李欣陽(yáng) 涂正坤

摘要： HBV感染誘導(dǎo)的慢性乙型肝炎是導(dǎo)致肝硬化和肝癌的重要危險(xiǎn)因素。半個(gè)世紀(jì)前， HBeAg在HBV感染者血清中首次被發(fā)現(xiàn)， 盡管HBeAg并不參與HBV在肝細(xì)胞中的感染或復(fù)制， 但其已被證實(shí)可干擾宿主先天性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)， 在慢性HBV感染的過程中發(fā)揮著重要的免疫激活和免疫抑制作用。HBV對(duì)于感染的肝細(xì)胞并沒有細(xì)胞毒性， 免疫應(yīng)答介導(dǎo)的抗病毒作用和炎癥反應(yīng)決定HBV是否被清除或者誘導(dǎo)肝臟炎癥相關(guān)疾病。因此， 本文對(duì)HBeAg的形成及其在慢性HBV感染中引起的免疫激活和免疫抑制機(jī)制進(jìn)行綜述， 重點(diǎn)論述HBeAg對(duì)先天免疫和適應(yīng)性免疫細(xì)胞所引起的不同免疫效應(yīng)， 闡述了其誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的兩面性， 并探討HBeAg在慢性HBV感染不同階段間的轉(zhuǎn)換作用。

關(guān)鍵詞： ?乙型肝炎， ?慢性； ?乙型肝炎e抗原； ?免疫激活； ?免疫抑制

基金項(xiàng)目： ?吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目自然科學(xué)基金 （20190201245JC）

Role of HBeAg-induced immune activition and immunosuppression in chronic hepatitis B

LI Xinyang， ?TU Zhengkun. ? （Laboratory of Tumor Immunology， ?The First Hospital of Jilin University， ?Changchun 130021， ?China

Corresponding author： ?TU Zhengkun， ?tuzhengkun@hotmail.com ?（ORCID： ?0000-0001-6803-2015）

Abstract： Chronic hepatitis B induced by HBV infection is a significant risk factor leading to liver cirrhosis and liver cancer. Half a century ago， HBeAg was first discovered in the serum of HBV infected individuals， and although HBeAg does not participate in HBV infection or replication in hepatocytes， studies have shown that it can interfere with the innate and adaptive immune responses of the host and play an important role in immune activation and immunosuppression during chronic HBV infection. HBV has no cytotoxicity to the infected hepatocytes， and the antiviral action and inflammatory response mediated by immune response determine whether HBV is cleared or induces liver inflammation-related diseases. Therefore， this article reviews the formation of HBeAg and its immune activation and immunosuppression mechanisms in chronic HBV infection， with a focus on the different immune effects caused by HBeAg on innate immune and adaptive immune cells， and this article also elaborates on the dual role of HBeAg in inducing immune responses and explores the conversion role of HBeAg in different stages of chronic HBV infection.

Key words： Hepatitis B， Chronic； Hepatitis B e Antigens； Immune Activation； Immune Suppressive

Research funding： Jilin Province Science and Technology Development Plan Project Natural Science Foundation Project （20190201245JC）

慢性HBV感染如今仍然是全球健康領(lǐng)域一項(xiàng)具有挑戰(zhàn)性的問題。目前， 全球約有2. 57億人慢性持續(xù)性感染HBV， 每年造成近100萬人死亡。慢性HBV感染是導(dǎo)致肝纖維化、 肝硬化和肝細(xì)胞癌 （HCC） 的主要危險(xiǎn)因素［1-2］ 。HBeAg是HBV復(fù)制過程中表達(dá)的一種非結(jié)構(gòu)性蛋白， 具有免疫抑制作用， 可干擾先天性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)， 導(dǎo)致免疫逃逸行為， 從而促進(jìn)HBV的持續(xù)性感染［3］ 。與此同時(shí)， HBeAg還具有免疫激活作用， 并在多項(xiàng)研究中發(fā)現(xiàn)與慢性乙型肝炎 （CHB） 期間的肝損傷相關(guān)［4-5］ 。然而， HBeAg導(dǎo)致這些截然相反免疫功能的確切機(jī)制目前尚未完全闡明。

1 HBeAg的形成

HBV是屬于嗜肝病毒科的一種雙鏈DNA病毒， 其基因組 DNA 是一種松弛環(huán)狀 DNA（relaxed circular DNA，rcDNA）， rcDNA在復(fù)制過程中被轉(zhuǎn)化為共價(jià)閉合環(huán)狀DNA （covalently closed circular DNA， cccDNA）， cccDNA產(chǎn)生不同長(zhǎng)度的HBV RNA， 這些RNA是從HBV基因組中的不同啟動(dòng)子開始轉(zhuǎn)錄的， 病毒基因組編碼4個(gè)重疊的開放閱讀框， 病毒編碼蛋白主要包括C、 P、 S和X蛋白。其中， 3. 5 kb RNA主要負(fù)責(zé)合成前核心蛋白、 核心蛋白以及Pol蛋白［6］ 。HBeAg主要是通過前核心蛋白 （p25） 在分泌途徑中經(jīng)過兩次蛋白酶切割轉(zhuǎn)化而來的。第一次切割發(fā)生在p25蛋白轉(zhuǎn)位到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)的過程中， 主要通過信號(hào)肽酶去除p25的N端信號(hào)肽， 從而導(dǎo)致p22的產(chǎn)生；隨后進(jìn)入高爾基體， p22的C端結(jié)構(gòu)域被進(jìn)一步切割后形成HBeAg， 并被分泌到細(xì)胞外［7-8］。盡管HBeAg并不是HBV的結(jié)構(gòu)成分， 也不參與其復(fù)制過程， 但是它仍然可以影響細(xì)胞的天然和適應(yīng)性免疫反應(yīng)， 在HBV的持續(xù)性感染中發(fā)揮著重要作用［9］ 。

2 HBeAg與CHB分期

慢性HBV感染主要涉及HBV、 感染的肝細(xì)胞和患者免疫系統(tǒng)之間的動(dòng)態(tài)相互作用， 因此， 慢性HBV感染的自然病程可劃分為不同的階段， 傳統(tǒng)上將CHB分為4個(gè)階段——免疫耐受期、 免疫清除期、 非活動(dòng)或低復(fù)制期和再活動(dòng)期。在對(duì)傳統(tǒng)術(shù)語進(jìn)行更新時(shí)， 為了更準(zhǔn)確地反映潛在的疾病活動(dòng)， 歐洲肝病學(xué)會(huì)依據(jù)HBeAg的表達(dá)以及是否發(fā)生肝臟炎癥損傷對(duì)CHB患者進(jìn)行了分期， 主要包括HBeAg陽(yáng)性慢性感染、 HBeAg陽(yáng)性慢性肝炎、 HBeAg陰性慢性感染和HBeAg陰性慢性肝炎 （圖1） ［10］ 。

HBeAg陽(yáng)性慢性感染期HBeAg的自發(fā)清除率很低。HBeAg陽(yáng)性慢性肝炎期可能會(huì)持續(xù)數(shù)周到數(shù)年， HBeAg的自發(fā)清除率較 HBeAg 陽(yáng)性慢性感染期有所提高。HBeAg陰性慢性感染期由于免疫應(yīng)答控制了病毒感染，因此， 在大多數(shù)患者中， 這種狀態(tài)對(duì)于良好長(zhǎng)期結(jié)果的維持非常有益， 出現(xiàn)肝硬化或肝癌的風(fēng)險(xiǎn)非常低。HBeAg陰性慢性肝炎期免疫應(yīng)答周期性再激活。該階段的患者無HBeAg表達(dá)， 并且在前核心和/或基本核心啟動(dòng)子區(qū)域存在核苷酸被替換的HBV變異體［11］ 。

在CHB上述分期中的重要轉(zhuǎn)折點(diǎn)是HBeAg的血清轉(zhuǎn)化， 即HBeAg消失并伴隨抗-HBe出現(xiàn)。有研究［12-13］表明， HBeAg的血清轉(zhuǎn)化可使HBV DNA水平持續(xù)降低，肝纖維化消退， 肝硬化和HCC風(fēng)險(xiǎn)降低。此外， 早期HBeAg的血清轉(zhuǎn)化或較短的HBeAg陽(yáng)性期會(huì)抑制肝臟疾病進(jìn)展， 甚至?xí)黾親BsAg的血清清除率［14］ 。這些發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步凸顯了HBeAg在CHB發(fā)展中的關(guān)鍵作用［14］ 。

3 HBeAg誘導(dǎo)的免疫激活及機(jī)制

3. 1 巨噬細(xì)胞 巨噬細(xì)胞是重要的天然免疫細(xì)胞， 在肝臟中尤其豐富。在感染過程中， 巨噬細(xì)胞通過模式識(shí)別受體識(shí)別HBV病原體相關(guān)分子模式， 分泌大量的炎癥細(xì)胞因子， 進(jìn)而介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。研究［5］ 發(fā)現(xiàn)， HBeAg主要通過影響巨噬細(xì)胞表面TLR的表達(dá)以及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而介導(dǎo)巨噬細(xì)胞的天然免疫應(yīng)答反應(yīng)。HBeAg主要與巨噬細(xì)胞表面的TLR-2受體結(jié)合并通過TLR-2/NF-κB信號(hào)通路激活巨噬細(xì)胞。此外， 巨噬細(xì)胞還能有效地促進(jìn)適應(yīng)性免疫應(yīng)答， 輔助誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的毒性反應(yīng)和B淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的抗體分泌［15］ 。另一方面， NF-κB信號(hào)通路的激活可以上調(diào)巨噬細(xì)胞中miR-155的表達(dá)水平，miR-155可以通過抑制炎癥因子負(fù)向調(diào)節(jié)蛋白如BCL-6、SHIP-1和SOCS-1的表達(dá)來增強(qiáng)HBeAg誘導(dǎo)的炎癥因子的釋放［15］ 。上述一系列現(xiàn)象和機(jī)制證明了HBeAg在調(diào)控巨噬細(xì)胞炎癥和免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。

3. 2 肝竇內(nèi)皮細(xì)胞（liver sinusoidal endothelial cell，LSEC）LSEC是肝臟中數(shù)量最多的非實(shí)質(zhì)細(xì)胞， 其產(chǎn)生的凝集素可觸發(fā)CD8+T淋巴細(xì)胞耐受， 在維持肝臟微環(huán)境的動(dòng)態(tài)平衡中發(fā)揮重要作用［16］ 。然而， 在炎癥條件下， LSEC可以由免疫耐受轉(zhuǎn)換為免疫應(yīng)答狀態(tài)， 并觸發(fā)CD8+T淋巴細(xì)胞的激活［17］ 。

機(jī)制方面， 有研究［18］ 顯示， 從小鼠體內(nèi)純化的LSEC，在接受HBeAg刺激24 h后， 培養(yǎng)上清液中TNF-α和IL-27的表達(dá)顯著增加， 表明HBeAg通過與LSEC結(jié)合， 促進(jìn)TNF-α和IL-27的分泌， 從而誘導(dǎo)肝內(nèi)HBV特異性T淋巴細(xì)胞的激活。該發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)了HBeAg在調(diào)節(jié)LSEC免疫活性中的關(guān)鍵作用， 為理解肝臟免疫微環(huán)境中HBeAg所扮演的角色提供了新的見解。

3. 3 B淋巴細(xì)胞 眾所周知， B淋巴細(xì)胞可以通過產(chǎn)生抗-HBe， 完成HBeAg的血清學(xué)轉(zhuǎn)化， 進(jìn)而抑制病毒的傳播。與此同時(shí)， B淋巴細(xì)胞還可以充當(dāng)抗原提呈細(xì)胞的作用， 影響T淋巴細(xì)胞的免疫應(yīng)答反應(yīng)［19］ 。在自身免疫性疾病、 感染和癌癥的相關(guān)研究中， B淋巴細(xì)胞已經(jīng)被確定為誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答反應(yīng)的有效調(diào)節(jié)細(xì)胞［20］ 。此外， 有研究［21］ 表明， HBeAg可以刺激單核細(xì)胞分泌BAFF。BAFF又稱為BLyS或TNFSF13B， 屬于TNF家族， 是激活B淋巴細(xì)胞的關(guān)鍵細(xì)胞因子［22］。這一系列機(jī)制展示了HBeAg在調(diào)控B淋巴細(xì)胞免疫功能方面的重要作用。

3. 4 T淋巴細(xì)胞 作為免疫細(xì)胞的重要組成部分， T淋巴細(xì)胞具有多種生物學(xué)功能， 如直接殺傷靶細(xì)胞， 輔助或抑制B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體等。有研究［18］ 表明， HBeAg可以作為一種刺激因子， 通過促進(jìn)LSEC的成熟， 進(jìn)而協(xié)助抗HBV細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞發(fā)揮其效應(yīng)功能。如前所述， 識(shí)別HBeAg的LSEC可以作為抗原提呈細(xì)胞， 并且以濃度依賴性的方式上調(diào)LSEC中TNF-α和IL-27的水平來激活HBV特異性T淋巴細(xì)胞［23］ ， 激活的T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生大量IFN-γ。IFN-γ是一種具有抗病毒、 抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用的多功能細(xì)胞因子［24］ ， 且能夠觸發(fā)廣泛的級(jí)聯(lián)反應(yīng)， 放大炎癥過程［25］ ， 促進(jìn)肝內(nèi)CD8+T淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答和HBV的清除［18， 26］。在HBV復(fù)制的小鼠模型中， 阻斷TNF-α?xí)?dǎo)致HBV特異性CD8+T淋巴細(xì)胞功能降低以及延緩HBV的清除［26］ ， 這進(jìn)一步證明HBeAg刺激LSEC釋放的TNF-α對(duì)于HBV特異性CD8+T淋巴細(xì)胞的重要作用。

4 HBeAg誘導(dǎo)的免疫抑制及機(jī)制

4. 1 巨噬細(xì)胞 HBeAg不僅可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的免疫激活， 還可以誘導(dǎo)其免疫抑制作用以逃避宿主免疫。有研究［27］顯示， HBeAg通過激活ERK2蛋白促進(jìn)炎性細(xì)胞因子IL-6和TNF-α的產(chǎn)生， 與此同時(shí)， ERK2又可以上調(diào)人和小鼠巨噬細(xì)胞中miR-212-3p的表達(dá)。而激活的miR-212-3p又可以通過負(fù)反饋調(diào)節(jié)抑制ERK2的表達(dá)， 從而抑制巨噬細(xì)胞炎癥因子的產(chǎn)生， 發(fā)揮免疫抑制功能。此外， 在一項(xiàng)以小鼠為模型的研究［28］中發(fā)現(xiàn)， 從雌性HBV轉(zhuǎn)基因的子代小鼠中分離出的Kupffer細(xì)胞， 如果使用HBeAg進(jìn)行處理， 巨噬細(xì)胞主要向M2型極化并產(chǎn)生大量IL-10。相比之下， 從非轉(zhuǎn)基因雌鼠的子代小鼠中分離出的Kupffer細(xì)胞則會(huì)向M1型極化并產(chǎn)生TNF-α和IL-1β。該結(jié)果表明， Kupffer細(xì)胞對(duì)于HBeAg的免疫應(yīng)答反應(yīng)主要取決于其初次接觸到HBeAg的時(shí)間點(diǎn)。然而， HBeAg是如何與Kupffer細(xì)胞相互作用并影響它們的活性仍有待進(jìn)一步研究。

4. 2 樹突狀細(xì)胞 （DC）DC是宿主免疫系統(tǒng)的哨兵， 其可大致分為髓系樹突狀細(xì)胞 （mDC） 和漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞 （pDC） 兩類。pDC的形態(tài)類似于漿細(xì)胞， 主要通過分泌大量的IFN-α和IFN-β來抵御病毒攻擊。有研究［29］表明， HBeAg主要通過抑制NF-κB信號(hào)通路來抑制粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子誘導(dǎo)DC的生成， 同時(shí)在DC分化過程中， HBeAg可以下調(diào)其TLR-2的表達(dá)。此外，HBeAg也抑制DC發(fā)揮生理功能的相關(guān)蛋白質(zhì) （主要組織相容性復(fù)合物Ⅱ、 組織蛋白酶S、 神經(jīng)節(jié)苷脂GM2激活蛋白） 的表達(dá)水平。而在HBeAg存在的條件下， Ca2+結(jié)合蛋白S100A8和S100A9的表達(dá)水平均有所增加， 二者的上調(diào)可進(jìn)一步抑制DC的分化［30］ 。

在病毒感染過程中， pDC還可以通過分泌大量IFN，進(jìn)一步激活mDC、 T淋巴細(xì)胞、 NK細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞，pDC通過連接先天性免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答反應(yīng)， 進(jìn)一步激活和調(diào)節(jié)抗病毒免疫反應(yīng)， 因此， 它們?cè)贖BV感染的控制過程中起著至關(guān)重要的作用［31］。有研究［29］表明， HBeAg可以抑制慢性HBV感染者體內(nèi)pDC的數(shù)量及其功能， 導(dǎo)致pDC的抗原提呈功能受損。HBeAg對(duì)pDC的抑制作用也間接抑制了宿主通過免疫反應(yīng)對(duì)于HBV的清除， 使得病毒得以持續(xù)復(fù)制。此外， HBeAg還可以抑制骨髓祖細(xì)胞中DC的生成。這些研究證明了HBeAg在調(diào)節(jié)DC功能和免疫抑制方面的復(fù)雜作用。

4. 3 中性粒細(xì)胞 中性粒細(xì)胞不僅可以影響NK細(xì)胞和DC的成熟， 還可以影響T淋巴細(xì)胞向輔助性T淋巴細(xì)胞 （Th） 1或Th17細(xì)胞的增殖和極化［32］ 。在接受刺激后，中性粒細(xì)胞通過NADPH氧化酶產(chǎn)生大量的ROS， ROS不僅可以直接殺死被攝取的病原微生物， 而且還可以作為信號(hào)分子進(jìn)一步介導(dǎo)信號(hào)通路的激活， 從而觸發(fā)包括轉(zhuǎn)錄激活和凋亡在內(nèi)的許多生理反應(yīng)。有研究［33］ 表明，雖然HBeAg促進(jìn)了中性粒細(xì)胞的存活， 但同時(shí)抑制了中性粒細(xì)胞的遷移以及ROS的產(chǎn)生， 從而抑制了NLRP3炎性小體的激活和炎癥因子的產(chǎn)生。此外， HBeAg可能通過干擾中性粒細(xì)胞的功能來間接削弱Th1細(xì)胞和NK細(xì)胞對(duì)于病毒的清除。機(jī)制上講， HBeAg可以通過影響磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、 磷脂酶C、 Ras、 Rac和Rho小GTPase等細(xì)胞內(nèi)蛋白分子的激活來抑制中性粒細(xì)胞的激活和遷移， 從而阻止中性粒細(xì)胞與DC或NK細(xì)胞的相互作用， 最終影響DC的成熟、 NK細(xì)胞的功能和Th1細(xì)胞的反應(yīng)［32］ 。這些發(fā)現(xiàn)說明HBeAg可以誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞的免疫抑制作用。

4. 4 骨髓源性抑制細(xì)胞 （MDSC）MDSC是天然免疫細(xì)胞的一個(gè)組成成分， 可以改變適應(yīng)性免疫應(yīng)答并誘導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)作用， 對(duì)于T淋巴細(xì)胞的免疫抑制至關(guān)重要。MDSC在健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞 （PBMC） 中所占的比例僅為0. 5%， 但是， 其在慢性炎癥和IL-1β、 IL-6、 IL-10、TNF-α、 GM-SCF和IL-12等細(xì)胞因子的作用下會(huì)大量增殖。根據(jù)細(xì)胞表面CD14的表達(dá)與否， MDSC可分為單核細(xì)胞 MDSC（mMDSC）和粒細(xì)胞 MDSC（gMDSC）。針對(duì)CHB患者的分析顯示， HBeAg陽(yáng)性患者的mMDSC水平顯著高于HBeAg陰性患者。從健康供體分離得到的PBMC暴露于HBeAg后， IL-6和IL-1β的表達(dá)增加， mMDSC通過依賴這兩種細(xì)胞因子的途徑進(jìn)行增殖［34］ 。上述研究揭示了HBeAg對(duì)MDSC的擴(kuò)增和免疫抑制功能的重要作用。

4. 5 NK細(xì)胞 NK細(xì)胞是肝臟中主要的淋巴細(xì)胞亞群， 占肝內(nèi)淋巴細(xì)胞的31%， 肝臟中的NK細(xì)胞主要通過分泌IFN-γ、 TNF-α和IL-10等細(xì)胞因子， 快速應(yīng)對(duì)病毒感染［35］ 。有研究［9］ 表明， 與健康對(duì)照組相比， 慢性HBV感染者NK細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒細(xì)胞因子的能力明顯受損。

NK細(xì)胞的活化與否是由細(xì)胞表面的抑制性和活化性受體之間的博弈所控制的， 在慢性HBV感染者中能夠觀察到NK細(xì)胞表面抑制性受體NKG2A表達(dá)的上調(diào)［36］ 。近期的一項(xiàng)研究［37］表明， HBeAg陽(yáng)性的慢性HBV攜帶者中NKG2A+NK細(xì)胞和IL-10+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞 （Treg）水平高于HBeAg陰性的慢性HBV攜帶者。進(jìn)一步的研究［9］ 發(fā)現(xiàn)， HBeAg可以誘導(dǎo)Treg產(chǎn)生IL-10， 進(jìn)而增加NK細(xì)胞中NKG2A的表達(dá)水平， 從而抑制NK細(xì)胞的活化。

此外， 另有研究［38］ 表明， 分別使用HBeAg陽(yáng)性和陰性CHB患者的血清刺激健康人的PBMC， 并檢測(cè)NK細(xì)胞中IFN-γ的表達(dá)水平， 結(jié)果顯示HBeAg陽(yáng)性CHB患者的血清能夠顯著降低NK細(xì)胞中IFN-γ的表達(dá)水平， IL-18介導(dǎo)的信號(hào)通路可能是HBeAg抑制NK細(xì)胞中IFN-γ釋放的中間媒介。HBeAg抑制NK細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ的作用有利于HBV的持續(xù)性感染， 這些研究結(jié)果闡明了HBeAg

對(duì)NK細(xì)胞免疫功能和抗病毒能力的抑制作用。4. 6 T淋巴細(xì)胞 HBV特異性CD8+T淋巴細(xì)胞的免疫應(yīng)答在病毒清除和肝臟疾病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著重要作用。相較于急性乙型肝炎患者， CHB患者的外周血中CD8+T淋巴細(xì)胞的免疫反應(yīng)較為低下。這些患者的肝臟中雖然存在病毒特異性CD8+T淋巴細(xì)胞， 但由于功能缺陷或數(shù)量短缺而無法清除病毒， 從而導(dǎo)致病毒的慢性持續(xù)性感染［25］ 。

有研究［4， 34］表明， HBeAg誘導(dǎo)的mMDSC能夠抑制CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞的增殖， 從而導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞無法產(chǎn)生大量的抗病毒因子和免疫激活因子。另外一項(xiàng)針對(duì)小鼠的實(shí)驗(yàn)［28］表明， 親代HBeAg主要通過上調(diào)肝臟巨噬細(xì)胞程序性死亡受體配體-1 （PD-L1） 的表達(dá)來破壞子代的CD8+T淋巴細(xì)胞對(duì)HBV的免疫應(yīng)答。從機(jī)制上講， PD-L1能夠與PD-1結(jié)合， 抑制T淋巴細(xì)胞增殖以及細(xì)胞因子的分泌， 從而導(dǎo)致HBV的持續(xù)性感染。此外，PD-L1表達(dá)的上調(diào)也會(huì)導(dǎo)致慢性HBV感染者的T淋巴細(xì)胞衰竭和細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)的損傷［39］ 。在HBeAg陽(yáng)性CHB患者中， 自體T淋巴細(xì)胞的增殖和IFN-γ的分泌被純化的mMDSC顯著抑制［34］ 。其中， MDSC通過PD-L1的表達(dá)、 ROS的產(chǎn)生以及IDO的誘導(dǎo)和分泌等多種抑制機(jī)制損害T淋巴細(xì)胞的功能［40］ 。IDO是一種限速酶， 催化色氨酸轉(zhuǎn)化為犬尿氨酸。色氨酸的耗盡和犬尿氨酸的積聚都會(huì)導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞抑制和凋亡［41］ 。IDO在HBeAg誘導(dǎo)的mMDSC中顯著升高， 進(jìn)而損害T淋巴細(xì)胞功能，這對(duì)CHB的建立有重要影響， 表明HBeAg-mMDSC-IDO軸可能作為CHB的免疫治療靶點(diǎn)［34］ 。

5 總結(jié)在臨床上， HBeAg是一個(gè)衡量病毒復(fù)制、 傳染性、 炎癥、 疾病的嚴(yán)重程度和對(duì)抗病毒治療反應(yīng)的重要蛋白分子［42］ 。HBeAg誘導(dǎo)的截然相反的免疫模式， 即免疫激活和免疫抑制， 決定了其與宿主之間的相互作用是復(fù)雜且多面的。HBeAg既可以誘導(dǎo)免疫細(xì)胞放任HBV感染肝細(xì)胞， 以確保免疫逃逸從而進(jìn)行大量復(fù)制［4］ ， 助力HBeAg陽(yáng)性慢性感染的發(fā)生； 又可以激活各類免疫細(xì)胞， 而激活的免疫細(xì)胞彼此產(chǎn)生級(jí)聯(lián)反應(yīng)進(jìn)一步放大免疫應(yīng)答，促進(jìn)HBeAg陽(yáng)性慢性肝炎的進(jìn)展。HBeAg陽(yáng)性慢性感染期向HBeAg陽(yáng)性慢性肝炎期轉(zhuǎn)化的具體機(jī)制尚不明確。一般認(rèn)為， 針對(duì)HBeAg的免疫應(yīng)答能夠清除HBV感染的肝細(xì)胞， 進(jìn)入HBeAg陽(yáng)性慢性肝炎期。已知HBeAg既具有免疫激活功能也具有免疫抑制功能， 考慮可能是由于HBV不斷復(fù)制， HBeAg水平逐漸積累， 誘導(dǎo)的免疫激活反應(yīng)逐漸增強(qiáng)， 使其在宿主中的主要作用由免疫抑制向誘導(dǎo)免疫應(yīng)答傾斜。肝損傷通常在HBeAg血清轉(zhuǎn)化之前發(fā)生， 而且HBV攜帶者的肝損傷越嚴(yán)重， HBeAg血清轉(zhuǎn)化的時(shí)間則越短。有研究［25］ 表明， 當(dāng)激活的HBV特異性CD8+T淋巴細(xì)胞進(jìn)入肝臟， 識(shí)別抗原， 殺死感染細(xì)胞并分泌IFN-γ時(shí)， HBV的感染可以被控制。年齡是決定HBeAg血清轉(zhuǎn)化的一個(gè)關(guān)鍵因素。與<10歲的患者相比，10～20歲患者的HBeAg血清轉(zhuǎn)化率增加了近2倍， 年齡>50歲增加了4倍［43］ 。此外， 也有證據(jù)表明HBV的基因型可能影響HBeAg的血清轉(zhuǎn)化率。在一項(xiàng)縱向研究［14］中發(fā)現(xiàn)， HBV B型患者比C型患者具有更早和更高的HBeAg血清轉(zhuǎn)化率， 與C型患者相比， B基因型患者在免疫清除期有更高的Th1和更低的Th2免疫應(yīng)答。這種現(xiàn)象也暗示了HBeAg的清除與T淋巴細(xì)胞及IFN-γ的重要聯(lián)系。因此了解T淋巴細(xì)胞是何時(shí)以何種方式在慢性HBV感染中恢復(fù)抗病毒功能， 也將有助于更好地理解CHB中HBeAg陽(yáng)性慢性感染期如何向HBeAg陽(yáng)性慢性肝炎期轉(zhuǎn)化， 以及HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)化的深層機(jī)制。

HBeAg的血清轉(zhuǎn)化是慢性HBV感染自然病程中的一個(gè)重要轉(zhuǎn)折點(diǎn)， 并且是證明IFN治療有效的主要指標(biāo)［44］ 。HBeAg血清轉(zhuǎn)化有利于改善患者預(yù)后， 包括持續(xù)降低HBV DNA水平， 減輕纖維化程度， 提高無并發(fā)癥生存率等［45］ 。因此， 對(duì)于HBeAg如何調(diào)控宿主免疫功能并助力HBV感染持續(xù)存在的相關(guān)研究和探索顯得尤為重要。此外， HBeAg血清轉(zhuǎn)化也會(huì)導(dǎo)致HBsAg的血清清除， 這也是最接近功能治愈的理想終點(diǎn)。綜上所述， 由于CHB導(dǎo)致的嚴(yán)重后果及HBeAg在CHB中的復(fù)雜作用， 對(duì)HBeAg的結(jié)構(gòu)和免疫學(xué)特性的深入理解將會(huì)為預(yù)防HBV轉(zhuǎn)變?yōu)镃HB以及為CHB患者的治療提供新的研究思路。利益沖突聲明： 本文不存在任何利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明： 李欣陽(yáng)負(fù)責(zé)查閱文獻(xiàn)， 撰寫文章； 涂正坤負(fù)責(zé)擬定文章思路， 指導(dǎo)撰寫文章并最后定稿。

參考文獻(xiàn)：

[1] TANG LSY， COVERT E， WILSON E， et al. Chronic hepatitis B infec?tion： A review[J]. JAMA， 2018， 319（17）： 1802-1813. DOI： 10.1001/jama.2018.3795.

[2] CHANG ML， LIAW YF. Hepatitis B flare in hepatitis B e antigen-nega?tive patients： A complicated cascade of innate and adaptive immune responses[J]. Int J Mol Sci， 2022， 23（3）： 1552. DOI： 10.3390/ijms23031552.

[3] MILICH DR. Is the function of the HBeAg really unknown？ [J]. Hum Vaccin Immunother， 2019， 15（9）： 2187-2191. DOI： 10.1080/21645515.2019.1607132.

[4] PADARATH K， DEROUBAIX A， KRAMVIS A. The complex role of HBeAg and its precursors in the pathway to hepatocellular carci?noma[J]. Viruses， 2023， 15（4）： 857. DOI： 10.3390/v15040857.

[5] XIE XY， LV HR， LIU CX， et al. HBeAg mediates inflammatory func?tions of macrophages by TLR2 contributing to hepatic fibrosis[J]. BMC Med， 2021， 19（1）： 247. DOI： 10.1186/s12916-021-02085-3.

[6] TSUKUDA S， WATASHI K. Hepatitis B virus biology and life cycle[J]. Antiviral Res， 2020， 182： 104925. DOI： 10.1016/j.antiviral.2020.104925.

[7] ITO K， KIM KH， LOK ASF， et al. Characterization of genotype-specific carboxyl-terminal cleavage sites of hepatitis B virus e anti?gen precursor and identification of furin as the candidate enzyme[J]. J Virol， 2009， 83（8）： 3507-3517. DOI： 10.1128/JVI.02348-08.

[8] KRAMVIS A， CHANG KM， DANDRI M， et al. A roadmap for serum biomarkers for hepatitis B virus： Current status and future outlook[J]. Nat Rev Gastroenterol Hepatol， 2022， 19（11）： 727-745. DOI： 10.1038/s41575-022-00649-z.

[9] TSAI KN， OU JH J. Hepatitis B virus e antigen and viral persistence[J]. Curr Opin Virol， 2021， 51： 158-163. DOI： 10.1016/j.coviro.2021.10.003.

[10] European Association for the Study of the Liver. EASL 2017 clinical prac?tice guidelines on the management of hepatitis B virus infection[J]. J Hepatol， 2017， 67（2）： 370-398. DOI： 10.1016/j.jhep.2017.03.021.

[11] European Association for the Study of the Liver. EASL clinical prac?tice guidelines： Management of chronic hepatitis B virus infection[J]. J Hepatol， 2012， 57（1）： 167-185. DOI： 10.1016/j.jhep.2012.02.010.

[12] HSU YS， CHIEN RN， YEH CT， et al. Long-term outcome after sponta?neous HBeAg seroconversion in patients with chronic hepatitis B[J]. Hepatology， 2002， 35（6）： 1522-1527. DOI： 10.1053/jhep.2002.33638.

[13] NI YH， CHANG MH， CHEN PJ， et al. Viremia profiles in children with chronic hepatitis B virus infection and spontaneous e antigen sero?conversion[J]. Gastroenterology， 2007， 132（7）： 2340-2345. DOI： 10.1053/j.gastro.2007.03.111.

[14] LIAW YF， LAU GKK， KAO JH， et al. Hepatitis B e antigen seroconver?sion： A critical event in chronic hepatitis B virus infection[J]. Dig Dis Sci， 2010， 55（10）： 2727-2734. DOI： 10.1007/s10620-010-1179-4.

[15] WANG WW， BIAN HJ， LI FF， et al. HBeAg induces the expression of macrophage miR-155 to accelerate liver injury via promoting pro?duction of inflammatory cytokines[J]. Cell Mol Life Sci， 2018， 75（14）： 2627-2641. DOI： 10.1007/s00018-018-2753-8.

[16] THOMSON AW， KNOLLE PA. Antigen-presenting cell function in the tolerogenic liver environment[J]. Nat Rev Immunol， 2010， 10（11）： 753-766. DOI： 10.1038/nri2858.

[17] LIU J， JIANG M， MA ZY， et al. TLR1/2 ligand-stimulated mouse liver endothelial cells secrete IL-12 and trigger CD8+ T cell immunity in vi?tro[J]. J Immunol， 2013， 191（12）： 6178-6190. DOI： 10.4049/jimmu?nol.1301262.

[18] XIE XH， LUO JZ， BROERING R， et al. HBeAg induces liver sinusoi?dal endothelial cell activation to promote intrahepatic CD8 T cell im?munity and HBV clearance[J]. Cell Mol Immunol， 2021， 18（11）： 2572-2574. DOI： 10.1038/s41423-021-00769-7.

[19] YANG CL， LI N， WANG YW， et al. Serum levels of B-cell activating factor in chronic hepatitis B virus infection： Association with clinical diseases[J]. J Interferon Cytokine Res， 2014， 34（10）： 787-794. DOI： 10.1089/jir.2014.0032.

[20] LI HJ， ZHAI NC， SONG HX， et al. The role of immune cells in chronic HBV infection[J]. J Clin Transl Hepatol， 2015， 3（4）： 277-283. DOI： 10.14218/JCTH.2015.00026.

[21] LU BR， ZHANG BC， WANG LC， et al. Hepatitis B virus e antigen regu?lates monocyte function and promotes B lymphocyte activation[J]. Viral Immunol， 2017， 30（1）： 35-44. DOI： 10.1089/vim.2016.0113.

[22] M?CKEL T， BASTA F， WEINMANN-MENKE J， et al. B cell activating factor （BAFF）： Structure， functions， autoimmunity and clinical impli?cations in Systemic Lupus Erythematosus （SLE） [J]. Autoimmun Rev， 2021， 20（2）： 102736. DOI： 10.1016/j.autrev.2020.102736.

[23] WANG L， ZENG XQ， WANG ZD， et al. Recent advances in under?standing T cell activation and exhaustion during HBV infection[J]. Virol Sin， 2023， 38（6）： 851-859. DOI： 10.1016/j.virs.2023.10.007.

[24] JORGOVANOVIC D， SONG MJ， WANG LP， et al. Roles of IFN-γ in tumor progression and regression： A review[J]. Biomark Res， 2020， 8： 49. DOI： 10.1186/s40364-020-00228-x.

[25] CHISARI FV， ISOGAWA M， WIELAND SF. Pathogenesis of hepatitis B virus infection[J]. Pathol Biol （Paris）， 2010， 58（4）： 258-266. DOI： 10.1016/j.patbio.2009.11.001.

[26] XIE XH， LUO JZ， ZHU D， et al. HBeAg is indispensable for inducing liver sinusoidal endothelial cell activation by hepatitis B virus[J]. Front Cell Infect Microbiol， 2022， 12： 797915. DOI： 10.3389/fcimb.2022.797915.

[27] CHEN WJ， BIAN HJ， XIE XY， et al. Negative feedback loop of ERK/CREB/miR-212-3p inhibits HBeAg-induced macrophage activation[J]. J Cell Mol Med， 2020， 24（18）： 10935-10945. DOI： 10.1111/jcmm.15723.

[28] TIAN YJ， KUO CF， AKBARI O， et al. Maternal-derived hepatitis B vi?rus e antigen alters macrophage function in offspring to drive viral persistence after vertical transmission[J]. Immunity， 2016， 44（5）： 1204-1214. DOI： 10.1016/j.immuni.2016.04.008.

[29] HATIPOGLU I， ERCAN D， ACILAN C， et al. Hepatitis B virus e anti?gen （HBeAg） may have a negative effect on dendritic cell genera?tion[J]. Immunobiology， 2014， 219（12）： 944-949. DOI： 10.1016/j.imbio.2014.07.020.

[30] SIOUD M， FL?ISAND Y. TLR agonists induce the differentiation of human bone marrow CD34+ progenitors into CD11c+ CD80/86+ DC capable of inducing a Th1-type response[J]. Eur J Immunol， 2007， 37（10）： 2834-2846. DOI： 10.1002/eji.200737112.

[31] WANG FC， SONG MY， HU YH， et al. The relation of the frequency and functional molecules expression on plasmacytoid dendritic cells to postpartum hepatitis in women with HBeAg-positive chronic hepatitis B virus infection[J]. Front Immunol， 2022， 13： 1062123. DOI： 10.3389/fimmu.2022.1062123.

[32] LEU CM， LU YC， PENG WL， et al. The hepatitis B virus e antigen suppresses the respiratory burst and mobility of human monocytes and neutrophils[J]. Immunobiology， 2014， 219（11）： 880-887. DOI： 10.1016/j.imbio.2014.07.008.

[33] YANG SS， LIAN GJ. ROS and diseases： Role in metabolism and en?ergy supply[J]. Mol Cell Biochem， 2020， 467（1-2）： 1-12. DOI： 10.1007/s11010-019-03667-9.

[34] YANG FF， YU XP， ZHOU CL， et al. Hepatitis B e antigen induces the expansion of monocytic myeloid-derived suppressor cells to dampen T-cell function in chronic hepatitis B virus infection[J]. PLoS Pathog， 2019， 15（4）： e1007690. DOI： 10.1371/journal.ppat.1007690.

[35] RACANELLI V， REHERMANN B. The liver as an immunological or?gan[J]. Hepatology， 2006， 43（2 Suppl 1）： S54-S62. DOI： 10.1002/hep.21060.

[36] SUN C， FU BQ， GAO YF， et al. TGF-β1 down-regulation of NKG2D/DAP10 and 2B4/SAP expression on human NK cells contributes to HBV persistence[J]. PLoS Pathog， 2012， 8（3）： e1002594. DOI： 10.1371/journal.ppat.1002594.

[37] MA QQ， DONG XY， LIU SY， et al. Hepatitis B e antigen induces NKG2A+ natural killer cell dysfunction via regulatory T cell-derived interleukin 10 in chronic hepatitis B virus infection[J]. Front Cell Dev Biol， 2020， 8： 421. DOI： 10.3389/fcell.2020.00421.

[38] JEGASKANDA S， AHN SH， SKINNER N， et al. Downregulation of in?terleukin-18-mediated cell signaling and interferon gamma expres?sion by the hepatitis B virus e antigen[J]. J Virol， 2014， 88（18）： 10412-10420. DOI： 10.1128/JVI.00111-14.

[39] FERRANDO-MARTINEZ S， HUANG K， BENNETT AS， et al. HBeAg seroconversion is associated with a more effective PD-L1 blockade during chronic hepatitis B infection[J]. JHEP Rep， 2019， 1（3）： 170-178. DOI： 10.1016/j.jhepr.2019.06.001.

[40] PARKER KH， BEURY DW， OSTRAND-ROSENBERG S. Myeloid-derived suppressor cells： Critical cells driving immune suppression in the tu?mor microenvironment[J]. Adv Cancer Res， 2015， 128： 95-139. DOI： 10.1016/bs.acr.2015.04.002.

[41] MUNN DH， MELLOR AL. IDO in the tumor microenvironment： Inflam?mation， counter-regulation， and tolerance[J]. Trends Immunol， 2016， 37（3）： 193-207. DOI： 10.1016/j.it.2016.01.002.

[42] KRAMVIS A， KOSTAKI EG， HATZAKIS A， et al. Immunomodulatory function of HBeAg related to short-sighted evolution， transmissibility， and clinical manifestation of hepatitis B virus[J]. Front Microbiol， 2018， 9： 2521. DOI： 10.3389/fmicb.2018.02521.

[43] LEE WM， KING WC， JANSSEN HLA， et al. Hepatitis B e antigen loss in adults and children with chronic hepatitis B living in North America： A prospective cohort study[J]. J Viral Hepat， 2021， 28（11）： 1526-1538. DOI： 10.1111/jvh.13591.

[44] TSAI SL， CHEN PJ， LAI MY， et al. Acute exacerbations of chronic type B hepatitis are accompanied by increased T cell responses to hepatitis B core and e antigens. Implications for hepatitis B e antigen seroconversion[J]. J Clin Invest， 1992， 89（1）： 87-96. DOI： 10.1172/JCI115590.

[45] YANG HC， KAO JH. Revisiting the natural history of chronic HBV in?fection[J]. Curr Hepatol Rep， 2016， 15（3）： 141-149. DOI： 10.1007/s11901-016-0304-z.

收稿日期：2024-01-25； 錄用日期：2024-02-22

本文編輯：王瑩