陳志峰

深圳市坪山區(qū)人民醫(yī)院心血管內(nèi)科，廣東 深圳 518118

動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）是嚴(yán)重危害人類健康的常見病，其發(fā)生率逐年上升。近年來，有研究［1］表明，慢性炎癥反應(yīng)是引起動脈粥樣硬化的病理過程，而白細(xì)胞分化抗原40（Cluster of Differentiation 40，CD40）介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)影響動脈粥樣硬化相關(guān)細(xì)胞功能，與斑塊的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［2-3］。目前，如何早期發(fā)現(xiàn)斑塊的不穩(wěn)定、預(yù)防急性心血管事件的發(fā)生，成為臨床的研究熱點(diǎn)?；诖耍狙芯刻接懠毙怨跔顒用}綜合征（acute cor?onary syndromes，ACS）患者外周血單個核細(xì)胞表達(dá)CD40和血清非高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）的相關(guān)性，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取深圳市坪山區(qū)人民醫(yī)院心血管內(nèi)科2019 年9 月—2020 年12 月收治的52 例住院患者作為研究對象。依據(jù)WHO1979 年制訂的標(biāo)準(zhǔn)并參考《2000 年ACC/AHA（美國心臟病學(xué)會）的診斷指南》［4］和《急性ST段抬高心肌梗死診斷和治療指南》［5］將其分為ACS組21例、穩(wěn)定性心絞痛（stable angina，SA）組16例及以非冠狀動脈粥樣硬化心臟?。ê喎Q冠心病）的患者作為對照組15 例。其中，ACS組：男16例，女5例；年齡38～74歲，平均年齡（57.33±11.52）歲。SA 組：男11 例，女5 例；年齡41～72 歲，平均年齡（59.12±8.87）歲。對照組，男9例，女6例；年齡40～76歲，平均年齡（55.93±10.74）歲。三組患者一般資料具有可比性（P＞0.05）。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)通過。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：均來自漢族人群，無血緣關(guān)系。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：①感染、慢性炎癥、惡性腫瘤、膠原系統(tǒng)疾病、甲狀腺功能亢進(jìn)、肝膽疾病等非心臟性疾病。②其他心臟疾病，如繼發(fā)性高血壓、冠心病、心力衰竭、外周血管病、風(fēng)濕性心瓣膜病、旁路移植術(shù)后及3 個月內(nèi)行溶栓治療等。

1.3 方法

三組患者入院48 h 內(nèi)，采肘靜脈血2 mL，加入含枸椽酸鈉抗凝的塑料管中，送實(shí)驗(yàn)室行外周血單個核細(xì)胞分離。將此管靜脈血緩慢移入另一加有等量淋巴細(xì)胞分層液的離心管中，使其形成清晰界面，室溫下2 000 r/min 離心25 min，吸取中間灰白色致密層，即分離出的單個核細(xì)胞。然后加入等體積磷酸鹽緩沖鹽水，在室溫下2 000 r/min 離心10 min，棄除上清，將細(xì)胞沉淀層移入1.5 mL 的離心管，用3～4 倍體積的磷酸鹽緩沖鹽水液洗2 次，再棄除上清，收集細(xì)胞沉淀備用。同時，抽取靜脈血2 mL 置于試管中，放置1 h，以4 ℃1 500 r/min 離心10 min，取上清。血清儲存在80 ℃冰箱中待測。采用全自動生化分析儀檢測三組患者血壓、血脂、血糖及體質(zhì)量指數(shù)（BMI）等指標(biāo)。采用間接免疫熒光流式細(xì)胞術(shù)檢測三組患者外周血單個核細(xì)胞表面CD40 和血清非HDL-C 水平，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測三組患者的血清C 反應(yīng)蛋白（CRP）水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用單因素方差分析（One-Way ANOVAB）或χ2檢驗(yàn)。CD40、CRP和非HDL-C指標(biāo)之間的相關(guān)性采用Bivariate 相關(guān)性分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組患者血壓、血脂、血糖及BMI情況

三組患者血壓、血脂[除低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）外]、血糖及BMI比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；ACS 組的LDL-C 較SA 組、對照組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 三組患者血壓、血脂、血糖及BMI情況（±s）

表1 三組患者血壓、血脂、血糖及BMI情況（±s）

注：1mmHg=0.133 kPa。

指標(biāo)血壓（mmHg）收縮壓舒張壓血脂（mmol/L）總膽固醇HDL-C LDL-C甘油三酯空腹血漿葡萄糖BMI（kg/m2）對照組（n=15）SA組（n=16）ACS組（n=21）F值P值126.56±20.70 75.78±9.80 128.56±14.69 76.40±7.23 134.19±22.31 79.33±11.11 0.665 0.288＞0.05＞0.05 4.04±0.79 1.54±0.30 1.83±0.45 1.71±0.86 4.63±0.99 25.19±4.80 4.55±0.97 1.24±0.43 2.30±0.59 2.27±0.59 5.31±1.06 23.18±2.55 4.95±1.43 1.18±0.36 2.56±0.90 2.04±1.03 5.87±3.07 24.03±2.39 2.952 3.323 5.825 0.808 0.657 0.964＞0.05＞0.05＜0.05＞0.05＞0.05＞0.05

2.2 三組患者外周血單個核細(xì)胞表達(dá)CD40 的平均熒光強(qiáng)度表達(dá)情況

對照組、SA組、ACS組的平均熒光強(qiáng)度分別為（11.50±2.21）、（9.99±2.55）、（19.41±5.08）。ACS組外周血單個核細(xì)胞表達(dá)CD40水平較SA組和對照組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-6.654、-5.062，P＜0.05）, SA 組與對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.829，P＞0.05）。三組患者平均熒光強(qiáng)度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=34.481，P＜0.05）。

2.3 三組患者血清CRP水平情況

ACS 組血清CRP 水平為（13.04±16.74）mg/L，高于SA 組的（1.58±1.19）mg/L 及對照組的（1.43±1.10）mg/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-2.014、-2.536，P＜0.05），SA 組與對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.138，P＞0.05）。三組患者血清CRP 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=4.123，P＜0.05）。

2.4 三組患者血清非HDL-C水平情況

ACS 組血清非HDL-C 水平為（3.78±1.31） mmol/L，高于SA 組的（3.31±1.06）mmol/L 及對照組的（2.50±0.70）mmol/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-2.661、-2.677，P＜0.05）, SA 組與對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-1.804，P＞0.05)。三組患者血清非HDL-C水平相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=4.567，P＜0.05）。

2.5 三組患者CRP、CD40、非HDL-C 指標(biāo)間的Bivariate相關(guān)性分析

CD40 與CRP 呈 顯 著 相 關(guān) 性（r=0.407，P＜0.05），CD40與非HDL-C呈顯著相關(guān)性（r=0.379，P＜0.05）。

3 討論

目前，慢性炎癥反應(yīng)是引起動脈粥樣硬化的病理基礎(chǔ)［1］，而冠狀動脈內(nèi)斑塊不穩(wěn)定導(dǎo)致的斑塊破裂是ACS發(fā)病的主要原因［6］。因此，探究斑塊不穩(wěn)定的血清學(xué)指標(biāo)顯得十分重要，可以為早期預(yù)測ACS的發(fā)生提供相關(guān)信息。

本研究結(jié)果顯示，ACS組外周血單個核細(xì)胞表達(dá)CD40較SA 組和對照組高，提示CD40 可能與ACS 中冠脈內(nèi)斑塊不穩(wěn)定、斑塊破裂有關(guān)，是動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定的標(biāo)志。CD40 隨著動脈粥樣硬化分級程度增加而增加，提示CD40可能在動脈粥樣硬化形成早期產(chǎn)生的作用較大［3］。有研究［7-8］證實(shí)，CD40-CD40L參與了動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展過程，而阻斷CD40-CD40L 相互作用可抑制動脈粥樣硬化的形成和發(fā)展。CD40和CD40L存在動脈粥樣斑塊，在不穩(wěn)定斑塊中表達(dá)更明顯［9-10］。粥樣斑塊的炎癥是促使其破裂的重要因素。CD40分布在斑塊的肩部，而肩部是不穩(wěn)定斑塊最容易破裂的地方。斑塊內(nèi)侵入炎性細(xì)胞越多，斑塊越脆弱。巨噬細(xì)胞能夠合成基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrix metal?loproteinase，MMPS），包括MMP-1、MMP-2、MMP-9 及MMP-3，這一酶家族能夠降解纖維帽的基質(zhì)是動脈粥樣斑塊趨向不穩(wěn)定的主要原因之一［11］。MMPS 還可通過活化血小板、損傷血管內(nèi)膜等機(jī)制致使動脈粥樣斑塊破裂，造成斑塊不穩(wěn)定［12］。這些研究進(jìn)一步支持了本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，據(jù)此推測，外周血單個核細(xì)胞表面CD40水平升高，可能會反映斑塊的炎癥程度和穩(wěn)定性狀況。

有研究［13-14］表明，CRP 水平與未來冠狀血管事件的發(fā)生密切相關(guān)。CRP 是一種臨床血清標(biāo)志物，通過增強(qiáng)炎癥反應(yīng)，參與動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展。Burke等［15］對突發(fā)性冠心病死亡的患者行病理尸檢研究時發(fā)現(xiàn)，血液中高敏CRP水平較高的組與較低的組相比，患者血管內(nèi)薄纖維帽的斑塊數(shù)目明顯增多，且容易破裂。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ACS 組的患者血清CRP 水平高于SA 組患者和對照組，提示CD40水平與CRP水平顯著相關(guān)。因此，本研究認(rèn)為，外周血單個核細(xì)胞表達(dá)CD40 可作為ACS 臨床預(yù)測炎癥的指標(biāo)之一，對于ACS 患者的病情判斷或預(yù)后評估具有一定的意義。

目前，LDL-C 是指導(dǎo)臨床治療高脂血癥的主要指標(biāo)，但是有部分患者即使LDL-C達(dá)標(biāo)，動脈粥樣硬化性心血管疾病的殘余風(fēng)險仍然存在。其中，在脂質(zhì)方面，非HDL-C及低HDL-C 最受關(guān)注。有研究［16］探討高心血管疾病風(fēng)險的老年人的甘油三酯和殘余膽固醇與主要心血管事件（MACE）的關(guān)系，研究結(jié)果顯示，HDL-C、LDL-C與MACE無關(guān)。相反血清甘油三酯和非HDL-C濃度每增加10 mg/dL，MACE風(fēng)險分別增加4%和5%，而殘余膽固醇每增加10 mg/dL，MACE風(fēng)險增加21%，致使動脈粥樣硬化的脂質(zhì)改變（甘油三酯＞1.69 mmol/L 及HDL-C＜1.03 mmol/L）也顯著增加，MACE風(fēng)險約44%。另外一項(xiàng)研究［17］極低密度脂蛋白（VLDL）和甘油三酯在載脂蛋白B（apoB）引起心肌梗死的風(fēng)險中的作用，結(jié)果顯示，VLDL膽固醇可解釋50%，包括apoB脂蛋白升高引起的心梗風(fēng)險，而甘油三酯不能解釋該風(fēng)險。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，非HDL-C 濃度在ACS 組中較SA組與對照組高，提示非HDL-C濃度增加與急性冠脈綜合征呈正相關(guān)性，而CD40 與非HDL-C 呈顯著相關(guān)性。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，非HDL-C與急性冠脈綜合征相關(guān)，說明非傳統(tǒng)的脂質(zhì)生物標(biāo)志物可用于評估殘余心血管風(fēng)險，有助于指導(dǎo)臨床決策及改善預(yù)后。

綜上所述，動脈粥樣硬化斑塊中的多種細(xì)胞因子相互作用，影響斑塊的穩(wěn)定性，而血清中細(xì)胞因子水平直接或間接地反映了斑塊炎癥程度和穩(wěn)定性狀況。因此，外周血單個核細(xì)胞表達(dá)CD40可能是冠脈病變活動性臨床標(biāo)志物，有望成為預(yù)測ACS 發(fā)生及識別易損斑塊的敏感指標(biāo)，為預(yù)防和治療ACS提供新的思路。