王琳瑋 趙小博 王 靖 蔣林樹

(北京農(nóng)學(xué)院,奶牛營養(yǎng)學(xué)北京重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 102206)

黃酮類化合物(flavonoids,FLAs)作為一種天然植物功能組分,具有抗菌、抗炎、抗氧化、增強(qiáng)免疫力、改善機(jī)體健康等多種生物學(xué)特征[1-3]。在畜牧行業(yè)中,FLAs作為飼料添加劑在改善反芻動物生產(chǎn)性能和機(jī)體免疫的應(yīng)用中具有巨大潛力[4-7]。但飼糧中添加FLAs的研究重復(fù)性較少,缺乏系統(tǒng)性評價。研究表明,在飼糧中添加FLAs可降低奶牛腹瀉的發(fā)生率,但在改善奶牛代謝和生長性能方面卻沒有顯著效果[8-9]。Liu等[10]研究發(fā)現(xiàn),在飼糧中添加FLAs可顯著提高奶牛的產(chǎn)奶量和乳脂率。而郭玉新[11]研究發(fā)現(xiàn),FLAs雖能夠提高奶牛的奶產(chǎn)量,但對乳蛋白率和乳脂率沒有顯著影響。也有研究并未觀察到添加FLAs對奶牛產(chǎn)奶量及乳成分產(chǎn)生影響[12]。在FLAs對奶牛血清免疫指標(biāo)的影響方面,有研究表明,提取自大豆的FLAs可以增加奶牛血清和乳汁中免疫球蛋白A(IgA)含量[13],而提取自蜂膠的FLAs則會降低奶牛血清中免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白M(IgM)含量[14]。由此可見,由于試驗(yàn)條件、試驗(yàn)動物個體差異、飼糧組成以及添加FLAs的種類、飼喂時長、添加劑量等條件差異,所得的研究結(jié)果并不一致。采用傳統(tǒng)的文獻(xiàn)定性分析方法很難準(zhǔn)確地評價奶牛飼糧中添加FLAs的影響,難以揭示FLAs對奶牛生產(chǎn)性能及血清免疫指標(biāo)的影響。

Meta分析作為一種可以對前人發(fā)表的一系列研究的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行收集、合并和統(tǒng)計的定量分析方法[15],在動物科學(xué)領(lǐng)域,尤其是動物營養(yǎng)學(xué)方向逐漸被接受和應(yīng)用[16],但在研究天然植物飼料添加劑對反芻動物影響方面的應(yīng)用較少[17]。因此,本文搜集了2000年至今國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn),旨在通過Meta分析方法,系統(tǒng)地評價FLAs對奶牛生產(chǎn)性能及血清免疫指標(biāo)的影響,同時進(jìn)行敏感性分析(sensitivity analysis)和亞組分析(sub-group analysis),比較FLAs的不同種類、不同飼喂時長、不同添加劑量的作用效果,以期為FLAs在奶牛生產(chǎn)中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 文獻(xiàn)檢索

為確保Meta分析質(zhì)量、減少發(fā)表偏倚,本研究遵循Moher等[18]提出的《系統(tǒng)評價和Meta分析首選報告項(xiàng)目》,通過計算機(jī)檢索從2000年1月至2023年6月發(fā)表在Web of Science、PubMed、Scopus、中國知網(wǎng)(CNKI)、維普(CQVIP)、萬方(Wanfang)等數(shù)據(jù)庫中FLAs對奶牛生產(chǎn)性能及血清免疫指標(biāo)影響的相關(guān)文獻(xiàn)。在數(shù)據(jù)庫中的檢索關(guān)鍵詞如下:奶牛(dairy cattle or dairy cow)、黃酮(flavonoids)、大豆黃酮(daidzein)、柚皮苷(naringin)、葛根素(puerarin)、花青素(anthocyanin)、槲皮素(quercetin)[19]、生產(chǎn)性能(production performance)、產(chǎn)奶量(milk yield)、乳成分(milk component or milk composition)、免疫指標(biāo)(immune indexes or immune indices)。檢索策略如表1所示。

1.2 文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn):1)研究主題為FLAs對奶牛生產(chǎn)性能和血清免疫指標(biāo)的影響;2)已發(fā)表的隨機(jī)對照試驗(yàn)且試驗(yàn)對象均為處于泌乳期的健康荷斯坦奶牛;3)試驗(yàn)飼糧中不含抗生素等其他添加劑;4)研究結(jié)果中包含奶牛生產(chǎn)性能、血清免疫指標(biāo)數(shù)據(jù),包括試驗(yàn)組和對照組的樣本量、平均值、標(biāo)準(zhǔn)差(standard deviation,SD)或標(biāo)準(zhǔn)誤(standard error,SE)。

1.3 文獻(xiàn)排除標(biāo)準(zhǔn)

排除標(biāo)準(zhǔn):1)綜述性研究、會議和論文摘要等非試驗(yàn)性文章;2)重復(fù)發(fā)表和使用同次試驗(yàn)數(shù)據(jù)的文章;3)處于應(yīng)激或攻毒等狀態(tài)下的健康狀況異常的荷斯坦奶牛;4)試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)不完整的研究,如缺失平均值、標(biāo)準(zhǔn)差、標(biāo)準(zhǔn)誤等關(guān)鍵數(shù)據(jù)或通過換算仍無法得到數(shù)據(jù)的研究;5)非中文和英文文獻(xiàn)。

1.4 文獻(xiàn)篩選和數(shù)據(jù)提取

首先對文獻(xiàn)進(jìn)行初步篩選。通過閱讀題目與摘要,剔除與納入標(biāo)準(zhǔn)不相符的研究,隨后進(jìn)行全文閱讀,再剔除數(shù)據(jù)不完整的研究,最后將確定納入的研究進(jìn)行數(shù)據(jù)提取。

每個研究提取的數(shù)據(jù)包括:1)第一作者姓名、文獻(xiàn)發(fā)表時間和發(fā)表國家;2)試驗(yàn)動物數(shù)量;3)試驗(yàn)周期;4)添加FLAs的種類;5)對照組和試驗(yàn)組的FLAs添加劑量;6)飼糧組成;7)測定指標(biāo):奶牛產(chǎn)奶量、乳成分、血清免疫球蛋白含量;8)測定指標(biāo)數(shù)據(jù)(試驗(yàn)樣本量或重復(fù)次數(shù)、平均值、標(biāo)準(zhǔn)差或標(biāo)準(zhǔn)誤)。

數(shù)據(jù)處理時,默認(rèn)數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布,分析方法均為參數(shù)檢驗(yàn)。若同一研究中含有2個及以上的試驗(yàn)組采用不同添加劑量或不同飼喂周期,則將各試驗(yàn)組的信息進(jìn)行合并處理[20]。若文獻(xiàn)中未給出標(biāo)準(zhǔn)差,則通過聯(lián)系文章作者以請求得到原始數(shù)據(jù),或通過標(biāo)準(zhǔn)誤、P值、t值或置信區(qū)間(confidence interval,CI)估算標(biāo)準(zhǔn)差[21]。標(biāo)準(zhǔn)差估算具體計算公式如下:

式中:SD為標(biāo)準(zhǔn)差;SE為標(biāo)準(zhǔn)誤;MD為均值差;N為試驗(yàn)樣本量或重復(fù)次數(shù);t為t統(tǒng)計量的值(若已知P值和各組樣本量,可通過查t界值表獲得相應(yīng)的t值),CI為置信區(qū)間。

亞組數(shù)據(jù)計算公式如下:

式中:SD為標(biāo)準(zhǔn)差;SD1、SD2分別為A、B 2個亞組的標(biāo)準(zhǔn)差;N1、N2分別為A、B 2個亞組的樣本量;M1、M2分別為A、B 2個亞組的平均值。如果有多個亞組的數(shù)據(jù)需要合并,可以按照上述公式,將其中2個亞組的數(shù)據(jù)進(jìn)行合并,再將得到的數(shù)據(jù)與第3個亞組進(jìn)行合并,以此類推。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

使用Excel 2013表格工具進(jìn)行數(shù)據(jù)的錄入與換算,使用Review Manager 5.4與Stata/MP 17.0軟件進(jìn)行Meta分析。由于不同研究間結(jié)局指標(biāo)的測量方法、測量單位并不一致,所以本研究采用標(biāo)準(zhǔn)均值差(standardized mean difference,SMD)作為效應(yīng)尺度指標(biāo)(effect-size indices,ESI)。各效應(yīng)量均以95%CI表示,將0值作為無效值。

使用P值和I2表示異質(zhì)性檢驗(yàn)的結(jié)果,當(dāng)P<0.10時,表明研究存在異質(zhì)性,I2可對異質(zhì)性大小進(jìn)行定量分析,當(dāng)I2>50%時,說明異質(zhì)性顯著,反之則不顯著,I2值越大則表明研究間的異質(zhì)性越大。本研究采用隨機(jī)效應(yīng)模型(randomized effect model,REM)計算合并統(tǒng)計量,當(dāng)納入的文獻(xiàn)少于5篇時則采用固定效應(yīng)模型(fixed effect model,FEM)[22]。在合并效應(yīng)量的檢驗(yàn)(test for overall effect)中,若P≤0.05,則說明多個研究的合并統(tǒng)計量具有統(tǒng)計學(xué)意義。

分析結(jié)果用森林圖進(jìn)行描述,并進(jìn)行敏感性分析以確定結(jié)果是否穩(wěn)健,通過對結(jié)果進(jìn)行亞組分析,以探究異質(zhì)性來源或亞組因素與結(jié)論的相關(guān)性。如果研究個數(shù)超過10個,需進(jìn)行發(fā)表偏倚分析(publication bias analysis),通過繪制漏斗圖以檢驗(yàn)納入文獻(xiàn)的發(fā)表偏倚[23],文獻(xiàn)是否存在實(shí)質(zhì)的偏倚與漏斗圖的對稱性有關(guān)。

2 結(jié)果與分析

2.1 文獻(xiàn)檢索與篩選

本研究通過閱讀文獻(xiàn)題目和摘要后從3個中文數(shù)據(jù)庫(CNKI、CQVIP、Wanfang)、3個英文數(shù)據(jù)庫(Web of Science、PubMed、Scopus)中共檢索文獻(xiàn)620篇,無其他來源的研究。去重后得到文獻(xiàn)587篇,根據(jù)篩選標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步剔除后,對62篇文獻(xiàn)進(jìn)行全文閱讀,最后共有16篇納入Meta分析,篩選流程如圖1所示。

圖1 Meta分析文獻(xiàn)篩選流程圖

2.2 納入文獻(xiàn)的基本特征

本研究納入的16篇文獻(xiàn)中,有10篇中文文獻(xiàn)和6篇英文文獻(xiàn),分別來自中國(13篇)、德國(2篇)、巴西(1篇)。試驗(yàn)研究對象均為泌乳期的健康荷斯坦奶牛,共計300頭。對照組為空白組,試驗(yàn)組均為在基礎(chǔ)飼糧中添加FLAs,以全混合日糧(total mixed ration,TMR)形式飼喂。16篇研究中涉及了10種不同種類的FLAs。在試驗(yàn)設(shè)計方法的選擇上,12篇研究采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計,4篇研究采用拉丁方設(shè)計。所納入的結(jié)局指標(biāo)有:產(chǎn)奶量、乳脂率、乳蛋白率、乳糖率、體細(xì)胞數(shù)、IgA含量、IgG含量、IgM含量。納入研究的基本特征如表2所示。

2.3 結(jié)局指標(biāo)的Meta分析

2.3.1 添加FLAs對奶牛產(chǎn)奶量影響的森林圖、敏感性分析及亞組分析

所納入的16篇文獻(xiàn)中,均報道了添加FLAs對奶牛產(chǎn)奶量的影響。使用Review Manager 5.4軟件繪制森林圖,如圖2所示,結(jié)果表明,納入的研究間存在異質(zhì)性,但異質(zhì)性不顯著[P=0.04<0.10,自由度(df)=15,I2=43%<50%],奶牛產(chǎn)奶量與添加FLAs具有相關(guān)性(SMD=0.75,95%CI:0.37～1.12,P<0.000 1)。

Experimental:試驗(yàn)組 experimental group;Control:對照組 control group;Std. Mean Difference:標(biāo)準(zhǔn)均值差 standardized mean difference;Study or Subgroup:研究或亞組 study or subgroup;Mean:平均值;SD:標(biāo)準(zhǔn)差 standard deviation;Total:樣本數(shù) sample number;Weight:權(quán)重;IV:逆方差 inverse variance;Random:隨機(jī);95%CI:95%置信區(qū)間 95% confidence interval;Heterogeneity:異質(zhì)性;df:自由度 degree of freedom;Test for overall effect:合并效應(yīng)量的檢驗(yàn);Favours [experimental]:試驗(yàn)組獲益;Favours [control]:對照組獲益。圖7、圖12、圖17、圖22、圖27、圖30、圖35同 the same as Fig.7, Fig.12, Fig.17, Fig.22, Fig.27, Fig.30 and Fig.35。

本研究采用逐一剔除文獻(xiàn)的方法進(jìn)行敏感性分析。使用Stata/MP 17.0軟件繪制敏感性分析圖,如圖3所示,可知在剔除任一個研究后的合并效應(yīng)量的點(diǎn)估計仍落在總的合并效應(yīng)量95%CI內(nèi),說明本項(xiàng)結(jié)局指標(biāo)的合并結(jié)果是穩(wěn)健的。

Meta-analysis estimates, given named study is omitted:Meta分析中忽略敏感分析圖命名;Lower CI Limit:置信區(qū)間下限 lower limit of confidence interval;Estimate:估計值 estimated value;Upper CI Limit:置信區(qū)間上限 upper limit of confidence interval。圖8、圖13、圖18、圖23、圖28、圖31、圖36同 the same as Fig.8, Fig.13, Fig.18, Fig.23, Fig.28, Fig.31 and Fig.36。

為進(jìn)一步探究異質(zhì)性來源或亞組因素與結(jié)論的相關(guān)性,分別根據(jù)FLAs種類、飼喂時長和添加劑量作亞組分析,使用Stata/MP 17.0軟件繪制亞組分析圖。

對不同種類FLAs的亞組分析結(jié)果如圖4所示。將納入文獻(xiàn)中涉及的11種FLAs按照不同種類分為3個亞組:槲皮素亞組(Quercetin亞組)、大豆黃酮亞組(Daidzein亞組)與混合物亞組(Blend亞組),將所納入研究中的2篇研究納入Quercetin亞組,包括蘆丁、槲皮素;7篇研究納入Daidzein亞組,包括大豆黃酮與大豆異黃酮;7篇研究納入Blend亞組,包括沙棘黃酮、竹葉提取物、辣木葉黃酮、柑橘黃酮、綠茶提取物、苜蓿黃銅與蜂膠提取物。結(jié)果顯示,Quercetin亞組I2=0,P=0.892;Blend亞組I2=38.9%,P=0.133;Daidzein亞組I2=18.0%,P=0.292,3個亞組的異質(zhì)性均不顯著且低于42.7%,說明FLAs的不同種類可能是異質(zhì)性來源之一。結(jié)果表明,在飼糧中添加的FLAs的主效成分為大豆黃酮或槲皮素時可提高奶牛產(chǎn)奶量(Quercetin亞組:SMD=1.58,95%CI:0.50～2.66;Blend亞組:SMD=0.33,95%CI:-0.18～0.85;Daidzein亞組:SMD=0.98,95%CI:0.52～1.44;組間異質(zhì)性:P=0.058)。

Subgroup and study:亞組和研究;Effect:影響;95%CI:95%置信區(qū)間 95% confidence interval;Weight:權(quán)重;Quercetin:槲皮素亞組 quercetin subgroup;Blend:混合物亞組 blend subgroup;Daidzein:大豆黃酮亞組 daidzein subgroup;Subgroup:亞組;Heterogeneity between groups:組間異質(zhì)性;Overall:總體;DL:Dersimonian-Laird隨機(jī)效應(yīng)模型 Dersimonian-Laird random effect model。圖9、圖14、圖19、圖24、圖32同 the same as Fig.9, Fig.14, Fig.19, Fig.24 and Fig.32。

對FLAs不同飼喂時長的亞組分析結(jié)果如圖5所示。分為飼喂時長<30 d亞組和飼喂時長≥30 d亞組。結(jié)果顯示,飼喂時長<30 d亞組I2=0,P=0.523;飼喂時長≥30 d亞組I2=64.8%,P=0.006。飼喂時長≥30 d亞組的異質(zhì)性顯著,說明FLAs的不同飼喂時長不是異質(zhì)性的來源。結(jié)果表明,以不同時長飼喂奶牛FLAs都可提高奶牛的產(chǎn)奶量,且飼喂時長≥30 d的效果更佳(飼喂時長<30 d亞組:SMD=0.71,95%CI:0.31～1.10;飼喂時長≥30 d亞組:SMD=0.77,95%CI:0.13～1.42;組間異質(zhì)性:P=0.864)。

Subgroup and study:亞組和研究;Effect:影響;95%CI:95%置信區(qū)間 95% confidence interval;Weight:權(quán)重;<30d:飼喂時長<30 d亞組 feeding time <30 d subgroup;≥30d:飼喂時長≥30 d亞組 feeding time≥30 d subgroup;Subgroup:亞組;Heterogeneity between groups:組間異質(zhì)性;Overall:總體;DL:Dersimonian-Laird隨機(jī)效應(yīng)模型 Dersimonian-Laird random effect model。圖10、圖15、圖20、圖25、圖33同 the same as Fig.10, Fig.15, Fig.20, Fig.25 and Fig.43。

對FLAs不同添加劑量的亞組分析結(jié)果如圖6所示,D1、D2、D3表示同一研究中FLAs的不同添加劑量。將各研究的試驗(yàn)組與對照組分為添加劑量<20 mg/kg亞組、添加劑量≥20 mg/kg且<50 mg/kg亞組、添加劑量≥50 mg/kg且<100 mg/kg亞組以及添加劑量≥100 mg/kg亞組。結(jié)果顯示,添加劑量<20 mg/kg亞組I2=0.3%,P=0.426;添加劑量≥20且<50 mg/kg亞組I2=61.4%,P=0.005;添加劑量≥50且<100 mg/kg亞組I2=8.3%,P=0.359;添加劑量≥100 mg/kg亞組I2=0,P=0.520。添加劑量≥20且<50mg/kg亞組的異質(zhì)性顯著,說明FLAs的不同添加劑量不是異質(zhì)性的來源。結(jié)果表明,以不同添加劑量飼喂奶牛FLAs都可提高奶牛的產(chǎn)奶量,其中添加劑量在20～50 mg/kg時效果更佳(添加劑量<20 mg/kg亞組:SMD=1.03,95%CI:0.60～1.46;添加劑量≥20且<50 mg/kg亞組:SMD=1.04,95%CI:0.38～1.70;添加劑量≥50且<100 mg/kg亞組:SMD=0.60,95%CI:0.07～1.13;添加劑量≥100 mg/kg亞組:SMD=0.61,95%CI:0.27～0.94;組間異質(zhì)性:P=0.344)。

Subgroup and study:亞組和研究;Effect:影響;95%CI:95%置信區(qū)間 95% confidence interval;Weight:權(quán)重;<20:添加劑量<20 mg/kg亞組 adding does <20 mg/kg subgroup;≥20,<50:添加劑量≥20 mg/kg且<50 mg/kg亞組 adding does ≥20 mg/kg and <50 mg/kg subgroup;≥50,<100:添加劑量≥50 mg/kg且<100 mg/kg亞組 adding does ≥50 mg/kg and <100 mg/kg subgroup;≥100:添加劑量≥100 mg/kg亞組 adding does ≥100 mg/kg subgroup;Heterogeneity between groups:組間異質(zhì)性;Overall:總體;DL:Dersimonian-Laird隨機(jī)效應(yīng)模型 Dersimonian-Laird random effect model;D1、D2、D3表示同一研究中FLAs的不同添加劑量 D1, D2 and D3 represent different adding does of FLAs in the same study。圖11、圖16、圖21、圖26、圖29、圖34、圖37同 the same as Fig.11, Fig.16, Fig.21, Fig.26, Fig.29, Fig.34, Fig.37。

2.3.2 添加FLAs對奶牛乳脂率影響的森林圖、敏感性分析及亞組分析

所納入的16篇文獻(xiàn)中,有15篇報道了添加FLAs對奶牛乳脂率的影響。如圖7所示,結(jié)果表明,納入的研究間存在異質(zhì)性且異質(zhì)性顯著(P<0.000 1,df=14,I2=78%>50%),添加FLAs的奶牛的乳脂率與對照組無顯著差異(SMD=-0.27,95%CI:-0.87～0.34,P=0.390 0)。

圖7 FLAs對奶牛乳脂率影響的森林圖

采用逐一剔除文獻(xiàn)的方法進(jìn)行敏感性分析。如圖8所示,可知在剔除任一個研究后的合并效應(yīng)量的點(diǎn)估計仍落在總的合并效應(yīng)量95%CI內(nèi),說明本項(xiàng)結(jié)局指標(biāo)的合并結(jié)果是穩(wěn)健的。

圖8 FLAs對奶牛乳脂率影響的敏感性分析圖

對不同種類FLAs的亞組分析結(jié)果如圖9所示。結(jié)果顯示,Quercetin亞組I2=65.7%,P=0.088;Blend亞組I2=72.2%,P=0.003;Daidzein亞組I2=84.7%,P<0.001。3個亞組的異質(zhì)性均顯著,說明FLAs種類不是異質(zhì)性的來源,且飼喂FLAs的種類對奶牛乳脂率的影響無統(tǒng)計學(xué)意義(Quercetin亞組:SMD=-1.05,95%CI:-2.84～0.74;Blend亞組:SMD=-0.06,95%CI:-0.86～0.73;Daidzein亞組:SMD=-0.29,95%CI:-1.37～0.79,組間異質(zhì)性:P<0.001)。

圖9 FLAs的不同種類對奶牛乳脂率影響的亞組分析圖

對FLAs不同飼喂時長的亞組分析結(jié)果如圖10所示。結(jié)果顯示,飼喂時長<30 d亞組I2=75.3%,P<0.001;飼喂時長≥30 d亞組I2=80.1%,P<0.001。2個亞組的異質(zhì)性均顯著,說明在飼喂FLAs情況下,不同飼喂時長不是異質(zhì)性的來源,且以飼喂FLAs的時長對奶牛乳脂率的影響無統(tǒng)計學(xué)意義(飼喂時長<30 d亞組:SMD=-0.01,95%CI:-0.87～0.85;飼喂時長≥30 d亞組:SMD=-0.49,95%CI:-1.36～0.39,組間異質(zhì)性:P<0.001)。

圖10 FLAs的不同飼喂時長對奶牛乳脂率影響的亞組分析圖

對FLAs不同添加劑量的亞組分析結(jié)果如圖11所示。結(jié)果顯示,添加劑量<20 mg/kg亞組I2=74.2%,P=0.001;添加劑量≥20且<50 mg/kg亞組I2=54.4%,P=0.020;添加劑量≥50且<100 mg/kg亞組I2=0,P=0.465;添加劑量≥100 mg/kg亞組I2=69.9%,P=0.001。3個亞組的異質(zhì)性顯著,說明FLAs的不同添加劑量不是異質(zhì)性的來源,且FLAs的添加劑量對奶牛乳脂率的影響無統(tǒng)計學(xué)意義(添加劑量<20 mg/kg亞組:SMD=-0.60,95%CI:-1.50～0.29;添加劑量≥20且<50 mg/kg亞組:SMD=-0.54,95%CI:-1.09～0.01;添加劑量≥50且<100 mg/kg亞組:SMD=-0.30,95%CI:-0.79～0.19;添加劑量≥100 mg/kg亞組:SMD=0.50,95%CI:-0.14～1.14,組間異質(zhì)性:P<0.001)。

圖11 FLAs的不同添加劑量對奶牛乳脂率影響的亞組分析圖

2.3.3 添加FLAs對奶牛乳蛋白率影響的森林圖、敏感性分析及亞組分析

所納入的16篇文獻(xiàn)中,有15篇報道了添加FLAs對奶牛乳蛋白率的影響。如圖12所示,結(jié)果表明,納入的研究間存在異質(zhì)性,但異質(zhì)性不顯著(P=0.06<0.10,df=14,I2=39%<50%),奶牛乳蛋白率與添加FLAs具有相關(guān)性(SMD=0.69,95%CI:0.33～1.06,P=0.000 2)。

圖12 FLAs對奶牛乳蛋白率影響的森林圖

采用逐一剔除文獻(xiàn)的方法進(jìn)行敏感性分析。如圖13所示,可知在剔除任一個研究后的合并效應(yīng)量的點(diǎn)估計仍落在總的合并效應(yīng)量95%CI內(nèi),說明本項(xiàng)結(jié)局指標(biāo)的合并結(jié)果是穩(wěn)健的。

圖13 FLAs對奶牛乳蛋白率影響的敏感性分析圖

對不同種類FLAs的亞組分析結(jié)果如圖14所示。結(jié)果顯示,Quercetin亞組I2=0,P=0.370;Blend亞組I2=60.7%,P=0.026;Daidzein亞組I2=8.4%,P=0.364。Blend亞組的異質(zhì)性顯著,說明FLAs的不同種類不是異質(zhì)性的來源。結(jié)果表明,當(dāng)添加的FLAs的主效成分為大豆黃酮或槲皮素時可以提高奶牛乳蛋白率(Quercetin亞組:SMD=1.19,95%CI:0.17～2.20;Blend亞組:SMD=0.49,95%CI:-0.22～1.19;Daidzein亞組:SMD=0.79,95%CI:0.37～1.20,組間異質(zhì)性:P=0.529)。

圖14 FLAs的不同種類對奶牛乳蛋白率影響的亞組分析圖

對FLAs不同飼喂時長的亞組分析結(jié)果如圖15所示。結(jié)果顯示,飼喂時長<30 d亞組I2=40.5%,P=0.121;飼喂時長≥30 d亞組I2=45.5%,P=0.076。2個亞組的異質(zhì)性均不顯著,但大于39.2%,說明FLAs的不同飼喂時長不是異質(zhì)性的來源。結(jié)果表明,以不同時長飼喂奶牛FLAs都可提高奶牛的乳蛋白率,且飼喂時長≥30 d的效果更佳(飼喂時長<30 d亞組:SMD=0.69,95%CI:0.12～1.27;飼喂時長≥30 d亞組:SMD=0.70,95%CI:0.19～1.21,組間異質(zhì)性:P=0.991)。

對FLAs不同添加劑量的亞組分析結(jié)果如圖16所示。結(jié)果顯示,添加劑量<20 mg/kg亞組I2=0,P=0.701;添加劑量≥20且<50 mg/kg亞組I2=72.8%,P<0.001;添加劑量≥50且<100 mg/kg亞組I2=78.4%,P=0.001;添加劑量≥100 mg/kg亞組I2=59.6%,P=0.011。3個亞組的異質(zhì)性顯著,說明FLAs的不同添加劑量不是異質(zhì)性的來源。結(jié)果表明,當(dāng)FLAs的添加劑量在20～50 mg/kg時可以提高奶牛乳蛋白率(添加劑量<20 mg/kg亞組:SMD=0.18,95%CI:-0.22～0.59;添加劑量≥20且<50 mg/kg亞組:SMD=0.99,95%CI:0.19～1.79;添加劑量≥50且<100 mg/kg亞組:SMD=0.95,95%CI:-0.38～2.27;添加劑量≥100 mg/kg亞組:SMD=0.40,95%CI:-0.16～0.96,組間異質(zhì)性:P=0.278)。

圖16 FLAs的不同添加劑量對奶牛乳蛋白率影響的亞組分析圖

2.3.4 添加FLAs對奶牛乳糖率影響的森林圖、敏感性分析及亞組分析

所納入的16篇文獻(xiàn)中,有9篇報道了添加FLAs對奶牛乳糖率的影響。如圖17所示,結(jié)果表明,納入的研究間存在異質(zhì)性且異質(zhì)性顯著(P=0.002<0.10,df=8,I2=67%>50%),添加FLAs的奶牛的乳糖率與對照組無顯著差異(SMD=-0.08,95%CI:-0.71～0.55,P=0.80)。

圖17 FLAs對奶牛乳糖率影響的森林圖

采用逐一剔除文獻(xiàn)的方法進(jìn)行敏感性分析。如圖18所示,可知在剔除任一個研究后的合并效應(yīng)量的點(diǎn)估計仍落在總的合并效應(yīng)量95%CI內(nèi),說明本項(xiàng)結(jié)局指標(biāo)的合并結(jié)果是穩(wěn)健的。

圖18 FLAs對奶牛乳糖率影響的敏感性分析圖

對不同種類FLAs的亞組分析結(jié)果如圖19所示。結(jié)果顯示,Quercetin亞組I2=0,P=0.620;Blend亞組I2=75.3%,P=0.001,Blend亞組的異質(zhì)性顯著,說明FLAs種類不是異質(zhì)性的來源,且飼喂FLAs的種類對奶牛乳糖率的影響無統(tǒng)計學(xué)意義(Quercetin亞組:SMD=-0.58,95%CI:-1.49～0.34;Blend亞組:SMD=0.26,95%CI:-0.61～1.14,組間異質(zhì)性:P=0.158)。

圖19 FLAs的不同種類對奶牛乳糖率影響的亞組分析圖

對FLAs不同飼喂時長的亞組分析結(jié)果如圖20所示。結(jié)果顯示,飼喂時長<30 d亞組I2=64.4%,P=0.038;飼喂時長≥30d亞組I2=55.4%,P=0.062。2個亞組的異質(zhì)性均顯著,說明FLAs的不同飼喂時長不是異質(zhì)性的來源,且飼喂FLAs的時長對奶牛乳糖率的影響無統(tǒng)計學(xué)意義(飼喂時長<30 d亞組:SMD=0.42,95%CI:-0.58～1.42;飼喂時長≥30 d亞組:SMD=-0.49,95%CI:-1.19～0.20,組間異質(zhì)性:P=0.140)。

圖20 FLAs的不同飼喂時長對奶牛乳糖率影響的亞組分析圖

對FLAs不同添加劑量的亞組分析結(jié)果如圖21所示。結(jié)果顯示,添加劑量<20 mg/kg亞組I2=86.9%,P<0.001;添加劑量≥20且<50 mg/kg亞組I2=0,P=0.393;添加劑量≥50且<100 mg/kg亞組I2=49.4%,P=0.115;添加劑量≥100 mg/kg亞組I2=79.3%,P<0.001。添加劑量<20 mg/kg亞組和添加劑量≥100 mg/kg亞組的異質(zhì)性顯著,說明FLAs的不同添加劑量不是異質(zhì)性的來源,且FLAs的添加劑量對奶牛乳糖率的影響無統(tǒng)計學(xué)意義(添加劑量<20 mg/kg亞組:SMD=-0.26,95%CI:-2.00～1.49;添加劑量≥20且<50 mg/kg亞組:SMD=-0.48,95%CI:-0.97～0.01;添加劑量≥50且<100 mg/kg亞組:SMD=0.70,95%CI:-0.14～1.55;添加劑量≥100 mg/kg亞組:SMD=0.81,95%CI:-0.12～1.75,組間異質(zhì)性:P=0.026)。

圖21 FLAs的不同添加劑量對奶牛乳糖率影響的亞組分析圖

2.3.5 添加FLAs對牛奶體細(xì)胞數(shù)影響的森林圖、敏感性分析及亞組分析

所納入的16篇文獻(xiàn)中,有8篇報道了添加FLAs對牛奶體細(xì)胞數(shù)的影響。如圖22所示,結(jié)果表明,納入的研究間存在異質(zhì)性且異質(zhì)性顯著(P=0.03<0.10,df=7,I2=54%>50%),牛奶體細(xì)胞數(shù)與添加FLAs具有相關(guān)性(SMD=-1.22,95%CI:-1.87～-0.56,P=0.000 3)。

圖22 FLAs對牛奶體細(xì)胞數(shù)影響的森林圖

采用逐一剔除文獻(xiàn)的方法進(jìn)行敏感性分析。如圖23所示,可知在剔除任一個研究后的合并效應(yīng)量的點(diǎn)估計仍落在總的合并效應(yīng)量95%CI內(nèi),說明本項(xiàng)結(jié)局指標(biāo)的合并結(jié)果是穩(wěn)健的。

圖23 FLAs對牛奶體細(xì)胞數(shù)影響的敏感性分析圖

對不同種類FLAs的亞組分析結(jié)果如圖24所示。結(jié)果顯示,Blend亞組I2=53.2%,P=0.058;Daidzein亞組I2=0,P=0.483。Blend亞組的異質(zhì)性顯著,說明FLAs的不同種類不是異質(zhì)性的來源。結(jié)果表明,在飼糧中添加FLAs可以降低牛奶體細(xì)胞數(shù),且以大豆黃酮作為添加劑時的效果更佳(Blend亞組:SMD=-0.98,95%CI:-1.72～-0.23;Daidzein亞組:SMD=-1.89,95%CI:-2.77～-1.00,組間異質(zhì)性:P=0.123)。

圖24 FLAs的不同種類對牛奶體細(xì)胞數(shù)影響的亞組分析圖

對FLAs不同飼喂時長的亞組分析結(jié)果如圖25所示。結(jié)果顯示,飼喂時長<30 d亞組I2=0,P=0.930;飼喂時長≥30 d亞組I2=78.9%,P=0.003。飼喂時長≥30 d亞組的異質(zhì)性顯著,說明FLAs的不同飼喂時長不是異質(zhì)性的來源。結(jié)果表明,FLAs的飼喂時長<30 d可以降低牛奶體細(xì)胞數(shù),但飼喂時長≥30 d對牛奶體細(xì)胞數(shù)的影響無統(tǒng)計學(xué)意義(飼喂時長<30 d亞組:SMD=-1.28,95%CI:-1.91～-0.65;飼喂時長≥30 d亞組:SMD=-1.30,95%CI:-2.65～0.05,組間異質(zhì)性:P=0.978)。

圖25 FLAs的不同飼喂時長對牛奶體細(xì)胞數(shù)影響的亞組分析圖

對FLAs不同添加劑量的亞組分析結(jié)果如圖26所示。結(jié)果顯示,添加劑量<20 mg/kg亞組I2=0,P=0.828;添加劑量≥20且<50 mg/kg亞組I2=15.1%,P=0.317;添加劑量≥50且<100mg/kg亞組I2=0,P=0.596;添加劑量≥100mg/kg亞組I2=77.6%,P<0.001。添加劑量≥100 mg/kg亞組的異質(zhì)性顯著,說明FLAs的不同添加劑量不是異質(zhì)性的來源。結(jié)果表明,以不同添加劑量飼喂奶牛FLAs都可降低奶牛的體細(xì)胞數(shù),其中添加劑量在20～50 mg/kg時效果更佳(添加劑量<20 mg/kg亞組:SMD=-1.51,95%CI:-2.11～-0.91;添加劑量≥20且<50 mg/kg亞組:SMD=-1.94,95%CI:-2.73～-1.14;添加劑量≥50且<100 mg/kg亞組:SMD=-1.42,95%CI:-2.06～-0.78;添加劑量≥100 mg/kg亞組:SMD=-1.26,95%CI:-2.20～-0.32,組間異質(zhì)性:P=0.696)。

圖26 FLAs的不同添加劑量對牛奶體細(xì)胞數(shù)影響的亞組分析圖

2.3.6 添加FLAs對奶牛血清中IgA含量影響的森林圖、敏感性分析及亞組分析

所納入的16篇文獻(xiàn)中,有4篇文獻(xiàn)報道了添加FLAs對奶牛血清中IgA含量的影響,因?yàn)閳蟮赖钠獢?shù)少于5篇,不足以對FLAs的種類與飼喂時長作亞組分析,且采用固定效應(yīng)模型計算合并統(tǒng)計量[22]。森林圖如圖27所示。結(jié)果表明,納入的研究間存在異質(zhì)性,但異質(zhì)性不顯著(P=0.21>0.10,df=3,I2=34%<50%),奶牛血清中IgA含量與添加FLAs具有相關(guān)性(SMD=0.68,95%CI:0.12～1.24)。

圖27 FLAs對奶牛血清中IgA含量影響的森林圖

采用逐一剔除文獻(xiàn)的方法進(jìn)行敏感性分析。如圖28所示,可知在剔除任一個研究后的合并效應(yīng)量的點(diǎn)估計仍落在總的合并效應(yīng)量95%CI內(nèi),說明本項(xiàng)結(jié)局指標(biāo)的合并結(jié)果是穩(wěn)健的。

圖28 FLAs對奶牛血清中IgA含量影響的敏感性分析圖

對FLAs不同添加劑量的亞組分析結(jié)果如圖29所示。結(jié)果顯示,添加劑量<20 mg/kg亞組I2=0,P=0.818;添加劑量≥20且<50 mg/kg亞組I2=40.4%,P=0.195;添加劑量≥50且<100 mg/kg亞組I2=11.0%,P=0.325;添加劑量≥100mg/kg亞組I2=66.9%,P=0.029。添加劑量≥100 mg/kg亞組的異質(zhì)性顯著,說明FLAs的不同添加劑量不是異質(zhì)性的來源。結(jié)果表明,當(dāng)FLAs的添加劑量在50～100 mg/kg時可以提高奶牛血清中IgA含量(添加劑量<20 mg/kg亞組:SMD=0.37,95%CI:-0.26～0.99;添加劑量≥20且<50 mg/kg亞組:SMD=1.03,95%CI:-0.26～2.31;添加劑量≥50且<100 mg/kg亞組:SMD=1.73,95%CI:0.80～2.65;添加劑量≥100 mg/kg亞組:SMD=0.33,95%CI:-0.89～1.56,組間異質(zhì)性:P=0.098)。

圖29 FLAs的不同添加劑量對奶牛血清中IgA含量影響的亞組分析圖

2.3.7 添加FLAs對奶牛血清中IgG含量影響的森林圖、敏感性分析及亞組分析

所納入的16篇文獻(xiàn)中,有5篇文獻(xiàn)報道了添加FLAs對奶牛血清中IgG含量的影響。如圖30所示,結(jié)果表明,納入的研究間存在異質(zhì)性且異質(zhì)性顯著(P=0.01<0.10,df=4,I2=70%>50%),添加FLAs的奶牛血清中IgG含量與對照組無顯著差異(SMD=0.71,95%CI:-0.40～1.82,P=0.21)。

圖30 FLAs對奶牛血清中IgG含量影響的森林圖

采用逐一剔除文獻(xiàn)的方法進(jìn)行敏感性分析。如圖31所示,可知在剔除任一個研究后的合并效應(yīng)量的點(diǎn)估計仍落在總的合并效應(yīng)量95%CI內(nèi),說明本項(xiàng)結(jié)局指標(biāo)的合并結(jié)果是穩(wěn)健的。

圖31 FLAs對奶牛血清中IgG含量影響的敏感性分析圖

對不同種類FLAs的亞組分析結(jié)果如圖32所示。結(jié)果顯示,Blend亞組I2=77.5%,P=0.012;Daidzein亞組I2=0,P=0.843。Blend亞組的異質(zhì)性顯著,說明FLAs的不同種類不是異質(zhì)性的來源。結(jié)果表明,在飼糧中添加的FLAs的主效成分為大豆黃酮時可提高奶牛血清中IgG含量(Blend亞組:SMD=0.45,95%CI:-1.30～2.19;Daidzein亞組:SMD=1.26,95%CI:0.38～2.13,組間異質(zhì)性:P=0.415)。

對FLAs不同飼喂時長的亞組分析結(jié)果如圖33所示。結(jié)果顯示,飼喂時長<30 d亞組I2=10.1%,P=0.329;飼喂時長≥30 d亞組I2=46.2%,P=0.173。2個亞組的異質(zhì)性均不顯著,說明FLAs的不同飼喂時長可能是異質(zhì)性的來源之一。結(jié)果表明,FLAs的飼喂時長≥30 d可以提高奶牛血清中IgG含量,但飼喂時長<30 d對IgG含量的影響無統(tǒng)計學(xué)意義(飼喂時長<30 d亞組:SMD=-0.17,95%CI:-0.96～0.62;飼喂時長≥30 d亞組:SMD=1.83,95%CI:0.37～3.28,組間異質(zhì)性:P=0.018)。

圖33 FLAs的不同飼喂時長對奶牛血清中IgG含量影響的亞組分析圖

對FLAs不同添加劑量的亞組分析結(jié)果如圖34所示。結(jié)果顯示,添加劑量<20 mg/kg亞組I2=0,P=0.716;添加劑量≥20且<50 mg/kg亞組I2=44.1%,P=0.147;添加劑量≥50且<100 mg/kg亞組I2=78.2%,P=0.010;添加劑量≥100 mg/kg亞組I2=76.5%,P=0.005。添加劑量≥50且<100 mg/kg亞組與添加劑量≥100 mg/kg亞組的異質(zhì)性顯著,說明FLAs的不同添加劑量不是異質(zhì)性的來源。結(jié)果表明,當(dāng)FLAs的添加劑量<20 mg/kg時可以提高奶牛血清中IgG含量(添加劑量<20 mg/kg亞組:SMD=1.09,95%CI:0.46～1.73;添加劑量≥20且<50 mg/kg亞組:SMD=0.82,95%CI:-0.21～1.85;添加劑量≥50且<100 mg/kg亞組:SMD=1.00,95%CI:-0.84～2.83;添加劑量≥100 mg/kg亞組:SMD=0.93,95%CI:-0.62～2.47,組間異質(zhì)性:P=0.977)。

圖34 FLAs的不同添加劑量對奶牛血清中IgG含量影響的亞組分析圖

2.3.8 添加FLAs對奶牛血清中IgM含量影響的森林圖、敏感性分析及亞組分析

所納入的16篇文獻(xiàn)中,有4篇文獻(xiàn)報道了添加FLAs對奶牛血清中IgM含量的影響,因?yàn)閳蟮赖钠獢?shù)少于5篇,不足以對FLAs的種類與飼喂時長作亞組分析,且采用固定效應(yīng)模型計算合并統(tǒng)計量。如圖35所示,結(jié)果表明,納入的研究間存在異質(zhì)性且異質(zhì)性顯著(P=0.105>0.10,df=3,I2=51%>50%),添加FLAs的奶牛血清中IgM含量與對照組無顯著差異(SMD=-0.05,95%CI:-0.59～0.50,P=0.87)。

圖35 FLAs對奶牛血清中IgM含量影響的森林圖

采用逐一剔除文獻(xiàn)的方法進(jìn)行敏感性分析。如圖36所示,可知在剔除任一個研究后的合并效應(yīng)量的點(diǎn)估計仍落在總的合并效應(yīng)量95%CI內(nèi),說明本項(xiàng)結(jié)局指標(biāo)的合并結(jié)果是穩(wěn)健的。

圖36 FLAs對奶牛血清中IgM含量影響的敏感性分析圖

對FLAs不同添加劑量的亞組分析結(jié)果如圖37所示。結(jié)果顯示,添加劑量<20 mg/kg亞組I2=0,P=1.000;添加劑量≥20且<50 mg/kg亞組I2=0,P=0.072;添加劑量≥50且<100 mg/kg亞組I2=75.3%,P=0.017;添加劑量≥100 mg/kg亞組I2=30.3%,P=0.230。添加劑量≥50且<100 mg/kg亞組的異質(zhì)性顯著,說明FLAs的不同添加劑量不是異質(zhì)性的來源,且FLAs的添加劑量對奶牛血清中IgM含量的影響無統(tǒng)計學(xué)意義(添加劑量<20 mg/kg亞組:SMD=0.10,95%CI:-0.52～0.72;添加劑量≥20且<50 mg/kg亞組:SMD=-0.03,95%CI:-0.78～0.71;添加劑量≥50且<100 mg/kg亞組:SMD=0.08,95%CI:-1.49～1.64;添加劑量≥100 mg/kg亞組:SMD=0.31,95%CI:-0.43～1.06)。

圖37 FLAs的不同添加劑量對奶牛血清中IgM含量影響的亞組分析圖

2.4 發(fā)表偏倚評價

對結(jié)局指標(biāo)中的奶牛產(chǎn)奶量、乳脂率和乳蛋白率進(jìn)行發(fā)表偏倚評估,如圖38所示。評估結(jié)果顯示,乳脂率的漏斗圖存在一定程度的不對稱性,說明乳脂率的Meta分析結(jié)果存在發(fā)表偏倚,可能是由于納入文獻(xiàn)量較少或樣本量不足導(dǎo)致的。產(chǎn)奶量與乳蛋白率的評價結(jié)果中代表研究結(jié)果的圓點(diǎn)較為集中,且基本對稱,說明Meta分析納入的研究同質(zhì)性較好,沒有觀察到顯著的發(fā)表偏倚,證實(shí)了研究結(jié)果的穩(wěn)定性。

Funnel plot with pseudo 95% confidence limits:95%置信區(qū)間漏斗圖;Effect size:效應(yīng)量;Standard error of effect size:效應(yīng)量的標(biāo)準(zhǔn)誤差。A:產(chǎn)奶量 Milk yield;B:乳脂率 Milk fat rate;C:乳蛋白率 Milk protein rate。

3 討 論

目前,在針對飼糧中添加FLAs對奶牛生產(chǎn)性能和血清免疫指標(biāo)的研究中,受諸多相關(guān)因素影響,各研究結(jié)果并不一致。因此,本研究以健康荷斯坦奶牛為研究對象,納入2001年以來的相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行Meta分析,全面系統(tǒng)評價FLAs對奶牛的應(yīng)用效果。

3.1 FLAs對奶牛生產(chǎn)性能的影響

產(chǎn)奶量是評定奶牛生產(chǎn)性能的重要指標(biāo)[40]。本研究Meta分析結(jié)果表明,飼糧中添加FLAs可以有效提高奶牛產(chǎn)奶量。在單獨(dú)觀測不同的FLAs種類、飼喂時長與添加劑量方面,亞組分析結(jié)果表明,FLAs主效成分為大豆黃酮、飼喂時長≥30 d、添加劑量在20～50 mg/kg的單個亞組對產(chǎn)奶量的提高效果優(yōu)于其他分組。沈菲[25]研究發(fā)現(xiàn),補(bǔ)飼30 mg/kg的大豆異黃酮60 d,能夠使奶牛日平均產(chǎn)奶量提高20.77%,而占今舜等[41]分別飼喂40 mg/kg與200 mg/kg苜蓿黃酮24 d,產(chǎn)奶量分別提高了7.96%與6.49%,均低于20.77%。近年來,FLAs對奶牛產(chǎn)奶量影響的研究主要圍繞天然植物提取物展開,不同提取物中FLAs在不同劑量與飼喂時長下對產(chǎn)奶量影響的效果也不同,本研究在宏觀層面對海量的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計,但并不代表著優(yōu)勢亞組的條件是絕對適用的,需要在FLAs的結(jié)構(gòu)、有效含量、主效成分、生物利用度、生物適用性等方面多重考慮。例如在飼糧中補(bǔ)充黃岑提取物能夠使奶牛的全周期泌乳量提高約13%[42],而在飼糧中補(bǔ)充柑橘提取物則對產(chǎn)奶量無顯著影響[12]。而且在飼喂時長≥30 d的情況下,Gessner等[36]的研究異質(zhì)性較大,可能是添加FLAs的有效成分較低導(dǎo)致的,這也證明了以上結(jié)論。所以,對天然植物提取物成分進(jìn)行深度挖掘、完善植物中FLAs的成分檢測,是未來反芻動物飼糧添加劑的研發(fā)過程中的一個重要方向。

乳脂率、乳蛋白率與乳糖率是衡量牛奶品質(zhì)高低的重要指標(biāo)[43-45],FLAs對乳品質(zhì)的改善能力在不同的指標(biāo)中也存在差異。研究對乳脂率的亞組分析結(jié)果表明,飼糧中添加的FLAs種類與飼喂時長對奶牛乳脂率無顯著影響,當(dāng)FLAs添加劑量≥100 mg/kg時,奶牛乳脂率有升高趨勢。張一涵等[24]研究發(fā)現(xiàn),在荷斯坦奶牛飼糧中添加160 mg/kg的沙棘黃酮后奶牛乳脂率顯著升高;賈若愚等[46]研究發(fā)現(xiàn),在荷斯坦奶牛飼糧中添加110 mg/kg的竹提取物會顯著升高奶牛的乳脂率,以上研究結(jié)果均與本文結(jié)果一致。多數(shù)關(guān)于FLAs對奶牛乳蛋白率影響的試驗(yàn)結(jié)果表明,FLAs可有效提高荷斯坦奶牛乳蛋白率,例如:在飼糧中分別添加30 mg/kg的大豆異黃酮與28 mg/kg的槲皮素均可顯著提高奶牛的乳蛋白率[25,39],且奶牛乳蛋白率會隨著杜仲提取物的使用時間延長有增加的趨勢[47],均與本研究所得結(jié)果一致。如今,乳制品行業(yè)對生產(chǎn)適合乳糖不耐癥患者飲用的低乳糖牛奶表現(xiàn)出濃厚興趣[48],關(guān)于飼料添加劑對奶牛乳糖率影響的研究也受到廣泛關(guān)注。在本研究中,當(dāng)剔除栗明月等[26]異質(zhì)性較大的研究時,發(fā)現(xiàn)FLAs的不同飼喂時長可能是異質(zhì)性來源之一。當(dāng)FLAs的添加劑量≥50 mg/kg時乳糖率有升高趨勢,郭玉新[11]在飼糧中補(bǔ)充60 mg/kg的王不留行提取物30 d,牛奶中乳糖含量提高了1.3%,但國內(nèi)外對王不留行單獨(dú)應(yīng)用于畜禽飼料的研究報道很少,且其中黃酮苷的含量及作用機(jī)理也需進(jìn)一步探究。

奶牛乳房炎是導(dǎo)致奶牛產(chǎn)奶量和繁殖性能下降的重要原因[49],在控制牛奶的乳脂、乳蛋白等指標(biāo)的同時,更要做好對體細(xì)胞數(shù)的監(jiān)控[50]。Meta分析結(jié)果表明,飼糧中添加FLAs可有效降低牛奶體細(xì)胞數(shù)。當(dāng)剔除張一涵等[24]異質(zhì)性較大的研究時,發(fā)現(xiàn)FLAs的不同飼喂時長可能是異質(zhì)性來源之一。當(dāng)飼喂時長≥30 d時,牛奶體細(xì)胞數(shù)有降低趨勢。Liu等[51]在荷斯坦奶牛飼糧中添加大豆黃酮提高了4%標(biāo)準(zhǔn)乳產(chǎn)量并降低乳中體細(xì)胞數(shù);鄒阿玲等[52]研究發(fā)現(xiàn),對奶牛補(bǔ)飼恰麻古90 d后乳中體細(xì)胞數(shù)平均值顯著低于對照組,與本研究亞組分析結(jié)果一致。

3.2 FLAs對奶牛血清免疫指標(biāo)的影響

特異性免疫球蛋白普遍存在于動物血液中[53],主要參與體液免疫的過程,其含量可以反映機(jī)體的免疫狀態(tài)[54]。IgA主要參與對黏膜的保護(hù)作用,IgG與IgM在抵御感染的免疫應(yīng)答中起著重要作用,其中IgM是抵御感染的第1道防線[55]。本研究Meta分析結(jié)果表明,飼糧中添加FLAs可以有效提高奶牛血清中IgA含量。李杰等[56]研究表明,在補(bǔ)飼當(dāng)歸提取物后奶牛血清中IgA含量顯著升高,研究結(jié)果與本文結(jié)論一致。對血清中IgG含量的亞組分析結(jié)果顯示,提高奶牛血清中IgG含量的最適飼喂時長為≥30 d,最適FLAs添加劑量為<50 mg/kg。研究發(fā)現(xiàn),在對奶牛補(bǔ)飼絲蘭提取物60 d后發(fā)現(xiàn)血清中IgG含量顯著升高[57],低添加劑量的苜蓿黃酮可以提高奶牛血清中IgG含量[37],與本研究亞組分析結(jié)果一致。對血清中IgM含量的Meta分析結(jié)果顯示,飼糧中添加FLAs對血清中IgM含量無顯著影響。栗明月[58]研究表明,補(bǔ)飼竹葉提取物可顯著升高奶牛血清中IgM含量;Abouzed等[59]研究表明,在奶牛飼糧中添加富含黃酮的木瓜提取物也可使血清中IgM含量增高,與Meta分析結(jié)果不一致的原因可能是可能由于本研究在對血清中IgM含量的Meta分析中所納入文獻(xiàn)較少,無法對添加FLAs與血清中IgM含量的相關(guān)性做出具體評價,而天然植物提取物中發(fā)揮主效作用的物質(zhì)也有待進(jìn)一步探究。

3.3 本研究的局限性

本研究仍存在一定的局限性:首先,本研究在分析FLAs對奶牛血清免疫指標(biāo)的影響中所納入的文獻(xiàn)數(shù)量較少,可能會對Meta分析結(jié)果造成影響,這與目前FLAs對于奶牛的研究主要集中在產(chǎn)奶量及乳成分等常規(guī)指標(biāo)上有關(guān),未來還需進(jìn)一步加強(qiáng)對血清免疫、氧化指標(biāo)及乳中營養(yǎng)物質(zhì)的研究。其次,各項(xiàng)研究所添加的FLAs的主效成分差異較大,可能造成某項(xiàng)結(jié)局指標(biāo)的樣本間異質(zhì)性較大而導(dǎo)致Meta分析結(jié)果存在潛在異質(zhì)性。因此,未來需要深入研究不同品種的FLAs的主效成分,并改進(jìn)FLAs的質(zhì)量評估方法,以確保FLAs在奶牛生產(chǎn)中得以有效應(yīng)用。另外,研究缺少質(zhì)量評估標(biāo)準(zhǔn),無法客觀驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性,因此本研究也需要進(jìn)一步優(yōu)化文獻(xiàn)的檢索與篩選流程,拓寬數(shù)據(jù)采集途徑,細(xì)化亞組因素以通過亞組分析更全面地探究異質(zhì)性來源,提高亞組因素與結(jié)論的相關(guān)性,進(jìn)一步驗(yàn)證研究結(jié)果。

4 結(jié) 論

采用Meta分析方法,可以從統(tǒng)計層面有效評價FLAs對奶牛生產(chǎn)性能及血清免疫指標(biāo)的影響,為FLAs應(yīng)用于奶牛生產(chǎn)實(shí)際奠定了堅實(shí)的理論基礎(chǔ)。本研究結(jié)果表明,在飼糧中添加FLAs可以有效提高奶牛產(chǎn)奶量、乳蛋白率及血清中IgA含量,有效降低牛奶體細(xì)胞數(shù)。本研究結(jié)論為在飼糧中添加FLAs改善奶牛生產(chǎn)性能和血清免疫指標(biāo)提供了堅實(shí)的理論基礎(chǔ)。