謝永興，曹淑鑫

（臨沂市沂南縣動物疫病預(yù)防控制中心，山東 沂南 276300）

在養(yǎng)牛過程中，如果飼養(yǎng)管理不當(dāng)，孕牛會出現(xiàn)流產(chǎn)、產(chǎn)死胎或弱胎等繁殖障礙現(xiàn)象，這些病癥會給養(yǎng)牛業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。在繁殖障礙疾病中由細(xì)菌、病毒和寄生蟲等病原造成的流產(chǎn)，具有較強(qiáng)的傳播能力，對妊娠母牛群構(gòu)成嚴(yán)重威脅，因此要重點(diǎn)防控。為了有效地防控傳染性流產(chǎn)，養(yǎng)牛場需要采取綜合防控措施。

1 鉤端螺旋體流產(chǎn)

1.1 發(fā)病原因

1.1.1 病原特征 鉤端螺旋體屬于螺旋菌科，其外形呈螺旋狀。修復(fù)為革蘭氏陰性桿菌，對氧敏感，需要在無氧條件下培養(yǎng)。鉤端螺旋體的形態(tài)呈螺旋狀，長約0.18～0.3 μm，寬約0.01～0.02 μm，長度可以超過細(xì)胞的10 倍。其代謝特征包括：需氧，最適生長溫度為35～37 ℃；無韋奇氏反應(yīng)，不能利用糖類等多種營養(yǎng)物質(zhì)作為能量來源；在無氧條件下使用有機(jī)物發(fā)酵產(chǎn)生能量。鉤端螺旋體具有強(qiáng)大的環(huán)境適應(yīng)性，可在自然環(huán)境中生存，如水、土壤等?？梢酝ㄟ^動物的傳播進(jìn)行人際感染，主要通過避孕套或不潔的注射器等途徑傳播。鉤端螺旋體對多種抗生素具有較高的耐藥性，其耐藥機(jī)制主要包括基因突變、質(zhì)粒傳遞以及基因組重組等。

1.1.2 致病機(jī)理 鉤端螺旋體是一種能夠感染廣泛的動物和人類病原體，它與妊娠母牛流產(chǎn)的發(fā)生息息相關(guān)。鉤端螺旋體可通過多種方式作用于妊娠母牛，直接或間接地導(dǎo)致母牛的免疫力下降、組織受損以及利用其生長繁殖的營養(yǎng)等，從而引發(fā)母牛流產(chǎn)。其致病機(jī)理有以下幾個(gè)方面：（1）感染途徑。鉤端螺旋體通過牛尿、分泌物等途徑在妊娠母牛體內(nèi)引起感染。當(dāng)妊娠母牛感染時(shí)，可引起子宮內(nèi)膜炎、胚胎胎盤炎等感染性疾病，從而導(dǎo)致母牛流產(chǎn)。（2）免疫抑制。鉤端螺旋體可以通過多種方式抑制母牛的免疫系統(tǒng)，進(jìn)而導(dǎo)致其易感染其他細(xì)菌和病毒，從而加速妊娠母牛流產(chǎn)的發(fā)生。（3）物質(zhì)毒性。通過釋放多種毒素和代謝產(chǎn)物，鉤端螺旋體可以直接或間接地?fù)p害母牛的組織和器官，從而引起母牛流產(chǎn)。（4）組織損傷。鉤端螺旋體侵入母牛子宮壁后，注意到在其表面附著微髓碎屑等物質(zhì)，這些物質(zhì)可能會引起母牛子宮壁組織的損傷和炎癥反應(yīng)，從而導(dǎo)致母牛流產(chǎn)。

1.1.3 發(fā)病原因 鉤端螺旋體是一種廣泛存在于自然界、可以感染多種動物和人類的致病菌。鉤端螺旋體通過接觸感染牛尿、鼻涕、分泌物等途徑，進(jìn)入妊娠母牛體內(nèi)，引起多種感染性疾病，如子宮內(nèi)膜炎、胎盤炎等，從而導(dǎo)致母牛流產(chǎn)。由于鉤端螺旋體易受環(huán)境因素和物質(zhì)影響，難以在實(shí)驗(yàn)室中檢測到，有時(shí)即使感染了鉤端螺旋體也會出現(xiàn)陰性反應(yīng)，從而增加了母牛流產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。妊娠母牛由于精力和營養(yǎng)不足，其免疫系統(tǒng)處于一種相對抑制狀態(tài)，容易受到細(xì)菌、病毒等侵害，導(dǎo)致孕期流產(chǎn)。妊娠母牛年齡、體質(zhì)、飲食、飼養(yǎng)環(huán)境等都會影響其身體健康狀態(tài)和免疫力，從而增加感染鉤端螺旋體和流產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。

1.2 臨床癥狀 鉤端螺旋體感染引起妊娠母牛流產(chǎn)的癥狀并不明顯，所以很難被及時(shí)發(fā)現(xiàn)和控制。初期妊娠母牛的小腹部持續(xù)出現(xiàn)疼痛，并最終導(dǎo)致流產(chǎn)。發(fā)病之后母牛子宮內(nèi)膜的炎癥反應(yīng)可以增加流產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)，這種炎癥也可能會導(dǎo)致其他問題，如熱、乏力等。鉤端螺旋體感染也可能引起胎盤炎，造成胎盤形成不良而流產(chǎn)，同時(shí)也有可能造成孕牛體內(nèi)的血液與更多的反應(yīng)物質(zhì)的滲透。妊娠期間，感染可導(dǎo)致牛的體重下降、食欲不振、體溫升高、眼結(jié)膜發(fā)炎等異常表現(xiàn)。

1.3 病理變化 感染后，鉤端螺旋體可引起子宮內(nèi)膜的炎癥反應(yīng)，使其出現(xiàn)紅、腫、熱、疼痛等癥狀。如果持續(xù)時(shí)間較長，可導(dǎo)致子宮內(nèi)膜嚴(yán)重受損，并可以擴(kuò)散到子宮的其他部位，進(jìn)而引起并發(fā)癥如盆腔膿腫。感染還可引起胎盤炎，胎盤的組織出現(xiàn)變性、壞死等病理變化，從而影響胎盤的形成和功能，如果營養(yǎng)物質(zhì)不能充分輸送到胚胎，也會導(dǎo)致流產(chǎn)。此外，由于鉤端螺旋體會使免疫系統(tǒng)失調(diào)，從而影響其他重要器官的結(jié)構(gòu)和功能，如心臟、肝臟、肺、腎等。這些器官的病理變化和組織學(xué)變化可能是導(dǎo)致妊娠母牛流產(chǎn)的潛在原因之一。

1.4 實(shí)驗(yàn)室診斷

1.4.1 染色鏡檢 取妊娠母牛子宮分泌物、胎盤、胎兒或其他可能感染的組織樣本。將樣本制成涂片，固定后放置甲醇中浸泡30 min。用革蘭氏染色劑染色約為20 min。用自來水清洗掉多余染料，將涂片置于顯微鏡下觀察。鉤端螺旋體呈現(xiàn)淡藍(lán)色，彎曲的形狀，一端鉤狀。如果觀察到該細(xì)菌在特定部位如母牛子宮內(nèi)壁處比較密集的分布，則可以判斷感染程度較嚴(yán)重。同時(shí)，對陽性?？梢愿鶕?jù)細(xì)菌數(shù)量及其分布區(qū)域的不同評估患病的嚴(yán)重程度。

1.4.2 凝集溶解試驗(yàn) 鉤端螺旋體血清凝集溶解試驗(yàn)是一種常用的實(shí)驗(yàn)室檢測方法，首先準(zhǔn)備一組有鉤端螺旋體抗原的血清，并將其分為不同的濃度。同時(shí)還需要制備一組正常血清作為對照。取一定量的血清樣本和前述的不同濃度的抗原混合，使其充分結(jié)合。在混合物中加入紅細(xì)胞，然后加入適量的鹽水均勻混合。通過觀察是否出現(xiàn)凝集和溶解反應(yīng)，來判斷被檢測樣本中的抗體含量。如果出現(xiàn)凝集反應(yīng)，則說明被檢測樣本中存在特異性鉤端螺旋體抗體。凝集的程度和時(shí)間可以反映出抗體的含量，比如凝集得越快，程度越高，抗體含量就越高。如果出現(xiàn)抗原的溶解反應(yīng)，則說明有溶菌酶存在，可以進(jìn)一步確認(rèn)該菌株屬于鉤端螺旋體。

1.5 預(yù)防措施 對急性感染牛群，尤其在出現(xiàn)流產(chǎn)之后，為了預(yù)防子宮內(nèi)膜炎以及清理體內(nèi)的病原微生物，可以選用四環(huán)素，土霉素，頭孢塞呋，替米考星等抗生素進(jìn)行針對性的治療。例如選擇使用長效土霉素注射液，20 mg/kg.bw，并搭配使用頭孢噻呋鈉緩釋劑，10 mg/kg.bw，可以有效的清除體內(nèi)的病原微生物。鉤端螺旋體是一種致流產(chǎn)的病原體，可以引起妊娠母牛的流產(chǎn)和早產(chǎn)等問題。防控該病應(yīng)做到定期對養(yǎng)殖場的母牛進(jìn)行鉤端螺旋體的檢測，及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理。定期給使用母牛必要的疫苗或藥物，如口服土霉素或者肌肉注射頭孢噻呋鈉，可有效減少鉤端螺旋體的傳染。保持牛舍干凈衛(wèi)生，維護(hù)優(yōu)良的飲用水源，減少致病細(xì)菌在環(huán)境中的存活。新進(jìn)的母牛需進(jìn)行隔離觀察和必要的檢疫措施，以避免病原菌的傳播。合理飼喂，增強(qiáng)牛體抵抗力，健康的母牛更不易感染疾病。加強(qiáng)獸醫(yī)師和農(nóng)民的識別能力，對發(fā)現(xiàn)的疑似感染及時(shí)隔離和治療。

2 衣原體流產(chǎn)

2.1 發(fā)病原因

2.1.1 病原學(xué)特征 衣原體是一種細(xì)胞內(nèi)寄生的細(xì)菌，屬于支原體科。它們與其他支原體一樣，是非常微小的細(xì)菌，通常直徑只有0.2～0.3 μm，不能自主繁殖，必須寄生在其他生物體內(nèi)。牛衣原體的細(xì)胞壁較薄，沒有莢膜，通常由三個(gè)分層構(gòu)成，其中有多種細(xì)胞外蛋白，可以幫助其寄生于宿主細(xì)胞內(nèi)，并抵抗宿主免疫系統(tǒng)的攻擊。牛衣原體也可以產(chǎn)生各種酶和代謝產(chǎn)物，以進(jìn)行能量代謝和生長。衣原體是一種革蘭氏陰性菌，沒有固定形態(tài)，通常呈線狀或球形。它們具有類似細(xì)胞核的DNA，但是沒有真正的細(xì)胞核。它們通過細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的原核體管理遺傳信息。牛衣原體有很強(qiáng)的適應(yīng)性，可以侵入各種不同種類的細(xì)胞，并導(dǎo)致多種不同的感染，例如，生殖道感染、肺炎、支氣管炎等。由于它們的寄生特性和特殊的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，常規(guī)的抗生素難以對其產(chǎn)生作用，因此預(yù)防和治療牛衣原體感染需要采取其他措施。

2.1.2 致病機(jī)理 衣原體是一種細(xì)胞內(nèi)寄生菌，它可以在動物和人類體內(nèi)引起多種疾病。在妊娠母牛中，衣原體感染可以導(dǎo)致早期流產(chǎn)、死胎和新生犢牛出生時(shí)的問題。衣原體致妊娠母牛流產(chǎn)的主要機(jī)理：（1）直接侵入胎盤和胎兒。衣原體可以通過感染母牛的生殖道進(jìn)入胎盤和胎兒，破壞其正常發(fā)育和功能。它會影響胎兒的營養(yǎng)供應(yīng)和氧氣運(yùn)輸，導(dǎo)致胎兒死亡和流產(chǎn)。（2）誘導(dǎo)宿主免疫反應(yīng)。衣原體感染會激活母牛免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致炎癥和免疫反應(yīng)。這些反應(yīng)會產(chǎn)生許多細(xì)胞因子和化學(xué)物質(zhì)，進(jìn)一步破壞胎盤和胎兒的正常生長和發(fā)育過程。（3）導(dǎo)致母牛的內(nèi)分泌失調(diào)。衣原體感染可能干擾母牛的內(nèi)分泌系統(tǒng)，使其分泌的雌激素和孕激素水平降低，或者使其在不正常的時(shí)間釋放，影響胎兒正常發(fā)育。

2.1.3 發(fā)病原因 （1）母牛感染衣原體。母牛感染衣原體是導(dǎo)致妊娠母牛流產(chǎn)的主要原因。衣原體可以在母牛的生殖道、眼睛、呼吸道等部位寄生，如果感染量較高，就容易引起炎癥反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)可能導(dǎo)致母牛流產(chǎn)。（2）繁殖管理不當(dāng)。如果繁殖管理不當(dāng)，比如飼養(yǎng)環(huán)境差、飼料不合理、空氣質(zhì)量差等，會影響母牛的身體狀況和免疫能力，使母牛更容易感染病菌，從而增加了妊娠母牛流產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。（3）飼養(yǎng)壓力過大。如果母牛的飼養(yǎng)密度過大、長期處于過度運(yùn)動、過度疲勞的狀態(tài)下，會導(dǎo)致母牛身體狀況下降，免疫力降低，從而增加了妊娠母牛流產(chǎn)的可能性。（4）營養(yǎng)不良。母牛在妊娠期間需要更多的營養(yǎng)和能量，如果攝入的飼料不足或者質(zhì)量差，會導(dǎo)致母牛身體狀況下降，從而影響其胎兒的生長發(fā)育，增加了流產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。（5）非特異性感染。除了衣原體感染外，還有一些其他的細(xì)菌、病毒等病原體也可能導(dǎo)致妊娠母牛流產(chǎn)，比如奶牛伯氏桿菌病、傳染性鼻氣管炎等。

2.2 臨床癥狀 衣原體致妊娠母牛流產(chǎn)的發(fā)病癥狀不明顯，有時(shí)甚至沒有任何癥狀，這是衣原體感染的一大特點(diǎn)。但是，在感染后的幾周內(nèi)，妊娠母?？赡軙霈F(xiàn)一些輕微的癥狀，由于衣原體感染引起母牛的內(nèi)分泌失調(diào)，可能導(dǎo)致乳房腫脹。受到衣原體感染的妊娠母?？赡軙霈F(xiàn)陰道分泌物增多的情況。在感染初期，妊娠母?？赡軙霈F(xiàn)輕微的發(fā)熱。受到衣原體感染的母?？赡軙霈F(xiàn)精神萎靡、食欲不振等情況。如果衣原體感染比較嚴(yán)重，那么妊娠母?？赡軙谌焉镌缙诰桶l(fā)生流產(chǎn)。需要注意的是，這些癥狀非常不明顯，容易被忽視或誤認(rèn)為其他疾病的癥狀，因此，若懷疑妊娠母牛受到衣原體感染，最好進(jìn)行相應(yīng)的檢測和診斷。

2.3 病理變化 衣原體感染的病理組織學(xué)變化主要表現(xiàn)為炎癥反應(yīng)和損傷。衣原體感染可引起子宮內(nèi)膜炎，影響胚胎著床和發(fā)育，導(dǎo)致胎兒死亡和流產(chǎn)。流產(chǎn)之后母?？赡軙霈F(xiàn)子宮頸炎，導(dǎo)致子宮頸口松弛、不收縮，增加胎兒流產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。衣原體感染可引起輸卵管和卵巢炎，導(dǎo)致輸卵管阻塞、卵巢功能障礙，影響受孕和妊娠發(fā)育。衣原體感染可引起生殖系統(tǒng)的粘膜和周圍組織損傷，導(dǎo)致上述炎癥反應(yīng)加重，增加胎兒流產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。

2.4 實(shí)驗(yàn)室診斷

2.4.1 染色鏡檢 取一支無菌棉簽，將其沾濕后從病畜（牛）的病灶處采集分泌物或組織樣本。將采集到的樣本涂抹在清潔的玻璃載片上，晾干后用甲醇固定。將載玻片放入姬姆薩染色液中，在加熱條件下染色10～15 min。用自來水沖洗載玻片，晾干后在顯微鏡下觀察。牛衣原體呈現(xiàn)為青紫色小圓點(diǎn)狀，大小約為0.2～1 μm，位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。由于牛衣原體沒有細(xì)胞壁，所以在姬姆薩染色中不會出現(xiàn)細(xì)胞壁染色的情況。如果載片上看到了顏色相同的圓點(diǎn)，但大小不一，很可能是其他細(xì)菌或病毒。

2.4.2 間接血凝試驗(yàn) 從疑似感染的母牛采集靜脈全血，將血置于無菌離心管中，離心10 min，收集上清液為血清樣本。將感染良好、純度高的衣原體菌株進(jìn)行培養(yǎng)、裂解，制備出含有衣原體抗原的懸浮液。將配置好的衣原體抗原懸浮液和0.9%生理鹽水按一定比例混合制成試劑，用來檢測血清樣本。在96 孔微量板中分別加入不同稀釋倍數(shù)的血清樣本。向每個(gè)孔加入等體積的衣原體抗原試劑，并混合均勻。放置在37 ℃恒溫箱中反應(yīng)30～60 min。加入4%羊紅細(xì)胞懸液，混合均勻。再次放置在37 ℃恒溫箱中反應(yīng)20～30 min。通過觀察微量板孔中紅細(xì)胞的輸聚狀態(tài)，根據(jù)血清的稀釋倍數(shù)及輸聚情況，判斷衣原體間接血凝試驗(yàn)的結(jié)果。IHA 的結(jié)果判定一般根據(jù)血清樣本稀釋倍數(shù)，如1:16 以下為陰性反應(yīng)；1:32～1:64 為可疑陽性反應(yīng)；1:128 以上為陽性反應(yīng)，陽性反應(yīng)越高，表示感染程度越嚴(yán)重。

3 結(jié)語

預(yù)防和控制牛流產(chǎn)的發(fā)生是養(yǎng)殖業(yè)者應(yīng)該非常重視的問題。了解牛常見的傳染性流產(chǎn)病因并采取綜合的防控措施可以有效地降低疾病的傳播風(fēng)險(xiǎn)。只有采取綜合的防控措施，才能有效地減少牛流產(chǎn)的發(fā)生，保障牛群的健康和生產(chǎn)性能，促進(jìn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。