王宇，李改改，張茜，張紅兵，和娟

1山西迪安醫(yī)學(xué)檢驗中心，太原 030032；2山西白求恩醫(yī)院病理科，太原 030023

輸卵管是最常見的宮腔以外妊娠部位，通常發(fā)生于輸卵管壺腹部。輸卵管妊娠導(dǎo)致的急腹癥是女性最常見的病癥之一，嚴(yán)重威脅女性的身體健康及生命安全[1-2]。關(guān)于輸卵管妊娠的相關(guān)研究主要集中于臨床保守治療方面的探索，但其發(fā)生機(jī)制目前仍未可知[3]。本研究組在臨床病理診斷工作中發(fā)現(xiàn)，在輸卵管子宮內(nèi)膜異位癥患者中，異位的子宮內(nèi)膜腺體HNF1β 呈陽性表達(dá)，而其旁的正常輸卵管上皮缺失表達(dá)。受這一現(xiàn)象啟示，我們猜想：輸卵管妊娠時，輸卵管上皮是否會模擬異位的子宮內(nèi)膜出現(xiàn)HNF1β 表達(dá)？HNF1β 是否參與了輸卵管妊娠的分子機(jī)制？本研究將通過免疫組織化學(xué)的方法，分別檢測正常子宮內(nèi)膜、輸卵管上皮及輸卵管妊娠組織中HNF1β 的蛋白表達(dá)情況，初步探討HNF1β 在輸卵管妊娠過程中的分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 病例資料 收集2021 年6 月至2022 年5 月山西迪安醫(yī)學(xué)檢驗中心病理診斷為輸卵管妊娠的標(biāo)本34例，同時收集同期育齡期女性正常輸卵管組織20 例及增殖期子宮內(nèi)膜組織14 例作為對照。所有病例均經(jīng)2 位主治醫(yī)師以上病理醫(yī)師確診。本研究符合倫理原則。

1.2 方法

1.2.1 病理制片及光鏡觀察 所有標(biāo)本均經(jīng)4%中性甲醛固定6～8 h，規(guī)范取材，組織經(jīng)梯度酒精脫水、二甲苯透明、浸蠟、石蠟包埋，3 μm 厚切片，行HE染色。光鏡觀察。

1.2.2 免疫組織化學(xué)染色 試劑HNF1β（克隆號OTIR2E9）購自北京中杉生物有限公司。免疫組化染色采用美國羅氏公司全自動多功能組織病理檢測系統(tǒng)（Bench Mark XT）制片。

1.3 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 參照文獻(xiàn)判讀標(biāo)準(zhǔn)[4]，HNF1β 陽性表達(dá)著色部位為細(xì)胞核，為棕黃色至棕褐色斑塊狀。染色結(jié)果由陽性細(xì)胞著色強(qiáng)度及百分率分別進(jìn)行評分。細(xì)胞核著色強(qiáng)度評定：無著色為0 分，淡棕色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分；陽性細(xì)胞百分率由兩位病理副主任級別以上醫(yī)師分別計算并取平均值，高倍鏡下（400×）隨機(jī)取5 個不同視野，計數(shù)細(xì)胞總數(shù)及陽性細(xì)胞數(shù)，陽性細(xì)胞百分率評定：無陽性細(xì)胞為0 分，陽性細(xì)胞數(shù)≤10%為1 分，11%～50%為2 分，51%～75%為3 分，＞75%為4 分。將兩項得分結(jié)果相乘：＞3 分為陽性（+）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 21.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，以P＜0.05 作為差異有統(tǒng)計學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，HNF1β 陽性表達(dá)部位為細(xì)胞核，在正常增殖期子宮內(nèi)膜腺上皮中呈強(qiáng)陽性表達(dá)；在正常輸卵管上皮中陰性；在輸卵管妊娠組織中，HNF1β 出現(xiàn)異常表達(dá)。見圖1。與正常輸卵管上皮相比，輸卵管妊娠中HNF1β 異常表達(dá)有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.01），見表1；而與正常增殖期子宮內(nèi)膜相比，HNF1β 的表達(dá)情況無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），見表2。

表1 HNF1β在各組別間的表達(dá) [例（%）]

表2 HNF1β在各組別間的表達(dá) [例（%）]

圖1 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果

3 討論

輸卵管妊娠是最常見的臨床急腹癥之一，嚴(yán)重影響女性的健康與生命安全。有關(guān)輸卵管妊娠的相關(guān)研究目前主要集中于保守治療方面，尤其是甲氨蝶呤的臨床應(yīng)用[5-7]。而關(guān)于輸卵管妊娠的分子機(jī)制方面的研究甚少，且更新緩慢。本研究組查閱Pubmed 官方網(wǎng)站，有關(guān)輸卵管妊娠機(jī)制方面的文獻(xiàn)僅63 篇，近5 年的文獻(xiàn)僅有10 篇。因此，輸卵管妊娠的機(jī)制研究成為臨床亟待推進(jìn)的問題。Refaat 等[8]的研究結(jié)果顯示，維生素D（vitamin D，VD）相關(guān)分子及Ca2+傳感受體（CaSP）在輸卵管妊娠中出現(xiàn)異常表達(dá)，除VD 結(jié)合蛋白外，其他作用于VD 的相關(guān)蛋白酶的水平均出現(xiàn)下降。Wang 等[9]研究顯示，腎上腺髓質(zhì)素（adrenomedullin，ADM）在正常輸卵管中為高表達(dá)狀態(tài)，從而顯著抑制巨噬細(xì)胞產(chǎn)生促炎因子IL-6及IL-8。在輸卵管妊娠時，ADM 出現(xiàn)異常的缺失表達(dá)，將明顯減弱對巨噬細(xì)胞的抑制作用，導(dǎo)致促炎因子IL-6、IL-8 水平升高，引發(fā)輸卵管炎癥反應(yīng)，提示ADM 的缺失表達(dá)可能在輸卵管妊娠過程中起重要的分子調(diào)節(jié)作用。Grudzinski 等[10]針對輸卵管妊娠的研究結(jié)果顯示，抗白細(xì)胞蛋白酶Elafin 在輸卵管妊娠中出現(xiàn)低表達(dá)，可能與輸卵管炎及輸卵管妊娠的發(fā)生機(jī)制有相關(guān)性。而另一項有關(guān)Elafin 的研究結(jié)果顯示[11]，與正常輸卵管組織相比，輸卵管妊娠組織中Elafin 蛋白水平及RNA 水平均出現(xiàn)明顯上調(diào)。因此，有關(guān)輸卵管妊娠的分子機(jī)制仍是臨床亟待解決的科學(xué)問題。

肝細(xì)胞核因子-1β（hepatocyte nuclear factor-1β，HNF1β）基因位于17q12，是參與肝、腎、胰腺和苗勒氏管等多種組織發(fā)育的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，又名轉(zhuǎn)錄因子2。該基因的雜合突變可導(dǎo)致青少年起病的成人型糖尿?。╩aturity-onset diabetes of the young，MODY）。HNF1β 基因在女性生殖器官畸形中的作用最早在1 個MODY 家族中被研究[12]。

臨床病理工作中，HNF1β 在卵巢癌的診斷中起重要的輔助診斷作用，尤其是卵巢透明細(xì)胞癌和其他伴有透明細(xì)胞改變的卵巢癌的鑒別。有研究發(fā)現(xiàn)，HNF1β 在子宮內(nèi)膜異位癥上皮中表達(dá)。本研究組發(fā)現(xiàn)，發(fā)生于輸卵管的子宮內(nèi)膜異位癥上皮表達(dá)HNF1β，定位于細(xì)胞核，而正常的輸卵管上皮不表達(dá)HNF1β，這一現(xiàn)象啟發(fā)我們：輸卵管妊娠時，輸卵管上皮是否會模擬子宮內(nèi)膜上皮，出現(xiàn)HNF1β 的表達(dá)？HNF1β 是否參與了輸卵管妊娠的發(fā)生？

本研究通過免疫組織化學(xué)的方法對輸卵管妊娠組織進(jìn)行了HNF1β 蛋白水平檢測，結(jié)果顯示，正常輸卵管黏膜不表達(dá)HNF1β 蛋白，而輸卵管妊娠時，輸卵管上皮卻呈現(xiàn)HNF1β 蛋白的核表達(dá)。本研究同時檢測了人正常子宮內(nèi)膜腺體中HNF1β 的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，HNF1β 在人正常子宮內(nèi)膜腺體中表現(xiàn)為核表達(dá)。因此，輸卵管妊娠時，輸卵管黏膜中HNF1β 蛋白出現(xiàn)了與正常子宮內(nèi)膜腺體相似的表達(dá)模式，這一研究結(jié)果提示，輸卵管妊娠時，輸卵管上皮模擬子宮內(nèi)膜腺體，出現(xiàn)HNF1β 蛋白的異常表達(dá)。HNF1β 在輸卵管上皮中的異常表達(dá)，可能是誘導(dǎo)受精卵著床，引發(fā)輸卵管妊娠的分子事件。本研究結(jié)果為下一步針對輸卵管妊娠的分子機(jī)制研究提供了理論基礎(chǔ)。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。