李國相，車顏婷，高迪，苗曉莉，張成宇，林彬，張威風(fēng)，2，3，何淑旺，3*（.北京達(dá)因高科兒童藥物研究院有限公司，北京 0076；2.山東大學(xué)，濟(jì)南 25000；3.山東達(dá)因海洋生物制藥股份有限公司，山東 威海 264300）

地氯雷他定是先靈葆雅公司于1988年開發(fā)上市的三環(huán)長效型第3代組胺拮抗劑。本品為氯雷他定的活性代謝物，可通過選擇性地拮抗外周H1受體，快速緩解季節(jié)性過敏性鼻炎的相關(guān)癥狀，如打噴嚏、流涕和鼻癢、鼻黏膜充血、鼻塞；還用于緩解慢性特發(fā)性蕁麻疹的相關(guān)癥狀如瘙癢，并可減少蕁麻疹的數(shù)量及大小[1-3]。

地氯雷他定口溶膜為改良型新藥，還未上市，各國藥典中均未收載該品種。《美國藥典》（USPNF）[4-5]、國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)[6]、國家藥典委公示稿[7]及相關(guān)文獻(xiàn)[8-13]中均是關(guān)于地氯雷他定片和地氯雷他定口崩片的溶出度和溶出曲線測(cè)定，分別采用紫外分光光度法和HPLC法檢驗(yàn)劑片或口崩片的溶出度和溶出曲線。紫外分光光度法專屬性差、操作煩瑣、耗時(shí)長，USP中地氯雷他定口崩片采用HPLC法測(cè)定溶出度，但流動(dòng)相中磷酸二氫鉀濃度較高，對(duì)色譜柱壽命影響較大。陳承貴等[11-12]采用HPLC法測(cè)定溶出度，但流動(dòng)相用三乙胺調(diào)pH值，操作難且三乙胺有強(qiáng)烈氨臭，刺激性強(qiáng)，對(duì)色譜柱壽命影響也較大。嚴(yán)一銘[13]采用HPLC法測(cè)定溶出曲線，該方法與地氯雷他定片公示稿的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法一致，流動(dòng)相鹽濃度較低、無害環(huán)保且便于制備，但地氯雷他定保留時(shí)間在21 min左右，耗時(shí)長。本研究擬優(yōu)化色譜條件，使地氯雷他定保留時(shí)間縮短至2.5 min左右，提高檢測(cè)效率，進(jìn)而滿足樣品大批量快速測(cè)定的質(zhì)量控制需求。

1 儀器與試藥

1260液相色譜儀（美國安捷倫公司），860DL藥物溶出儀（LOGAN），分析天平（梅特勒托利多，精度：0.01 mg），地氯雷他定對(duì)照品（含量：99.9%，批號(hào)：100919-202105，中國食品藥品檢定研究院），地氯雷他定口溶膜（規(guī)格：5 mg，批號(hào)：230301、230302、230303，均為自制），乙腈和三氟乙酸為色譜純，十二烷基硫酸鈉、鹽酸、醋酸鈉、冰醋酸、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、氯化鈉為化學(xué)純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：采用Agilent C8（4.6 mm×150 mm，3.5 μm）柱，流動(dòng)相：乙腈-0.003 mol·L－1的十二烷基硫酸鈉水溶液（稱取十二烷基硫酸鈉0.865 g，加1000 mL水溶解，加三氟乙酸 1 mL）（47∶53）；檢測(cè)波長280 nm；流速1.5 mL·min－1；進(jìn)樣量10 μL；柱溫35℃。

2.2 溶出試驗(yàn)方法

取本品6片，照溶出度測(cè)定法（2020年版《中國藥典》四部通則0931第二法），以0.1 mol·L－1鹽酸溶液900 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r·min－1，依法操作，經(jīng)30 min后取樣。另取地氯雷他定對(duì)照品適量，精密稱定，用0.1 mol·L－1鹽酸溶液溶解并定量稀釋成每1 mL約含5 μg的溶液。同法測(cè)定，計(jì)算每片溶出量。

2.3 溶出介質(zhì)

根據(jù)《普通口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》[14]并參考日本“藥品品質(zhì)再評(píng)價(jià)”工程[15-16]，采用不同pH的4種溶出介質(zhì)，分別為0.1 mol·L－1鹽酸溶液（取9 mL鹽酸，加水稀釋至1000 mL，混勻）、pH 4.0醋酸鹽緩沖液（取醋酸鈉1.22 g，冰醋酸2.46 g，用水溶解并稀釋至1000 mL，冰醋酸調(diào)節(jié)pH值為4.0）、0.2 mol·L－1氯化鈉溶液（取11.7 g的氯化鈉，用水溶解并稀釋至1000 mL）和pH 6.8磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀6.805 g，氫氧化鈉0.896 g，加水稀釋至1000 mL，混勻，氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值為6.8）。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 專屬性 按處方比例配制空白輔料，用溶出介質(zhì)溶解、稀釋，濾過，取續(xù)濾液，測(cè)定。結(jié)果4種溶出介質(zhì)中，空白輔料均不干擾本品溶出度的測(cè)定。色譜圖見圖1。

圖1 0.1 mol·L－1鹽酸溶液（A）、pH 4.0醋酸鹽緩沖液（B）、0.2 mol·L－1氯化鈉溶液（C）及pH 6.8磷酸鹽緩沖液（D）專屬性色譜圖Fig 1 Chromatogram of specificity test in 0.1 mol·L－1 hydrochloric acid（A），acetate buffer pH 4.0（B），0.2 mol·L－1 sodium chloride aqueous solution（C），and phosphate buffer pH 6.8（D）

2.4.2 線性關(guān)系考察 精密稱取地氯雷他定對(duì)照品14 mg，置100 mL量瓶中，加溶出介質(zhì)溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液適量，用溶出介質(zhì)稀釋制成每1 mL中含地氯雷他定分別為0.6、1.7、2.8、4.5、5.6、6.7 μg的溶液。分別進(jìn)樣10 μL，以地氯雷他定質(zhì)量濃度（μg·mL－1）為橫坐標(biāo)（x），峰面積為縱坐標(biāo)（y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得回歸方程，結(jié)果見表1。地氯雷他定在0.6～6.7 μg·mL－1與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

表1 地氯雷他定在不同溶出介質(zhì)中的線性試驗(yàn)結(jié)果Tab 1 Linearity of desloratadine in different dissolution media

2.4.3 精密度考察 取對(duì)照品溶液（5.6 μg·mL－1）連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果在0.1 mol·L－1鹽酸溶液、pH 4.0醋酸鹽緩沖液、0.2 mol·L－1氯化鈉溶液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液中，地氯雷他定峰面積的RSD分別為0.15%、0.56%、0.070%、0.050%，表明儀器精密度良好。

2.4.4 重復(fù)性考察 取樣品6份（批號(hào)：230301），按“2.2”項(xiàng)下方法分別配制溶液，在同一色譜條件下進(jìn)樣，結(jié)果在0.1 mol·L－1鹽酸溶液、pH 4.0醋酸鹽緩沖液、0.2 mol·L－1氯化鈉溶液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液中，地氯雷他定峰面積的RSD分別為0.55%、0.71%、0.37%、0.67%，表明該方法具有良好的重復(fù)性。

2.4.5 回收試驗(yàn) 精密稱取已知量的輔料細(xì)粉適量，置100 mL量瓶中，加溶出介質(zhì)溶解并稀釋至刻度；精密量取2 mL，置50 mL量瓶中，共量取12份，3份一組，各組分別精密加入地氯雷他定對(duì)照品溶液（0.14 mg·mL－1）0.2、2.0、2.4 mL，加溶出介質(zhì)溶解并稀釋至刻度，進(jìn)樣測(cè)定，并采用外標(biāo)法計(jì)算回收率，結(jié)果顯示在0.1 mol·L－1鹽酸溶液中平均回收率為100.4%，RSD為0.14%；在pH 4.0醋酸鹽緩沖液中平均回收率為100.5%，RSD為0.72%；在0.2 mol·L－1氯化鈉溶液中平均回收率為100.0%，RSD為0.61%；在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中平均回收率為100.3%，RSD為0.57%。

2.4.6 穩(wěn)定性考察 取供試品溶液，在同一色譜條件下，分別于0、2、4、6、8、10、12、24 h測(cè)定8次，結(jié)果在0.1 mol·L－1鹽酸溶液、pH 4.0醋酸鹽緩沖液、0.2 mol·L－1氯化鈉溶液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液中，地氯雷他定峰面積的RSD分別為0.71%、1.2%、0.22%、1.2%。

2.4.7 濾膜吸附 取不同濃度供試品溶液，在同一色譜條件下，分別棄去0、1、2、3、4、6、8、10 mL，考察峰面積的RSD，結(jié)果見表2。結(jié)果顯示：50%濃度、100%濃度時(shí)本品均無濾膜吸附；10%濃度在0.1 mol·L－1鹽酸溶液中無濾膜吸附；在0.2 mol·L－1氯化鈉溶液中棄去1 mL后，本品無濾膜吸附；在pH 4.0醋酸鹽緩沖液和pH 6.8磷酸鹽緩沖液中棄去2 mL后，本品無濾膜吸附。

表2 濾膜吸附試驗(yàn)結(jié)果Tab 2 Filtration membrane adsorption

2.5 樣品含量測(cè)定

以4種不同溶出介質(zhì)，按擬訂溶出試驗(yàn)方法，轉(zhuǎn)速為50 r·min－1，分別于5、10、15、30、45、60 min（0.1 mol·L－1鹽酸溶液）或5、10、15、30、45、60、90、120 min（pH 4.0醋酸鹽緩沖液、0.2 mol·L－1氯化鈉溶液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液），取溶液1.5 mL，取續(xù)濾液作為供試液品溶液。另取地氯雷他定對(duì)照品適量，精密稱定，用0.1 mol·L－1鹽酸溶液溶解并定量稀釋成每1 mL約含5 μg的溶液，計(jì)算每片溶出量并繪制溶出曲線。溶出量結(jié)果見表3及圖2。

表3 3批樣品在不同介質(zhì)中的累計(jì)溶出度Tab 3 Cumulative dissolution of 3 batches of samples in different dissolution media

圖2 地氯雷他定口溶膜在0.1 mol·L－1鹽酸溶液（A）、pH 4.0醋酸鹽緩沖液（B）、0.2 mol·L－1氯化鈉溶液（C）及 pH 6.8磷酸鹽緩沖液（D）的溶出曲線Fig 2 Dissolution of desloratadine oral soluble film in 0.1 mol·L－1 hydrochloric acid（A），acetate buffer pH 4.0（B），0.2 mol·L－1 sodium chloride aqueous solution（C），and phosphate buffer pH 6.8（D）

3 討論

3.1 三氟乙酸用量考察

三氟乙酸用量分別為0.05%、0.1%、0.15%時(shí)，考察主峰拖尾因子，結(jié)果用量為0.05%時(shí)，主峰前延；用量為0.1%和0.15%時(shí)，主峰峰形較好，拖尾因子分別為1.12和0.98，保留時(shí)間分別為12 min和10 min，考慮三氟乙酸對(duì)柱子的影響，故選擇用量為0.1%。

3.2 不同色譜柱考察

更換不同品牌、不同規(guī)格C8色譜柱，最后選擇Agilent（4.6 mm×150 mm，3.5 μm）色譜柱，保留時(shí)間為6 min，快速出峰。

3.3 考察流動(dòng)相比例

先后考察了乙腈和0.003 mol·L－1十二烷基硫酸鈉水溶液的比例為44∶56、45∶55、46∶54、47∶53、48∶52、50∶50的影響，最終選用乙腈-0.003 mol·L－1十二烷基硫酸鈉溶液（47∶53）作為流動(dòng)相等度洗脫，主峰拖尾因子1.1，保留時(shí)間為2.5 min，滿足要求。

3.4 溶出介質(zhì)的篩選

根據(jù)日最大劑量5 mg推算，地氯雷他定可完全溶解在小于250 mL的pH 1.0～6.8范圍水溶性介質(zhì)中，屬于高溶解性藥物，故采用常規(guī)的4種介質(zhì)作為其溶出介質(zhì)，即0.1 mol·L－1鹽酸溶液、pH 4.0醋酸鹽緩沖液、水、pH 6.8磷酸鹽緩沖液，但由于水介質(zhì)中沒有離子，無法使地氯雷他定從包覆輔料中置換出來，故選擇在水介質(zhì)中加入氯化鈉，同時(shí)考察不同氯化鈉濃度對(duì)溶出曲線的影響。結(jié)果選擇0.2 mol·L－1氯化鈉溶液作為溶出介質(zhì)。

3.5 溶出裝置的選擇

參照各國藥典[4-5]及標(biāo)準(zhǔn)[6-7]收載的地氯雷他定片或地氯雷他定口崩片溶出度項(xiàng)目規(guī)定，設(shè)置地氯雷他定口溶膜的溶出條件為槳法?？疾觳捎勉~絲作為沉降裝置固定藥膜和采用沉降籃固定藥膜兩種不同投樣方法對(duì)本品溶出結(jié)果的影響。結(jié)果采用沉降籃固定藥膜時(shí)5 min內(nèi)溶出杯中已無漂浮的肉眼可見的口溶膜，而采用銅絲固定藥膜時(shí)5 min時(shí)溶出杯內(nèi)仍有少量肉眼可見的口溶膜，兩種投樣方式累計(jì)溶出度無明顯差異，但沉降籃作為沉降方式投樣測(cè)得的溶出結(jié)果RSD相對(duì)更好，故選擇沉降籃作為沉降裝置。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)建立了一種HPLC法測(cè)定地氯雷他定口溶膜溶出度和溶出曲線的方法，專屬性、線性范圍、精密度、穩(wěn)定性和回收試驗(yàn)結(jié)果均滿足要求，且有耗時(shí)短、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，提高檢驗(yàn)工作效率的同時(shí)為大批量快速測(cè)定溶出曲線提供了可能。