譚婷，楊超超，楊娜，王琪，雷忻

（1.延安大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，陜西 延安 716000；2.延安市生態(tài)恢復(fù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西 延安 716000）

近年來(lái)，隨著殺菌劑的廣泛使用，其在環(huán)境中的殘留與日俱增，對(duì)生態(tài)系統(tǒng)和人類健康產(chǎn)生了潛在的危害[1]，引起了人們的關(guān)注。甲基托布津（Methyltobuzine,TM，化學(xué)分子式為C12H14N4O4L2）是一種廣譜內(nèi)吸性殺菌劑，對(duì)禾谷類、蔬菜類、果樹(shù)上的多種病害有較好的防治作用[2]。TM通過(guò)轉(zhuǎn)化為2-苯并咪唑類物質(zhì)產(chǎn)生殺菌作用，易在生態(tài)環(huán)境中富集[3]。據(jù)報(bào)道，在大白菜、黃瓜、柑橘、海帶等均可檢測(cè)到TM殘留[4]，對(duì)水生生物也有一定威脅，如嚴(yán)重破壞萼花臂尾輪蟲(chóng)（Brachionus calyciflorus Pallas）的無(wú)性生殖和有性生殖[5]，對(duì)小球藻（Chlorella）、水蚤（Daphnia）、網(wǎng)狀水母（Plathymentia reticulata Blgelou）、虹鱒（Oncorhynchus keta）也可產(chǎn)生毒性效應(yīng)[6]。TM可對(duì)不同生長(zhǎng)時(shí)期的黃顙魚(yú)（Pelteobagrus fulvidraco）具有較強(qiáng)毒性，影響生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)[7]。TM暴露對(duì)大鼠產(chǎn)前發(fā)育有影響，造成局部性壞死、微泡性脂肪變性、炎癥浸潤(rùn)、肝細(xì)胞核固縮，并誘發(fā)母體毒性效應(yīng)[8]。多菌靈（Carbendazim,BCM，化學(xué)分子式為C9H9N3O2）為食品、土壤和水中經(jīng)常檢測(cè)到的主要污染物[9，10]，通過(guò)農(nóng)藥噴灑和水體徑流等方式進(jìn)入水體環(huán)境[11]。佘偉鐸等[12]對(duì)長(zhǎng)江流域重慶段水體和沉積物檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，BCM 濃度范圍為2.1～46.9 ng·L-1。BCM 不僅可誘導(dǎo)斑馬魚(yú)（Danio rerio）快速游動(dòng)，增加攻擊性行為和異常行為的表現(xiàn)[13]，還可改變斑馬魚(yú)組織中的總蛋白水平，降低魚(yú)類的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值以及生理和代謝狀態(tài)[14]，神經(jīng)毒性作用還顯著改變參與抗原處理和呈遞、凋亡、自噬和代謝相關(guān)基因的表達(dá)[15]。目前TM和BCM殺菌劑的毒性效應(yīng)研究，主要是分析蔬菜、水果等食品的殘留與降解，其次是對(duì)水生生物的生殖毒性和神經(jīng)毒性報(bào)道較豐富，而2 種殺菌劑對(duì)水生生物肝臟代謝的干擾作用及關(guān)鍵生化指標(biāo)的影響，目前研究報(bào)道尚少。一定劑量農(nóng)藥在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)累積可誘發(fā)產(chǎn)生大量活性氧（Reactive oxygen species,ROS）[16]，攻擊機(jī)體組織，造成一定程度過(guò)氧化損傷，機(jī)體需要及時(shí)清除或降低過(guò)量ROS，其中過(guò)氧化物酶（Peroxidase,POD）可將體內(nèi)過(guò)氧化產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為H2O 和O2，也是目前評(píng)價(jià)機(jī)體氧化損傷程度的生物標(biāo)志物[17,18]。同時(shí)動(dòng)物體需對(duì)外源化合物進(jìn)行一系列代謝反應(yīng)，其中主要包括谷草轉(zhuǎn)氨酶（Aspartate aminotransferase,GOT）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Glutamate pyruvic transa,GPT）2種關(guān)鍵酶。外源污染物進(jìn)入機(jī)體，組織中GOT 和GPT 大量釋放，加速體內(nèi)代謝產(chǎn)物排出，緩解或消除過(guò)氧化帶來(lái)的組織損傷，維持肝臟組織正常運(yùn)轉(zhuǎn)，其也可作為污染物毒性檢測(cè)的生物標(biāo)志物[19,20]。泥鰍（Misgurnus anguillicaudatus）一般生存在沙泥底層的緩流淺水區(qū)，適應(yīng)能力較強(qiáng)，廣泛分布于我國(guó)各個(gè)水系，可作為毒理學(xué)試驗(yàn)的試驗(yàn)?zāi)Ｊ缴铩?/p>

本研究通過(guò)檢測(cè)泥鰍96 h 內(nèi)的死亡數(shù)，以評(píng)估TM和BCM對(duì)6 月齡泥鰍的急性毒性，并檢測(cè)28 d內(nèi)TM 和BCM 脅迫對(duì)POD、GOT 和GPT 活性的變化，探究?jī)煞N殺菌劑對(duì)泥鰍抗氧化酶的影響及其毒性效應(yīng)，以期為兩種殺菌劑的污染治理和安全合理使用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

6 月齡泥鰍平均體長(zhǎng)（6.3±0.7）cm、平均質(zhì)量（2.4±0.5）g，購(gòu)于陜西省水產(chǎn)貿(mào)易市場(chǎng)。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，選擇體型相當(dāng)，反應(yīng)靈敏，體質(zhì)健康的泥鰍，在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中用自然脫氯的水馴養(yǎng)7 d，使泥鰍適應(yīng)環(huán)境，每天喂食少量食物。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前一天停止喂食。實(shí)驗(yàn)期間，試液每24 h 更換，維持水溫在（25±2）℃，pH（7.5±0.2）。

水中農(nóng)藥殘留測(cè)定儀（CSY-N12A，深圳芬析儀器制造有限公司）；酶標(biāo)分析儀（Multiskan FC，上海博訊公司）；高速離心機(jī)（KH19A，湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司）；恒溫水浴鍋（DZKW-C，河南沃林儀器設(shè)備有限公司）；電子分析天平（BCE64-1CCN，聚儀惠供應(yīng)鏈有限公司）。

甲基托布津（CAs：23564-05-8，純度≥95%，上海允發(fā)化工有限公司）；多菌靈（CAs：10605-21-7，純度≥98%，江蘇藍(lán)豐生物化工股份有限公司）；二甲基亞砜（DMSO，分析純，濟(jì)南歐萊博生物科技有限公司）；生理鹽水（四川科倫藥業(yè)股份有限公司）；2,4 二硝基苯肼（分析純，上海吉至生化科技有限公司）；磷酸緩沖液（pH 為7.4）；NaOH（0.4 mmol·L-1）；HCl（0.05 mmol·L-1,10 mmol·L-1）；愈創(chuàng)木酚、過(guò)硫酸銨、硝酸銀（均為分析純，上海易恩化學(xué)技術(shù)有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 急性毒性實(shí)驗(yàn)

依據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)和相關(guān)文獻(xiàn)[21,22]，分別設(shè)5 個(gè)質(zhì)量濃度處理組：TM 為65 mg·L-1、85 mg·L-1、112 mg·L-1、146 mg·L-1和191 mg·L-1；BCM 為26 mg·L-1、34 mg·L-1、45 mg·L-1、58 mg·L-1和76 mg·L-1。采用半靜水實(shí)驗(yàn)法，設(shè)3 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)放健康、活潑且體型相近的20 尾泥鰍，觀察96 h，統(tǒng)計(jì)死亡率。每24 h 更換1 次試驗(yàn)試劑，若有死亡及時(shí)撈出，以保證水環(huán)境酸堿度、含氧量等性質(zhì)穩(wěn)定。根據(jù)最大耐受濃度和最小全致死濃度，記錄泥鰍死亡情況，計(jì)算得到TM 和BCM 的LC50和安全濃度（SC）。

1.2.2 肝臟酶活性檢測(cè)

將TM和BCM用去DMSO 配制為1.00 g·L-1的母液，根據(jù)急性毒性24 h 安全濃度等梯度設(shè)置TM和BCM 濃度為分別 為0.05 mg·L-1、0.50 mg·L-1、5.00 mg·L-1和0.02 mg·L-1、0.10 mg·L-1、0.50 mg·L-1、2.50 mg·L-1，并設(shè)置空白對(duì)照組與溶劑對(duì)照組（DMSO 水溶液），每組設(shè)3 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)中放入規(guī)格相似的泥鰍15 尾。實(shí)驗(yàn)周期為28 d，每24 h 更換實(shí)驗(yàn)試劑，每隔3 h 測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組2 種藥物濃度變化，保證實(shí)驗(yàn)濃度波動(dòng)于±0.50 ng·L-1。實(shí)驗(yàn)第7 d、14 d、21 d、28 d 取樣，觀察記錄泥鰍情況，有死亡泥鰍及時(shí)記錄并撈出。

酶活性測(cè)定時(shí)，拍暈?zāi)圉q，沿著泄殖孔剪開(kāi)，提取肝臟組織、稱量，將預(yù)冷過(guò)的生理鹽水依據(jù)重量∶體積=1∶19 的比率加入，于研缽中在冰袋上研磨為組織勻漿，做好標(biāo)記，以轉(zhuǎn)速3 000 r/min處理20 min，取上清于干凈離心管中在4 ℃冰箱中保存以便后續(xù)測(cè)定酶活性。

用愈創(chuàng)木酚法[23]檢測(cè)POD 活性，25 ℃環(huán)境下1 mg 組織蛋白1 min 催化分解l μg 底物為1 個(gè)酶活性單位；GOT 和GPT 活性用賴氏比色法[24]檢測(cè)，37 ℃環(huán)境下1 mg 組織蛋白與底物反應(yīng)30 min后形成1 g 丙酮酸為1 個(gè)酶活性單位。

1.3 數(shù)據(jù)處理

在急性毒性實(shí)驗(yàn)中，用Excel 軟件和SPSS 26.0軟件，利用TM和BCM質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)值與泥鰍死亡幾率制作線性回歸分析方程y=ax+b，計(jì)算出24 h、48 h、72 h 和96 h TM 和BCM 對(duì)6 月齡泥鰍的LC50和24 h SC[25]，計(jì)算公式為：

24 h SC=48 h LC500.3/(24 h LC50/48 h LC50)2。

在亞急性毒性實(shí)驗(yàn)中，數(shù)據(jù)均用平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差（Mean±SD）來(lái)表示，利用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 20.0開(kāi)展單因素方差分析，采用Duncan 法比較組間差異，使用GraphPad 8.0 作圖。當(dāng)0.01＜P＜0.05 時(shí)，用“*”標(biāo)注表示處理組與對(duì)照組之間差異顯著；P＜0.01 時(shí)，用“**”標(biāo)注表示處理組與對(duì)照組之間差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 急性毒性效應(yīng)

2.1.1 TM 對(duì)泥鰍的急性毒性效應(yīng)

高濃度TM 脅迫期間，泥鰍體色發(fā)紅，在水中不活躍，隨著暴露時(shí)長(zhǎng)增加，泥鰍身體失衡側(cè)翻，魚(yú)體明顯彎曲，并分泌紅色黏液，最終死亡。由表1可得，TM對(duì)泥鰍LC50隨時(shí)間增長(zhǎng)而減小，泥鰍死亡數(shù)量隨時(shí)間延長(zhǎng)增加。TM 對(duì)泥鰍24 h、48 h、72 h和96 h LC50分別為35.48 mg·L-1、26.98 mg·L-1、17.25mg·L-1和10.03mg·L-1，24h 的SC為6.16mg·L-1。

表1 TM 對(duì)泥鰍急性毒性結(jié)果Tab.1 Results of acute toxicity of TM to loach

2.1.2 BCM 對(duì)泥鰍的急性毒性效應(yīng)

高質(zhì)量濃度BCM組的泥鰍泄殖腔分泌黃色黏液，體表褶皺變形，在水中的興奮性降低，對(duì)食物敏感性下降，魚(yú)體發(fā)白逐漸死亡。BCM對(duì)泥鰍的LC50隨時(shí)間增長(zhǎng)而減小，泥鰍死亡數(shù)量隨脅迫時(shí)間持續(xù)上升。BCM對(duì)泥鰍的24 h、48 h、72 h 和96 h LC50分別為23.53 mg·L-1、17.66 mg·L-1、6.54 mg·L-1和3.58 mg·L-1，24 h 的SC 為3.98 mg·L-1（表2）。

表2 BCM 對(duì)泥鰍急性毒性結(jié)果Tab.2 Results of acute toxicity of BCM to loach

2.2 2 種殺菌劑對(duì)泥鰍亞急性毒性效應(yīng)

2.2.1 對(duì)泥鰍死亡數(shù)目影響

由圖1 可知，空白對(duì)照組與溶劑對(duì)照組泥鰍死亡數(shù)目相同，未出現(xiàn)顯著差異。由圖1-a 可知，各TM處理組泥鰍死亡數(shù)目差異較大，脅迫7 d、14 d、21 d 和28 d 時(shí)，泥鰍死亡數(shù)目隨脅迫濃度增加呈現(xiàn)升高趨勢(shì)，其中5.00 mg·L-1濃度組死亡數(shù)目最多；由圖1-b 可知，各BCM處理組泥鰍死亡數(shù)目同樣差異較大，脅迫期內(nèi)泥鰍死亡數(shù)目的增加與脅迫濃度存在明顯劑量效應(yīng)，其中2.50 mg·L-1濃度組死亡數(shù)目大于其他3 個(gè)濃度組；同一TM、BCM濃度脅迫下，泥鰍死亡數(shù)目隨脅迫時(shí)間增加而升高，TM、BCM脅迫下泥鰍死亡數(shù)目表現(xiàn)為：7 d＜14 d＜21 d＜28 d，整體上BCM脅迫下泥鰍死亡數(shù)目大于TM。

圖1 泥鰍死亡數(shù)目隨TM、BCM 脅迫時(shí)間的變化Fig.1 Changes in death member in loach liver with TM and BCM stress period

2.2.2 對(duì)肝臟POD 活性的影響

由圖2-a 可知，TM 各濃度組脅迫7 d 時(shí)泥鰍肝臟POD 活性顯著高于對(duì)照組，14 d 時(shí)活性達(dá)到最高，21 d 時(shí)活性明顯下降，28 d 時(shí)活性最低，高濃度組（5.00 mg·L-1）POD 活性低于對(duì)照組。由圖2-b 可知，BCM 各濃度組脅迫7d 時(shí)泥鰍肝臟POD活性顯著高于對(duì)照組，其中0.02 mg·L-1、0.10 mg·L-1、0.50 mg·L-1濃度組脅迫14 d 時(shí)活性最高，之后下降。高濃度組（2.50 mg·L-1）在脅迫7 d 時(shí)POD 活性即達(dá)到最大值，脅迫14 d 時(shí)活性顯著下降，28 d時(shí)活性最低。

圖2 泥鰍肝臟抗氧化物酶活性隨TM、BCM 脅迫時(shí)間的變化Fig.2 Changes in POD activity in loach liver with TM and BCM stress period

2.2.3 對(duì)GOT 活性的影響

由圖3-a 可知，TM各濃度組脅迫7 d 時(shí)泥鰍肝臟GOT 活性顯著高于對(duì)照組，TM脅迫14 d 后高濃度組GOT 活性下降，脅迫28 d 時(shí)各濃度組GOT 活性均受到抑制作用，低濃度組（0.05 mg·L-1）活性最大。由圖3-b 可知，與對(duì)照組相比，BCM脅迫7 d 時(shí)各濃度組GOT 活性被顯著激活，脅迫28 d 時(shí)各濃度組GOT 活性被明顯抑制。在不同濃度TM 和BCM脅迫時(shí)，隨著脅迫濃度的增大，GOT 活性表現(xiàn)為低濃度時(shí)促進(jìn)高濃度時(shí)抑制的現(xiàn)象，BCM處理組GOT 活性變化較TM處理組更敏感。

圖3 泥鰍肝臟谷草轉(zhuǎn)氨酶活性隨TM、BCM 脅迫時(shí)間的變化Fig.3 Changes in GOT activity in loach liver with TM and BCM stress period

2.2.4 對(duì)GPT 活性的影響

由圖4-a 可知，與對(duì)照組相比，TM各濃度組脅迫7 d 時(shí)GPT 活性顯著升高，超出對(duì)照組活性2倍，脅迫14 d 后各濃度組GPT 活性均下降，隨著濃度提升GPT 活性逐漸下降，出現(xiàn)明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。由圖4-b 可得，與對(duì)照組相比，BCM脅迫7 d各濃度組GPT 活性呈顯著上升趨勢(shì)，脅迫14 d 后活性總體下降，高濃度組（2.50 mg·L-1）28 d 時(shí)GPT活性低于對(duì)照組。

圖4 泥鰍肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性隨TM、BCM 脅迫時(shí)間的變化Fig.4 Changes in GPT activity in loach liver with TM and BCM stress period

3 討論

3.1 TM 和BCM 對(duì)泥鰍的急性毒性效應(yīng)

施用殺菌劑農(nóng)藥對(duì)水生動(dòng)物有一定毒性效應(yīng)，其毒性等級(jí)在評(píng)價(jià)農(nóng)藥毒性中扮演著重要角色。李亞夢(mèng)[26]研究發(fā)現(xiàn)，BCM 對(duì)克氏原螯蝦（Procambarus clarkii）成體具中度毒性。袁思亮[27]研究發(fā)現(xiàn)，有效成分為50%的BCM 和TM 懸浮劑對(duì)大型溞（Daphnia magna）分別具有中毒與低毒。依照目前農(nóng)藥對(duì)魚(yú)類毒性等級(jí)分級(jí)準(zhǔn)則：LC50（96 h）＞10.0 mg·L-1的為低毒，1.0 mg·L-1＜LC50≤10.0 mg·L-1的為中毒，0.1 mg·L-1＜LC50≤1.0 mg·L-1的為高毒，LC50mg·L-1≤0.1 mg·L-1為劇毒[28]，不同物種間毒性等級(jí)研究中可能存在一定差別，這可能與2 種殺菌劑的制劑類型、物種間差異和物種的生長(zhǎng)階段密切相關(guān)。在本研究中，TM 96 h LC50為10.03 mg·L-1，對(duì)6 月齡毒性等級(jí)為低毒；BCM 96 h LC50為3.58 mg·L-1，對(duì)6 月齡泥鰍毒性等級(jí)為中毒，這與熊昭娣等[29]發(fā)現(xiàn)有效成分22%BCM殺菌劑96 h LC50為7.64 mg·L-1，對(duì)斑馬魚(yú)毒性屬于中毒的研究結(jié)果相似。

3.2 TM 和BCM 對(duì)泥鰍亞急性毒性效應(yīng)

TM和BCM長(zhǎng)期脅迫對(duì)泥鰍的影響嚴(yán)重，兩種殺菌劑刺激泥鰍死亡數(shù)目變化趨勢(shì)相似，BCM脅迫下泥鰍死亡數(shù)趨勢(shì)變化更顯著。TM和BCM同一時(shí)間脅迫下，泥鰍死亡數(shù)目均隨脅迫濃度增加而不斷增加，高濃度組死亡數(shù)持續(xù)上升；同一TM、BCM 濃度脅迫下，泥鰍死亡數(shù)目均隨脅迫時(shí)間增加而升高，呈現(xiàn)明顯時(shí)間效應(yīng)。

3.2.1 TM 和BCM 對(duì)泥鰍肝臟POD 活性的影響

動(dòng)物中毒時(shí)會(huì)發(fā)生氧化應(yīng)激[30，31]。POD 可將H2O2轉(zhuǎn)化為羥基化合物并排出體外[32]，調(diào)節(jié)機(jī)體變化，維持機(jī)體穩(wěn)態(tài)，廣泛存在于各個(gè)組織中，尤其是肝臟。張曉紅等[33]研究發(fā)現(xiàn)，低濃度丁草胺誘導(dǎo)金魚(yú)（Carassius auratus）POD 活性，但伴隨毒素積累肝臟受損其活性出現(xiàn)下降。本研究中，TM 脅迫7 d、14 d、21 d，泥鰍肝臟POD 活性隨濃度的升高呈先上升后下降的趨勢(shì)，存在明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系，說(shuō)明TM對(duì)泥鰍肝臟POD 先誘導(dǎo)后抑制，其中高濃度組脅迫28 d，抑制作用最明顯。低劑量TM雖然可以誘導(dǎo)POD 活性，但隨著TM 在體內(nèi)累積，所產(chǎn)生的超氧陰離子濃度超過(guò)機(jī)體承受能力，POD 活性降低。BCM脅迫14 d 0.02 mg·L-1、0.10 mg·L-1、0.50 mg·L-1濃度組活性均顯著誘導(dǎo)，而2.50 mg·L-1脅迫14 d明顯抑制POD 活性，說(shuō)明高濃度BCM脅迫短時(shí)間即可使機(jī)體產(chǎn)生大量超氧陰離子，從而抑制POD 活性。TM和BCM脅迫一定時(shí)間后活性氧自由基的積累已遠(yuǎn)超過(guò)抗氧化酶系統(tǒng)清理自由氧的能力，過(guò)量的氧自由基不能被抗氧化酶及時(shí)、高效地清除掉，導(dǎo)致POD 活性被抑制，這與林海[34]研究氟唑菌酰胺對(duì)斑馬魚(yú)POD 影響的結(jié)果類似。

3.2.2 TM 和BCM 對(duì)泥鰍肝臟GOT 和GPT 活性的影響

GOT 和GPT 是魚(yú)類肝臟中的主要解毒酶[35]，當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生炎癥、中毒、壞死時(shí)兩種轉(zhuǎn)氨酶釋放，因此轉(zhuǎn)氨酶可作為動(dòng)物毒性損傷效應(yīng)的標(biāo)志酶。在各組織中，GOT 在心臟中的活力最大，其次是肝臟；而GPT 則在肝臟中活力最大[36]。在氯氰菊酯脅迫下鯽（Carassius auratus）腎臟LDH 和血清GOT 活性變化研究中發(fā)現(xiàn)，各活性隨脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)產(chǎn)生先誘導(dǎo)后抑制的作用[37]；在亞甲基雙硫氰酸酯脅迫下斑鱧（Channa maculata）肝臟GOT 活性變化中發(fā)現(xiàn)，一定處理時(shí)間內(nèi)，高濃度脅迫GOT 活性短時(shí)間內(nèi)上升，而較低質(zhì)量濃度脅迫中，GOT 活性上升時(shí)間較高濃度更長(zhǎng)[38]。本研究中，BCM比TM對(duì)泥鰍肝臟GOT活性更敏感，泥鰍肝臟GOT 活性均先上升后下降，表明兩種殺菌劑低劑量脅迫誘導(dǎo)GOT 活性，高劑量抑制其活性，呈現(xiàn)明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系，干擾泥鰍肝臟GOT 平衡。在低濃度TM組GOT 活性在脅迫21 d 達(dá)到最大值，高濃度組GOT 活性脅迫14 d達(dá)到最大值，而B(niǎo)CM各濃度組28 d GOT 均呈下降趨勢(shì)，說(shuō)明伴隨暴露時(shí)間增加肝臟調(diào)節(jié)能力下降，即使泥鰍一定時(shí)間后處于低質(zhì)量濃度污染中，相關(guān)活性也仍舊會(huì)偏低。

GPT 抗活性氧毒性程度可作為干擾魚(yú)氧自由基的污染物檢測(cè)標(biāo)志[39]。在聲脅迫對(duì)斜帶石斑魚(yú)（Epinephelus coioides）的研究中發(fā)現(xiàn)，GPT 活性隨著脅迫時(shí)間延長(zhǎng)和強(qiáng)度增加而升高[40]。本研究中，兩種殺菌劑脅迫下GPT 均有顯著變化，TM脅迫14 d 高濃度組GPT 活性呈下降趨勢(shì)，TM 脅迫會(huì)誘導(dǎo)泥鰍體內(nèi)過(guò)氧化物過(guò)度累積，大量異常積累會(huì)誘使GPT 防御失敗、活性降低。BCM脅迫7 d 各濃度組顯著誘導(dǎo)GPT 活性，脅迫14 d 后，各濃度組GPT 活性均受抑制，當(dāng)脅迫濃度高于一定程度時(shí)，體內(nèi)GPT 未能及時(shí)清除機(jī)體的有害物質(zhì)，導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)受到破壞，酶活性逐漸下降。泥鰍肝臟對(duì)殺菌劑應(yīng)激反應(yīng)中GPT 比GOT 活性變化更顯著，可能是GPT 和GOT 的主要作用部位不相同所致[41]。

本文研究了兩種常用殺菌劑TM 和BCM 的毒性。結(jié)果表明，TM對(duì)泥鰍的毒性等級(jí)為低毒，BCM對(duì)泥鰍的毒性等級(jí)為中毒。兩種殺菌劑短期脅迫不同程度刺激泥鰍死亡，誘導(dǎo)POD、GOT、GPT 活性，而隨著脅迫時(shí)間延長(zhǎng)，泥鰍死亡數(shù)目持續(xù)增加，對(duì)POD、GOT、GPT 活性誘導(dǎo)程度減弱甚至顯著抑制，并與毒物濃度呈明顯劑量效應(yīng)。BCM對(duì)泥鰍毒性大于TM，且水環(huán)境中一定劑量TM、BCM長(zhǎng)期存在可能嚴(yán)重影響泥鰍抗氧化酶系統(tǒng)，在生產(chǎn)中應(yīng)合理使用。