吳竹蓮 蔡甜

作者簡(jiǎn)介：吳竹蓮（1988—），女，湖北襄陽(yáng)人，碩士，實(shí)驗(yàn)師。研究方向：環(huán)境和食品安全檢測(cè)。

摘 要：建立高效液相色譜-四級(jí)桿/飛行時(shí)間高分辨質(zhì)譜法檢測(cè)保健食品中非法添加藥物西布曲明和酚酞的分析方法。通過(guò)保留時(shí)間對(duì)西布曲明和酚酞進(jìn)行定性分析，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線法對(duì)保健食品中西布曲明和酚酞進(jìn)行定量分析。結(jié)果表明，2種藥物標(biāo)準(zhǔn)品的溶液濃度與檢測(cè)響應(yīng)具有良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)（R2）均大于0.99，該方法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確，適合用于保健食品中非法添加物的篩查。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜；四級(jí)桿/飛行時(shí)間高分辨質(zhì)譜法；保健食品；非法添加藥物

The detection of Illegally Added Drugs in Health Food Products Using High-Performance Liquid Chromatography-Quadrupole/Time-of-Flight High-Resolution Mass Spectrometry

WU Zhulian， CAI Tian

（School of Chemistry and Chemical Engineering， Southwest University， Chongqing 400715， China）

Abstract： An analytical method for the detection of unlawfully added drugs， sibutramine and phenolphthalein， in health food products was established using high-performance liquid chromatography coupled with quadrupole/time-of-flight high-resolution mass spectrometry. Qualitative analysis of sibutramine and phenolphthalein was conducted based on retention time， while quantitative analysis of these two drugs in health food products was performed using the standard curve method. The results showed that a strong linear correlation was observed between the concentrations of the standard solutions of the two drugs and the corresponding detection response， with correlation coefficients （R?） greater than 0.99. This approach is simple， rapid， and precise， indicating its suitability for the screening of illegally added substances in health food products.

Keywords： high-performance liquid chromatography; quadrupole/time-of-flight high-resolution mass spectrometry; health food products; illegally added drugs

在追求健康與形體美的時(shí)代背景下，減肥保健食品逐漸成為消費(fèi)者日常生活中的重要選擇。然而，部分不法商家為追求短期利益，違法添加西布曲明和酚酞等藥物成分到減肥保健食品中，嚴(yán)重侵害了消費(fèi)者的權(quán)益。西布曲明作為中樞神經(jīng)抑制劑，長(zhǎng)期攝入可能導(dǎo)致心率異常、血壓波動(dòng)，甚至引發(fā)嚴(yán)重的心腦血管事件，對(duì)消費(fèi)者的生命安全構(gòu)成極大威脅[1-2]。酚酞常作為瀉藥使用，但長(zhǎng)期或過(guò)量攝入可能導(dǎo)致電解質(zhì)紊亂、腸道功能失調(diào)，甚至增加患癌風(fēng)險(xiǎn)[3]。因此，對(duì)減肥保健食品中的非法添加藥物進(jìn)行準(zhǔn)確、高效檢測(cè)至關(guān)重要。

傳統(tǒng)的檢測(cè)方法，如高效液相色譜法[4-5]和拉曼光譜法[6]，在保健食品非法添加物的檢測(cè)中雖有一定應(yīng)用，但受限于其靈敏度和分辨率，難以滿(mǎn)足對(duì)微量復(fù)雜成分的精確檢測(cè)需求。相比之下，高效液相-高分辨質(zhì)譜檢測(cè)以其高靈敏度、高分辨率和快速分析的特點(diǎn)，在非法添加物檢測(cè)領(lǐng)域展現(xiàn)出顯著優(yōu)勢(shì)[7-8]。

該方法不僅能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)微量成分的準(zhǔn)確檢測(cè)，還能夠獲得分析對(duì)象的分子量和碎片離子信息，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)一次檢測(cè)即可同時(shí)確證結(jié)構(gòu)，為監(jiān)管部門(mén)提供有力的技術(shù)支持。本文探討了高效液相色譜-四級(jí)桿/飛行時(shí)間高分辨質(zhì)譜法在定性定量分析減肥保健食品中西布曲明和酚酞方面的應(yīng)用，可為減肥保健品里非法添加藥物的檢測(cè)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

甲醇（LC-MS純，上海麥克林生化科技有限公司）；乙腈（LC-MS純，阿拉丁試劑有限公司）；甲酸（分析純，F(xiàn)isher Scientific）；氫氧化鈉（電子級(jí)純，Sigma-Aldrich）；西布曲明（分析純，壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心）；酚酞（分析純，阿拉丁試劑有限公司）；異丙醇（LC-MS純，Sigma-Aldrich）；水為超純水。

Agilent 1290 infinity II超高效液相色譜儀；Bruker Impact II四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜儀，精天FA2004B萬(wàn)分之一分析天平；KQ5200B超聲波儀。

1.2 實(shí)驗(yàn)條件

（1）液相色譜條件。色譜柱：Agilent Poroshell 120 EC-C18（2.1 mm×100 mm，1.9 μm）；流動(dòng)相：含0.1%甲酸的水溶液（A）和甲醇（B）；流速：

0.2 mL·min-1；進(jìn)樣量：2 μL；柱溫：30 ℃。采用梯度洗脫方式，梯度變化如表1所示。

（2）質(zhì)譜條件。采用電噴霧離子源（ESI），正離子掃描模式；電噴霧電壓：4 500 V；霧化氣壓力：0.24 bar；干燥氣流量：8.0 L·min-1；干燥溫度：220 ℃；掃描范圍（m/z）： 50～1 500。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液及校正液配制

（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液配制。精確稱(chēng)取鹽酸西布曲明、酚酞適量，用甲醇溶解并配成1 000 mg·mL-1的儲(chǔ)備液，各取適量?jī)?chǔ)備液，用甲醇稀釋為50 μg·mL-1的混合溶液。取混合溶液適量，用甲醇逐級(jí)稀釋成質(zhì)量濃度為0.05 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1、0.25 μg·mL-1、

0.50 μg·mL-1、1.00 μg·mL-1和5.00 μg·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

（2）甲酸鈉校正液配制。異丙醇和水按1∶1混合并加入0.2%甲酸作為溶劑。取1 mL 1 mol·L-1 NaOH和99 mL溶劑混勻配制成10 mmol·L-1甲酸鈉校正液。

1.4 實(shí)際樣品處理

取適量市售樣品，研細(xì)，準(zhǔn)確稱(chēng)取1.000 g粉末，置于50 mL具塞離心管中，加入20 mL甲醇，渦旋1 min，超聲提取10 min，10 000 r·min-1離心

5 min，上清液用0.22 μm微孔濾膜（有機(jī)相型）過(guò)濾，收集濾液，作為樣品原液。

取1 mL樣品原液到15 mL具塞離心管中，加入9 mL甲醇，渦旋1 min，超聲提取10 min，

10 000 r·min-1離心5 min，上清液用0.22 μm微孔濾膜（有機(jī)相型）過(guò)濾，收集濾液作為樣品待測(cè)液。

2 結(jié)果與分析

2.1 西布曲明和酚酞定性分析

按照上述色譜和質(zhì)譜條件對(duì)西布曲明和酚酞標(biāo)樣（5 μg·mL-1）進(jìn)行液質(zhì)聯(lián)合分析，得到總離子流譜圖，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Data Analysis 4.4處理。在50～

1 500質(zhì)荷比范圍內(nèi)，通過(guò)高分辨全譜掃描模式，以精確質(zhì)量數(shù)提取目標(biāo)化合物，得到西布曲明和酚酞的保留時(shí)間分別為5.1 min和4.7 min（圖1），此為二者定性的依據(jù)。分析二者的質(zhì)譜圖（圖2和圖3），如表2所示，西布曲明和酚酞的測(cè)量分子量與實(shí)際分子量偏差較?。ā?×10-6），同位素模式擬合小于50 mSigma[9]，表明該測(cè)試方法準(zhǔn)確度高，可用于后續(xù)分析測(cè)試。

2.2 西布曲明和酚酞定量分析

分析一系列標(biāo)準(zhǔn)樣品的測(cè)試結(jié)果，以目標(biāo)物的濃度為橫坐標(biāo)（x），色譜峰積分面積為縱坐標(biāo)（y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合校正曲線，建立回歸方程，計(jì)算相關(guān)系數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3所示，在濃度為0.05 ～ 5.00 ?g·mL-1時(shí)，西布曲明和酚酞均呈現(xiàn)良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2大于0.99。

在空白樣品中添加低濃度的西布曲明和酚酞，將信噪比（S/N）為3時(shí)的濃度定義為方法的檢出限，信噪比為10所對(duì)應(yīng)的濃度定為方法的定量限。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，得到方法的檢出限和定量限見(jiàn)表3。

2.3 實(shí)際樣品檢測(cè)

用本方法對(duì)實(shí)際樣品進(jìn)行測(cè)試分析，按定性分析數(shù)據(jù)處理方法未得到西布曲明和酚酞的信號(hào)，即表明該實(shí)際樣品為陰性樣品，西布曲明和酚酞含量可忽略不計(jì)。

3 結(jié)論

本研究建立了基于高效液相色譜-四級(jí)桿/飛行時(shí)間高分辨質(zhì)譜儀檢測(cè)減肥保健品中西布曲明和酚酞的定性定量分析方法，該方法簡(jiǎn)便快速，準(zhǔn)確可靠，靈敏度高，并用于實(shí)際樣品檢測(cè)，未檢出西布曲明和酚酞。

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