黃色粉末。 ESI-MS m/s ：177.0[M-H]-。分子式C10H10O3。1H NMR (500 MHz,CD3OD): δ 9.53 (1H, d,J= 7.9 Hz, H-9), 7.54 (1H, d,J= 15.7 Hz, H-7), 7.21 (1H, d,J= 1.8 Hz, H-2), 7.13(1H, dd,J= 8.2, 1.8 Hz, H-6), 6.82 (1H, d,J= 8.2 Hz,H-5), 6.61 (1H, dd,J= 15.7, 7.9 Hz, H-8), 3.87 (3H, s,-OCH3);13C NMR (126 MHz, CD3OD): δ 196.18(C-9), 156.35 (C-7), 152.05 (C-4), 149.57 (C-3),127.43 (C-1), 126.54 (C-8), 125.25 (C-6), 116.70(C-5), 112.05 (C-2), 56.42 (-OCH3)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[10]報道基本一致，故鑒定為4-hydroxy-3-methoxycinnamaladehyde。

化合物8：黃色無定形粉末。ESI-MS m/s：171.2[M+Na]+。分子式C9H8O2。1H NMR (500 MHz,CD3OD): δ 9.55 (1H, d,J= 7.9 Hz, H-9), 7.59 (1H, d,J= 15.7 Hz, H-1), 7.53 (2H, d,J= 8.7 Hz, H-2, 6),6.82 (2H, d,J= 8.7 Hz, H-3, 5), 6.60 (1H, dd,J= 15.7,7.9 Hz, H-8);13C NMR (126 MHz, CD3OD): δ 196.22(C-9), 163.60 (C-4), 156.34 (C-7), 132.12 (C-2, 6),126.49 (C-1), 125.95 (C-8), 117.42 (C-3, 5)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[11]報道基本一致，故鑒定為trans-pcoumaryl aldehyde。

化合物9：白色粉末。ESI-MS m/s：193.0[M+H]+。分子式C11H12O3。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 9.67(1H, d,J= 7.7 Hz, H-9), 7.42 (1H, d,J= 15.8 Hz,H-7), 7.17 (1H, dd,J= 8.3, 1.8 Hz, H-6), 7.08 (1H, d,J= 1.8 Hz, H-2), 6.91 (1H, d,J= 8.3 Hz, H-5), 6.62(1H, dd,J= 15.8, 7.7 Hz, H-8), 3.94 (3H, s, 3-OCH3),3.93 (3H, s, 4-OCH3);13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ 193.75 (C-9), 153.02 (C-7), 152.10 (C-4), 149.50(C-3), 127.17 (C-1), 126.85 (C-6), 123.60 (C-8),111.22 (C-2), 109.93 (C-5), 56.18 (3-OCH3), 56.07(4-OCH3)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[12]基本一致，故鑒定為(E)-3-(3,4-dimethoxyphenyl) acrylaldehyde。

化合物 10：白色油狀物。ESI-MS m/s：217.0[M+Na]+。分子式C11H14O3。1H NMR (500 MHz,CD3OD): δ 7.02 (1H, d,J= 1.8 Hz, H-2), 6.93 (1H, dd,J= 8.3, 1.9 Hz, H-6), 6.87 (1H, d,J= 8.3 Hz, H-5),6.52 (1H, d,J= 15.8 Hz, H-7), 6.23 (1H, dt,J= 15.8,5.8 Hz, H-8), 4.19 (2H, dd,J= 5.8, 1.4 Hz, H-9), 3.83(3H, s, 3-OCH3), 3.81 (3H, s, 4-OCH3);13C NMR (126 MHz, CD3OD): δ 150.51 (C-3), 150.23 (C-4), 131.77(C-1), 131.61 (C-7), 127.98 (C-8), 120.84 (C-6), 112.84(C-5), 110.61 (C-2), 63.80 (C-9), 56.42 (3-OCH3),56.39 (4-OCH3)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[13]報道基本一致，故鑒定為3,4-dimethoxycinnamyl alcohol。

化合物 11：黃色油狀物。ESI-MS m/s：225.0[M+H]+。分子式C12H16O4。1H NMR (500 MHz,CD3OD): δ 6.71 (2H, s, H-2, 6), 6.53 (1H, d,J= 15.8 Hz, H-7), 6.30 (1H, dt,J= 15.8, 5.7 Hz, H-8), 4.21(2H, dd,J= 5.7, 1.5 Hz, H-9), 3.84 (6H, s, 3, 5-OCH3),3.74 (3H, s, 4-OCH3);13C NMR (126 MHz, CD3OD):δ 154.58 (C-3, 5), 138.72 (C-4), 134.63 (C-1), 131.55(C-7), 129.61 (C-8), 104.77 (C-2, 6), 63.62 (C-9),61.14 (4-OCH3), 56.54 (3, 5-OCH3)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[13]報道基本一致， 故鑒定 3,4,5-trimethoxycinnamyl alcohol。

化合物 12：白色油狀物。ESI-MS m/s：187.0[M+Na]+。分子式C10H12O2。1H NMR (500 MHz,CD3OD): δ 7.42 (1H, dd,J= 7.6, 1.6 Hz, H-6), 7.21 -7.17 (1H, m, H-4), 6.94 - 6.86 (3H, m, H-3, 5, 7), 6.33(1H, dt,J= 16.0, 5.8 Hz, H-8), 4.20 (2H, dd,J= 5.8,1.6 Hz, H-9), 3.81 (3H, s, 2-OCH3);13C NMR (126 MHz, CD3OD): δ 158.20 (C-2), 130.19 (C-7), 129.69(C-4), 127.71 (C-8), 127.11 (C-1), 126.65 (C-6),121.63 (C-5), 112.00 (C-3), 64.18 (C-9), 55.88(2-OCH3)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[14]報道基本一致，故鑒定為trans-2-methoxycinnamyl alcohol。

化合物 13：黃色油狀物。ESI-MS m/s：157.0[M+Na]+。分子式C9H10O。1H NMR (500 MHz,CDCl3): δ 7.39 (2H, d,J= 7.4 Hz, H-3, 5), 7.32 (2H, t,J= 7.6 Hz, H-2, 6), 7.24 (1H, t,J= 7.3 Hz, H-4), 6.61(1H, d,J= 15.9 Hz, H-7), 6.37 (1H, dt,J= 15.9, 5.7 Hz,H-8), 4.32 (2H, dd,J= 5.7, 1.3 Hz, H-9);13C NMR(126 MHz, CDCl3): δ 136.78 (C-1), 131.27 (C-7),128.72 (C-3, 5), 128.61 (C-4), 127.83 (C-8), 126.59(C-2, 6), 63.85 (C-9)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[15]報道基本一致，故鑒定為cinnamyl alcohol。

化合物14：白色油狀物。分子式C13H18O3，分子量222。1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 7.04 (1H, d,J= 1.9 Hz, H-6), 6.94 (1H, dd,J= 8.3, 1.9 Hz, H-2),6.89 (1H, d,J= 8.3 Hz, H-5), 6.55 (1H, d,J= 15.9 Hz,H-7), 6.19 (1H, dt,J= 15.8, 6.2 Hz, H-8), 4.11 (2H, dd,J= 6.2, 1.4 Hz, H-9), 3.84 (3H, s, 3-OCH3), 3.82 (3H,s, 4-OCH3), 3.55 (2H, q,J= 7.0 Hz, -CH2-), 1.21 (3H,t,J= 7.0 Hz, -CH3);13C NMR (126 MHz, CD3OD): δ 150.56 (C-3), 150.43 (C-4), 133.63 (C-7), 131.51 (C-1),125.05 (C-8), 120.99 (C-6), 112.83 (C-5), 110.64 (C-2),72.37 (C-9), 66.58 (-CH2-), 56.43 (3-OCH3), 56.41(4-OCH3), 15.45 (-CH3)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[16]報道基本一致，故鑒定為1,2-dimethoxy-4-(3-ethoxy-1E-propenyl)-benzene。

化合物 15：白色油狀物。ESI-MS m/s：215.0[M+Na]+。分子式C11H12O3。1H NMR (500 MHz,CD3OD): δ 7.35 (1H, d,J= 6.7 Hz, H-6), 7.05 (1H, t,J= 7.0 Hz, H-4), 6.92 (1H, d,J= 16.1 Hz, H-7), 6.78(1H, d,J= 4.1 Hz, H-5), 6.76 (1H, d,J= 4.9 Hz, H-3),6.32 (1H, dt,J= 16.0, 6.5 Hz, H-8), 4.69 (2H, d,J=6.4 Hz, H-9), 2.05 (3H, s, -CH3);13C NMR (126 MHz,CD3OD): δ 172.80 (C=O), 156.22 (C-2), 130.69 (C-4),129.94 (C-6), 128.18 (C-7), 124.58 (C-8), 123.91 (C-5),120.62 (C-3), 116.57 (C-1), 66.88 (C-9), 20.89 (-CH3)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[17]報道基本一致，故鑒定為cryptamygin-A。

化合物 16：黃色油狀物。ESI-MS m/s：222.0[M]+。分子式C12H14O4。1H NMR (500 MHz,CD3OD): δ 7.59 (1H, d,J= 15.9 Hz, H-7), 7.17 (1H, d,J= 1.9 Hz, H-2), 7.05 (1H, dd,J= 8.2, 1.9 Hz, H-5),6.79 (1H, d,J= 8.2 Hz, H-6), 6.33 (1H, d,J= 15.9 Hz,H-8), 4.21 (2H, q,J= 7.1 Hz, -CH2-), 3.88 (3H, s,3-OCH3), 1.31 (3H, d,J= 7.1 Hz, -CH3);13C NMR(126 MHz, CD3OD): δ 169.35 (C-9), 151.07 (C-3),149.51 (C-4), 146.71 (C-7), 127.47 (C-1), 124.14 (C-6),116.56 (C-5), 115.41 (C-8), 111.61 (C-2), 61.41 (-CH2-),56.40 (3-OCH3), 14.64 (-CH3)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[18]報道基本一致，故鑒定為ethyl ferulate。

化合物 17：白色粉末。ESI-MS m/s：166.1[M-H]-。分子式C9H10O3。1H NMR (500 MHz,CD3OD): δ 7.85 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-2, 6), 6.80 (2H,d,J= 8.8 Hz, H-3, 5), 4.29 (2H, q,J= 7.1 Hz, -OCH2-),1.35 (3H, t,J= 7.1 Hz, -CH3);13C NMR (126 MHz,CD3OD): δ 168.28 (C=O), 163.65 (C-4), 132.69 (C-2,6), 122.39 (C-1), 116.17 (C-3, 5), 61.66 (-OCH2-),14.66 (-CH3)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[19]報道基本一致，故鑒定為p-hydroxybenzoic acid ethyl ester。

化合物18：白色結(jié)晶(甲醇)。ESI-MS m/s：169.0[M+Na]+。分子式C9H6O2。1H NMR (500 MHz,CDCl3): δ 7.73 (1H, d,J= 9.5 Hz, H-4), 7.56-7.51 (1H,m, H-5), 7.50 (1H, d,J= 7.7 Hz, H-7), 7.33 (1H, d,J=8.3 Hz, H-6), 7.31-7.27 (1H, m, H-8), 6.43 (1H, dd,J= 9.5, 1.5 Hz, H-3);13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ 160.89 (C-2), 154.08 (C-9), 143.58 (C-4), 131.91 (C-7),127.97 (C-5), 124.52 (C-6), 118.89 (C-10), 116.92(C-8), 116.71 (C-3)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[20]報道基本一致，故鑒定為coumarin。

化合物 19：淡黃色粉末。ESI-MS m/s：177.0[M-H]-。分子式C9H6O4。1H NMR (500 MHz,CD3OD): δ 7.94 (1H, d,J= 5.9 Hz, H-2), 6.30 (1H, d,J= 2.1 Hz, H-3), 6.17 (1H, d,J= 2.1 Hz, H-8), 6.16(1H, d,J= 6.0 Hz, H-6);13C NMR (126 MHz,CD3OD): δ 183.35 (C-4), 167.87 (C-7), 163.45 (C-5),159.93 (C-9), 158.10 (C-2), 111.61 (C-3), 107.19(C-10), 100.34 (C-6), 95.16 (C-8)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[21]報道基本一致， 故鑒定為 5,7-dihydroxychromone。

化合物 20：棕色粉末。ESI-MS m/s：169.0[M+H]+。分子式C8H8O4。1H NMR (500 MHz,CDCl3): δ 5.85 (2H, s, H-3, 5), 3.82 (6H, s, 2,6-OCH3);13C NMR (126 MHz, CDCl3)：δ 186.99(C-1), 176.83 (C-4), 157.44 (C-2, 6), 107.56 (C-3, 5),56.63 (2, 6-OCH3)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[22]報道基本一致，故鑒定為2,6-dimethoxyquinone。

化合物21：淡黃色針晶(甲醇)。ESI-MS m/s：169.0[M+H]+。分子式C8H8O4。1H NMR (500 MHz,Acetone-d6): δ 5.90 (2H, s, H-3, 6), 3.82 (6H, s, 2,5-OCH3);13C NMR (126 MHz, Acetone-d6): δ 187.51(C-1, 4), 158.50 (C-2, 5), 107.83 (C-3, 6), 56.80 (2,5-OCH3)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[23]報道基本一致，故鑒定為2,5-dimethoxybenzoquinone。

化合物 22：黃色油狀物。ESI-MS m/s：231.2[M+Na]+。分子式C13H20O2。1H NMR (500 MHz,CD3OD): δ 6.74 (1H, dd,J= 15.8, 9.6 Hz, H-7), 6.10(1H, d,J= 15.8 Hz, H-8), 5.54 (1H, s, H-4), 4.15 (1H,dd,J= 9.5, 4.8 Hz, H-3), 2.33 (1H, d,J= 9.6 Hz, H-6),2.24 (3H, s, 10-CH3), 1.62 - 1.61 (3H, m, 13-CH3),1.59 (1H, d,J= 6.7 Hz, H-2a), 1.42 (1H, dd,J= 12.9,9.9 Hz, H-2b), 0.97 (3H, s, 11-CH3), 0.87 (3H, s,12-CH3);13C NMR (126 MHz, CD3OD): δ 200.97(C-9), 150.24 (C-7), 136.05 (C-5), 133.45 (C-8),127.74 (C-4), 66.89 (C-3), 55.46 (C-6), 41.00 (C-2),35.88 (C-1), 29.57 (C-10), 27.20 (C-11), 27.00 (C-12),22.59 (C-13)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[24]報道基本一致，故鑒定為 (3R,6R,7E)-3-hydroxy-4,7-megastigmadien-9-one。

化合物23：白色無定形粉末。ESI-MS m/s：241.2[M+H]+。分子式C15H28O2。1H NMR (500 MHz,CD3OD): δ 2.22 - 2.17 (1H, m, H-6β), 1.96 (1H, d,J=10.8 Hz, H-8α), 1.74 (1H, dd,J= 12.6, 1.5 Hz, H-3β),1.64 - 1.62 (1H, m, H-2), 1.61 (1H, d,J= 4.0 Hz,H-9β), 1.58 (1H, t,J= 3.4 Hz, H-7α), 1.55 (1H, t,J=3.2 Hz, H-1α), 1.46 (1H, d,J= 3.3 Hz, H-6α), 1.43(1H, t,J= 2.9 Hz, H-3α), 1.35 (1H, d,J= 3.0 Hz,H-5β), 1.31 (1H, d,J= 3.4 Hz, H-9α), 1.23 (1H, dd,J=12.5, 2.3 Hz, H-1β), 1.18 (3H, s, 12-CH3), 1.17 (3H, s,13-CH3), 1.09 (3H, s, 14-CH3), 1.04 (1H, d,J= 12.1 Hz,H-8β), 0.89 (3H, s, 15-CH3);13C NMR (126 MHz,CD3OD): δ 73.53 (C-11), 73.10 (C-4), 55.67 (C-5),51.26 (C-7), 46.09 (C-9), 44.15 (C-3), 42.33 (C-1),35.60 (C-10), 27.50 (C-12), 26.85 (C-13), 23.50 (C-14),22.81 (C-8), 22.48 (C-6), 21.13 (C-2), 19.23 (C-5)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[25]報道基本一致，故鑒定為cryptomeridiol。

化合物 24：黃色固體。ESI-MS m/s：256.2[M+H2O]+。分子式C15H26O2。1H NMR (500 MHz,CDCl3): δ 1.89 - 1.55 (8H, m, H-1, 2, 3, 8, 9), 1.25 (3H,s, H-14), 1.20 (1H, d,J= 10.6 Hz, H-5), 1.17 (3H, s,H-15), 1.03 (6H, s, H-12, 13), 0.95 - 0.86 (1H, m, H-8),0.64 (1H, ddd,J= 11.1, 9.5, 6.2 Hz, H-7), 0.42 (1H, dd,J= 10.8, 9.5 Hz, H-6);13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ 80.51 (C-4), 75.19 (C-10), 56.47 (C-1), 48.56 (C-5),44.59 (C-9), 41.27 (C-3), 28.80 (C-12), 28.37 (C-6),26.72 (C-7), 24.64 (C-14), 23.92 (C-2), 20.46 (C-15),20.32 (C-8), 19.71 (C-11), 16.62 (C-13)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[26]報道基本一致， 故鑒定為acomadendrane-4β,10β-diol。

化合物 25：白色油狀物。ESI-MS m/s：168.0[M+Na]+。分子式C9H7NO。1H NMR (500 MHz,CD3OD): δ 9.87 (1H, s, -CHO), 8.14 (1H, d,J= 7.5 Hz,H-4), 8.08 (1H, s, H-2), 7.46 (1H, d,J= 7.9 Hz, H-7),7.24 (2H, dtd,J= 20.3, 7.3, 1.1 Hz, H-5, 6);13C NMR(126 MHz, CD3OD): δ 187.42 (-CHO), 139.71 (C-2),138.94 (C-8), 125.71 (C-9), 125.00 (C-4), 123.61 (C-6),122.40 (C-5), 120.12 (C-3), 113.13 (C-7)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻[27]報道基本一致，故鑒定為1H-indole-3-carboxaldehyde。

2.2 陰香葉化學(xué)成分的抗菌活性

實驗發(fā)現(xiàn)，除化合物20 和21 對金黃色葡萄球菌具有較好的抑制效果(最小抑菌濃度均為32 μmol·L-1)外，其余23 個化合物在測定濃度(64 μmol·L-1)下對金黃色葡萄球菌均未表現(xiàn)出抑菌活性；此外，在測定濃度(64 μmol·L-1)下，所有化合物對大腸桿菌均未表現(xiàn)出抑菌活性?；衔?0 的最小殺菌濃度為64 μmol·L-1，化合物 21 的最小殺菌濃度為32 μmol·L-1，證明化合物21 具有更好的殺菌效果。圖2 顯示，在2 倍最小抑菌濃度、最小抑菌濃度下12 h 之后，化合物20 的吸光度值明顯增高，測試菌種大量增長，而化合物21 的吸光度值變化不如化合物20 的明顯，證明化合物21 具有更強的抑菌活性。

圖2 化合物20(左)和21(右)的抑菌動力學(xué)曲線Fig. 2 Antibacterial kinetic curves of compounds 20 (left) and 21 (right)

2.3 陰香葉化學(xué)成分的抗炎活性

從圖3 和圖4 可見，與模型組對比，化合物5、6、7 濃度為20 μmol·L-1時可抑制LPS 誘導(dǎo)的BV2細胞的NO 生成量，具有抗炎活性，其IC50值分別為7.85 μmol·L-1、24.97 μmol·L-1、7.49 μmol·L-1，無細胞毒性。

圖3 化合物對LPS 誘導(dǎo)BV2 細胞產(chǎn)生NO 的影響(20 μmol·L-1)Fig. 3 Effects of compounds on LPS-induced NO production in BV2 cells (20 μmol·L-1)

圖4 化合物的MTT 細胞毒性Fig. 4 MTT cytotoxicity of compounds isolated from Cinnamomum burmanni leaves

3 結(jié)論與討論

從陰香葉的95%乙醇提取物中分離鑒定了25個化合物，包括黃酮類化合物(1～3)、木脂素類化合物(4～6)、簡單苯丙素類化合物(7～16)、香豆素類化合物(18)、苯醌類化合物(20～21)、倍半萜類化合物(22～24)和一個吲哚生物堿（25）。除化合物1、2、5、18 外，其余均為首次從陰香中分離得到。

抗菌實驗顯示，化合物20 和21 對金黃色葡萄球菌表現(xiàn)出較好的抑菌活性(MIC 值)。發(fā)現(xiàn)含甲氧基的苯醌類化合物抗菌活性較強，對革蘭氏陽性菌更有效，與文獻[28]的結(jié)論一致。未見有關(guān)這兩個化合物抑菌動力學(xué)的報道。

抗炎實驗表明，化合物5、6、7 的IC50值分別為7.85 μmol·L-1、24.97 μmol·L-1、7.49 μmol·L-1，均可抑制LPS 誘導(dǎo)的BV2 細胞NO 的生成，表現(xiàn)出較好的抗炎活性，且無細胞毒性，與Lee 等[29]的研究基本一致。Bajpai 等[30]研究了化合物5 對LPS 誘導(dǎo)的RAW 264.7 細胞的抗炎機制。Jin 等[31]發(fā)現(xiàn)化合物7 濃度為3 μmol·L-1時仍可抑制LPS 誘導(dǎo)的RAW 264.7 細胞的NO、腫瘤壞死因子α(TNF-α)和白細胞介素6(IL-6)的產(chǎn)生，且對RAW 264.7 細胞的毒性較小。Kim 等[32]發(fā)現(xiàn)化合物7 可通過阻斷LPS 誘導(dǎo)的C-Jun 氨基末端激酶(JNK)和NF-κB 通路的激活，以劑量依賴的方式顯著減少LPS 誘導(dǎo)產(chǎn)生的過量iNOS 和 NO，發(fā)揮抗炎作用。關(guān)于化合物6 的抗炎機制未見報道。化合物5、6 和7 對LPS 誘導(dǎo)的BV2細胞的抗炎機制有待進一步研究。

本研究結(jié)果豐富了陰香葉的化學(xué)成分和生物活性成分，為其開發(fā)利用提供了科學(xué)依據(jù)。