王忠巧　高妍　司峰志

【摘要】 目的：探討微小RNA-146a（miR-146a）及黏蛋白5AC（MUC5AC）在慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法：選取2022年1月—2023年1月新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院耳鼻喉科所收治的慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉患者40例（觀察組）及同期因鼻外傷、鼻中隔偏曲、單純鼻竇囊腫接受手術(shù)治療患者40例（對照組）。檢測對照組鼻黏膜組織和觀察組鼻息肉組織的miR-146a水平及MUC5AC水平，并分析兩組的VAS評分、鼻內(nèi)鏡評分，以及鼻息肉組織的miR-146a、MUC5AC表達(dá)水平與VAS評分、鼻內(nèi)鏡評分、炎癥細(xì)胞百分比的相關(guān)性。結(jié)果：觀察組miR-146a水平低于對照組，MUC5AC水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；鼻息肉組織中的miR-146a水平與VAS評分及鼻內(nèi)鏡評分均呈負(fù)相關(guān)（r=-0.637、-0.339，P<0.05），而MUC5AC水平與VAS評分及鼻內(nèi)鏡評分均呈正相關(guān)（r=0.525、0.471，P<0.05）；miR-146a的表達(dá)水平與嗜酸性粒細(xì)胞的百分比呈負(fù)相關(guān)（r=-0.701，P<0.05），MUC5AC的表達(dá)水平與嗜酸性粒細(xì)胞百分比呈正相關(guān)（r=0.587，P<0.05），miR-146a、MUC5AC的表達(dá)水平與中性粒細(xì)胞百分比、淋巴細(xì)胞百分比均無相關(guān)性（P>0.05）。結(jié)論：在慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉疾病診斷中，鼻息肉組織的miR-146a水平低表達(dá)及MUC5AC水平高表達(dá)均提示病情加重，均與組織炎性程度有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 miR-146a水平 MUC5AC水平 慢性鼻-鼻竇炎 鼻息肉 相關(guān)性

The Expression and Clinical Significance of miR-146a and MUC5AC in Chronic Sinusitis with Nasal Polyps/WANG Zhongqiao， GAO Yan， SI Fengzhi. //Medical Innovation of China， 2024， 21（05）： -138

[Abstract] Objective： To investigate the expression and clinical significance of microRNA-146a （miR-146a） and mucin 5AC （MUC5AC） in chronic sinusitis with nasal polyps. Method： From January 2022 to January 2023， 40 patients with chronic rhinosinusitis with nasal polyps admitted to the Department of Otolaryngology， the Second Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University （the observation group） and 40 patients with nasal trauma， deflection of the nasal septum， and simple sinus cyst received surgery at the same time （the control group） were selected. The miR-146a and MUC5AC levels in the control group nasal mucosal tissue and the observation group nasal polyp tissue were detected. The VAS score， nasal endoscopy score， as well as the correlation between miR-146a and MUC5AC expression levels in nasal polyp tissue and VAS score， nasal endoscopy score， and percentage of inflammatory cells in both groups were analyzed. Result： The level of miR-146a in the observation group was lower than that in the control group， and the level of MUC5AC was higher than that in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The level of miR-146a in nasal polyps was negatively correlated with VAS score and nasal endoscopic score （r=-0.637， -0.339， P<0.05）， while the level of MUC5AC was positively correlated with VAS score and nasal endoscopic score （r=0.525， 0.471， P<0.05）. The expression level of miR-146a was negatively correlated with the percentage of eosinophils （r=-0.701， P<0.05）， and the expression level of MUC5AC was positively correlated with the percentage of eosinophils （r=0.587， P<0.05）. The expression levels of miR-146a and MUC5AC were not correlated with the percentage of neutrophils and lymphocytes （P>0.05）. Conclusion： In the diagnosis of chronic sinusitis with nasal polyp tissue diseases， the low expression of miR-146a and the high expression of MUC5AC levels indicate an aggravation of the condition and inflammatory degree.

[Key words] miR-146a level MUC5AC level Chronic rhinosinusitis Nasal polyp Correlation

慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉是臨床上較為常見的一類疾病，多因急性鼻竇炎未及時治療或反復(fù)發(fā)作引發(fā)呼吸道感染經(jīng)久不愈所致，會使得患者出現(xiàn)一定程度的頭昏頭痛、精神萎靡、記憶力退化等癥狀；部分患者會出現(xiàn)鼻塞，且常伴有膿涕、嗅覺減退；病情嚴(yán)重者易出現(xiàn)疲乏、食欲下降、注意力不集中、失眠等癥狀，且該病病程一般較長，可長達(dá)數(shù)十年，并且該病較難治愈，通常會反復(fù)發(fā)作[1-3]。黏蛋白5AC（MUC5AC）是呼吸道黏液中主要的黏蛋白，在感染、炎癥反應(yīng)等多種因素的影響下，可通過轉(zhuǎn)錄、遺傳等多種方式實(shí)現(xiàn)表達(dá)調(diào)控，其為鼻腔及鼻腔黏膜的主要成分，若該物質(zhì)大量生成則很有可能會導(dǎo)致鼻腔及鼻竇內(nèi)黏液出現(xiàn)引流障礙，進(jìn)而使得慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組織癥狀加重[4-7]。微小RNA-146a（miR-146a）水平于自身免疫性疾病中的變化或miR-146a基因敲除，均會影響通路相關(guān)蛋白的表達(dá)，繼而影響疾病的進(jìn)展[8-11]。于此，本研究將對新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院耳鼻喉科2022年1月—2023年1月所收治的慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉患者40例及同期因鼻外傷、鼻中隔偏曲、單純鼻竇囊腫接受手術(shù)治療患者40例展開研究，旨在為臨床治療提供借鑒，現(xiàn)研究結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究對象為2022年1月—2023年1月本科所收治的慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉患者40例（觀察組）及同期因鼻外傷、鼻中隔偏曲、單純鼻竇囊腫接受手術(shù)治療患者40例（對照組）。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）病癥均符合臨床診斷要求[12]；（2）臨床診斷及病例資料均完善；（3）均于研究開展前留有鼻黏膜或鼻息肉組織待測。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）在納入研究前1個月使用過糖皮質(zhì)激素；（2）在患有該疾病的同時合并有較為嚴(yán)重的臟器類疾病；（3）有鼻炎、哮喘等可能影響研究結(jié)果的疾??；（4）精神功能異?；蛘J(rèn)知功能障礙，不能有效配合本次研究的開展。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批?；颊咧橥獗狙芯俊?/p>

1.2 方法

miR-146a水平表達(dá)檢測：取對照組鼻黏膜組織及觀察組鼻息肉組織展開檢測，試劑盒為miR提取分離試劑盒，測定樣本組織中的miR。使用miR cDNA第一鏈合成試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)及合成miR所對應(yīng)的cDNA，本次所選用的試劑盒均來自北京天根公司。使用miR熒光定量檢測試劑盒進(jìn)行PCR檢測，根據(jù)說明書配置反應(yīng)20 μL的體系，分別使用miR-146a、U6的特異性引物，于PCR儀上進(jìn)行40個循環(huán)的擴(kuò)增反應(yīng)，最后根據(jù)循環(huán)所得曲線計(jì)算miR-146a水平表達(dá)結(jié)果。在操作過程中應(yīng)當(dāng)注意要經(jīng)常更換新手套，避免皮膚表面的細(xì)菌造成待測組織的感染；為防止造成交叉感染，可使用無核苷酸酶的塑料制品及槍頭；RNA于裂解液中不會被RNase降解，但提取后繼續(xù)處理時應(yīng)使用不含RNase的塑料及玻璃器皿。玻璃器皿可于150 ℃烘烤4 h，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10 min，再以清水清洗，滅菌，便能消除RNase。

MUC5AC水平表達(dá)檢測：取對照組鼻黏膜組織及觀察組鼻息肉組織展開檢測，在兩組待測組織樣本中添加RIPA裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的PAGE、Western blot、免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（co-IP）和ELISA等。采用BCA試劑盒檢測蛋白含量，將含有20 μg蛋白的樣本用于測定MUC5AC表達(dá)，將待測樣本添加SDS-聚丙烯酰胺凝膠，電泳、電轉(zhuǎn)PVDF膜，5%脫脂牛奶室溫孵育60 min，并依照1∶1 000的比例稀釋稀釋患者的MUC5AC，1∶2 000的比例稀釋二抗，室溫孵育60 min，于凝膠成像系統(tǒng)的顯影中獲得所需的MUC5AC及β-actin的蛋白條帶，其表達(dá)水平便可依據(jù)蛋白條帶上的灰度值計(jì)算。為取得最佳的使用效果，盡量避免過多的反復(fù)凍融?？梢赃m當(dāng)分裝后使用，實(shí)驗(yàn)期間全程佩戴一次性手套。

1.3 觀察指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn)

（1）miR-146a水平及MUC5AC水平。（2）VAS評分：采用VAS評分量表從鼻塞、瘤體、頭痛或頭暈、面部脹痛、嗅覺減退5個項(xiàng)目評價患者的癥狀情況，量表總分為10分，每個項(xiàng)目2分，得分越高即表示患者癥狀越嚴(yán)重[13]。（3）鼻內(nèi)鏡評分：依照Lund-Kennedy評分標(biāo)準(zhǔn)對鼻內(nèi)鏡展開評分，評價項(xiàng)目包括息肉、水腫、鼻漏、瘢痕、結(jié)痂5個方面，每個方面得分0～2分，且兩側(cè)均展開評價，該量表總分為20分，得分越高即表示患者病情越嚴(yán)重[14]。（4）炎癥細(xì)胞檢測：嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所得數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS 22.0處理，計(jì)量資料采用（x±s）進(jìn)行表述，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表述，采用字²檢驗(yàn)，采用直線相關(guān)性分析鼻息肉組織的miR-146a、MUC5AC表達(dá)水平與VAS評分、鼻內(nèi)鏡評分、炎癥細(xì)胞百分比的相關(guān)性。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組基線資料對比

對照組男24例，女16例，年齡22～70歲，平均（40.68±9.57）歲，病程6～21周，平均（16.17±1.04）周。觀察組男25例，女15例，年齡22～70歲，平均（41.13±9.32）歲，病程5～22 周，平均（17.13±2.12）周。兩組性別、年齡對比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 兩組miR-146a水平及MUC5AC水平對比

觀察組miR-146a水平低于對照組，MUC5AC水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.3 兩組VAS評分及鼻內(nèi)鏡評分對比

觀察組VAS評分及鼻內(nèi)鏡評分均高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.4 鼻息肉組織中miR-146a、MUC5AC水平與VAS評分及鼻內(nèi)鏡評分相關(guān)性分析

經(jīng)直線相關(guān)性分析顯示，鼻息肉組織中miR-146a水平與VAS評分及鼻內(nèi)鏡評分均呈負(fù)相關(guān)（r=-0.637、-0.339，P<0.05），而MUC5AC水平與VAS評分及鼻內(nèi)鏡評分均呈正相關(guān)（r=0.525、0.471，P<0.05）。

2.5 鼻息肉組織中miR-146a、MUC5AC表達(dá)水平與炎癥細(xì)胞百分比相關(guān)性

鼻息肉組織中的嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的百分比分別為（7.87±1.48）%、（7.56±1.29）%、（5.52±0.89）%，直線相關(guān)性分析顯示，在鼻息肉組織中，miR-146a的表達(dá)水平與嗜酸性粒細(xì)胞的百分比呈負(fù)相關(guān)（r=-0.701，P<0.05），MUC5AC的表達(dá)水平與嗜酸性粒細(xì)胞百分比呈正相關(guān)（r=0.587，P<0.05），miR-146a、MUC5AC的表達(dá)水平與中性粒細(xì)胞百分比、淋巴細(xì)胞百分比均無相關(guān)性（r=0.043、0.031、0.014、0.005，P>0.05）。

3 討論

合并鼻息肉的慢性鼻-鼻竇炎是慢性鼻竇炎的一個亞型，鼻息肉在一般情況下會繼發(fā)于慢性鼻竇炎，并且還有一部分息肉可能是因?yàn)樽儜B(tài)反應(yīng)水腫、不明原因等因素所導(dǎo)致的[14]?；嫉迷摷膊?dǎo)致患者出現(xiàn)頭暈頭痛、萎靡不振、記憶力變差、疲倦、注意力變差等癥狀。對患者行鼻腔檢查時，常提示中鼻甲呈肥大、水腫或息肉樣變化。鼻竇炎若治療不及時或不當(dāng)，會累及至鄰近組織器官，也會順管道延伸，繼而影響呼吸系統(tǒng)、消化道[15-17]。黏液過度分泌是慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組織的主要特征，黏液中的黏蛋白數(shù)量增加將會使得黏液黏性增加且彈性提高，進(jìn)而使得慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組織在發(fā)病的過程中病情的進(jìn)一步加重。黏液高黏彈性主要是因?yàn)镸UC的存在，呼吸道中MUC主要分為3類：第一類分泌但不聚合的粘蛋白（MUC7）；第二類分泌并聚合形成凝膠的粘蛋白（MUC5AC、MUC5B）；最后跨膜結(jié)構(gòu)域且與細(xì)胞表面相關(guān)的粘蛋白（MUC1、MUC4、MUC16、MUC20）。其中MUC5AC和MUC5B這兩種分泌性MUC被認(rèn)為與呼吸道炎性疾病有密切關(guān)系，前者主要表達(dá)于氣道上皮的杯狀細(xì)胞上，后者主要表達(dá)于黏膜下腺體內(nèi)，其中MUC5AC是氣道主要的黏蛋白類型[18-20]。

在本次研究中，觀察組miR-146a水平低于對照組，MUC5AC水平高于對照組；鼻息肉組織中miR-146a水平與VAS評分及鼻內(nèi)鏡評分均呈負(fù)相關(guān)，而MUC5AC水平與VAS評分及鼻內(nèi)鏡評分均呈正相關(guān)。miR-146a的表達(dá)水平與嗜酸性粒細(xì)胞的百分比呈負(fù)相關(guān)（P<0.05），MUC5AC的表達(dá)水平與嗜酸性粒細(xì)胞百分比呈正相關(guān)（P<0.05），miR-146a、MUC5AC的表達(dá)和中性粒細(xì)胞百分比、淋巴細(xì)胞百分比均無相關(guān)性（P>0.05）。因?yàn)槭人嵝粤＜?xì)胞的浸潤或可影響MUC5AC、miR-146a的進(jìn)一步表達(dá)，使得鼻黏膜受到刺激，進(jìn)而加重患者病情，使得患者VAS評分及鼻內(nèi)鏡評分提高。臨床相關(guān)研究分析ROC曲線后可得，miR-146a及MUC5AC可以作為慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組織病情診斷的標(biāo)志物，對于該疾病的臨床診斷也可以提供借鑒，且miR-146a作為一種非編碼RNA，能在轉(zhuǎn)錄后對于多種基因的水平進(jìn)行調(diào)節(jié)，且其生物學(xué)作用廣泛，具有抗炎意義，可靶向抑制EGFR的表達(dá)及減少M(fèi)UC5AC的水平[21]，與本研究結(jié)果相似。

上述研究結(jié)果表明，慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組織病情的引發(fā)及加重與miR-146a水平及MUC5AC水平密不可分，且其還參與調(diào)控嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤，是臨床用來研究慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組織疾病的一個新靶點(diǎn)。但本次研究僅僅只分析了MUC5AC水平與miR-146a水平在慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組織中可起到一定的調(diào)控作用，但仍未明確其直接調(diào)控作用及調(diào)控機(jī)制，可進(jìn)一步通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)或動物實(shí)驗(yàn)展開進(jìn)一步的探討。

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