袁志鵬,鄭銳年△,袁淑卿,陳鏡塘,吳依芬

1.廣東醫(yī)科大學(xué),廣東湛江 524023;2.東莞市人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科,廣東東莞 523000;3.東莞市婦幼保健院超聲科,廣東東莞 523000;4.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院,廣東汕頭 515041

胃癌是常見惡性腫瘤之一,發(fā)病率在全球范圍內(nèi)居第五位,死亡率在癌癥原因死亡中排第3位,全球胃癌發(fā)病率在地理分布上差異廣泛,高發(fā)地區(qū)約是低發(fā)地區(qū)的15～20倍[1]。在我國,胃癌是最常見的高發(fā)惡性腫瘤之一,其發(fā)病機(jī)制尚不明晰,但通常認(rèn)為與幽門螺桿菌感染、遺傳因素、環(huán)境因素和飲食習(xí)慣有關(guān)[2]。近年來,盡管胃癌的診斷技術(shù)和治療策略取得了較大的提升,但是胃癌患者術(shù)后5年生存率只有25%左右,臨床評估患者預(yù)后的局限性是造成這種現(xiàn)象的主要原因之一[3]。因此,尋找精準(zhǔn)評估外患者預(yù)后的指標(biāo)對提高患者生存率具有重要價值。

非編碼RNA是細(xì)胞生物學(xué)重要的一員,其參與了腫瘤包括胃癌的發(fā)生和發(fā)展。胃癌中研究最多的非編碼RNA包括微小RNA(miRNA)、長鏈非編碼RNA和環(huán)狀RNA,它們具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲及參與胃癌的轉(zhuǎn)移的作用[4]。其中,miRNA在基因表達(dá)調(diào)控中發(fā)揮著重要作用,miR-597位于人類染色體8p23.1,已有研究表明miR-597可以抑制乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展[5]。miR-3188可能是乳腺癌、胃癌的治療靶點(diǎn)[6]。目前關(guān)于胃癌組織中miR-597和miR-3188表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系尚鮮見報道,因此,本研究分析胃癌患者組織中miR-597和miR-3188表達(dá)情況及其與患者臨床病理特征的關(guān)系,并探討了二者對患者預(yù)后的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年1月至2020年6月在東莞市人民醫(yī)院住院并行手術(shù)治療的96例胃癌患者作為研究對象,收集患者術(shù)中切除的胃癌組織和癌旁組織(距離癌組織>5 cm)標(biāo)本。96例胃癌患者年齡44～78歲、平均(61.27±8.33)歲,男49例、女47例。收集患者年齡、性別、腫瘤最大徑、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分級等臨床病理資料。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)經(jīng)胃鏡和術(shù)后病理確診為原發(fā)性胃癌;(2)首次確診;(3)入組前1周未服用激素類藥物;(4)年齡>18歲,術(shù)中成功獲取組織標(biāo)本并保存完整,隨訪資料齊全;(5)患者入院前未進(jìn)行過手術(shù)、放療、化療等治療。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并有其他腫瘤;(2)伴有肝、腎或其他臟器功能障礙;(3)有自身免疫性疾病、全身感染性疾病。本研究獲得東莞市人民醫(yī)院倫理委員會審核批準(zhǔn)后實(shí)施。所有要就對象詳知此項(xiàng)研究內(nèi)容,并自愿簽署同意書。

1.2方法 取研究對象術(shù)中胃癌組織和癌旁組織置于-80 ℃冰箱保存待測。組織總RNA按照Trizol試劑(上海文韌生物科技有限公司)操作步驟進(jìn)行分離提取,后進(jìn)行濃度和純度測定,按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(德國Qiagen公司)操作步驟逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA,采用ABI 7500型實(shí)時熒光定量PCR(RT-PqCR)儀(美國ABI公司)檢測組織中miR-597、miR-3188的相對表達(dá)量,U6為內(nèi)參。所有引物均由上海生工生物工程有限公司合成,引物序列見表1。使用2-ΔΔCt方法(Ct為循環(huán)閾值)計算目的基因miR-597、miR-3188的相對表達(dá)量。

表1 引物序列

1.3隨訪 所有患者均進(jìn)行電話隨訪或門診隨訪,第1年每3個月進(jìn)行1次隨訪,主要以門診復(fù)查的方式進(jìn)行,第2年每6個月進(jìn)行1次隨訪,主要以電話隨訪的方式進(jìn)行,第3年每1年進(jìn)行1次隨訪。當(dāng)患者出現(xiàn)癌癥復(fù)發(fā)或死亡時則隨訪終止,患者隨訪率為100%。生存時間定義為術(shù)后至患者死亡或隨訪終止的時間。

2 結(jié) 果

2.1胃癌組織和癌旁組織miR-597、miR-3188表達(dá)比較 與癌旁組織相比,胃癌組織中miR-597和miR-3188表達(dá)水平明顯降低(P<0.05)。見表2。

表2 胃癌組織和癌旁組織miR-597、miR-3188表達(dá)比較

2.2胃癌組織miR-597、miR-3188表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系 以胃癌組織miR-597(0.46)和miR-3188(0.39)表達(dá)水平的中位數(shù)為臨界值,將胃癌患者分為miR-597高表達(dá)48例,miR-597低表達(dá)48例;miR-3188高表達(dá)48例,miR-3188低表達(dá)48例。結(jié)果顯示,miR-597表達(dá)水平與患者年齡、性別、腫瘤最大徑、浸潤深度無相關(guān)性(P>0.05),與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度有關(guān)(P<0.05);miR-3188表達(dá)水平與患者年齡、性別、腫瘤最大徑無相關(guān)性(P>0.05),與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、腫瘤分化程度有關(guān)(P<0.05)。見表3。

2.3胃癌組織miR-597、miR-3188表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系 Kaplan-Meier分析結(jié)果顯示,胃癌組織miR-597高表達(dá)患者3年生存率(30/48,62.50%)高于miR-597低表達(dá)患者(14/48,29.17%),胃癌組織miR-3188高表達(dá)患者3年生存率(33/48,68.75%)高于miR-3188低表達(dá)患者(11/48,22.92%),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見圖1、2。

圖1 胃癌組織miR-597表達(dá)與患者3年總生存率的關(guān)系

圖2 胃癌組織miR-3188表達(dá)與患者3年總生存率的關(guān)系

2.4多因素COX回歸分析胃癌患者預(yù)后的影響因素 單因素分析顯示,miR-597、miR-3188、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度均與患者預(yù)后有關(guān)(P<0.05);以胃癌患者3年內(nèi)是否死亡為因變量,以miR-597、miR-3188、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度為自變量進(jìn)行多因素COX回歸分析,結(jié)果顯示,TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胃癌患者死亡的獨(dú)立危險因素(P<0.05),miR-597、miR-3188是胃癌患者死亡的保護(hù)因素(P<0.05)。見表4、5。

表4 胃癌患者預(yù)后死亡的單因素分析

表5 多因素COX回歸分析胃癌患者預(yù)后的影響因素

3 討 論

胃癌是導(dǎo)致癌癥患者死亡的第三大因素,僅次于肺癌和腸癌,胃癌患者約占全世界癌癥患者總數(shù)的6%。據(jù)統(tǒng)計,2020年全球范圍內(nèi)新增癌癥病例超過100萬,死亡病例約77萬[7]。胃癌的發(fā)展是一個長期的過程,主要是從正常黏膜發(fā)展到慢性胃炎再到黏膜萎縮、腸道化生、上皮內(nèi)化膿最終發(fā)展成為胃癌。這一過程可能會持續(xù)數(shù)年,長期的炎癥可能是導(dǎo)致胃癌發(fā)展的主要致病因素[8]。臨床中胃癌患者的治療方式有化療、分子靶向治療、免疫治療等[9-10],盡管治療手段和技術(shù)發(fā)展迅速,但是患者術(shù)后的生存情況仍不容樂觀,因此,尋找與胃癌患者預(yù)后關(guān)系密切的指標(biāo)具有重要意義。

miRNA是一種非編碼RNA,近年來在腫瘤中被廣泛研究,尤其是在癌癥的診斷和預(yù)后中,miRNA發(fā)揮著重要作用[11]。研究表明,在胃癌的發(fā)展進(jìn)程中,miRNA會影響胃癌細(xì)胞的生長、侵襲和凋亡過程,其可激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信號通路,促進(jìn)胃癌細(xì)胞生長和遷移,并對胃癌細(xì)胞的凋亡也起到抑制效果[12]。有研究顯示,miR-4513可以靶向抑制賴氨酸乙酰轉(zhuǎn)移酶6B,致使胃癌細(xì)胞增殖和上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化,從而增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的抗凋亡能力[13]。杜鑫等[14]研究結(jié)果表明,miR-183高表達(dá)和miR-144-3p低表達(dá)均是老年胃癌患者的獨(dú)立影響因素,且與患者的預(yù)后較差有關(guān)。黃金麗等[15]研究也發(fā)現(xiàn),miR-501通過靶向下調(diào)抑癌基因eIF4E3的表達(dá),進(jìn)一步促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力,同時指出miR-501可能成為胃癌治療的潛在靶點(diǎn)。此外,miRNA可通過抑制PTEN/PI3K/AKT通路及其部分通路、上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化過程、Wnt/β-連環(huán)蛋白信號通路等發(fā)揮抑癌作用。李欣等[16]研究發(fā)現(xiàn),miR-30a-5p主要通過負(fù)調(diào)控靶基因SNAIL1的表達(dá),抑制BGC-823胃癌細(xì)胞的遷移,從而發(fā)揮其抑癌作用。

目前,miR-597在乳腺癌及胰腺癌癌組織中呈低表達(dá),主要發(fā)揮抑癌作用[17]。本研究結(jié)果顯示,miR-597在胃癌組織中低表達(dá)且miR-597高表達(dá)患者3年生存率可達(dá)62.50%,顯著高于miR-597低表達(dá)患者,這一結(jié)果與文獻(xiàn)[17]研究一致,進(jìn)一步多因素COX分析結(jié)果表明,miR-597是胃癌患者的保護(hù)因素,提示miR-597可能在作為抑癌因子在胃癌中發(fā)揮作用。研究表明,miR-3188可在多種癌癥的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用,在鼻咽癌中miR-3188作為腫瘤抑制因子可以直接靶向mTOR參與FOXO1介導(dǎo)的細(xì)胞生長抑制、腫瘤發(fā)生和鼻咽癌化療耐藥等[18]。miR-3188在肝癌組織中呈高表達(dá),miR-3188在肝癌細(xì)胞中過表達(dá)促進(jìn)了肝癌細(xì)胞的生長和增殖,同時抑制了肝癌細(xì)胞的凋亡,miR-3188可以靶向Cxcl14調(diào)節(jié)肝癌細(xì)胞的生長和凋亡[19]。而王坤男等[20]分析發(fā)現(xiàn),miR-3188在胃癌細(xì)胞中呈低表達(dá),miR-3188過表達(dá)能夠抑制胃癌細(xì)胞HGC-27的侵襲、增殖和遷移并促使其進(jìn)行凋亡,miR-3188可能在胃癌的發(fā)生和發(fā)展過程起抑癌作用。本研究結(jié)果顯示,miR-3188在胃癌組織中呈低表達(dá),miR-3188高表達(dá)患者3年生存率顯著高于miR-3188低表達(dá)患者,這一結(jié)果與文獻(xiàn)[20]一致。多因素COX分析結(jié)果表明,miR-3188是胃癌患者的保護(hù)因素,提示miR-3188也可能在作為抑癌因子在胃癌組織中發(fā)揮作用。miR-597和miR-3188表達(dá)與胃癌患者病理特征關(guān)系分析結(jié)果表明,miR-597和miR-3188表達(dá)均與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度有關(guān)。多因素COX分析結(jié)果顯示,TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均是胃癌患者死亡的獨(dú)立危險因素,因此,miR-597和miR-3188可能參與了胃癌的發(fā)生和發(fā)展,且與胃癌患者預(yù)后密切相關(guān)。

綜上所述,miR-597和miR-3188均在胃癌組織中低表達(dá),二者表達(dá)均與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度有關(guān);miR-597和miR-3188高表達(dá)患者的生存率高于低表達(dá)患者,二者均是胃癌患者死亡的保護(hù)因素。miR-597和miR-3188有可能是評估胃癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)。