葉子雨，何學(xué)東，鄭永軍，李婉婧，曾晴勤，李 瑞，劉夢(mèng)琪，張 璟，鄭亞東，楊永春，趙金國(guó)，宋厚輝*

1. 浙江農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，浙江省畜禽綠色生態(tài)健康養(yǎng)殖應(yīng)用技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/動(dòng)物健康互聯(lián)網(wǎng)檢測(cè)技術(shù)浙江省工程研究中心，浙江省動(dòng)物醫(yī)學(xué)與健康管理國(guó)際科技合作基地，中澳動(dòng)物健康大數(shù)據(jù)分析聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州 311300

2. 福建農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院（蜂學(xué)學(xué)院）/福建-臺(tái)灣動(dòng)物病原生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350002

3. 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心寄生蟲病預(yù)防控制所（國(guó)家熱帶病研究中心），國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)寄生蟲病原與媒介生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，世界衛(wèi)生組織熱帶病合作中心，國(guó)家級(jí)熱帶病國(guó)際聯(lián)合研究中心，上海 200025

4. 甘肅省天水市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅 天水 741000

肝纖維化為一種以細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）異常沉積為特征的病理過程，是造成全球疾病負(fù)擔(dān)增加的重要因素[1]。因病毒/寄生蟲感染、炎癥、機(jī)械損傷、自身免疫性疾病等因素，肝臟中的非實(shí)質(zhì)細(xì)胞即肝臟星狀細(xì)胞（hepatic stellate cells，HSC）激活，轉(zhuǎn)化成肌成纖維細(xì)胞，分泌大量的ECM 并在肝臟間質(zhì)中沉積，形成瘢痕[2]。一般情況下，機(jī)體會(huì)自動(dòng)啟動(dòng)抗纖維化反應(yīng)，使肌成纖維細(xì)胞逆轉(zhuǎn)為HSC 或發(fā)生凋亡，促進(jìn)瘢痕消退，但在慢性肝病中，肌成纖維細(xì)胞會(huì)持續(xù)激活，使促纖維化和抗纖維化失衡，從而導(dǎo)致ECM 的過度合成，最終引起肝纖維化[3]。肝纖維化作為從慢性肝病最終發(fā)展為肝衰竭/肝癌的中間環(huán)節(jié)，如何逆轉(zhuǎn)肝纖維化是目前具有十分重要研究意義的熱點(diǎn)課題。女貞子是木犀科植物女貞LigustrumlucidumAit.的干燥成熟果實(shí)，又名“冬青子”，具有十分高的藥用價(jià)值[4]，《神農(nóng)本草經(jīng)》曾記載“女貞實(shí)，味苦平，主補(bǔ)中，安五臟，養(yǎng)精神，除百病”[5]。女貞子含有多種活性成分，如三萜類：齊墩果酸、熊果酸、乙酰齊墩果酸等；環(huán)烯醚萜類：女貞苷、特女真苷等；黃酮類：芹菜素、槲皮素等；苯乙醇苷類：紅景天苷、毛蕊花苷等，具有調(diào)節(jié)保肝、免疫、抗癌、抗腫瘤等功效[6]。此外，女貞子還含有一些多糖、脂肪酸等[7]。本文基于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）/Smad、還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4，NOX4）/活性氧、磷脂酰肌醇 3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）、p38 絲裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase，MAPK）、Janus 激酶（Janus kinase，JAK）/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活子（signal transducers and activators of transcription，STAT）、核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）等信號(hào)通路相關(guān)研究，就女貞子的抗肝纖維化作用機(jī)制進(jìn)行綜述，為女貞子的臨床應(yīng)用提供參考。

1 肝纖維化

慢性肝病發(fā)展到后期時(shí)，肝細(xì)胞受損嚴(yán)重，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)并分泌大量的炎癥因子，導(dǎo)致HSC 激活并增殖。正常情況下，HSC 以靜息狀態(tài)存在于肝臟的竇周隙中[2,8]，參與調(diào)節(jié)ECM 的產(chǎn)生和降解，以及肝竇血流。然而，當(dāng)肝臟受損時(shí)，肝臟血竇內(nèi)散在的組織駐留巨噬細(xì)胞即庫(kù)普弗細(xì)胞激活，在多種細(xì)胞因子的共同作用下，促進(jìn)HSC 活化。因HSC表達(dá)TGF-β1 受體，同時(shí)也可以分泌TGF-β1，在這種情況下形成正反饋調(diào)節(jié)環(huán)路，導(dǎo)致HSC 持續(xù)激活。激活的HSC 轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞，使α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA），I、III型膠原蛋白，纖連蛋白及層黏連蛋白等一些促纖維化相關(guān)蛋白表達(dá)增加。正常情況下，ECM 的合成與降解受基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子（tissue inhibitors of MMP，TIMPs）的調(diào)控，處于動(dòng)態(tài)平衡，但在肝纖維化發(fā)生時(shí)，該平衡遭到破壞，ECM 合成增加、降解減少，導(dǎo)致ECM 出現(xiàn)過度合成，進(jìn)而引起肝纖維化的發(fā)生[9]。

2 女貞子活性成分抗肝纖維化作用機(jī)制

2.1 TGF-β/Smad 信號(hào)通路的調(diào)節(jié)機(jī)制

TGF-β 家族成員主要包括TGF-β、骨形態(tài)發(fā)生蛋白及激活素等，其中TGF-β 激活并介導(dǎo)TGF-β/Smad 信號(hào)通路，促使HSC 轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞，在肝纖維化發(fā)生過程中具有重要作用[10]。TGF-β/Smad 信號(hào)通路的組成主要包括3 部分：位于胞外的TGF-β 配體、細(xì)胞膜表面TGF-β 受體及胞內(nèi)傳遞信號(hào)的Smad 蛋白[11]。Smad 蛋白在TGF-β/Smad信號(hào)通路的下游發(fā)揮作用，直接參與并影響肝纖維化發(fā)生[12]。

TGF-β/Smad 有2 種存在形式：基礎(chǔ)狀態(tài)和激活狀態(tài)[10,13]。當(dāng)處于基礎(chǔ)狀態(tài)時(shí)，TGF-β 配體被ECM 或其他物質(zhì)隔離，以復(fù)合物形式穩(wěn)定存在，使其無法與受體結(jié)合而發(fā)揮作用，但當(dāng)其被激活時(shí)，TGF-β 配體從相應(yīng)的復(fù)合物中解離出來，與細(xì)胞膜上的絲氨酸/蘇氨酸激酶即I 型受體（TGF-β type I receptor，TβR-I）和TβR-II 直接結(jié)合，或在其他輔助分子的作用下再與上述2 種受體結(jié)合。之后，TβRII 作用于TβR-I 近膜調(diào)控區(qū)，使之發(fā)生磷酸化，進(jìn)而引起受體調(diào)控型Smad（receptor-regulated Smad，R-Smad）進(jìn)行磷酸化反應(yīng)，最后磷酸化的R-Smad 與Smad3 形成復(fù)合體入核并調(diào)控相應(yīng)基因的表達(dá)[10]。

黃酮類成分對(duì)肝臟具有獨(dú)特的保護(hù)作用，可緩解肝纖維化的發(fā)生[14-15]，其中芹菜素是女貞子中主要的黃酮類成分，其還存在于柑橘類水果、歐芹和芹菜葉等植物中[16]。在CCl4和膽管結(jié)扎的肝纖維化動(dòng)物疾病模型中，芹菜素可下調(diào)TGF-β1、Smad3、p-Smad3 的表達(dá)，說明芹菜素可抑制TGF-β1/Smad3通路；通過測(cè)定血清中的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase，AST）水平，及蘇木精-伊紅和Masson 染色，發(fā)現(xiàn)芹菜素可顯著改善肝細(xì)胞的排列紊亂，纖維組織增生和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，可見芹菜素對(duì)肝纖維化有一定的治療作用，可能與抑制TGF-β1/Smad3 通路有關(guān)[17]。此外，女貞子中的木犀草素、槲皮素和花旗松素等其他一些黃酮類成分也可通過該通路發(fā)揮抗肝纖維化作用。其中，木犀草素廣泛存在于菊花、胡椒、洋蔥等多種植物中，是天然的四羥基黃酮類成分，其藥理作用廣泛，包括抗腫瘤、抗氧化等[18]。通過探究木犀草素影響HSC 增殖、激活等的相關(guān)機(jī)制，發(fā)現(xiàn)其可以顯著抑制Smad2 和Smad3 的磷酸化，表明木犀草素可以抑制TGF-β1/Smad3 通路，具有抗肝纖維化的潛力[19]。槲皮素也是一種廣泛存在于多種植物的黃酮類化合物，具有抗氧化、抗炎等多種功能[20]。同樣，槲皮素也可顯著降低血清中TGF-β1、p-Smad2和p-Smad3 的水平；免疫組織化學(xué)染色顯示，經(jīng)槲皮素處理后肝臟組織中TGF-β1、p-Smad2 和p-Smad3 的表達(dá)水平顯著下降，提示槲皮素對(duì)TGFβ1/Smad3 通路具有抑制作用[21]。此外，通過檢測(cè)肝纖維化小鼠模型肝臟中的AST 和ALT，發(fā)現(xiàn)槲皮素可降低AST、ALT 水平，減輕肝纖維化的發(fā)展程度。以上結(jié)果提示，槲皮素可通過TGF-β1/Smad3 通路抑制肝纖維化[21]。花旗松素存在于長(zhǎng)白落葉松、黃芪、洋蔥等諸多植物中，具有4 個(gè)酚羥基和1 個(gè)羥基，由于這種特殊的化學(xué)結(jié)構(gòu)，使其成為最強(qiáng)效的天然抗氧化劑，具有抗氧化應(yīng)激、保肝等多種藥理作用[22]。通過探究花旗松素保肝作用及其分子機(jī)制，發(fā)現(xiàn)相較于CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化模型組，花旗松素20、40、80 mg/kg 處理組中TGF-β1、α-SMA的mRNA 及蛋白水平顯著下調(diào)，且40、80 mg/kg 劑量組中Smad3 的蛋白水平也呈下調(diào)趨勢(shì)[23]，表明花旗松素可以通過抑制TGF-β1/Smad3 信號(hào)通路抑制HSC 的活化，從而發(fā)揮抗肝纖維化作用。

苯乙醇苷類化合物為一類天然糖苷類化合物。到目前為止，已從女貞子中分離出了18 種苯乙醇苷類化合物，如紅景天苷和松果菊苷等[7]。其中，松果菊苷由糖基、苯丙烯基和苯乙醇基構(gòu)成，大量存在于松果菊屬植物的根莖中，具有保肝、抗腫瘤、消炎等作用[24]。研究發(fā)現(xiàn)，松果菊苷可下調(diào)Smad2、Smad3 的表達(dá)及其磷酸化水平，同時(shí)上調(diào)Smad7 的表達(dá)，提示松果菊苷通過抑制TGF-β/Smad 信號(hào)通路，具有調(diào)節(jié)HSC 活化的潛在功能[25]。紅景天苷作為女貞子中主要藥效成分之一，其藥理作用十分廣泛，具有保肝、抗腫瘤、抗氧化應(yīng)激等功能[26]。紅景天苷可通過下調(diào)HSC 中TGF-β1 的表達(dá)抑制TGF-β/Smad 信號(hào)通路，影響HSC 的激活和自噬，導(dǎo)致ECM 合成下降，促進(jìn)失衡的MMP2 和TIMP1恢復(fù)正常[9]。岳學(xué)良[27]通過研究紅景天苷對(duì)CCl4誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化模型的影響，發(fā)現(xiàn)其可有效緩解肝纖維化，且與模型組相比，紅景天苷20、40 mg/kg組的肝組織中TGF-β 及Smad3 的表達(dá)量均顯著下調(diào)，提示紅景天苷可能通過TGF-β/Smad3 信號(hào)通路抑制肝纖維化發(fā)生。

女貞子中還含有一些環(huán)烯醚萜類和三萜類化合物，可能通過TGF-β/Smad 信號(hào)通路發(fā)揮潛在的抗肝纖維化作用。女貞苷是女貞子中具有多種藥理作用的環(huán)烯醚萜類物質(zhì)活性成分[28]。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，女貞苷可以降低肝纖維化小鼠的肝臟指數(shù)，下調(diào)肝臟ALT、AST 的表達(dá)，說明女貞苷可以有效改善CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化中的肝損傷程度。同時(shí)，女貞苷也可降低肝臟HSC 中I 型膠原蛋白、α-SMA，及TβR-I、TβR-II、p-Smad2、p-Smad3 和Smad4 的表達(dá)。這些研究結(jié)果提示，女貞苷可能通過TGF-β/Smad 信號(hào)通路緩解肝纖維化[29]。委陵菜酸是一種五環(huán)三萜化合物，廣泛存在于薔薇科、紫草科植物中，具有保肝、消炎鎮(zhèn)痛、抗氧化等多種藥理活性[30]。研究表明，委陵菜酸不僅可顯著抑制HSC 的活化，而且還能顯著下調(diào)Smad4 的表達(dá)，提示委陵菜酸可能通過TGF-β/Smad 信號(hào)通路調(diào)節(jié)HSC 的活化[31]。

2.2 NOX4/活性氧信號(hào)通路的調(diào)節(jié)機(jī)制

NOX4 是NOX 中的一員。NOX 是由6 種蛋白質(zhì)亞基（gp91phox、p22phox、p47phox、p40phox、p67phox和小GTP 連接酶Rac）組成的復(fù)合體[32-33]，主要存在于吞噬細(xì)胞的胞質(zhì)及細(xì)胞膜上，其產(chǎn)生的活性氧可引起強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)，起到清除病原的作用；非吞噬細(xì)胞中的NOX 同樣也可產(chǎn)生活性氧，但其作用主要是調(diào)控細(xì)胞凋亡、增殖等[34]。在肝損傷過程中，NOX4 通過誘導(dǎo)p22phox亞基的表達(dá)促進(jìn)活性氧的合成，進(jìn)而激活酪氨酸蛋白激酶，引發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)[35]；肝細(xì)胞中高濃度的活性氧能抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶，誘發(fā)細(xì)胞凋亡[36]。此外，NOX4 還參與HSC 的增殖和凋亡，并在肌成纖維細(xì)胞的遷移過程中發(fā)揮重要功能[37]。

熊果酸是女貞子中的一種三萜類化合物，具有保肝、調(diào)節(jié)血脂、抗骨骼肌萎縮等多種藥理作用[38]。研究發(fā)現(xiàn)，熊果酸可抑制HSC 中NOX4 的表達(dá)，緩解肝組織的氧化應(yīng)激反應(yīng)。并且，熊果酸還可抑制HSC 的活化及肝細(xì)胞的凋亡[39]?？赡苁峭ㄟ^抑制促肝纖維化因子血管緊張素II（angiogenin II，AngII）引起的NOX 活化，進(jìn)而抑制HSC 的增殖及I 型膠原蛋白合成實(shí)現(xiàn)的[40-41]。這些研究結(jié)果表明，熊果酸可通過NOX4/活性氧信號(hào)通路逆轉(zhuǎn)肝纖維化發(fā)生。

羥基酪醇為苯乙醇苷類化合物，也是女貞子中的有效成分之一，其為木犀科植物中以酯類形式存在的天然多酚化合物，具有抗氧化活性[42]。酪醇和羥基酪醇均能顯著下調(diào)NOX4 的表達(dá)，抑制HSC 的活化，從而發(fā)揮抗肝纖維化作用[43]。

2.3 PI3K/Akt 信號(hào)通路的調(diào)節(jié)機(jī)制

PI3K 是位于PI3K/Akt 信號(hào)通路上游的重要分子，其激活后可將磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate，PIP2）磷酸化為 PIP3[44]。 在磷酸肌醇依賴性蛋白激酶（phosphoinositide-dependent protein kinase，PDK）的作用下，PIP3 將Akt 募集到質(zhì)膜上并使之發(fā)生磷酸化，從而激活A(yù)kt[45]，正向調(diào)控細(xì)胞周期，促進(jìn)HSC的活化增殖及膠原蛋白的合成，進(jìn)而導(dǎo)致肝纖維化發(fā)生[46]。

女貞子中的熊果酸和委陵菜酸可通過PI3K/Akt 信號(hào)通路發(fā)揮抗肝纖維化功能。研究發(fā)現(xiàn)，大鼠肝星狀HSC-T6 細(xì)胞經(jīng)AngII 刺激后，PI3K/Akt信號(hào)通路相關(guān)蛋白（PI3K、p-Akt、p-p38 和MAPK）的表達(dá)明顯升高，說明AngII 可以激活PI3K/Akt 信號(hào)通路。與AngII 組相比，熊果酸＋AngII 組中PI3K/Akt 信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)及I 型膠原蛋白mRNA 的水平顯著下降，同時(shí)HSC 的活化增殖程度也顯著降低，提示熊果酸可通過PI3K/Akt 信號(hào)通路抑制HSC 活化增殖，使I 型膠原蛋白合成減少，從而緩解肝纖維化[40]。與熊果酸相似，委陵菜酸也可顯著下調(diào)HSC 中PI3K/Akt/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）信號(hào)通路相關(guān)蛋白p-PI3K、p-Akt、p-mTOR 和磷酸化黏著斑激酶的表達(dá)水平，提示委陵菜酸可通過PI3K/Akt/mTOR 信號(hào)通路調(diào)節(jié)肝纖維化[47]。

女貞子中的黃酮類化合物芹菜素、槲皮素和花旗松素同樣也可通過PI3K/Akt 信號(hào)通路發(fā)揮抗肝纖維化功能[21,23,48]。其中，芹菜素能夠緩解肝纖維化小鼠的肝臟損傷程度，減輕其病理變化，同時(shí)對(duì)上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化也具有明顯的抑制作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，芹菜素可顯著抑制p-PDK1 和p-Akt 表達(dá)水平，提示芹菜素的抗纖維化作用可能是通過抑制PDK1/Akt 信號(hào)通路而實(shí)現(xiàn)的[48]。同樣，槲皮素也能有效降低血清中p-PI3K、p-Akt 及肝臟組織中p-Akt 的表達(dá)；在小鼠肝纖維化模型中，槲皮素可抑制HSC 活化、促進(jìn)ECM 降解，提示槲皮素對(duì)肝纖維化的抑制作用可能與PI3K/Akt 通路密切相關(guān)[21]。

2.4 p38 MAPK 信號(hào)通路的調(diào)節(jié)機(jī)制

MAPK 是一種分布于胞漿中的蛋白激酶，作為MAPK 家族中的重要一員[49]，具有對(duì)絲氨酸和酪氨酸雙重磷酸化的能力，可通過結(jié)合膜受體及調(diào)控胞內(nèi)因子參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，最終以保守的三級(jí)激酶級(jí)聯(lián)形式激活并參與肝纖維化等多種疾病的發(fā)生[50]。研究證明，p38 MAPK 的表達(dá)可以促進(jìn)HSC 的活化，加快肝纖維化發(fā)展進(jìn)程。并且，HSC 活化程度越高，p-p38 MAPK 水平也越高；在阻斷p38 MAPK 信號(hào)通路后，HSC 活化程度顯著降低[19,51]。

女貞子中白樺脂醇屬于三萜類化合物，具有抗艾滋病、抗腫瘤等活性。白樺脂醇是p38 MAPK 信號(hào)通路的抑制劑，可顯著降低乙醇誘導(dǎo)的 p38 MAPK 磷酸化水平[52]，但其是否具有抗肝纖維化的功能仍需實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確定。女貞子中的另1 種三萜類化合物也具有類似的作用：在HSC-T6 細(xì)胞中，熊果酸可以抑制瘦素誘導(dǎo)的p-p38 MAPK 水平，其抑制效果與p38 MAPK 抑制劑SB203580 相似[53]，提示熊果酸可負(fù)調(diào)節(jié)p38 MAPK 信號(hào)通路，進(jìn)而發(fā)揮抗肝纖維化的作用。

橄欖苦苷是女貞子中一種具有天然裂環(huán)烯醚萜苷骨架的多酚化合物，具有抗癌、抗氧化、抗炎等活性[54]。利用肝纖維化小鼠模型發(fā)現(xiàn)，橄欖苦苷具有減輕肝臟病理?yè)p傷的作用，并且與對(duì)照組相比，橄欖苦苷組的肝組織中p38 磷酸化水平和轉(zhuǎn)錄因子ETS 結(jié)構(gòu)域蛋白（transcription factor ETS domaincontaining protein，ELK-3）蛋白表達(dá)顯著下調(diào)[55]，表明橄欖苦苷可能通過p38 MAPK/ELK-3 信號(hào)通路參與調(diào)節(jié)肝纖維化發(fā)生。

槲皮素作為女貞子中的一種黃酮類化合物，其抗肝纖維化作用較為復(fù)雜[21,56]。除TGF-β/Smad 和PI3K/Akt 信號(hào)通路外，槲皮素還可通過p38 MAPK信號(hào)通路調(diào)控肝纖維化[57]。

2.5 JAK/STAT 信號(hào)通路的調(diào)節(jié)機(jī)制

JAK 是主要分布在細(xì)胞膜表面的一類蛋白激酶，參與細(xì)胞因子受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，處于JAK/STAT 信號(hào)通路中的上游，其家族成員有JAK1、JAK2、JAK3、TYK2 等[58]。STAT 是一類具有信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活功能的胞漿蛋白，作為JAK 的底物，發(fā)揮信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能，可將信號(hào)從上游傳遞入核，調(diào)控相應(yīng)基因的表達(dá)。目前，STAT 家族成員共有7個(gè)：STAT1～4、STAT5a、STAT5b 和STAT6[59]。在肝纖維化發(fā)生過程中，JAK/STAT 信號(hào)通路發(fā)揮著重要作用[60]。肝纖維化相關(guān)分子，如瘦素、α 干擾素、白細(xì)胞介素-4（interleukin-4，IL-4）等，在與HSC細(xì)胞膜上的特異性受體結(jié)合后，會(huì)激活胞內(nèi)JAK/STAT 信號(hào)通路，逐步將信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)入核，調(diào)控相關(guān)靶基因的表達(dá)[60]。

瘦素是引起肝纖維化的一類重要因子，可激活JAK2/STAT3 信號(hào)通路。但經(jīng)熊果酸處理后，瘦素激活的HSC 中的p-JAK2 和p-STAT3 表達(dá)水平會(huì)顯著下降，且與JAK 抑制劑AG490 相比，二者的抑制效果相近[61]，提示熊果酸能抑制瘦素誘導(dǎo)的JAK2/STAT3 信號(hào)通路的激活，具有潛在的抗肝纖維化功能。與熊果酸相似，木犀草素也可呈劑量相關(guān)性顯著降低p-STAT3 水平，提示其抗肝纖維化功能可通過抑制STAT 信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)[62]。

2.6 NF-κB 信號(hào)通路的調(diào)節(jié)機(jī)制

NF-κB 在機(jī)體正?；蚧疾顟B(tài)下均可表達(dá)，參與多種轉(zhuǎn)錄調(diào)控，在肝纖維化發(fā)生過程中具有重要作用。Rel 蛋白質(zhì)家族是一類與NF-κB 結(jié)構(gòu)相關(guān)的蛋白，包括p50、p52、p65、RelB 和c-Rel，能夠入核與相應(yīng)靶基因結(jié)合，發(fā)揮調(diào)控作用[63]。在肝纖維化發(fā)生過程中，庫(kù)普弗細(xì)胞通過NF-κB 信號(hào)通路合成各種炎性因子，不斷激活HSC，同時(shí)抑制激活的HSC 發(fā)生凋亡，促進(jìn)肝纖維化進(jìn)一步發(fā)展[64]。

在女貞子中，一些三萜類化合物可通過NF-κB信號(hào)通路調(diào)節(jié)肝纖維化發(fā)生，包括熊果酸、委陵菜酸、白樺脂醇和白樺脂酸等。其中，熊果酸可通過抑制NOX 的激活，下調(diào)NF-κB 的活性，從而降低HSC 細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化及ECM 的合成，減緩肝纖維化進(jìn)程[65]。與熊果酸不同，委陵菜酸則是通過下調(diào)NF-κB 信號(hào)通路相關(guān)蛋白p-p65、p-IκB-α 和p-IKKα/β 磷酸化水平，抑制NF-κB 信號(hào)通路，促進(jìn)HSC 的凋亡，抑制ECM 的產(chǎn)生與沉積[66-67]。同樣，白樺脂醇和白樺脂酸也可下調(diào)NF-κB 及p-IκBα 的水平，抑制HSC 的活化，說明白樺脂醇和白樺脂酸也可通過抑制NF-κB 信號(hào)通路在肝纖維化發(fā)生過程中發(fā)揮作用[52]。

此外，還有某些黃酮類、苯乙醇苷類化合物同樣可以通過該通路發(fā)揮抗肝纖維化功能，包括槲皮素[56]、紅景天苷[68]等。

3 結(jié)語(yǔ)與展望

自“禁抗令”實(shí)施以來，中藥因無明顯的不良反應(yīng)、來源廣泛、易獲得、藥理作用廣等優(yōu)點(diǎn)受到人們的廣泛關(guān)注，其替代抗生素已然成為了一種趨勢(shì)。本文基于在肝纖維化發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用的信號(hào)通路，包括TGF-β/Smad、NOX4/活性氧、PI3K/Akt、p38 MAPK、JAK/STAT 和NF-κB 等，對(duì)女貞子活性成分的抗肝纖維化作用機(jī)制進(jìn)行歸納總結(jié)（圖1）。熊果酸、芹菜素、槲皮素和花旗松素等各種女貞子中的活性成分，可通過以上一種或多種信號(hào)通路抑制HSC 活化增殖與肌成纖維細(xì)胞形成、調(diào)節(jié)HSC 細(xì)胞凋亡、維持MMP 和TIMP 間的平衡等，減少ECM 合成，發(fā)揮抗肝纖維化功能。

圖1 女貞子活性成分抗肝纖維化的作用機(jī)制Fig. 1 Mechanisms of anti-fibrosis by active ingredients of Ligustri Lucidi Fructus

女貞子中的一些活性成分可通過多種信號(hào)通路參與調(diào)控肝纖維化發(fā)生，如花旗松素可通過PI3K/Akt/mTOR 和TGF-β/Smad 信號(hào)通路發(fā)揮抗肝纖維化作用，紅景天苷可通過TGF-β/Smad 和NF-κB 信號(hào)通路發(fā)揮抗肝纖維化作用，但這些信號(hào)通路間是如何互相協(xié)調(diào)發(fā)揮作用，不同活性成分通過同種信號(hào)通路發(fā)揮作用時(shí)是否存在競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系，是后續(xù)需要深入研究的內(nèi)容。再者，對(duì)于肝纖維化病理模型而言，常用的建模方法主要為4 類：化學(xué)藥物注射法、特殊飲食飼喂法、遺傳修飾法、手術(shù)法[69]。其中CCl4皮下注射法因便捷、低廉、易于重復(fù)等優(yōu)勢(shì)而被廣泛應(yīng)用，但嚙齒類動(dòng)物對(duì)CCl4的毒性敏感，在造模過程中極易因劑量過大而引起動(dòng)物死亡，需根據(jù)動(dòng)物種類、體質(zhì)量等因素斟酌用藥劑量、配比、給藥頻率及給藥時(shí)間。目前中藥單體或復(fù)方抗肝纖維化的作用研究大多采用CCl4皮下注射建模，病因較單一，但在臨床上肝纖維化的病因卻多種多樣，因此在解析女貞子等中草藥抗肝纖維化的作用機(jī)制時(shí)，利用CCl4肝纖維化模型是否合適也需進(jìn)一步商榷。此外，女貞子中還存在一些未解析的物質(zhì)，這些物質(zhì)與已知物質(zhì)是否存在協(xié)同或拮抗作用，仍需要深入研究。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突