魏世東,孫勁文,梅 雪

原發(fā)性肝癌為臨床常見肝膽系統(tǒng)惡性腫瘤,作為異質(zhì)性較強的惡性腫瘤,原發(fā)性肝癌的發(fā)生及發(fā)展受多種分子生物學(xué)指標(biāo)的影響［1 - 2］。微小核糖核酸為20 ～ 24個核苷酸構(gòu)成的非編碼單鏈核糖核酸分子,具有廣泛的生物調(diào)節(jié)作用,其中微小核糖核苷酸-122-5p(miR-122-5p)可調(diào)節(jié)免疫信號和炎癥指標(biāo)水平,進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,而微小核糖核苷酸-618(miR-618)抑制了惡性腫瘤細(xì)胞的增殖及促進(jìn)其凋亡,微小核糖核苷酸-202(miR-202)在基因調(diào)控中起著重要作用,可抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移［3 - 4］。盡早診治是原發(fā)性肝癌的主要干預(yù)原則,但肝癌的解剖位置較深,肝穿刺活體組織檢查為原發(fā)性肝癌的確診方法,創(chuàng)傷較高、操作復(fù)雜［5］。血清學(xué)指標(biāo)檢測具有創(chuàng)傷低、可重復(fù)性強、檢測方便的優(yōu)勢,但聯(lián)合檢測是否可進(jìn)一步提高原發(fā)性肝癌的診斷率仍需探索。基于此,本研究旨在分析血清miR-122-5p、miR-618、miR-202聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌的診斷價值,為原發(fā)性肝癌的臨床診治提供新的依據(jù)。

1 對象與方法

1.1對象 回顧性選取應(yīng)急總醫(yī)院2022年1月 ～ 2023年1月收治的原發(fā)性肝癌患者118例納入原發(fā)性肝癌組,另擇同期120例良性肝臟疾病患者納入良性組,120例健康體檢者為健康對照組,收集其臨床資料。原發(fā)性肝癌組男性63例,女性55例;年齡32 ～ 73歲,平均(53.79 ± 8.24)歲;體質(zhì)量指數(shù)(BMI)19 ～ 25 kg/m2,平均(22.89 ± 1.65)kg/m2。良性組男性63例,女性57例;年齡30 ～ 71歲,平均(54.02 ± 7.40)歲;BMI 18 ～ 24 kg/m2,平均(22.95 ± 1.51)kg/m2。健康對照組男性65例,女性55例;年齡31 ～ 75歲,平均(55.81 ± 8.57)歲;BMI 19 ～ 26 kg/m2,平均(23.05 ± 1.49)kg/m2。3組研究對象性別、年齡、BMI等一般資料比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。研究經(jīng)應(yīng)急總醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn),患者或家屬知情同意。

納入標(biāo)準(zhǔn):(1)原發(fā)性肝癌組患者均符合《原發(fā)性肝癌的分層篩查與監(jiān)測指南(2020版)》中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］;(2)良性組肝臟疾病包括乙型肝炎、非酒精性脂肪性肝病、酒精性肝病等;造血功能及凝血功能正常者;(3)成年;(4)臨床資料完整等。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并其他惡性腫瘤;(2)肝腎功能障礙;(3)妊娠期或哺乳期;(4)既往接受放化療、靶向治療或其他治療;(5)合并自身免疫性疾病等。

1.2方法 收集所有研究對象臨床資料,包括性別、年齡、TNM分期、乙型肝炎病毒(HBV)感染、腫瘤數(shù)目等。

入院后當(dāng)日取研究對象血液標(biāo)本3 ml,離心處理(離心速度3 000 r/min,離心半徑10 cm,離心時間10 min)后取血清,并提取總核糖核酸,再將總核糖核酸進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,生成雙鏈的互補脫氧核糖核酸。采用實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(上海生工生物工程有限公司提供引物試劑盒)檢測血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平,其中miR-122-5p、miR-618、miR-202、內(nèi)參β-actin序列正向分別為:AGUUUUGCAUAGUUGOACUCAC,AACACGCAGAGGTATAGGGCAT,GGGGAAACTCTACTTGTCCTT,GCGCGTCGTTAAGCGTTC,反向分別為:AGUUUUGCAUAGUUGCACUCAC,CAGTGCAGGGTCCGAGGT,TCGTATCCAGTGCGTGTCGT,GTGCAGGGTCCGAGGT,采用2-△△CT對miR-122-5p、miR-618、miR-202表達(dá)水平進(jìn)行定量計算。

2 結(jié)果

2.13組研究對象血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平比較 原發(fā)性肝癌組血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平低于良性組和健康對照組,良性組低于健康對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P< 0.05)。見表1。

表1 3組研究對象血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平比較

2.2不同病理特征原發(fā)性肝癌患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平比較 年齡≥60歲、TNM分期Ⅲ ～ Ⅳ期、HBV感染、腫瘤數(shù)目多發(fā)的原發(fā)性肝癌患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平更低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同病理特征原發(fā)性肝癌患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平比較

2.3原發(fā)性肝癌患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平之間的相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)性分析法結(jié)果顯示,原發(fā)性肝癌患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202表達(dá)水平均呈正相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 原發(fā)性肝癌患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平之間的相關(guān)性

2.4miR-122-5p、miR-618、miR-202單獨及聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌的診斷價值 ROC曲線分析結(jié)果顯示,miR-122-5p、miR-618、miR-202單獨及聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌的預(yù)測價值,AUC分別為0.839、0.814、0.807、0.932,靈敏度分別為85.59%、84.75%、79.66%、88.98%,特異度分別為75.00%、68.75%、70.00%、85.42%,聯(lián)合檢測均為最高。見表4。

表4 miR-122-5p、miR-618、miR-202單獨及聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌的診斷價值

3 討論

流行病學(xué)研究顯示,我國原發(fā)性肝癌發(fā)病率呈上升趨勢,已成為嚴(yán)重公共衛(wèi)生問題,早認(rèn)識、早診斷、早治療為原發(fā)性肝癌的主要干預(yù)原則［7］。miRNA表達(dá)失調(diào)被認(rèn)為在多種炎癥、腫瘤疾病中的常見事件,可通過與目標(biāo)mRNA的3′-UTR區(qū)結(jié)合,因此miRNA具有雙向作用,進(jìn)而參與腫瘤細(xì)胞生物學(xué)過程,使其成為潛在的診斷靶標(biāo)［8］。miR-122-5p可通過靶向細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1/轉(zhuǎn)錄激活因子3信號通路參與肝細(xì)胞損傷,進(jìn)而誘導(dǎo)肝癌的發(fā)生［9］。康璐璐等［10］研究顯示,miR-122-5p在創(chuàng)傷性腦外傷后小膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)下調(diào),可減少小膠質(zhì)細(xì)胞凋亡,控制組織炎性損傷。王繼振等［11］研究指出,miR-122-5p表達(dá)可食管鱗狀細(xì)胞癌的臨床治療和診斷提供分子基礎(chǔ),對腫瘤細(xì)胞增殖和侵襲具有抑制作用,在食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞中表達(dá)降低。

本研究結(jié)果顯示,原發(fā)性肝癌組血清miR-122-5p、miR-202水平低于良性組和健康對照組,良性組低于健康對照組;且年齡≥60歲、TNM分期Ⅲ ～ Ⅳ期、HBV感染、腫瘤數(shù)目多發(fā)的原發(fā)性肝癌患者血清miR-122-5p、miR-202水平更低,提示miR-122-5p、miR-202表達(dá)降低與原發(fā)性肝癌發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān)。miR-618靶基因為FOXO1,其是一個轉(zhuǎn)錄因子,為機體常見抑癌基因;miR-618還可誘導(dǎo)上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化,抑制腫瘤細(xì)胞侵襲及遷移［12］。李敏等［13］研究顯示,miR-618可通過下調(diào)SMAD4蛋白表達(dá)抑制結(jié)直腸癌生長轉(zhuǎn)移。Cao等［14］研究指出,miR-618在胃癌患者中表達(dá)降低,miR-618的過表達(dá)對細(xì)胞增殖具有抑制作用。本研究結(jié)果顯示,原發(fā)性肝癌組血清miR-618水平低于良性組和健康對照組,良性組低于健康對照組,且年齡≥60歲、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、HBV感染、腫瘤數(shù)目多發(fā)的原發(fā)性肝癌患者血清miR-618水平更低,提示miR-618表達(dá)降低與原發(fā)性肝癌發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān)。谷士海等［15］研究表明,miR-618在胃癌中表達(dá)降低,非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)增加,miR-618低表達(dá)的非小細(xì)胞肺癌患者的術(shù)后5年總生存率更低,在不同病理特征的非小細(xì)胞肺癌患者中表達(dá)存在差異,與本研究結(jié)果相互印證。

miR-202可通過靶向抑制促癌基因Gil1的表達(dá)功能,從而抑制了癌細(xì)胞的增殖及促進(jìn)其凋亡,其表達(dá)與腫瘤的增殖及轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性。盧振等［16］的報道中已證實,肝癌患者血清中miR-202表達(dá)量降低,且與腫瘤標(biāo)志物含量、癌基因表達(dá)量呈負(fù)相關(guān),可抑制肝癌進(jìn)展。李曉濤［17］研究指出,miR-202高表達(dá)與原發(fā)性肝癌患者生存期長、預(yù)后復(fù)發(fā)率小密切相關(guān),與本研究結(jié)果基本一致。

綜上,隨著肝臟病情進(jìn)展,患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202表達(dá)水平降低,三者聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌的診斷價值較高,可能作為原發(fā)性肝癌患者確診依據(jù),進(jìn)而為提高原發(fā)性肝癌的早診斷、早治療、改善患者預(yù)后奠定堅實基礎(chǔ)。但本研究為回顧性研究,血清miR-122-5p、miR-618、miR-202聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌診斷價值仍有待進(jìn)一步進(jìn)行前瞻性、多中心研究予以驗證。