周 媛 徐京育 李啟注 徐 闖 李宗瑛 白 麗

(1 黑龍江中醫(yī)藥大學,哈爾濱,150040; 2 黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院,哈爾濱,150040)

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(Coronary Atherosclerotic Heart Disease,CAHD)是指冠狀動脈粥樣硬化使管腔狹窄甚至閉塞,導致心肌缺血、缺氧或壞死的心臟病,簡稱冠狀動脈性心臟病或冠心病(Coronary Heart Disease,CHD),臨床分為慢性心肌缺血綜合征和急性冠脈綜合征(Acute Coronary Syndrome,ACS)。慢性心肌缺血綜合征以反復(fù)發(fā)作的胸悶胸痛為主要臨床表現(xiàn),若不規(guī)范治療,ACS發(fā)生風險高,還會發(fā)展為缺血性心肌病。ACS包括不穩(wěn)定型心絞痛、ST段抬高型心肌梗死及非ST段抬高型心肌梗死,以胸悶、胸痛加重,甚至有瀕死感為主要臨床表現(xiàn),嚴重者可發(fā)生猝死。全球因CHD死亡人數(shù)為892萬,中亞地區(qū)人群CHD死亡率最高,在我國CHD死亡在總死亡中比例上升,隨著老齡化進程加劇,我國CHD的發(fā)病和死亡人數(shù)將持續(xù)增加,因而早診斷并防治CHD是非常必要的[1]。CHD屬中醫(yī)“胸痹”的范疇,首見于張機《金匱要略》。中醫(yī)藥治療CHD可發(fā)揮其整體觀念、辨證施治的優(yōu)勢,改善患者癥狀同時緩解焦慮情緒。蛋白質(zhì)組學研究是目前研究熱點方向,現(xiàn)階段已用于許多重大疾病的診斷及防治。本文對近年來應(yīng)用蛋白質(zhì)組學技術(shù)研究診斷CHD的生物標志物、中醫(yī)證候分型及中藥治療方面進行總結(jié),希望對后續(xù)研究有所幫助。

蛋白質(zhì)組學概念于20世紀90年代由Willkins M等提出,是鑒定細胞、組織、器官、個體或某一物種在特定條件、時間表達全部蛋白質(zhì)的一項技術(shù),能夠全面地認識疾病發(fā)生的過程,具有特異性、整體性、動態(tài)性、階段性等特點[2]。蛋白質(zhì)組學技術(shù)流程包括樣本提取純化、蛋白分離鑒定及數(shù)據(jù)處理分析。蛋白質(zhì)分離技術(shù)主要有雙向電泳(Two-Dimensional Electrophoresis,2-DE)、雙向熒光差異凝膠電泳(Two-Dimensional Fluorescence Difference Gel Electrophoresis,2D-DIGE)、SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(Polyacrylamide Gel Eletrophoresis,SDS-PAGE)[3-4]。蛋白質(zhì)分離后可運用不同的質(zhì)譜分析進行蛋白質(zhì)鑒定。常用的質(zhì)譜技術(shù)包括基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜(Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Time-Of-Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF-MS)、表面增強激光解析離子化飛行時間質(zhì)譜(Surface-Enhanced Laser Desorption Ionization Time-Of-Flight Mass Spectrometry,SELDI-TOF-MS)、液相色譜質(zhì)譜(Liquid Chromatography-Mass Spectrometry,LC-MS/MS)和電噴霧電離質(zhì)譜(Electron Epray Ionization Mass Spectrometry,ESI-MS MS)[5]。定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)包括同位素親和標記(Isotope-Coded Affinity Tags,ICAT)、同位素標記相對和絕對定量(Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation,iTRAQ)、穩(wěn)定同位素標記氨基酸技術(shù)(Stable Isotope Labeling with Amino Acids in Cell Culture,SILAC)等[6-7]。中醫(yī)學以整體觀念和辨證論治為特點,與蛋白質(zhì)組學具有整體性、系統(tǒng)性、動態(tài)復(fù)雜性、階段穩(wěn)定性的特點相一致,蛋白質(zhì)組學技術(shù)可研究機體整體水平的蛋白質(zhì),也可反映基因組的動態(tài)變化,與中醫(yī)診斷過程中的“辨病”和“辨證”兩方面相一致[8]。中醫(yī)病機理論為中醫(yī)藥理論體系的核心,蛋白質(zhì)組學可通過對同一疾病不同病機患者的血清、尿液或組織蛋白質(zhì)分離、質(zhì)譜鑒定分析,尋找其差異蛋白點,幫助臨床診斷;蛋白質(zhì)組學也可通過質(zhì)譜分析找出不同疾病同一病機的微觀特異性;蛋白質(zhì)組學也可幫助明確中醫(yī)醫(yī)藥治療疾病的作用機制。近年來中醫(yī)藥運用蛋白質(zhì)組學技術(shù)的文獻顯著增加,在中醫(yī)診斷、中醫(yī)證候、中醫(yī)藥機制等方面的研究非常廣泛[9]。

1 蛋白質(zhì)組學在冠心病診斷中的應(yīng)用

CHD可導致心肌組織缺血、缺氧、壞死,嚴重者可出現(xiàn)急性心力衰竭、循環(huán)衰竭危及生命,因而積極尋找早期診斷的生物標志物是預(yù)防和治療CHD的關(guān)鍵。目前,臨床應(yīng)用心肌酶、血清肌鈣蛋白(Cardiac TroponinⅠ,cTnT)診斷ACS,但心肌酶及血清肌鈣蛋白多在發(fā)病2 h后變化,因而還需發(fā)現(xiàn)更靈敏的生物標志物。蛋白質(zhì)組學分析技術(shù)為識別生物標志物提供了新手段。

1.1 血液樣本的蛋白質(zhì)組學研究 血液是人體生物標志物的重要來源,具有創(chuàng)傷小、方便采集、安全性高的優(yōu)勢。STAKHNEVA等[10]通過觀察冠心病男性和無冠心病男性,應(yīng)用MALDI-TOF-MS,發(fā)現(xiàn)屬炎癥蛋白和運輸?shù)鞍椎霓D(zhuǎn)甲狀腺素、視黃醇結(jié)合蛋白4(Retinol Binding Protein4,RBP4)、血漿血紅素和補體C3、C9增加,激肽原、鋅指蛋白133和B細胞CLL/淋巴瘤6減少。胡水旺等[11]對10例對照組、10例不穩(wěn)定型心絞痛患者和10例穩(wěn)定型心絞痛患者進行觀察,利用DIGE技術(shù)進行蛋白分離,采用MALDI-TOF-MS分析,發(fā)現(xiàn)不穩(wěn)定型心絞痛患者血漿與穩(wěn)定心絞痛患者血漿相比有9個上調(diào)蛋白點包括纖維蛋白原γ鏈(Fibrinogen-gamma,FGG)、補體C4B(C4B)、免疫球蛋白κ恒定區(qū)(Immunoglobulin Kappa Constant,IGKC)和血紅蛋白α亞基(Hemoglobin A1,HBA1)等,還有1個下調(diào)蛋白點是結(jié)合珠蛋白(Haptoglobin,HP)。許京鋒等[12]觀察急性心肌梗死和傳統(tǒng)外科患者各15例,運用MALDI-TOF-MS法分析血清蛋白,發(fā)現(xiàn)補體C3類似物差異最大,可把急性心肌梗死“毒證”與傳統(tǒng)外科“毒證”進行區(qū)分。韓業(yè)明[13]運用MALDI-TOF-MS分析,發(fā)現(xiàn)動脈粥樣硬化患者與健康人群比較有27個差異蛋白點,其中有15種蛋白質(zhì)表達升高,如細胞周期依賴性蛋白激酶(Cyclin-Depended Kinase9,CDK9),12種蛋白質(zhì)表達降低,根據(jù)功能不同,這些蛋白點歸納為6個組別:細胞增殖和凋亡相關(guān)蛋白、炎癥介質(zhì)相關(guān)蛋白、免疫因子相關(guān)蛋白、能量代謝相關(guān)蛋白信號通路相關(guān)分子和其他分子如血管緊張素Ⅱ受體,CDK9與炎癥反應(yīng)相關(guān),可推測動脈硬化發(fā)生與炎癥反應(yīng)相關(guān)。DREGOESC等[14]研究發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定型CHD患者有5種生物標志物與不良心血管事件相關(guān),其中瘤壞死因子受體超家族13B(Tumor Nercrosis Receptor Superfamily13B,TNFRSF13B)和腫瘤壞死因子受體超家族10A(Tumor Nercrosis Receptor Superfamily10A,TNFRSF10A)與TNF信號通路相關(guān),在細胞凋亡、細胞核因子κB(Nuclear Factor-κB,NF-κB)激活和B細胞激活3個通路發(fā)揮作用。

CHD患者血液蛋白質(zhì)組學與正常人比較有顯著差異,其差異主要表現(xiàn)在補體系統(tǒng)中的補體C3、補體C4B、補體C9。補體激活與急性心肌梗死血栓形成密切相關(guān)[15]。有研究表明,早發(fā)型冠心病患者補體C3、C4與低密度脂蛋白膽固醇(Low-density Lipoprotein Cholesterol,LDL-C)正相關(guān),補體可能會協(xié)同LDL-C,促進LDL-C氧化,增加CHD的發(fā)病風險[16]。

1.2 血小板樣本的蛋白質(zhì)組學研究 血小板的生成情況與動脈粥樣硬化密切相關(guān)。區(qū)文超等[17]觀察冠心病患者9例和健康志愿者11例,抽取外周血分離血小板,通過MALDI-TOF-MS分析,成功鑒定7個差異蛋白點:絲束蛋白-2(Plastin-2)、冠蛋白1A(Coronin-1A)、凝聚素(Clusterin)、膜聯(lián)蛋白(Annexin A1)、氯離子胞內(nèi)通道蛋白-1(Chloride Intracellular Channel Protein 1)、過氧化物氧化還原酶6(Peroxiredoxin,Prdx6)、過氧化物氧化還原酶2(Peroxiredoxin2,Prdx2)。

在CHD不同階段血小板會發(fā)生不同程度的動態(tài)變化。通過CHD患者血小板樣本的蛋白質(zhì)組學研究,可早期區(qū)別CHD的不同階段,預(yù)防危險事件的發(fā)生[18]。Prdxs與氧化應(yīng)激反應(yīng)相關(guān),脂質(zhì)過氧化促進動脈硬化的發(fā)生[19]。

1.3 高密度脂蛋白的蛋白組學研究 血脂異常是冠心病的危險因素之一,高密度脂蛋白(High-density Lipoprotein,HDL)與CHD的發(fā)生負相關(guān),HDL降低可增加CHD風險[20]。因而研究CHD患者HDL蛋白質(zhì)組學改變是十分必要的。ALWAILI等[21]觀察穩(wěn)定型冠心病和ACS患者各10例,采集血漿并分離HDL,運用LC-MS/MS檢測蛋白質(zhì),發(fā)現(xiàn)ACS組血清淀粉樣蛋白A(Serum Amyloid A,SAA)和補體C3水平增加,SAA和補體C3可使HDL功能發(fā)生改變,損害HDL抗動脈硬化的功能。

綜上所述,CHD患者與健康人群血液、血小板及高密度脂蛋白的蛋白質(zhì)組學均有差異。CHD患者不同階段蛋白質(zhì)組學也存在明顯差異。這些差異主要與補體激活、脂質(zhì)代謝及氧化應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)。補體激活及氧化應(yīng)激反應(yīng)均可導致脂質(zhì)代謝異常,導致CHD發(fā)生風險增加。因此蛋白質(zhì)組學研究在CHD的預(yù)防、早期診斷及心血管危險事件的鑒別等方面均有意義。

2 蛋白質(zhì)組學在冠心病證候分型中的應(yīng)用

中醫(yī)認為CHD屬“胸痹”范疇,其主要病因病機為“陽微陰弦”,屬本虛標實,本虛包括氣虛、氣陰兩虛、陽氣虛衰,標實則包括血瘀、寒凝、痰濁、氣滯。胸痹的主要證型有:心血瘀阻證、氣滯心胸證、痰濁閉阻證、寒凝心脈證、氣陰兩虛證、心腎陰虛證、心腎陽虛證及痰瘀互結(jié)證。不同證型的冠心病蛋白組質(zhì)學研究也有所不同。

2.1 血瘀證 周倩倩等[22]對冠心病血瘀證患者和健康人群各8例進行觀察,采集2組人群外周靜脈血,運用MALDI-TOF-MS進行質(zhì)譜分析,發(fā)現(xiàn)3個上調(diào)蛋白點:RBP4、Hp、血清白蛋白(Serum Albumin,SA),以及1個下調(diào)蛋白點:載脂蛋白A1(Apolipoprotein A1,ApoA1)。張書萌等[23]觀察早發(fā)冠心病血瘀患者27例、早發(fā)冠心病非血瘀患者14例、非早發(fā)冠心病血瘀患者29例及非早發(fā)冠心病非血瘀患者31例,運用iTRAQ技術(shù)檢測患者血漿蛋白,發(fā)現(xiàn)早發(fā)冠心病血瘀證組與健康對照組有差異蛋白32個,包括22個上調(diào)蛋白和10個下調(diào)蛋白,這些蛋白的相關(guān)通路主要與金黃色葡萄球菌感染、補體系統(tǒng)及血小板激活相關(guān),其中內(nèi)凝集蛋白1(Intelectin-1,ITLN1)表達水平差異有統(tǒng)計學意義,可作為家系早發(fā)冠心病瘀血證診斷的危險標志物。尚青華等[24]觀察冠心病血瘀證對照組、“潛毒”組及“毒證”組患者,運用MALDI-TOF-MS分析和鑒定血漿蛋白,發(fā)現(xiàn)2個差異蛋白是同種型高分子量激肽原1前體(Kininogen 1,KNG1)和PRDX1,推測這2個差異蛋白可作為冠心病“瘀毒”病機轉(zhuǎn)化的分子標志物。趙慧輝等[25]運用高解析離子淌度質(zhì)譜(High Definition Mass Spectrometry,HDMS),發(fā)現(xiàn)CHD不穩(wěn)定型心絞痛血瘀證患者與健康人相比有25種差異蛋白,上調(diào)的蛋白質(zhì)根據(jù)功能分為急性時相反應(yīng)蛋白、補體蛋白、凝血相關(guān)蛋白、心肌損傷蛋白,下調(diào)的蛋白分為載脂蛋白、運輸?shù)鞍?、抗凝血相關(guān)蛋白、免疫球蛋白、細胞骨架蛋白。

2.2 痰瘀互結(jié)證 郎笑梅和徐珊[26]觀察14例痰瘀證患者及16例健康人,應(yīng)用SELDI-TOF-MS及蛋白質(zhì)芯片技術(shù)檢測血清,發(fā)現(xiàn)18種差異蛋白。姚笛等[27]應(yīng)用SELDI-TOF-MS檢測急性心肌梗死痰瘀證、血瘀證患者和對照組血清蛋白,發(fā)現(xiàn)冠心病與對照組有29個差異蛋白,痰瘀證和血瘀證有35個差異蛋白。

2.3 虛證 魏其云和吳紅[28]選擇冠心病心氣虛弱證患者和心腎陰虛證患者各100例,將血清離心并進行質(zhì)譜分析,檢出23個差異蛋白點,鑒定出6種蛋白質(zhì),呈高表達結(jié)果的有3種:細胞周期依賴性蛋白激酶9(Cyclin-Depended Kinase9,CDk9)、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(Glucose Regulated Protein 78,GRP78)和富亮氨酸糖蛋白(Leucine-Rich-α2-Glycoprotein,LRG),呈低表達的有3種:轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶-2(Transglutaminase 2,TG2)、膜聯(lián)蛋白4(Annexin A4,ANXA4)和骨鈣素(Osteoglycin,OC)。袁宏偉等[29]采集冠心病心氣虛弱證和心腎陰虛證患者血清,2-DE分離蛋白質(zhì),應(yīng)用MALDI-TOF/TOF MS鑒定蛋白質(zhì),檢測出34個差異點,主要差異蛋白有凝血酶原、α2巨球蛋白、膜聯(lián)蛋白A5、補體C3、甘露糖結(jié)合蛋白C、載脂蛋白A1(Apolipoprotein ApoA1)、載脂蛋白E(Apolipoprotein E,ApoE)、載脂蛋白B(Apolipoprotein B,ApoB)、活化T細胞核因子5亞型b等,差異蛋白與凝血系統(tǒng)、激肽釋放酶-激肽系統(tǒng)、補體系統(tǒng)、脂代謝系統(tǒng)、Wnt途徑及凋亡系統(tǒng)密切相關(guān)。

綜上所述,CHD患者不同證型蛋白質(zhì)組學有差異,總結(jié)目前研究可見,血瘀證與痰瘀證有差異,心氣虛弱證和心腎陰虛證有差異。ITLN1可作為冠心病血瘀證診斷的危險標志物;KNG1和Prdx1可作為冠心病“瘀毒”病理因素的分子標志物。痰瘀互結(jié)證患者與健康人、單純血瘀證蛋白質(zhì)組學有多個差異,但其具體蛋白質(zhì)名稱及信號通路尚不明確。心氣虛弱證和心腎陰虛證患者雖有多個差異蛋白點,但仍需繼續(xù)研究篩選出差異有顯著意義的蛋白質(zhì),進一步幫助診斷胸痹病的臨床證型。

3 蛋白質(zhì)組學在中藥防治冠心病中的應(yīng)用

中醫(yī)藥防治胸痹心痛病可體現(xiàn)其整體觀念、辨證施治的特色。針對本虛者,治以益氣養(yǎng)陰,溫通心陽;針對標實者,治以活血、散寒、祛痰、行氣。有多種中藥復(fù)方、中成藥及中藥提取物治療CHD效果顯著,可運用蛋白質(zhì)組學技術(shù)探究其作用機制。

3.1 中藥復(fù)方 保元湯為治療元氣虛弱的名方,由人參、黃芪、肉桂和炙甘草四味藥組成,萬彥軍等[30]發(fā)現(xiàn)保元湯對氧糖剝奪/復(fù)糖復(fù)氧(Oxygen Glucose Deprivation/Recovery,OGD/R)損傷的H9c2心肌細胞和原代心肌細胞有保護作用,進行LC-MS/MS高分辨質(zhì)譜鑒定發(fā)現(xiàn)46個潛在結(jié)合靶點蛋白,經(jīng)京都基因和基因組數(shù)據(jù)庫(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析發(fā)現(xiàn)靶點與三羧酸循環(huán)信號通路相關(guān)最為密切。

滋腎活血方是國醫(yī)大師劉志明從腎論治冠心病的代表方劑,由首烏、桑椹、瓜蔞、薤白、三七、茯苓、杏仁、枳殼及太子參組成,具有補腎虧、通心陽、祛瘀化濁的功效[31]。劉如秀等[32]運用2-DE分析發(fā)現(xiàn)滋腎活血方可逆轉(zhuǎn)腎虛血瘀型心肌缺血大鼠乳酸脫氫酶B鏈(Lactate Dehydrogenase B,LDHB)、肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-2(Carnitine Palmitoyl Transferase 2,CPT2)、異檸檬酸脫氫酶(Isocitrate Dehydrogenase,IDH)、ATP合酶α亞基(ATP Synthase Subunitα,ATPs-α)及肌凝蛋白-6(Myosin-6)表達,推測其治療心肌缺血的機制與改善能量代謝和保護細胞骨架相關(guān)。補陽還五湯屬理血劑,由當歸尾、赤芍、川芎、桃仁、紅花及地龍組成,具有益氣活血、化瘀通絡(luò)的作用,可治療氣虛血瘀型胸痹心痛[33]。有研究表明,補陽還五湯可改善心肌梗死大鼠心功能,減輕心室重塑,保護心肌組織結(jié)構(gòu);通過蛋白質(zhì)圖譜分析成功鑒定7種蛋白質(zhì),包括心肌細胞結(jié)構(gòu)蛋白肌球蛋白輕鏈4(Myosin Light Chain 4,MYL4)、肌球蛋白調(diào)節(jié)輕鏈2(Myosin Regulatory light Chain2,MRLC2),以及抑制氧化應(yīng)激的煙酰胺腺嘌呤脫氫酸和Prdx6[34]。

養(yǎng)心通脈方是中醫(yī)學家秦伯未治療胸痹心痛病的著名方藥,具有“扶養(yǎng)心氣,和通血脈”的作用[35]。鄭景輝等[36]采用iTRAQ蛋白質(zhì)組學技術(shù)分析養(yǎng)心通脈方對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone marrow Stromal Cells,BMSCs)的作用蛋白,鑒定62個差異蛋白,這些差異蛋白主要集中在Notch信號轉(zhuǎn)導通路、阿爾茨海默病通路、可溶性N-乙基順丁烯二酰亞胺敏感性的融合蛋白附著蛋白(Soluble N-ethylmaleimide-sensitive Factor Attachment Protein Receptor,SNARE)通路、促分裂原活化的蛋白激酶(Mitogen Activated Protein Kinase,MAPK)信號通路上,推測養(yǎng)心通脈方抗心肌缺血機制與上述通路相關(guān)。

3.2 中成藥 復(fù)方丹參片由丹參、三七、冰片組成,具有活血化瘀、理氣止痛的作用,是治療CHD的常用中成藥,藥理作用研究表明復(fù)方丹參片能夠抗心肌缺血、缺氧,擴張冠狀動脈,抗心律失常,對心肌缺血再灌注損傷有保護作用[37]。馬增春等[38]采集正常人、冠心病患者和復(fù)方丹參片用藥患者血漿,運用2-DE、圖像分析及質(zhì)譜鑒定發(fā)現(xiàn):冠心病患者與正常組比較,有6個蛋白質(zhì)上調(diào)和3個蛋白質(zhì)下調(diào),復(fù)方丹參片可使這些差異蛋白點有所恢復(fù),復(fù)方丹參片可降低免疫球蛋白、纖維蛋白原及粒酶。

復(fù)方丹參滴丸有活血化瘀的藥理作用,廣泛用于冠心病、心絞痛的臨床治療。WU等[39]研究發(fā)現(xiàn)復(fù)方丹參滴丸給藥組和對照組大鼠有42個差異蛋白點,通過蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(Protein-Protein Interaction,PPI)分析,復(fù)方丹參滴丸舒張血管的作用與血小板活化、環(huán)磷酸鳥苷-蛋白激酶G(Cyclic Guanosine Monophosphate Protein Kinase G,CGMP-PKG)信號通路及血管平滑肌收縮與舒張3個通路相關(guān)。

3.3 中藥提取物 薤白皂苷是薤白的主要有效成分,可抑制血小板聚集和心肌凋亡,減緩炎癥反應(yīng)[40-41]。馮俊靈[42]運用MALDI-TOF-MS發(fā)現(xiàn)薤白皂苷可改變二磷酸腺昔(Adenosine Diphosphate,ADP)誘導小鼠血小板的蛋白質(zhì)表達,與對照組相比有7個差異蛋白質(zhì),包括鈣網(wǎng)蛋白(Calreticulin,CRT)、肌動蛋白(Actin)、LIM和SH3結(jié)構(gòu)域蛋白1(LIM and SH3 domain Protein 1)、蛋白磷酸酶1(Protein Phosphatase 1)、核因子κB激酶亞單位ε抑制劑(IkappaB Kinase Inhibitor of KappaB Kinase Epsilon,IKBKE)抑制因子1(Suppressor of IKBKE1)、核酮糖-5-磷酸-3差向異構(gòu)酶(Ribulose-5-phosphate-3-epimerase),這些差異蛋白質(zhì)為薤白皂苷抗血小板活化及聚集的重要蛋白質(zhì)。

丹皮酚和芍藥苷是牡丹皮的主要成分,具有活血化瘀的作用,胡春艷等[43]結(jié)扎左冠狀動脈前降支構(gòu)建AMI大鼠模型,用丹皮酚和芍藥苷配伍對模型心大鼠灌胃,提取大鼠心肌組織蛋白樣品,運用iTRAQ質(zhì)譜分析,研究發(fā)現(xiàn)干預(yù)前后有367個差異蛋白點,KEGG富集分析發(fā)現(xiàn)差異蛋白點涉及凝血與補體級聯(lián)反應(yīng)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、核糖體等信號通路相關(guān)。

綜上所述,保元湯治療CHD與三羧酸循環(huán)通路相關(guān);滋腎活血湯可通過改善能量代謝和保護細胞骨架改善心肌缺血;補陽還五湯可改善心肌細胞結(jié)構(gòu),抑制氧化應(yīng)激;養(yǎng)心通脈方抗心肌缺血與Notch信號轉(zhuǎn)導通路、阿爾茨海默病通路、SNARE通路、MAPK信號通路相關(guān);薤白皂苷可作用于多個蛋白點,具有抗血小板活化及聚集的作用;丹皮酚和芍藥苷配伍治療CHD與補體級聯(lián)反應(yīng)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、核糖體等信號通路相關(guān)。中藥治療CHD的靶點蛋白和信號通路多而復(fù)雜,蛋白質(zhì)組學技術(shù)提供了新的分析方法,從而揭示中藥防治CHD的作用機制。

4 討論與展望

CHD在我國發(fā)病率和死亡率高,危險因素有高血壓、血脂異常、糖尿病、肥胖和超重、吸煙、不良飲食習慣等。一般認為冠狀動脈狹窄程度>50%會影響心肌供血,冠狀動脈急性完全性閉塞可導致供血區(qū)域心肌透壁性壞死,嚴重可導致心源性猝死,CHD的早期防治是十分重要的。蛋白質(zhì)組學技術(shù)能夠更準確地分析蛋白質(zhì),有助于CHD的診斷、研究疾病的發(fā)展、判斷藥物治療的效果。

總結(jié)各項研究可以發(fā)現(xiàn)CHD患者血清及HDL蛋白質(zhì)組學在屬補體系統(tǒng)的蛋白質(zhì)有明顯改變,如補體C3、C4、C9。CHD的發(fā)病機制有多種學說,包括脂質(zhì)浸潤學說、內(nèi)皮損傷-反應(yīng)學說、血小板聚集和血栓形成假說、平滑肌細胞克隆學說、慢性炎癥反應(yīng)等。近年來許多研究表明補體系統(tǒng)與脂質(zhì)代謝存在明顯相關(guān)性,補體C3、C4與HDL-C負相關(guān),補體C3、C4與總膽固醇、三酰甘油、ApoB、LDL-C正相關(guān)[44-46]。補體激活還能引起血小板變形,激活血小板釋放某些因子,損傷血管內(nèi)皮細胞,引起血管平滑肌細胞增殖[47]。Prxs與CHD的發(fā)生亦有關(guān),Prxs能夠清除組織和細胞內(nèi)的活性氧,有抗氧化應(yīng)激的作用[48]。氧化應(yīng)激反應(yīng)可導致LDL-C氧化成氧化型低密度脂蛋白(Oxidized Low-density Lipoproteins,Ox LDL-C),加重內(nèi)皮損傷[49]。蛋白質(zhì)組學技術(shù)的應(yīng)用對研究CHD的發(fā)病機制亦有幫助,可推測CHD與炎癥反應(yīng)、細胞凋亡等相關(guān)。

血瘀證患者和非血瘀證患者差異蛋白多與補體系統(tǒng)和血小板激活相關(guān)。ITLN1具有延緩動脈硬化的作用,有研究表明,ITLN1與冠心病AMI患者心肌損傷密切相關(guān),ITLN1與肌酸激酶同工酶(Creatine Kinase Isoenzyme,CK-MB)、cTnT負相關(guān),ITLN1可作為早發(fā)冠心病的診斷標志物[50]。心氣虛弱證患者和心腎陰虛證患者差異蛋白與凝血系統(tǒng)、補體系統(tǒng)、脂代謝系統(tǒng)、激肽釋放酶-激肽系統(tǒng)、Wnt途徑及凋亡系統(tǒng)密切相關(guān)。雖然目前對CHD患者證候進行了大量蛋白質(zhì)組學的研究,但僅探究出血瘀證的生物標志物,而其他證候的蛋白質(zhì)組學尚未探究出有診斷意義的生物標志物。臨床上治療CHD的中藥復(fù)方、中成藥及中藥提取物眾多。保元湯可通過三羧酸循環(huán)信號通路治療元氣虛弱證;滋腎活血方可保護心肌組織結(jié)構(gòu),抑制氧化應(yīng)激治療氣虛血瘀證;養(yǎng)心通脈方可作用于Notch信號轉(zhuǎn)導通路、阿爾茨海默病通路、SNARE通路、MAPK信號通路治療胸痹;復(fù)方丹參滴丸作用于血小板活化、CGMP-PKG信號通路及血管平滑肌收縮與舒張3個通路治療心絞痛;薤白皂苷可抗血小板活化及聚集治療CHD;丹皮酚和芍藥苷配伍治療CHD與補體級聯(lián)反應(yīng)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、核糖體等信號通路相關(guān)。中醫(yī)藥治療CHD的機制復(fù)雜,蛋白質(zhì)組學可幫助研究者探究其作用機制,有益于證明中藥治療CHD的有效性及安全性。

5 小結(jié)

綜上所述,蛋白質(zhì)組學技術(shù)在CHD的診斷和中醫(yī)藥防治方面發(fā)揮重要作用。但CHD發(fā)病機制復(fù)雜,臨床分型包括慢性心肌缺血綜合征和急性冠脈綜合征,目前對慢性心肌缺血綜合征蛋白質(zhì)組學研究較多,缺乏急性冠脈綜合征的蛋白質(zhì)組學研究。CHD屬中醫(yī)胸痹,中醫(yī)證型有心血瘀阻證、氣滯心胸證、痰濁閉阻證、寒凝心脈證、氣陰兩虛證、心腎陰虛證、心腎陽虛證及痰瘀互結(jié)證,但目前胸痹中醫(yī)證候的蛋白質(zhì)組學研究尚不全面,僅有血瘀證、痰瘀證、心氣虛弱證及心腎陰虛證,并且大多數(shù)研究多針對單種證候或2種證候,欠缺多種證候的對比,對中醫(yī)辨別證候的幫助有一定的局限性,今后需要對其他證型進行蛋白質(zhì)組學的研究以期對中醫(yī)診斷有所幫助。中醫(yī)學治療CHD的方法眾多,包括中藥提取物、中藥復(fù)方、中成藥及針灸等,但目前僅有少數(shù)中藥、中藥復(fù)方及中成藥應(yīng)用蛋白質(zhì)組學技術(shù),今后應(yīng)該將蛋白質(zhì)組學技術(shù)廣泛用于中藥治療CHD作用機制的研究,還可用于探索中藥與西藥治療CHD的比較,以期對中藥新藥的開發(fā)與應(yīng)用有所幫助。

利益沖突聲明:無。