邱啟官

(長(zhǎng)沙生態(tài)動(dòng)物園，湖南 長(zhǎng)沙 410004)

疣鼻天鵝(Cygnusolor)是一種大型鳥(niǎo)類，屬游禽，因其前額突起一個(gè)瘤疣狀物，所以被命名為疣鼻天鵝。疣鼻天鵝除腳趾、蹼呈灰黑色以外全身覆蓋白色羽毛，脖頸細(xì)長(zhǎng)，游泳時(shí)彎曲成“S”形，飛行時(shí)脖頸伸直，姿態(tài)優(yōu)美。疣鼻天鵝主要分布于歐洲、非洲、亞洲，常營(yíng)居于蘆葦叢中，主要以水草的根、莖、葉、芽、果實(shí)為食。不動(dòng)桿菌(Acinetobacter)是非發(fā)酵菌的條件致病菌，當(dāng)機(jī)體抵抗力下降時(shí)易感染。該菌可引起呼吸道感染、敗血癥、腦膜炎、心內(nèi)膜炎、傷口及皮膚感染、泌尿生殖道感染等[1]，嚴(yán)重者致死。其中鮑曼不動(dòng)桿菌(A.baumanii)極易對(duì)包括碳青霉烯類抗生素在內(nèi)的大多數(shù)抗菌藥產(chǎn)生耐藥性[2]。高溫天氣下受到污染的水體給不動(dòng)桿菌提供了適宜的環(huán)境，造成了一批疣鼻天鵝的群發(fā)性疾病。通過(guò)對(duì)此病的診斷、治療和分析，可為以后此類疾病的防治提供參考。

1 發(fā)病情況

2021年9月14日—10月4日，長(zhǎng)沙生態(tài)動(dòng)物園天鵝湖水域共26只疣鼻天鵝發(fā)病。其中9月14日發(fā)現(xiàn)在湖內(nèi)死亡5只，15日發(fā)現(xiàn)在湖內(nèi)死亡5只。將剩余的16只疣鼻天鵝轉(zhuǎn)移至獸醫(yī)院隔離場(chǎng)治療，9月16日早上發(fā)現(xiàn)死亡2只，17日死亡1只，22日死亡1只，10月3日死亡1只，10月4日死亡1只。

2 疾病診斷

2.1 臨床觀察及病理檢查

觀察轉(zhuǎn)移至獸醫(yī)院的16只疣鼻天鵝的精神狀況、運(yùn)動(dòng)狀況和糞便形狀，發(fā)現(xiàn)臨床表現(xiàn)為精神沉郁、不喜動(dòng)、拉水樣稀糞，其中4只脖子彎曲著地，呼吸時(shí)有時(shí)無(wú)。

對(duì)9月14—15日死亡的10只疣鼻天鵝進(jìn)行解剖，觀察內(nèi)部臟器變化，發(fā)現(xiàn)其解剖結(jié)果具有共同的特征：胰腺出血(圖1A)，脾臟有紅色梗死(圖1B)，十二指腸出血(圖1C)；其中2只還有肺炎。9月16日和17日死亡的3只疣鼻天鵝，除出現(xiàn)14日和15日死亡的疣鼻天鵝的共同特征外，心臟外膜內(nèi)膜均有出血點(diǎn)。9月22日死亡1只疣鼻天鵝，其胰腺、脾臟、十二指腸無(wú)明顯病變，但心肌有出血點(diǎn)，肺部有炎癥。10月3日死亡的1只，心臟外有大量尿酸鹽沉積，塵肺并局部壞死。10月4日死亡的1只，內(nèi)臟無(wú)明顯病變，從主氣管取出圓狀白色偽膜。將患病疣鼻天鵝內(nèi)臟出血、肺部炎癥等剖檢結(jié)果與其他動(dòng)物感染不動(dòng)桿菌的癥狀比較，疑似為不動(dòng)桿菌感染。

圖1 胰腺(A)、脾臟(B)和十二指腸(C)病變

采集肝臟、脾臟送長(zhǎng)沙市中心醫(yī)院做切片，進(jìn)行病理診斷分析。結(jié)果顯示肝組織結(jié)構(gòu)保留，肝細(xì)胞廣泛變性壞死，伴有膽汁淤積，匯管區(qū)可見(jiàn)中等量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，符合急性或亞急性肝臟損傷所致肝組織大塊壞死(圖2A)。脾臟淤血性腫大，脾臟結(jié)構(gòu)欠清，其內(nèi)可見(jiàn)小淋巴細(xì)胞、有核紅細(xì)胞，脾竇內(nèi)充滿輕度異型單核細(xì)胞樣細(xì)胞，不能明確其細(xì)胞來(lái)源及性質(zhì)(圖2B)。

A.肝臟(200×)；B.脾臟(200×)

2.2 實(shí)驗(yàn)室診斷

2.2.1 細(xì)菌的分離

無(wú)菌采取胰腺、脾臟、十二指腸、肝臟、肺臟樣品送湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)技術(shù)檢測(cè)中心實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。樣品接種于哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基，置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)37℃培養(yǎng)24～48h，挑取典型單菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)。接種脾、肝、肺等組織的血瓊脂培養(yǎng)基上有均一的菌落生長(zhǎng)。分離的菌落較黏稠，呈灰白色圓形，表面光滑、濕潤(rùn)，無(wú)溶血現(xiàn)象(圖3A)。染色鏡檢顯示為革蘭染色陰性(圖3B)，短桿菌，兩端鈍圓，無(wú)芽孢。分離菌初步鑒定為不動(dòng)桿菌。

A.菌落形態(tài)；B.革蘭氏染色鏡檢(1 000×)。

2.2.2 細(xì)菌的鑒定

DNA提取：使用美國(guó)Promege公司的Wizard?SV Genomic DNA Purification System試劑盒提取細(xì)菌基因組DNA。

16S rDNA通用引物：27F：5′-AGAGTTTAGT CCTGCCTCAG-3′；1492R：5′-CTACGGCTCACT CGTTACGA-3′。由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

PCR反應(yīng)體系25.0μL：Premix TaqTM12.5μL，無(wú)核酸酶水6.5μL，上、下游通用引物各1μL，模板DNA 4.0μL。

PCR反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性5min；95℃變性20s，56℃退火30 s，72 ℃延伸90 min，共35個(gè)循環(huán)；最后72 ℃延伸5 min。

分離菌的16S rDNA基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物約為1450bp。PCR產(chǎn)物送至生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序結(jié)果與GenBank中的序列進(jìn)行Blast比對(duì)，結(jié)果顯示與鮑曼不動(dòng)桿菌高度同源，相似度達(dá)到98%。結(jié)合細(xì)菌形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果，判定該分離菌株為鮑曼不動(dòng)桿菌。

2.3 診斷結(jié)論

經(jīng)臨床癥狀觀察、病理檢查、分離菌的鑒定，結(jié)合不動(dòng)桿菌引發(fā)疾病的相關(guān)文獻(xiàn)，該批疣鼻天鵝符合不動(dòng)桿菌引發(fā)的病變，診斷該病為鮑曼不動(dòng)桿菌感染。

3 疾病治療

9月14—24日，根據(jù)臨床癥狀和解剖結(jié)果基本排除禽流感、小鵝瘟、禽霍亂、肝炎、副傷寒沙門氏菌及寄生蟲(chóng)，但仍不能確定具體病原體的情況下，以對(duì)癥治療為主：肌肉注射頭孢他啶(0.5g，3次·d-1)、硫酸阿米卡星(0.1g，2次·d-1)、維生素K1(5mg，2次·d-1)，靜脈滴注利巴韋林(0.1g，2次·d-1)。癥狀表現(xiàn)嚴(yán)重的增加靜脈滴注維生素C(0.1g，2次·d-1)、三磷酸腺苷二鈉(5mg，2次·d-1)、肌酐(50mg，2次·d-1)。

經(jīng)實(shí)驗(yàn)室診斷疑似致病菌為鮑曼不動(dòng)桿菌后，9月24日—10月4日，借鑒同類型分離菌株的藥敏試驗(yàn)結(jié)果，調(diào)整治療方案為：全群靜脈滴注頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉(0.5g，2次·d-1)和鹽酸左氧氟沙星氯化鈉(0.1g，1次·d-1)，肌肉注射維生素K1(5mg，2次·d-1)。

對(duì)全園水系采取分段抽干、撲灑石灰等方式進(jìn)行全面消毒。10月4—11日，對(duì)所有治療存活的疣鼻天鵝精心護(hù)理一周，10月12日治療完成放回班組。此次病情從發(fā)生到控制共持續(xù)20d，死亡16只疣鼻天鵝。

4 討論

鮑曼不動(dòng)桿菌廣泛分布于水體和土壤中，常引起生物被膜感染，不易清除，且泛耐藥或多重耐藥，治療極困難。不動(dòng)桿菌感染在國(guó)內(nèi)外醫(yī)院報(bào)道和研究比較深入。有研究表明，動(dòng)物臨床病例中由于細(xì)菌引起感染的比例不斷上升，其中耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌從獸醫(yī)臨床標(biāo)本中分離出來(lái)的頻率也越來(lái)越高[3]；2020年，三門峽天鵝湖國(guó)家城市濕地公園從病死的野生疣鼻天鵝中分離出洛菲不動(dòng)桿菌[4]；2022年，安徽科技學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院報(bào)告從病死鵝中分離出鮑曼不動(dòng)桿菌[5]；四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院檢測(cè)出肉牛不動(dòng)桿菌[6]；奶牛生乳中分離出洛菲不動(dòng)桿菌[7]；不動(dòng)桿菌感染嚙齒動(dòng)物(如鼠)[8]、水禽(如鴨)[9]導(dǎo)致死亡的病例也時(shí)有報(bào)道。鮑曼不動(dòng)桿菌普遍存在于自然界，當(dāng)動(dòng)物體質(zhì)弱時(shí)易于感染；鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)多種動(dòng)物顯示出致病性，已經(jīng)成為自然界普遍存在的致病菌種。

目前針對(duì)于疣鼻天鵝感染鮑曼不動(dòng)桿菌后的臨床研究較少，缺乏典型癥狀的總結(jié)，僅靠臨床癥狀和剖檢病理變化很難確定為哪種細(xì)菌感染。在動(dòng)物治療中，取得病樣后經(jīng)化驗(yàn)?zāi)艽_定某一種病原，根據(jù)病原采取選擇特異性的藥物、補(bǔ)充體液、加強(qiáng)護(hù)理減少并發(fā)癥的危害、對(duì)癥治療等治療方法很重要。飼養(yǎng)應(yīng)精細(xì)，治療應(yīng)精準(zhǔn)。本次疣鼻天鵝感染鮑曼不動(dòng)桿菌在未確定之前，采用排除法保守治療并配合輔助療法；在確定病原后，對(duì)癥治療效果較佳。在感染鮑曼不動(dòng)桿菌后的中后期，部分病例疑似因鮑曼不動(dòng)桿菌侵犯腦部和神經(jīng)系統(tǒng)，導(dǎo)致大腦皮層出現(xiàn)出血、淤血或神經(jīng)損傷的情況。這些疣鼻天鵝會(huì)出現(xiàn)低頭、頭部撞擊地面或墻壁、頭部不受控制等一系列神經(jīng)癥狀，剖檢后發(fā)現(xiàn)頭頸部皮下出現(xiàn)水腫、淤血和出血等癥狀。針對(duì)這些臨床表現(xiàn)，做好飼養(yǎng)管理、防止撞傷和溺水、對(duì)具有此癥狀的病例提供適當(dāng)護(hù)理顯得尤為重要。近年來(lái)，單味中藥治療鮑曼不動(dòng)桿菌[10-11]、中藥復(fù)方治療鮑曼不動(dòng)桿菌[12-13]、中藥與抗生素聯(lián)合應(yīng)用治療鮑曼不動(dòng)桿菌均進(jìn)行了研究[14-16]，取得了好的抑菌效果，為野生動(dòng)物感染鮑曼不動(dòng)桿菌的治療藥物提供了新的選擇。疣鼻天鵝感染鮑曼不動(dòng)桿菌的病例很少，無(wú)相關(guān)特征性病變的報(bào)道。此次病例，胰腺出血、脾臟紅色梗死、十二指腸出血為共同病理變化，其能否作為疣鼻天鵝感染鮑曼不動(dòng)桿菌的特征性病變，需要相關(guān)專業(yè)人員進(jìn)一步的驗(yàn)證。

通過(guò)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，每年的7—9月份是此種疾病的易發(fā)期，湖南屬于亞熱帶季風(fēng)氣候，夏季高溫，如果一段時(shí)間沒(méi)有充足的雨水，人工湖泊如果沒(méi)有流動(dòng)性水源，疣鼻天鵝的排泄物及飼料在高溫天氣下為水體提供了大量的營(yíng)養(yǎng)，極易爆發(fā)流行性的傳染病。疣鼻天鵝的機(jī)體抵抗力降低，多種條件性致病菌均易感，在此次病例細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)，也培養(yǎng)出了肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae)，結(jié)合肺炎克雷伯菌在飼養(yǎng)環(huán)境的普遍性、臨床癥狀、剖檢變化，認(rèn)為造成疣鼻天鵝死亡的因素是鮑曼不動(dòng)桿菌感染。對(duì)于此類群發(fā)性疾病，早發(fā)現(xiàn)、早診斷和早治療，以及在疾病發(fā)生時(shí)對(duì)健康個(gè)體進(jìn)行隔離，使其遠(yuǎn)離以前的飼養(yǎng)環(huán)境，采取提高機(jī)體抵抗力、減少應(yīng)激和輔助使用一些抗生素的措施，能夠阻止疾病的進(jìn)一步發(fā)展和傳播。因此，群體感染時(shí)應(yīng)該視感染嚴(yán)重程度分群飼養(yǎng)、分群治療和護(hù)理，無(wú)癥狀的保留在原場(chǎng)地，癥狀輕的進(jìn)行隔離，癥狀重的單獨(dú)治療，做到早發(fā)現(xiàn)、早隔離。飼養(yǎng)人員也應(yīng)與分群動(dòng)物對(duì)應(yīng)，保持相對(duì)穩(wěn)定，避免病原傳播。